專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種分光光度計(jì)測(cè)定環(huán)境水樣中糖含量的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種對(duì)以葡萄糖為主體的環(huán)境水樣中糖含量進(jìn)行檢測(cè)的方法，特別是涉及一種通過(guò)分光光度法對(duì)環(huán)境水樣中糖含量的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：糖是生物界分布極廣，含量較大的一類(lèi)有機(jī)化合物。幾乎所有的動(dòng)物、植物、微生物體內(nèi)都含有它。糖在生命過(guò)程中發(fā)揮著重要的生理機(jī)能，是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)。環(huán)境水體中的糖以葡萄糖為主體，糖濃度的高低與變化反映出水質(zhì)中糖的污染狀況。由于糖類(lèi)化合物的紫外吸收很弱，示差折光檢測(cè)法的靈敏度又較低，因此糖類(lèi)的分析一直是分析化學(xué)的一個(gè)難點(diǎn)。采用苯酚-硫酸反應(yīng)以碳水化合物形式比色測(cè)定其含量，其顯色強(qiáng)度與糖含量成正比，以此計(jì)算糖含量。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，提供一種分光光度計(jì)測(cè)定環(huán)境水樣中糖含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的配制A.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制準(zhǔn)確稱(chēng)取相對(duì)分子質(zhì)量5X105已干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混勻，置冰箱中保存。此溶液每毫升含10.Omg葡萄糖。B.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液配制吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.OmL，置于lOOmL容量瓶中，加水至刻度，混勻，置冰箱中保存。此溶液lmL含葡萄糖0.10mg。C.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)配制和測(cè)定步驟分別取O，O.l，O.2，，0.4，0.6，0.8，1.OmL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液于25mL具塞比色管中，準(zhǔn)確補(bǔ)充蒸餾水至1.OmL，加入5%苯酚溶液lmL，混勻(注意輕搖放氣)，再加入濃硫酸5mL，搖勻，于室溫放置40min，用分光光度計(jì)于490nm波長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比，lcm比色皿測(cè)定吸光度值。以葡萄糖的含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。經(jīng)測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的方程為Y=0.0093X+0.0089，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R2=0.9997。(2)制樣水樣經(jīng)0.45iim濾膜過(guò)濾后備用。(3)樣品的測(cè)定吸取1.OmL(濃度高應(yīng)取適量稀釋)過(guò)濾后的水樣于25mL比色管中。加入5%苯酚溶液lmL，混勻(注意輕搖放氣)，再加入濃硫酸5mL，搖勻，于室溫放置40min，用分光光度計(jì)于490nm波長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比，lcm比色皿測(cè)定吸光度值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出糖含量，計(jì)算樣品中糖含量。同時(shí)做樣品空白實(shí)驗(yàn)。(4)結(jié)果計(jì)算水樣中糖用公式(1)進(jìn)行計(jì)算vwn、Z=yr①式中X-水樣中糖的含量，單位為毫克每升(mg/L);m-曲線(xiàn)上查得的濃度，單位為微克(yg);V-吸取水樣的體積(ml)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是采用分光光度法檢測(cè)環(huán)境水體中糖的含量，快速有效，RSD小于5X，檢出限為lmg/L。由此可見(jiàn)，本發(fā)明的方法，為檢測(cè)環(huán)境中糖的含量，提供了一種可靠的便于實(shí)施的方法，能夠滿(mǎn)足研究和生產(chǎn)中的需要。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:湖水中總糖含量的精密度和回收率檢測(cè)(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的配制分別吸取O，O.l，O.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL糖標(biāo)準(zhǔn)使用液(100iig/mL)于25mL具塞比色管中，準(zhǔn)確補(bǔ)充蒸餾水至1.OmL，加入5%苯酚溶液lmL，混勻(注意輕搖放氣)，再加入濃硫酸5mL，搖勻，于室溫放置40min，用分光光度計(jì)于490nm波長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比，lcm比色皿測(cè)定吸光度值。以葡萄糖的含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。經(jīng)測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的方程為Y=0.0093X+0.0089，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R2=0.9997。(2)制樣湖水樣經(jīng)O.45iim濾膜過(guò)濾后，置于具塞錐形瓶中備用。(3)樣品的測(cè)定吸取1.OmL(濃度高應(yīng)取適量稀釋)過(guò)濾后的水樣于25mL比色管中。加入5%苯酚溶液lmL，混勻(注意輕搖放氣)，再加入濃硫酸5mL，搖勻，于室溫放置40min，用分光光度計(jì)于490nm波長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比，lcm比色皿測(cè)定吸光度值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出糖含量，計(jì)算樣品中糖含量。同時(shí)做樣品空白實(shí)驗(yàn)。以同樣的處理方式得到六個(gè)平行樣品，并進(jìn)行分析并計(jì)算含量，分析結(jié)果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>顯而易見(jiàn)，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，可以用發(fā)明的苯酚-硫酸分光光度法對(duì)環(huán)境水體中糖含量進(jìn)行測(cè)定。上述實(shí)施例僅供說(shuō)明本發(fā)明之用，而并非是對(duì)本發(fā)明的限制，有關(guān)
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，因此所有等同的技術(shù)方案也應(yīng)屬于本發(fā)明的范疇，本發(fā)明的專(zhuān)利保護(hù)范圍應(yīng)由各權(quán)利要求限定。權(quán)利要求本發(fā)明涉及一種分光光度計(jì)測(cè)定環(huán)境水樣中糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于所述測(cè)定方法包括如下步驟(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的配制A.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制準(zhǔn)確稱(chēng)取相對(duì)分子質(zhì)量5×105已干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混勻，置冰箱中保存。此溶液每毫升含10.0mg葡萄糖。B.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液配制吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混勻，置冰箱中保存。此溶液1mL含葡萄糖0.10mg。C.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)配制和測(cè)定步驟分別取0，0.1，0.2，，0.4，0.6，0.8，1.0mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液于25mL具塞比色管中，準(zhǔn)確補(bǔ)充蒸餾水至1.0mL，加入5％苯酚溶液1mL，混勻(注意輕搖放氣)，再加入濃硫酸5mL，搖勻，于室溫放置40min，用分光光度計(jì)于490nm波長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比，1cm比色皿測(cè)定吸光度值。以葡萄糖的含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。經(jīng)測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的方程為Y＝0.0093X+0.0089，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)R2＝0.9997。(2)制樣水樣經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后備用。(3)樣品的測(cè)定吸取1.0mL(濃度高應(yīng)取適量稀釋)過(guò)濾后的水樣于25mL比色管中。加入5％苯酚溶液1mL，混勻(注意輕搖放氣)，再加入濃硫酸5mL，搖勻，于室溫放置40min，用分光光度計(jì)于490nm波長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比，1cm比色皿測(cè)定吸光度值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出糖含量，計(jì)算樣品中糖含量。同時(shí)做樣品空白實(shí)驗(yàn)。(4)結(jié)果計(jì)算水樣中糖用公式(1)進(jìn)行計(jì)算<mrow><mi>X</mi><mo>=</mo><mfrac><mi>m</mi><mi>V</mi></mfrac><mo>-</mo><mo>-</mo><mo>-</mo><mrow><mo>(</mo><mn>1</mn><mo>)</mo></mrow></mrow>式中X-水樣中糖的含量，單位為毫克每升(mg/L)；m-曲線(xiàn)上查得的濃度，單位為微克(μg)；V-吸取水樣的體積(ml)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分光光度計(jì)測(cè)定環(huán)境水樣中糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于標(biāo)準(zhǔn)品選擇分子質(zhì)量為5X105的葡萄糖。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分光光度計(jì)測(cè)定環(huán)境水樣中糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于試劑加入量應(yīng)嚴(yán)格，吸取水樣lmL，加入苯酚溶液lmL，加入濃硫酸5mL。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分光光度計(jì)測(cè)定環(huán)境水樣中糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于加完苯酚-硫酸溶液后，放置時(shí)間為40min。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分光光度計(jì)測(cè)定環(huán)境水樣中糖含量的檢測(cè)方法，其特征在于用分光光度計(jì)比色，波長(zhǎng)為490nm。全文摘要本發(fā)明涉及一種分光光度計(jì)測(cè)定環(huán)境水樣中糖含量的檢測(cè)方法，即吸取1mL過(guò)濾后的水樣于試管中，加入苯酚水溶液(5％)和濃硫酸，攪拌后放置10min，充分顯色后于490nm處測(cè)吸光值，依據(jù)濃度和吸光值曲線(xiàn)，測(cè)得水樣中糖類(lèi)含量。本發(fā)明的方法檢測(cè)水體中糖的含量，快速有效，相對(duì)平均偏差小于5.0％。由此可見(jiàn)，本發(fā)明的方法，對(duì)于環(huán)境水樣中糖含量的檢測(cè)，提供了一種更可靠又便于實(shí)施的方法，能夠滿(mǎn)足研究和生產(chǎn)中的需要。文檔編號(hào)G01N1/28GK101776611SQ201010108638公開(kāi)日2010年7月14日申請(qǐng)日期2010年2月5日優(yōu)先權(quán)日2010年2月5日發(fā)明者宋薇申請(qǐng)人:譜尼測(cè)試科技(北京)有限公司