專利名稱：一種檢測精漿γ-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶試劑盒及檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物化學(xué)試劑盒及檢測方法，具體說是一種檢測精漿Y -L-谷氨 酰轉(zhuǎn)肽酶試劑盒及檢測方法。
背景技術(shù)：
精漿富含γ -L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(Y -GT)，γ -GT是谷光苷肽(GSH)代謝的關(guān)鍵酶， 在保護(hù)精子免受氧自由基損害方面起了重要作用。精液中的Y-GT主要來自前列腺，其活 性的檢測可用于評價(jià)前列腺的功能。精漿中的Y-GT可分解Y-谷氨酰-α-萘酚為游離 的α-萘酚，α-萘酚與重氮試劑作用產(chǎn)生紅色，其色澤深淺與酶活性成正比。目前，開展精漿Y -GT活性檢測項(xiàng)目的男科實(shí)驗(yàn)室極少，我們在前期建立手工檢 測精漿Y-GT方法的基礎(chǔ)上，又進(jìn)一步建立了半自動生化分析儀檢測法。手工檢測方法的 具體操作過程中，精漿樣本需用生理鹽水進(jìn)行1 200稀釋后方可檢測，稀釋后精漿樣本與 基質(zhì)液在37°C溫育15min后，再加入重氮試劑，混勻后37°C再次溫育5min，然后用分光光 度計(jì)比色，手工計(jì)算獲得結(jié)果，每次檢測所需α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液10 μ 1，基質(zhì)液0. 5ml，重氮試劑 5ml。該法操作步驟較多，費(fèi)時(shí)、費(fèi)試劑，且精漿在檢測前需稀釋，很難在臨床常規(guī)檢測中廣 泛使用。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是為了提供一種能使檢測精漿Y-GT時(shí)操作簡便、省時(shí)、 節(jié)省試劑、結(jié)果穩(wěn)定可靠、能廣泛適用于臨床檢測的檢測精漿Y -GT試劑盒及檢測方法。技術(shù)方案為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所述的一種檢測精漿Y-GT試劑盒，包 括α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液、Y-谷氨酰-α-萘胺基質(zhì)液和重氮試劑；其中所述α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液，濃度 為2. 86mg/ml ； γ -谷氨酰-α -萘胺基質(zhì)液，濃度為2. 71mg/ml ；重氮試劑由lg/L亞硝酸鈉 水溶液與2g/L氨基苯磺酸溶液以1 4體積比混勻配制而成，每IOOml所述氨基苯磺酸溶 液中含有20ml醋酸。按每個(gè)試劑盒裝載100個(gè)測試所需檢測試劑計(jì)算，所述α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液為 0. Iml 士 4 μ 1、γ -谷氨酰-α -萘胺基質(zhì)液為30ml ± 1.2ml,重氮試劑為200ml 士 8ml。一種用檢測精漿、-GT試劑盒檢測精漿、-GT的方法，該方法包括如下步驟1)依據(jù)反應(yīng)原理和儀器性能設(shè)定檢測參數(shù)；2)在空白管中加入基質(zhì)液，在標(biāo)準(zhǔn)管中加入標(biāo)準(zhǔn)液和基質(zhì)液，在樣品管中加入精 漿和基質(zhì)液；3)將步驟2)中的空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管同時(shí)進(jìn)行溫育，溫育時(shí)間為15min、溫育 溫度為37°C ；4)再向步驟3)中溫育好的空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管中加入重氮試劑，混勻后37°C 再次溫育5min，通過檢測儀器進(jìn)行比色，得出結(jié)果。所述檢測儀器為半自動生化分析儀，它的參數(shù)為項(xiàng)目類型為終點(diǎn)法；主波長為5IOnm ；延遲時(shí)間為3s ；測量時(shí)間為3s ；項(xiàng)目單位為U/ml ；標(biāo)準(zhǔn)濃度為80U/ml ；比色皿溫度 為 37°C。步驟2)中所述的精漿是將液化精液通過3000g離心15min獲得的上清液。有益效果與我們前期建立的手工法相比，使用本發(fā)明中的試劑盒以及用該試劑 盒進(jìn)行檢測的方法，能使操作簡便、省時(shí)，無需進(jìn)行樣品稀釋，無需計(jì)算儀器直接給出結(jié)果； 基質(zhì)液用量為原來的3/5，重氮試劑用量為原來的2/5，從而節(jié)省試劑用量；采用本發(fā)明，能 夠作同步對比試驗(yàn)，使得結(jié)果穩(wěn)定可靠，能廣泛適用于各級醫(yī)院的男科實(shí)驗(yàn)室。


附圖為光密度與Y-GT活性的線性關(guān)系圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā) 明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1 本發(fā)明一種檢測精漿Y-GT試劑盒，包括α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液、谷氨 酰-α-萘胺基質(zhì)液和重氮試劑。其中所述α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液，濃度為2.86mg/ml;Y-谷氨 酰-α-萘胺基質(zhì)液，濃度為2.71mg/ml ；重氮試劑由lg/L亞硝酸鈉水溶液與2g/L氨基苯 磺酸溶液以1 4體積比混勻即可，其中每IOOml氨基苯磺酸溶液中含有20ml醋酸。按每 個(gè)試劑盒裝載100個(gè)測試所需檢測試劑計(jì)算，所述α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液為0. Iml士4μ 1、γ-谷氨 酰-α -萘胺基質(zhì)液為30ml 士 1. 2ml，重氮試劑為200ml 士 8ml。實(shí)施例2 —種用實(shí)施例1中的一種檢測精漿、-GT試劑盒進(jìn)行檢測精漿、-GT的 方法，該方法的具體步驟如下1)設(shè)定檢測儀器參數(shù)所述檢測儀器為半自動生化分析儀，它的參數(shù)為項(xiàng)目類 型為終點(diǎn)法；主波長為510nm ；延遲時(shí)間為3s ；測量時(shí)間為3s ；項(xiàng)目單位為U/ml ；標(biāo)準(zhǔn)濃度 為80U/ml ；比色皿溫度為370C ；2)在空白管中加入基質(zhì)液，在標(biāo)準(zhǔn)管中加入標(biāo)準(zhǔn)液和基質(zhì)液，在樣品管中加入精 漿和基質(zhì)液；3)將上述空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管同時(shí)進(jìn)行溫育，溫育時(shí)間為15min、溫育溫度為 370C ；所述的精漿是將液化精液通過3000g離心15min獲得的上清液；4)向溫育好的空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管中加入重氮試劑，混勻后37°C再次溫育 5min，通過檢測儀器進(jìn)行比色，得出結(jié)果。實(shí)施例3 按照實(shí)施例2的檢測方法對適合反應(yīng)體系的反應(yīng)體積進(jìn)行確定依據(jù)手工法檢測結(jié)果，選擇Y-GT活性在正常參考值范圍上限附近的精漿樣本1 例。分別取100、200、300、400μ 1基質(zhì)液，每管用生理鹽水補(bǔ)足至總體積為400 μ 1，分別加 入1 μ 1精漿樣本，混勻后37°c溫育15min，加5ml重氮試劑，37°C再次溫育5min，510nm檢 測各管吸光度。根據(jù)基質(zhì)應(yīng)過量，能保證反應(yīng)充分進(jìn)行的原則，發(fā)現(xiàn)300 μ 1基質(zhì)液與1 μ 1 精漿反應(yīng)較為合適。在此基礎(chǔ)上，取4支試管，分別加300 μ 1基質(zhì)液和1 μ 1精漿樣本，混 勻后37°C溫育15min，分別加l、2、3、4ml重氮試劑，37°C再次溫育5min，然后前三管依次加 入3、2、lml生理鹽水，以保證總體積一致，混勻后510nm檢測各管吸光度。選擇能保證充分
4反應(yīng)的最小量作為重氮試劑量，故反應(yīng)體系中重氮試劑用量選擇為2ml。實(shí)施例4 在實(shí)施例2和實(shí)施例3的基礎(chǔ)上進(jìn)行批內(nèi)和批間變異檢測依據(jù)手工法檢測結(jié)果，選擇Y -GT活性在正常參考值范圍為94. 90U/ml 260. 32U/ml上限和下限附近的精漿樣本各1例，均分成2份，每份500 μ 1，1份在同一批 次內(nèi)用半自動生化分析儀按照實(shí)施例2的方法并按照表一中的檢測步驟和反應(yīng)條件重復(fù) 檢測10次，計(jì)算批內(nèi)變異系數(shù)(CV)，得CV< 15% ；另1份置于-20°C凍存，檢測方法如實(shí) 施例2，檢測步驟和反應(yīng)條件如表一，每天檢測1次，共10次，計(jì)算批間變異系數(shù)(CV)，得 CV < 15%，結(jié)論批內(nèi)和批間的變異檢測得到的CV接近，表示使用該試劑盒方法檢測精漿 Y-GT活性穩(wěn)定、可靠。表一反應(yīng)條件
權(quán)利要求
一種檢測精漿γ L 谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶試劑盒，其特征在于，包括α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液、γ 谷氨酰 α 萘胺基質(zhì)液和重氮試劑；其中所述α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為2.86mg/ml；γ 谷氨酰 α 萘胺基質(zhì)液的濃度為2.71mg/ml；重氮試劑由1g/L亞硝酸鈉水溶液與2g/L氨基苯磺酸溶液以1∶4體積比混勻配制而成，每100ml所述氨基苯磺酸溶液中含有20ml醋酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測精漿Y-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶試劑盒，其特征在于，按每 個(gè)試劑盒裝載100個(gè)測試所需檢測試劑計(jì)算，所述α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液為0. Iml 士 4μ 1、γ-谷氨 酰-α -萘胺基質(zhì)液為30ml 士 1. 2ml，重氮試劑為200ml 士 8ml。
3.用權(quán)利要求1或2所述的一種檢測精漿Y-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶試劑盒檢測精漿Y-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟1)依據(jù)反應(yīng)原理和儀器性能設(shè)定檢測參數(shù)；2)在空白管中加入基質(zhì)液，在標(biāo)準(zhǔn)管中加入標(biāo)準(zhǔn)液和基質(zhì)液，在樣品管中加入精漿和 基質(zhì)液；3)將步驟2)中的空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管同時(shí)進(jìn)行溫育，溫育時(shí)間為15min、溫育溫度 為 37°C ；4)再向步驟3)中溫育好的空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管中加入重氮試劑，混勻后37°C再次 溫育5min，通過檢測儀器進(jìn)行比色，得出結(jié)果。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用檢測精漿Y-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶試劑盒檢測精漿Y-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的方法，其特征在于，所述檢測儀器為半自動生化分析儀，它的參數(shù)為 項(xiàng)目類型為終點(diǎn)法；主波長為510nm ；延遲時(shí)間為3s ；測量時(shí)間為3s ；項(xiàng)目單位為U/ml ；標(biāo) 準(zhǔn)濃度為80U/ml ；比色皿溫度為37°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種用檢測精漿Y-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶試劑盒檢測精漿Y-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的方法，其特征在于，步驟2)中所述的精漿是將液化精液通過3000g離 心15min獲得的上清液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測精漿γ-L-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶試劑盒及檢測方法，該檢測精漿γ-GT試劑盒，包括α萘胺標(biāo)準(zhǔn)液、γ-谷氨酰-α-萘胺基質(zhì)液和重氮試劑。該檢測方法為首先設(shè)定檢測儀器參數(shù)；在空白管中加入基質(zhì)液，在標(biāo)準(zhǔn)管中加入標(biāo)準(zhǔn)液和基質(zhì)液，在樣品管中加入精漿和基質(zhì)液；將上述空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管同時(shí)進(jìn)行溫育，溫育時(shí)間為15min、溫育溫度為37℃；加入重氮試劑，混勻后37℃再次溫育5min，通過檢測儀器進(jìn)行比色，得出結(jié)果。本發(fā)明中的試劑盒及檢測方法能使操作簡便、省時(shí)、節(jié)省試劑；采用本發(fā)明，能夠作同步對比試驗(yàn)，使得結(jié)果穩(wěn)定可靠，適用于各級醫(yī)院的男科實(shí)驗(yàn)室。
文檔編號G01N21/31GK101974614SQ201010501709
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月29日
發(fā)明者盧坤剛, 陸金春, 陳曉慧 申請人:南京欣迪生物藥業(yè)工程有限責(zé)任公司