專利名稱：6-酮-前列腺素F1α酶聯(lián)免疫測定試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于酶聯(lián)免疫測定試劑盒，具體的涉及一種6-酮-前列腺素聯(lián)免疫測定試劑盒。
背景技術(shù)：
前列腺素是血管內(nèi)皮細(xì)胞花生四烯酸代謝的主要產(chǎn)物，也可產(chǎn)生于呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)與消化系統(tǒng)等。前列腺素是機(jī)體最強(qiáng)的血小板聚集抑制劑與血管擴(kuò)張物質(zhì)。6-酮-前列腺素Fla (以下簡稱6-酮-PGFla )是前列環(huán)素的穩(wěn)定的代謝產(chǎn)物。在動(dòng)脈粥樣硬化、急性心肌梗塞、心絞痛、腦血管病變、糖尿病、腫瘤轉(zhuǎn)移、周圍血管血栓形成及血栓性血小板減少性紫癜等疾病時(shí)血漿6-酮-PGFla含量往往降低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種6-酮-前列腺素酶聯(lián)免疫測定試劑盒。為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn) 本發(fā)明的6-酮-前列腺素^k酶聯(lián)免疫測定試劑盒，包括
1)已包被6-酮-PGFla-牛血清白蛋白連接物酶標(biāo)板，-20°C保存；
2)明膠；
3)6-酮-PGFla標(biāo)準(zhǔn)品，4°C保存；
4)抗體6-酮-PGFla-IgG，4°C保存；
5)羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶結(jié)合物，-20°C保存；
6)鄰苯二胺；
7)稀釋液，用前用蒸餾水作1:20稀釋；
8)底物液，用前用蒸餾水作1:5稀釋。本發(fā)明的檢測原理如下
抗原(6-酮-PGFla-BSA)包被固相載體，與游離抗原(標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品)競爭性地與一定量得抗體結(jié)合，洗滌后加過量酶標(biāo)抗體，再加底物顯色。根據(jù)顯色程度(0D值)即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出待測樣品6-酮-PGFla含量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果
1、本發(fā)明的6-酮-前列腺素Jpk酶聯(lián)免疫測定試劑盒合具有良好的特異性，可有效測定人和動(dòng)物的血漿、血細(xì)胞、體液或組織中的6-酮-PGFl的濃度；
2、本發(fā)明的6-酮-前列腺素酶聯(lián)免疫測定試劑盒合在動(dòng)脈粥樣硬化、急性心肌梗塞、心絞痛、腦血管病變、糖尿病、腫瘤轉(zhuǎn)移、周圍血管血栓形成及血栓性血小板減少性紫癜等疾病中的鑒別診斷靈敏度高，可保證良好的線性關(guān)系；
3、本發(fā)明的6-酮-前列腺素J^k酶聯(lián)免疫測定試劑盒合在_20°C條件下可可保存6個(gè)月。上述說明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)技術(shù)方案，并可依照說明書的內(nèi)容予以實(shí)施，以下以本發(fā)明的較佳實(shí)施例。
具體實(shí)施例方式一種6-酮-前列腺素酶聯(lián)免疫測定試劑盒，其包括
1)已包被6-酮-PGFla-牛血清白蛋白連接物酶標(biāo)板，-20°c保存；
2)明膠，Ig/瓶；
3)6-酮-PGFla 標(biāo)準(zhǔn)品，1600pg/ml，4°C保存；
4)抗體6-酮-PGFla-IgG, lml，滴度為 1:8000，4°C保存；
5)羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶結(jié)合物(GARIgG-HRP)，100ug/ml,_20°C保存；
6)鄰苯二胺(0PD)，15mg/瓶;
7)稀釋液(PBS)，0.2M，用前用蒸餾水作1:20稀釋；
8)底物液化吐作『2)，0.1M，用前用蒸餾水作1:5稀釋。利用本發(fā)明的6-酮-前列腺素聯(lián)免疫測定試劑盒的檢測步驟如下 1、一次反應(yīng)
將6-酮-PGFla標(biāo)準(zhǔn)品用0. 1%明膠倍比稀釋成8個(gè)濃度1. 25,2. 5、5、10、20、40、80和 160 pg/0. 1ml，用 0. 1% 明膠(PBS 配制)將抗 6-酮-PGF1 a-IgG 作 1:10 稀釋。零標(biāo)準(zhǔn)(BO)孔加稀釋液lOOul，標(biāo)準(zhǔn)(ST)孔加6_酮-PGFla標(biāo)準(zhǔn)品lOOul，樣品 (SMP)孔加待測樣品lOOul。各孔均加抗體6-酮-PGFla-IgGlOOul (TA孔除外)。37 0C 2hr 或室溫下 4hr。tween-PBS稀釋液洗板5次。2、二次反應(yīng)
用0. 1%明膠(稀釋液配制)12ml將GARIgG-HRP稀釋，各孔均加200ul (ΤΑ孔除外)。 37 °C 2hr或室溫下4hr。tween-PBS 洗板 5 次。3、反應(yīng)測定
用底物液新鮮配制OPD-H2A基質(zhì)(0PD濃度lmg/ml，每毫升底物液中加入0. 5微升30% H2O2),每孔注入200ul。37°C放置20min或至顯色較好時(shí)，用3M硫酸50ul終止反應(yīng)。置室溫lOmin，在酶標(biāo)檢測儀上測定OD49tl,以TA孔調(diào)零。4、計(jì)算
權(quán)利要求
1.6-酮-前列腺素酶聯(lián)免疫測定試劑盒，其特征在于，包括1)已包被6-酮-PGFla-牛血清白蛋白連接物酶標(biāo)板；2)明膠；3)6-酮-PGFla標(biāo)準(zhǔn)品；4)抗體6-酮-PGFla-IgG ；5)羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶結(jié)合物；6)鄰苯二胺；7)稀釋液;8)底物液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的6-酮-前列腺素酶聯(lián)免疫測定試劑盒，其特征在于所述明膠為Ig/瓶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的6-酮-前列腺素酶聯(lián)免疫測定試劑盒，其特征在于所述6-酮-PGF1標(biāo)準(zhǔn)品為1600pg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的6-酮-前列腺素聯(lián)免疫測定試劑盒，其特征在于所述抗體6-酮-PGFla-IgG為lml，滴度為1:8000。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的6-酮-前列腺素聯(lián)免疫測定試劑盒，其特征在于所述羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶結(jié)合物為100ug/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的6-酮-前列腺素聯(lián)免疫測定試劑盒，其特征在于所述鄰苯二胺為15mg/瓶。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的6-酮-前列腺素酶聯(lián)免疫測定試劑盒，其特征在于稀釋液為0. 2M。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)所述的6-酮-前列腺素Pk酶聯(lián)免疫測定試劑盒， 其特征在于底物液為0. 1M。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種6-酮-前列腺素F1α酶聯(lián)免疫測定試劑盒，其包括已包被6-酮-PGF1α-牛血清白蛋白連接物酶標(biāo)；明膠；6-酮-PGF1α標(biāo)準(zhǔn)品；抗體6-酮-PGF1α-IgG；羊抗兔IgG-辣根過氧化物酶結(jié)合物；鄰苯二胺；稀釋液和底物液。本發(fā)明的6-酮-前列腺素F1α酶聯(lián)免疫測定試劑盒合具有良好的特異性，可有效測定人和動(dòng)物的血漿、血細(xì)胞、體液或組織中的6-酮-PGF1α的濃度。
文檔編號(hào)G01N33/88GK102495218SQ201110420060
公開日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月15日
發(fā)明者何楊, 王兆鉞, 阮長耿, 陳德春 申請(qǐng)人:蘇州博賽生物醫(yī)藥有限公司, 蘇州大學(xué), 蘇州蘇大賽爾免疫生物技術(shù)有限公司