專利名稱：：梔子提取物的檢測方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種中藥提取物的檢測方法，特別是涉及梔子提取物檢測方法。
背景技術：
：梔子為茜草科植物梔子(GardeniajasminoidesEllis)的干燥成熟果實，為常用中藥之一。其性味苦寒，能瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒、散瘀消腫，可用于熱病心煩、黃疸尿赤、血淋澀痛、瘡瘍疔毒、外治扭挫傷痛等。《藥典》2005年版一部公開了梔子藥材的檢測方法，包括如下鑒別和含量測定方法。鑒別方法采用的薄層鑒別方法梔子粉末lg，加50%乙醇10ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。取梔子苷對照品，加乙醇制成每lml含4mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各2iU，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5:5:i:i)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在ll(TC加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定方法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水(15:85)為流動相；檢測波長為238nm，理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500;其中對照品溶液采用梔子苷對照品加甲醇制成每lml含30iig的溶液；供試品溶液的制備采用甲醇溶解藥材細粉，經超聲處理20分鐘的方法。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明提供梔子提取物更全面的質量檢測方法。
發(fā)明內容本發(fā)明目的在于提供一種梔子提取物的檢測方法。本發(fā)明目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的本發(fā)明提供上述梔子提取物檢測方法，包括如下鑒別方法和/或指紋圖譜和/或含量測定中的一種或幾種鑒別取梔子提取物置容量瓶中，加60-80%乙醇稀釋，超聲10-30min使溶解，作為梔子提取物供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.4mg的溶液，作為對照品溶液；取京尼平龍膽雙糖苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含O.25mg的溶液，作為對照品溶液；另稱取梔子對照藥材粉末0.3-0.9g置于容量瓶中，加入60-80%乙醇25ml，超聲提取30-50min，濾過，即得對照藥材溶液；參照薄層色譜法，吸取供試品溶液，對照品溶液各5yi，分別點于同一硅膠G板上，以4-6:4-7:i:i醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以8-20%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照色譜相同的位置上顯相同顏色斑點；指紋圖譜照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為238nm;流動相乙腈-水，梯度洗脫，流速lml/min，柱溫15-30°C;所述梯度洗脫是:0min乙腈比例為5%;40min乙腈比例為10%;60min乙腈比例為15%;供試品溶液的制備精密稱取梔子提取物10mg，置50mL容量瓶中，用60-80%乙醇超聲溶解后稀釋，為供試品溶液；測定法精密吸取供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；含量測定A:總環(huán)烯醚萜苷取梔子提取物約0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入60-80%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，加60-80%乙醇至刻度，搖勻，精密量取lml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇制成每lml含O.Olmg的溶液，作為對照品溶液；分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應試劑為空白，照紫外_可見分光光度法，在220-250nm波長處測定吸光度，計算，即得；本品按干燥品計算，含總環(huán)烯醚萜苷以梔子苷(C17H2401Q)計，不得少于80%;B:梔子苷照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(10-20:75-95)為流動相；檢測波長為220-250nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500;對照品溶液的制備稱取梔子苷對照品，加甲醇制成每lml含O.lmg的溶液，即得；供試品溶液的制備取梔子提取物約0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入60-80%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，加60-80%乙醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入液相色譜儀，測定，即得；所述梔子提取物按干燥品計算，含梔子苷(C17H2401Q)不得少于60%。本發(fā)明提供上述梔子提取物質量檢測方法，優(yōu)選包括如下鑒別方法和/或指紋圖譜和/或含量測定中的一種或幾種鑒別取梔子提取物15mg，置25ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，超聲15min使溶解，作為梔子提取物供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.4mg的溶液，作為對照品溶液；取京尼平龍膽雙糖苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液；另稱取梔子對照藥材粉末0.5g置于50ml容量瓶中，加入70%乙醇25ml，超聲提取40min，濾過，即得對照藥材溶液；參照薄層色譜法，吸取供試品溶液，對照品溶液各5iU，分別點于同一硅膠G板上，以5:5:i:i醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，1051:加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照色譜相同的位置上顯相同顏色斑點；指紋圖譜照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為238nm;流動相乙腈_水，梯度洗脫，流速lml/min，柱溫2(TC;所述梯度洗脫是:Omin乙腈比例為5%;40min乙腈比例為10%;60min乙腈比例為15%;供試品溶液的制備精密稱取梔子提取物10mg，置50mL容量瓶中，用70%乙醇超聲溶解后稀釋，為供試品溶液；測定法精密吸取供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；含量測定A:總環(huán)烯醚萜苷取梔子提取物0.01g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，精密量取該溶液lml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.Olmg的溶液，作為對照品溶液；分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應試劑為空白，照紫外_可見分光光度法，在238nm波長處測定吸光度，計算，即得；本品按干燥品計算，含總環(huán)烯醚萜苷以梔子苷(C17H24010)計，不得少于80%;B:梔子苷照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(14:86)為流動相；檢測波長為238nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500;對照品溶液的制備精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；供試品溶液的制備取梔子提取物0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入液相色譜儀，測定，即得；梔子提取物按干燥品計算，含梔子苷(C17H2401Q)不得少于60%。所述梔子提取物的制備方法包括常規(guī)的水提取或醇提取或先水提取再醇提取或先醇提取后再水提取，經上述常規(guī)提取后還可以過活性炭或大孔樹脂柱進一步富集有效成分；上述常規(guī)工藝水提取方法可以為每次10-30倍量，提取1-4次，每次1-3小時；上述常規(guī)工藝醇提取方法可以為30-80%乙醇、4-15倍量、分別提取1_3小時；所述過大孔樹脂柱方法為提取液濾過，濾液通過大孔樹脂，先用2-6倍柱體積量水或20%以下濃度的乙醇洗脫，洗脫液棄取，再用加30-60%乙醇1-6倍柱體積洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，得純化提取液。本發(fā)明進一步提供梔子提取物的制備方法，包括如下步驟步驟1:取梔子藥材，水煎煮提取2-4次，每次加6-30倍量的水，濃縮；步驟2:加入乙醇使藥液含醇量達50%_80%，放置，抽濾，濾液回收乙醇，加水調節(jié)藥液濃度以梔子原藥材的重量與藥液的體積比計為梔子藥材藥液=1-2:l-2(g/ml);步驟3:采用靜態(tài)吸附法進行活性炭凈化處理；上樣量以梔子原藥材的重量與活性炭重量比計算為梔子藥材活性炭=1:l-3，將活性炭置藥液中，攪拌，靜態(tài)吸附3-6小時，上柱，先用水洗，再用50%-80%乙醇洗脫，洗脫流速為0.6-1倍生藥量/小時，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至相對密度0.5-1.05，得梔子提取液A或干燥得梔子提取物B;步驟4:取大孔樹脂，裝柱；將上述梔子提取液A直接上樣或提取物B加水制成濃度為O.03-0.lg/mL的藥液后上樣；上樣體積為l-3倍柱體積，以O.2_1.0倍柱體積/小時的流速吸附，1-3倍柱體積水、1-3倍柱體積的3%-10%乙醇洗脫，3-8倍柱體積的20%-50%乙醇以0.2-0.5倍柱體積/小時的流速洗脫，收集20%_50%乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即得。優(yōu)選為，所述步驟1中梔子藥材加8-12倍量的水煎煮，每次1-3小時；優(yōu)選為，所述步驟2中加入乙醇后放置18-48小時，抽濾，以3倍生藥量70%乙醇溶液洗滌沉淀，濾液與洗液合并，回收乙醇至藥液沒有醇味，加水調節(jié)藥液濃度為藥材藥液=1:l，即lg/ml;優(yōu)選為，所述步驟3中梔子提取液A6(TC減壓干燥得梔子提取物B;加水制成濃度為0.07g/mL的藥液，優(yōu)選為，所述步驟3中靜態(tài)吸附法進行活性炭凈化處理，活性炭用乙醇回流法至紫外掃描沒有吸收，用蒸餾水洗至含無醇味；優(yōu)選為，所述步驟3中上樣量為梔子藥材活性炭=1:1.2，靜態(tài)吸附4小時，上柱，先用水洗至洗脫液Molish反應為陰性，再改用20倍生藥量的70%乙醇洗脫，洗脫流速為0.8倍生藥量/小時；優(yōu)選為，所述步驟4中量取H103、HPD450、HPD600、HPD750或D101型大孔樹脂中的任意一種裝柱，徑高比為1/8-1/4;水洗至無醇味；優(yōu)選為，所述步驟4上樣體積為2.5倍柱體積，以0.4倍柱體積/h的流速吸附，2倍柱體積水、2倍柱體積7%乙醇洗脫，30%乙醇5倍柱體積以0.3倍柱體積/h的流速洗脫；進一步優(yōu)選地，收集25-35%乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥。所述步驟3中梔子原藥材的重量與活性炭重量比計算是指藥液先折算出被提取的梔子原藥材的重量后與活性炭的比值為1:1-3;所述步驟3中洗脫流速以"倍生藥量/小時"為單位計算是指藥液折算被提取的梔子原藥材的重量與時間的比。所述重量/體積為g/ml。最優(yōu)選地，梔子提取物制備的方法包括如下步驟步驟1:取梔子藥材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度1.05(60°C);步驟2:加入95%乙醇使藥液含醇量達70%，放置2處，抽濾，以3倍生藥量70%乙醇溶液洗滌沉淀，濾液與洗液合并，回收乙醇至藥液沒有醇味，加水調節(jié)藥液濃度為藥材藥液=1:l，即lg/ml;步驟3:采用靜態(tài)吸附法進行活性炭純化處理活性炭用乙醇回流法至紫外掃描沒有吸收，用蒸餾水洗至含無醇味；上樣量為梔子藥材活性炭=1:1.2，將活性炭置藥液中，攪拌，靜態(tài)吸附4小時，上柱，先用水洗至洗脫液Molish反應為陰性，再改用20倍生藥量的70%乙醇洗脫，洗脫流速為0.8倍生藥量/小時，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，6(TC減壓干燥得梔子提取物；步驟4:量取已處理好的H103型大孔樹脂，裝柱，水洗至無醇味；將上述梔子提取物加水制成濃度為0.07g/mL的藥液，上樣體積為2.5倍柱體積，以0.4倍柱體積/h的流速吸附(按比例放大)，2倍柱體積水、2倍柱體積7%乙醇洗脫，30%乙醇5倍柱體積以0.3倍柱體積/h的流速洗脫，收集30%乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥。上述梔子提取物可按常規(guī)工藝加入輔料制成片劑、膠囊、口服液、滴丸、噴霧劑、顆粒劑、鼻腔吸入劑、滴鼻劑等臨床可接受的劑型；所述輔料包括溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐8劑、著色劑、粘合劑、潤滑劑、填充劑、稀釋劑、吸收劑、表面活性劑、吸附劑、基質等。本發(fā)明建立了梔子提取物指紋圖譜的測定方法，能更全面的控制提取物的質量。在含量測定項下不僅測定了梔子苷的含量，還測定了總環(huán)烯醚萜苷的含量；另外供試品的制備本發(fā)明再用70%的乙醇，較《藥典》甲醇制備供試品的方法對操作人員毒性小，對環(huán)境污染少。本發(fā)明質量檢測方法專屬性強，快速，能夠準確控制產品的質量。下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。實驗例l梔子提取物指紋圖譜研究乙腈-水流動相梯度的考察，應用DAD檢測器進行了檢測波長的確定并對柱溫的影響進行了考察。最終確定條件為Agilent1100高效液相色譜儀，Diamonsil(TM)鉆石C化柱5踐(250X4.6mm)，檢測波長238nm，流動相乙腈_水梯度洗脫，見下表，流速:lml/min，柱溫20。C。表l洗脫梯度<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>1、梔子提取物與梔子原料藥材指紋圖譜相關性比較按本發(fā)明指紋圖譜測定方法，測定梔子藥材和提取物，獲得二者的指紋圖譜進行比較。結果表明，梔子提取物與梔子原料藥材指紋圖譜相關性較好。2、120min指紋圖譜全信息考察實驗進樣梔子提取物溶液和梔子藥材溶液，分別按照按本發(fā)明的流動相梯度程序運行后，繼續(xù)用乙腈運行至120min，記錄色譜圖，考察全信息情況。結果表明，記錄圖譜60min，信息已經完全。在確定色譜條件下，梔子藥材、中間體供試液中所有化學成分在60min內洗脫完全，空白無干擾。3、精密度實驗精密稱取按本發(fā)明實施例1制備的批號為080609的梔子中間體浸膏粉0.Olg，制備中間體供試液溶液，分別精密吸取10iU共5份，注入高效液相色譜儀，記錄60min色譜(命名為1、2、3、4、5)，并通過《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》軟件計算相似度。結果見表2。表2中間體指紋圖譜精密度實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表知，各色譜圖相互間相似度S>0.99，各色譜峰相對保留時間和峰面積RSD均小于3%，表明該方法的精密度良好。4、穩(wěn)定性實驗精密稱取按本發(fā)明實施例1制備的批號為080609的梔子中間體浸膏粉0.Olg，制備中間體供試液溶液，分別在0、1、2、4、12h精密吸取101，注入高效液相色譜儀，記錄60min色譜，并通過《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》軟件計算相似度。結果見表3。表3中間體指紋圖譜穩(wěn)定性實驗結果Ohlh2h4h12h保留時間RSD%峰面積RSD%Oh10.9930.9930.9990.9930.232.43lh0.993110.99310.241.842h0.993110.99310.162.384h0.9990,9930.99310.9930.060.6612h0.993110.99310.152.09由表知，各色譜圖相互間相似度S>0.99，各色譜峰相對保留時間和峰面積RSD均小于3%，中間體供試液溶液在12h內穩(wěn)定性符合要求。5、重復性實驗分別精密稱取批號為080609的梔子中間體浸膏粉0.Olg，制備5份中間體供試液溶液，各精密吸取10ia，注入高效液相色譜儀，記錄60min色譜(命名為Sl、S2、S3、S4、S5)，并通過《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》軟件計算相似度。結果見表4。表4中間體指紋圖譜重復性實驗結果SlS2S3S4S5保留時間RSD%峰面積RSD%Sl10.999110.9990,322.46S20.99910.9990.99910.112.65S310.卿110.9990.271.83S410.卿110.9990.191.28S50.99910.9990.卿10.131.22由表知，各色譜圖相互間相似度S>0.99，各色譜峰相對保留時間和峰面積RSD均小于3%，故中間體指紋圖譜重復性良好，符合要求。6、樣品測定按照確定的HPLC方法對樣品進行了測定，記錄60min，分別測定兩次(命名為(Sll，S12，S21，S22，S31，S32，S41，S42)，并通過《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》(國家藥典委員會，2004A版)計算相似度。各樣品相似度計算結果見表5。表5樣品指紋圖譜測定結果SllS12S21S22S31S32S41S42Sll10.9990.9930.99910.9920.9990.999S120.99910.99110.99111S210,9930.9910.9910.99210.9910.99S220.99910.991110.99111S31110.992110.9921S320.9920.99110.9910.艦10.9910.99S410.99910.991110.99111S420.99910.99110.9911由圖中結果可以看出各批次樣品之間的相似度均大于0.99。實驗例2梔子苷含量測定實驗1、含量測定指標成分的選擇藥典中要求測定梔子苷的含量。規(guī)定梔子苷的含量測定方法為采用甲醇超聲提取，HPLC測定，最低限度為1.8%。在實驗過程中發(fā)現(xiàn)這種方法提取效率較低，測定結果偏低。用70%乙醇做溶劑可提高提取效率，減少有機溶劑對人的毒害和對環(huán)境的污染。2、儀器與試藥Agilent1100系列高效液相色譜儀(四元泵，紫外檢測器)；電子天平(北京分析儀器廠)；CX-300型超聲波清洗器(50w-3000w)(北京醫(yī)療設備二廠)；UV-2000紫外-可見分光光度計(日本日立)。梔子苷對照品(中國藥品生物制品檢定所批號0749-200507)，甲醇為分析純(北京化工廠)，乙腈為色譜純(美國merck公司)，水(娃哈哈純凈水杭州娃哈哈集團)所用梔子藥材購自樟樹天齊堂中藥飲片廠(批號040421)，經生藥學鑒定為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實即梔子。3、梔子苷含量測定方法與結果3.1色譜分析條件色譜柱C18色譜柱(Diamonsil鉆石250X4.6mm，5ym);流動相乙腈水(14:86);檢測波長238nm;流速1.0ml/min;柱溫室溫。梔子苷可基線分離。3.2樣品處理方法確定3.2.1對照品溶液的制備精密稱取經五氧化二磷干燥恒重的梔子苷對照品適量，用甲醇溶解，制成每lml含梔子苷0.1344mg的溶液，即得。3.2.2樣品溶液的制備采用與藥材相同的處理方法進行試驗，考察了超聲時間，結果見表6。表6超聲不同時間確定(n=2)提取時間(min)梔子苷含量(％)1064.901564.802064.903064.29實驗結果表明提取時間長短無顯著性差異，故確定樣品超聲10min。3.2.3測定法分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液5ul，注入液相色譜儀，測定，即得。3.3線性關系考察精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10iU，按上述色譜條件進行色譜分析，以對照品進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算得到回歸(加原點)方程為￥=1631X+3.995，相關系數(shù)r=0.99998，結果見表7。表7梔子線性數(shù)據樣品號進樣量(wg)峰面積(Y)10.228378.820.45674730.6841122.940.9121495.351.141858結果表明，梔子苷在0.228-1.14g范圍內線性關系良好。3.4穩(wěn)定性試驗取同一供試品(080601)，分別于配制后0，2，4，6，10小時，依上法測定，結果見表8。表8穩(wěn)定性試驗(11=5)時間(h)_峰面積A(mAu)_均值(mAu)_RSD%0955.42923.94929.4936.21.436927.410944,9結果表明，平均峰面積為936.2，RSDX為1.43，供試品溶液在IO小時內基本穩(wěn)定。3.5精密度試驗精密吸取同一對照品溶液樣品5iU，重復進樣5次，結果見表9。表9表精密度試驗(n=5)序-號_峰面積A(mAu)_均值(mAu)_RSD%1911.52927.63924.1929.241.374940.25942.8結果表明，平均峰面積為929.24，RSDX為1.37，精密度良好。3.6重現(xiàn)性試驗按正文方法處理同一批號(080601)樣品5份，依法測定，結果見表10。表IO重現(xiàn)性試驗(n二5)序號峰面積A(mAu)含量(％)均值(％)RSD%1989.666.0421000.566.763100266.8666.890.844100967.3351011.267.48結果測得樣品平均含量66.89%，RSDX為0.84，表明方法重現(xiàn)性良好。實驗例3總環(huán)烯醚萜苷含量測定實驗121、對照品溶液制備取梔子苷對照品3mg，精密稱定，加甲醇25mL使溶解，取lmL用甲醇稀釋至10mL，即得。2、供試品溶液制備取梔子提取物10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加70X乙醇稀釋，超聲10min，取出，放冷，加70%乙醇至刻度，取續(xù)濾液lmL用70%乙醇稀釋至10mL即得。3、最大吸收波長確定取對照品、供試品溶液在200400nm進行掃描，隨行空白。結果表明在238nm處均有最大吸收，故確定238nm為測定波長。4、線性關系考察精密吸取對照品溶液(148.8iigmL-"1、2、3、4、5、6mL，分別置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，238nm測定吸收度。以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得計算得到回歸方程(過原點)y=0.021x+0.0166，r=0.9999，結果見表11。表ll梔子線性數(shù)據樣品號梔子苷濃度UgmL—')吸收度(Y)15.5920.154211.9040.273317.8560.3945423.8080.515529.7600.643635.7120.7585結果表明，梔子苷在5.59235.712iigmL—1范圍內線性關系良好。5、精密度實驗取對照品溶液，238nm測定吸收度，重復8次，計算RSD為0.178%，結果表明儀器有較高精密度。6、穩(wěn)定性實驗取對照品溶液和供試品溶液，于0，2，4，6，8，10h在238nm測定吸收度，計算RSD分別為0.37%，0.37%，表明對照品溶液和供試品溶液在10h內穩(wěn)定。7、重復性實驗取梔子提取物(批號080601)6份，制備供試品溶液，238nm測定吸收度，計算平均梔子總環(huán)烯醚萜苷含量為87.44%，RSD為1.25%。8、回收率實驗采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同一批號(批號080601，含量87.44%)的樣品粉末約0.005g，精密稱定，置50mL量瓶中，加70%乙醇稀釋，超聲10min，取出，，放冷，加70%乙醇至刻度，取lmL至lOmL容量瓶中，精密加入O.0672mg、0.0872mg、0.1048mg梔子苷對照品，再加70X乙醇至刻度，238nm下測定吸光度，按下式計算回收率。結果見表12。測出總環(huán)烯醚萜苷總量一樣品中總環(huán)烯醚砲苷的量回收率(％)二-*ioo。/0加入梔子苷對照品的量表12回收率試驗序號樣品含量加入梔子苷的量測得總量回收率平均回收率RSD(mg)(mg)(mg)(%)(%)(%)10.0880.06980.158100.272340.0880.15495.4398.342.600.0880.15799.300.0880.08720.17599.38560,0880.177102.28100.671.470.0880.175100.3570.0880.10460.19299.94890.0880.195102.36101.071.200.0880.193100,91以上結果表明，回收率平均值為100.11%，RSD=1.34%，本法具有良好的回收率。下述實施例均能夠實現(xiàn)上述實驗例所述的效果具體實施方式實施例1:取梔子藥材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度1.05(60°C)，加入95%乙醇使藥液含醇量達70%，放置24h，抽濾，以3倍生藥量70%乙醇溶液洗滌沉淀，濾液與洗液合并，回收乙醇至藥液沒有醇味，減壓干燥得梔子提取物；含量測定A:總環(huán)烯醚萜苷精密量取梔子苷測定項下供試品溶液lml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液，作為對照品溶液；分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應試劑為空白，照紫外_可見分光光度法，在238nm波長處測定吸光度，計算，即得；B:梔子苷照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(14:86)為流動相；檢測波長為238nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500;對照品溶液的制備精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品約0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入液相色譜儀，測定，即得。實施例2:取梔子藥材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度1.05(60°C)，加入95%乙醇使藥液含醇量達70%，放置24h，抽濾，以3倍生藥量70%乙醇溶液洗滌沉淀，濾液與洗液合并，回收乙醇至藥液沒有醇味，減壓干燥得梔子提取物；指紋圖譜照高效液相色譜法(附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為238nm;流動相乙腈_水，度洗脫，見下表，流速1ml/min，柱溫20。C;時間(min)乙腈比例(％)510^_供試品溶液的制備精密稱取梔子提取物10mg，置50mL量瓶中，用70%乙醇超聲溶解后稀釋至刻度，為供試品溶液；測定法精密吸取供試品溶液lOul，注入液相色譜儀，測定，即得；采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》(國家藥典委員會，2004A版)計算相似度，各批次樣品之間的相似度應不小于0.95。實施例3:A梔子提取物制備取梔子藥材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度1.05(60°C)，加入95%乙醇使藥液含醇量達70%，放置24h，抽濾，以3倍生藥量70%乙醇溶液洗滌沉淀，濾液與洗液合并，回收乙醇至藥液沒有醇味，加水調節(jié)藥液濃度為藥材藥液=1:1，即lg/ml。采用靜態(tài)吸附法進行活性炭純化處理活性炭用乙醇回流法至紫外掃描沒有吸收，用蒸餾水洗至含無醇味。上樣量為生藥活性炭=i:1.2，將規(guī)定用量的活性炭置藥液中，攪拌，靜態(tài)吸附4小時，上柱，先用水洗至洗脫液Molish反應為陰性，再改用20倍生藥量的70%乙醇洗脫，洗脫流速為0.8倍生藥量/小時，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，6(TC減壓干燥得梔子提取物。量取已處理好的H103型大孔樹脂，裝柱，水洗至無醇味。將上述梔子提取物加水制成濃度為0.07g/mL的藥液，上樣體積為2.5倍柱體積，以0.4倍柱體積/h的流速吸附(按比例放大)，2倍柱體積水、2倍柱體積7%乙醇洗脫，30%乙醇5倍柱體積以0.3倍柱體積/h的流速洗脫，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥得梔子提取物。B:指紋圖譜照高效液相色譜法(附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為238nm;流動相乙腈-水，度洗脫，見下表，流速lml/min，柱溫20。C;時間(min)乙腈比例(％)0540106015供試品溶液的制備精密稱取梔子提取物10mg，置50mL量瓶中，用70X乙醇超聲溶解后稀釋至刻度，為供試品溶液；測定法精密吸取供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》(國家藥典委員會，2004A版)計算相似度，各批次樣品之間的相似度應不小于0.95;實施例4:梔子提取物制備及含量測定A梔子提取物制備取梔子藥材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度1.05(60°C)，加入95%乙醇使藥液含醇量達70%，放置24h，抽濾，以3倍生藥量70%乙醇溶液洗滌沉淀，濾液與洗液合并，回收乙醇至藥液沒有醇味，加水調節(jié)藥液濃度為藥材藥液=1:1，即lg/ml。采用靜態(tài)吸附法進行活性炭純化處理活性炭用乙醇回流法至紫外掃描沒有吸收，用蒸餾水洗至含無醇味。上樣量為生藥活性炭=i:1.2，將規(guī)定用量的活性炭置藥液中，攪拌，靜態(tài)吸附4小時，上柱，先用水洗至洗脫液Molish反應為陰性，再改用20倍生藥量的70%乙醇洗脫，洗脫流速為0.8倍生藥量/小時，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，6(TC減壓干燥得梔子提取物。量取已處理好的H103型大孔樹脂，裝柱，水洗至無醇味。將上述梔子提取物加水制成濃度為0.07g/mL的藥液，上樣體積為2.5倍柱體積，以0.4倍柱體積/h的流速吸附(按比例放大)，2倍柱體積水、2倍柱體積7%乙醇洗脫，30%乙醇5倍柱體積以0.3倍柱體積/h的流速洗脫，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥得梔子提取物。含量測定A:總環(huán)烯醚萜苷精密量取梔子苷測定項下供試品溶液lml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇制成每lml含0.01mg的溶液，作為對照品溶液；分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應試劑為空白，照紫外_可見分光光度法，在238nm波長處測定吸光度，計算，即得；本品按干燥品計算，含總環(huán)烯醚萜苷以梔子苷(C17H2401Q)計，不得少于80%;B:梔子苷照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(14:86)為流動相；檢測波長為238nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500;對照品溶液的制備精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品約0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品按干燥品計算，含梔子苷(C17H2401Q)不得少于60%。實施例5:梔子提取物制備及質量檢測方法A梔子提取物制備取梔子藥材一定量，加10倍量的水，煎煮提取3次，每次1.5小時，濾過，合并濾16液，濃縮至相對密度1.05(60°C)，加入95%乙醇使藥液含醇量達70%，放置24h，抽濾，以3倍生藥量70%乙醇溶液洗滌沉淀，濾液與洗液合并，回收乙醇至藥液沒有醇味，加水調節(jié)藥液濃度為藥材藥液=1:1，即lg/ml。采用靜態(tài)吸附法進行活性炭純化處理活性炭用乙醇回流法至紫外掃描沒有吸收，用蒸餾水洗至含無醇味。上樣量為生藥活性炭=i:1.2，將規(guī)定用量的活性炭置藥液中，攪拌，靜態(tài)吸附4小時，上柱，先用水洗至洗脫液Molish反應為陰性，再改用20倍生藥量的70%乙醇洗脫，洗脫流速為0.8倍生藥量/小時，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，6(TC減壓干燥得梔子提取物。量取已處理好的H103型大孔樹脂，裝柱，水洗至無醇味。將上述梔子提取物加水制成濃度為0.07g/mL的藥液，上樣體積為2.5倍柱體積，以0.4倍柱體積/h的流速吸附(按比例放大)，2倍柱體積水、2倍柱體積7%乙醇洗脫，30%乙醇5倍柱體積以0.3倍柱體積/h的流速洗脫，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥得梔子提取物。質量檢測方法A:指紋圖譜照高效液相色譜法(附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為238nm;流動相乙腈_水，度洗脫，見下表，流速lml/min，柱溫20。C;時間(min)乙腈比例(％)0540106015供試品溶液的制備精密稱取梔子提取物10mg，置50mL量瓶中，用70%乙醇超聲溶解后稀釋至刻度，為供試品溶液；測定法精密吸取供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》(國家藥典委員會，2004A版)計算相似度，各批次樣品之間的相似度應不小于0.95;含量測定A:總環(huán)烯醚萜苷精密量取梔子苷測定項下供試品溶液lml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇制成每lml含0.01mg的溶液，作為對照品溶液；分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應試劑為空白，照紫外_可見分光光度法(附錄VA)，在238nm波長處測定吸光度，計算，即得；本品按干燥品計算，含總環(huán)烯醚萜苷以梔子苷(C17H2401Q)計，不得少于80%;B:梔子苷照高效液相色譜法(附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(14:86)為流動相；檢測波長為238nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500;對照品溶液的制備精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品約0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入液相色譜儀，測定，即得；本品按干燥品計算，含梔子苷(C17H2401Q)不得少于60%。實施例6:梔子提取物的制備17步驟1:取梔子藥材，加8倍量的水，煎煮提取2次，每次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度1.05(60°C);步驟2:加入乙醇使藥液含醇量達65%，放置，抽濾，用乙醇溶液洗滌沉淀，濾液與洗液合并，回收乙醇至藥液沒有醇味，加水調節(jié)藥液濃度為梔子藥材藥液=1:2(重量/體積);步驟3:采用靜態(tài)吸附法進行活性炭純化處理，活性炭用乙醇回流法至紫外掃描沒有吸收，用蒸餾水洗至含無醇味；步驟4:上樣量為梔子藥材活性炭=1:1.5，將活性炭置藥液中，攪拌，靜態(tài)吸附4.5小時，上柱，先用水洗，再改用乙醇洗脫，洗脫流速為0.7倍生藥量/小時，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓干燥得梔子提取物；指紋圖譜照高效液相色譜法(附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為238nm;流動相乙腈_水，度洗脫，見下表，流速lml/min，柱溫20。C;<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>供試品溶液的制備精密稱取梔子提取物10mg，置50mL量瓶中，用70%乙醇超聲溶解后稀釋至刻度，為供試品溶液；測定法精密吸取供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》(國家藥典委員會，2004A版)計算相似度，各批次樣品之間的相似度應不小于0.95;鑒別取梔子提取物15mg，置25ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，超聲15min使溶解，作為梔子提取物供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含O.4mg的溶液，作為對照品溶液；取京尼平龍膽雙糖苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液；另稱取梔子對照藥材(過4號篩)粉末0.5g，置于50ml具塞三角瓶中，精密加入70%乙醇25ml，超聲提取40min，濾過，即得對照藥材溶液；參照薄層色譜法，吸取供試品溶液，對照品溶液各5iU，分別點于同一硅膠G板上，以5:5:i:i醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照色譜相同的位置上顯相同顏色斑點；實施例7:梔子提取物的制備步驟1:取梔子藥材，加8倍量的水，煎煮提取2次，每次1小時，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度1.05(60°C);步驟2:加入乙醇使藥液含醇量達65%，放置，抽濾，用乙醇溶液洗滌沉淀，濾液與洗液合并，回收乙醇至藥液沒有醇味，加水調節(jié)藥液濃度為梔子藥材藥液=1:2(重量/體積)；步驟3:采用靜態(tài)吸附法進行活性炭純化處理，活性炭用乙醇回流法至紫外掃描沒有吸收，用蒸餾水洗至含無醇味；上樣量為梔子藥材活性炭=1:1.5，將活性炭置藥液中，攪拌，靜態(tài)吸附4.5小時，上柱，先用水洗，再改用乙醇洗脫，洗脫流速為0.7倍生藥量/小時，收集乙醇洗脫液，回收乙醇得梔子提取液；步驟4:量取已處理好的H103大孔樹脂，裝柱，水洗至無醇味；將上述梔子提取液上樣，上樣體積為2.5倍柱體積，以0.4倍柱體積/h的流速吸附，2倍柱體積水、2倍柱體積7%乙醇洗脫，30%乙醇5倍柱體積以0.3倍柱體積/h的流速洗脫，收集乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥。鑒別取梔子提取物15mg，置25ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，超聲15min使溶解，作為梔子提取物供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含O.4mg的溶液，作為對照品溶液；取京尼平龍膽雙糖苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液；另稱取梔子對照藥材粉末置于容量瓶中，加入70%乙醇25ml，超聲提取40min，濾過，即得對照藥材溶液；參照薄層色譜法，吸取供試品溶液，對照品溶液各5yi，分別點于同一硅膠G板上，以5:5:i:i醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，1051:加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照色譜相同的位置上顯相同顏色斑點；指紋圖譜照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為238nm;流動相乙腈_水，梯度洗脫，流速lml/min，柱溫:20。C;所述梯度洗脫是:0min乙腈比例為5%;40min乙腈比例為10%;60min乙腈比例為15%;供試品溶液的制備精密稱取梔子提取物10mg，置容量瓶中，用70%乙醇超聲溶解后稀釋，為供試品溶液；測定法精密吸取供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；含量測定A:總環(huán)烯醚萜苷精密量取梔子苷測定項下供試品溶液lml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇制成每lml含0.01mg的溶液，作為對照品溶液；分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應試劑為空白，照紫外_可見分光光度法，在238nm波長處測定吸光度，計算，即得；本品按干燥品計算，含總環(huán)烯醚萜苷以梔子苷(C17H2401Q)計，不得少于80%;B:梔子苷照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(14:86)為流動相；檢測波長為238nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500;對照品溶液的制備精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品約0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照19權利要求一種梔子提取物檢測方法，其特征在于指紋圖譜檢測方法為照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為238nm；流動相乙腈-水，梯度洗脫，流速1ml/min，柱溫15-30℃；所述梯度洗脫是0min乙腈比例為5％；40min乙腈比例為10％；60min乙腈比例為15％；供試品溶液的制備精密稱取梔子提取物10mg，置50mL容量瓶中，用60-80％乙醇超聲溶解后稀釋，為供試品溶液；測定法精密吸取供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。2.如權利要求1所述的方法，其特征在于包括如下含量測定中方法中的任意一種A:總環(huán)烯醚萜苷取梔子提取物0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入60-80%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，取該溶液lml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇制成每lml含0.Olmg的溶液，作為對照品溶液；分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在220-250nm波長處測定吸光度，計算，即得；B:梔子苷照高效液相色譜法測定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10-20:75-95的乙腈-水為流動相；檢測波長為220-250nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500;對照品溶液的制備精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；供試品溶液的制備取梔子提取物0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入60-80%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，加60-80%乙醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入液相色譜儀，測定，即得。3.如權利要求2所述的方法，其特征在于總環(huán)烯醚萜苷的含量測定方法為取梔子提取物約0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，取該溶液lml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇制成每lml含0.Olmg的溶液，作為對照品溶液；分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應試劑為空白，照紫外_可見分光光度法，在238nm波長處測定吸光度，計算，即得；梔子提取物按干燥品計算，含總環(huán)烯醚萜苷以梔子苷計，不得少于80%。4.如權利要求2所述的方法，其特征在于梔子苷的含量測定方法為照高效液相色譜法測定，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以14:86的乙腈-水為流動相；檢測波長為238nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500;對照品溶液的制備精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；供試品溶液的制備取梔子提取物約0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入70%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入液相色譜儀，測定，即得；梔子提取物按干燥品計算，含梔子苷不得少于60%。5.如權利要求1所述的方法，其特征在于包括如下鑒別方法取梔子提取物置容量瓶中，加60-80%乙醇稀釋，超聲10-30min使溶解，作為梔子提取物供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.4mg的溶液，作為對照品溶液；取京尼平龍膽雙糖苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液；另稱取梔子對照藥材粉末0.3-0.9g置于容量瓶中，加入60-80%乙醇25ml，超聲提取30-50min，濾過，即得對照藥材溶液；參照薄層色譜法，吸取供試品溶液，對照品溶液各5yi，分別點于同一硅膠G板上，以4-6:4-7:i:i醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以8-20X硫酸乙醇溶液，105t:加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照色譜相同的位置上顯相同顏色斑點。6.如權利要求5所述的方法，其特征在于所述鑒別方法為取梔子提取物15mg，置25ml容量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，超聲15min使溶解，作為梔子提取物供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.4mg的溶液，作為對照品溶液；取京尼平龍膽雙糖苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液；另稱取梔子對照藥材粉末0.5g置于50ml容量瓶中，加入70%乙醇25ml，超聲提取40min，濾過，即得對照藥材溶液；參照薄層色譜法，吸取供試品溶液，對照品溶液各5iU，分別點于同一硅膠G板上，以5:5:i:i醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，1051:加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照色譜相同的位置上顯相同顏色斑點。7.梔子提取物檢測方法，其特征在于該方法包括如下鑒別、含量測定和指紋圖譜方法鑒別取梔子提取物置容量瓶中，加60-80%乙醇稀釋，超聲10-30min使溶解，作為梔子提取物供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.4mg的溶液，作為對照品溶液；取京尼平龍膽雙糖苷對照品，加甲醇溶解制成每lml含0.25mg的溶液，作為對照品溶液；另稱取梔子對照藥材粉末O.3-0.9g置于容量瓶中，加入60-80X乙醇25ml，超聲提取30-50min，濾過，即得對照藥材溶液；參照薄層色譜法，吸取供試品溶液，對照品溶液各5yi，分別點于同一硅膠G板上，以4-6:4-7:i:i醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以8-20X硫酸乙醇溶液，105t:加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照色譜相同的位置上顯相同顏色斑點；指紋圖譜照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測波長為238nm;流動相乙腈_水，梯度洗脫，流速lml/min，柱溫15-30°C;所述梯度洗脫是:0min乙腈比例為5%;40min乙腈比例為10%;60min乙腈比例為15%;供試品溶液的制備精密稱取梔子提取物10mg，置容量瓶中，用60-80%乙醇超聲溶解后稀釋，為供試品溶液；測定法精密吸取供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，即得；含量測定A:總環(huán)烯醚萜苷取梔子提取物約0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入60-80%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，取該溶液lml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加甲醇制成每lml含0.Olmg的溶液，作為對照品溶液；分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在220-250nm波長處測定吸光度，計算，即得；B:梔子苷照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10-20:75-95的乙腈-水為流動相；檢測波長為220-250nm;理論板數(shù)按梔子苷峰計算應不低于1500;對照品溶液的制備，精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0.lmg的溶液，即得；供試品溶液的制備取梔子提取物約0.Olg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加入60-80%乙醇，超聲處理10min，取出，放冷，加60-80%乙醇至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入液相色譜儀，測定，即得。8.如權利要求1-7所述的任意一種方法，其特征在于梔子提取物由梔子藥材替代。9.如權利要求1-8所述的任意一種方法，所述梔子提取物是由如下方法制備步驟1:取梔子藥材，水煎煮提取2-4次，每次加6-30倍量的水，濃縮；步驟2:加入乙醇使藥液含醇量達50%_80%，放置，抽濾，濾液回收乙醇，加水調節(jié)藥液濃度以梔子原藥材的重量與藥液的體積比計為梔子藥材藥液=1-2:l-2(g/ml);步驟3:采用靜態(tài)吸附法進行活性炭凈化處理；上樣量以梔子原藥材的重量與活性炭重量比計算為梔子藥材活性炭=1:l-3，將活性炭置藥液中，攪拌，靜態(tài)吸附3-6小時，上柱，先用水洗，再用50%-80%乙醇洗脫，洗脫流速為0.6-1倍生藥量/小時，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至相對密度0.5-1.05，得梔子提取液A或干燥得梔子提取物B;步驟4:取大孔樹脂，裝柱；將上述梔子提取液A直接上樣或提取物B加水制成濃度為0.03-0.Ig/mL的藥液后上樣；上樣體積為1-3倍柱體積，以0.2_1.0倍柱體積/小時的流速吸附，1-3倍柱體積水、1-3倍柱體積的3%-10%乙醇洗脫，3-8倍柱體積的20%50%乙醇以0.2-0.5倍柱體積/小時的流速洗脫，收集20%_50%乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，即得。10.如權利要求9所述的檢測方法，其特征在于梔子提取物的制備方法步驟4中選取H103、HPD450、HPD600、HPD750或D101型大孔樹脂中的任意一種；徑高比為1/8-1/4;所述步驟4中洗脫后收集25-35%乙醇洗脫液。全文摘要本發(fā)明提供了一種梔子提取物檢測方法，該方法包括鑒別方法和/或指紋圖譜和/或含量測定方法，本發(fā)明建立了梔子提取物指紋圖譜的測定方法，能更全面的控制提取物的質量，在含量測定項下不僅測定了梔子苷的含量，還測定了總環(huán)烯醚萜苷的含量；另外供試品的制備本發(fā)明采用70％的乙醇提取，較藥典用甲醇制備供試品的方法，對操作人員毒性小，對環(huán)境污染少。文檔編號G01N30/90GK101703599SQ200910237580公開日2010年5月12日申請日期2009年11月18日優(yōu)先權日2009年11月18日發(fā)明者杜守穎申請人:杜守穎