專利名稱：一種紅樹木欖中總黃酮含量的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黃酮類物質(zhì)含量的測(cè)定方法，特別是一種紅樹木欖中總黃 酮含量的測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
黃酮類化合物是自然界廣泛存在的一大類物質(zhì)，廣泛分布于植物界。絕大 多數(shù)植物都能合成黃酮類化合物。黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是具有C6-C3-Ce的基 本骨架，并根據(jù)中間吡喃環(huán)的不同氧化水平和兩側(cè)A、 B環(huán)上的各種取代基的不 同，分為不同類型，主要包括黃酮類、黃酮醇類、異黃酮類、黃垸酮類、査耳 酮、異黃烷酮、雙黃酮類等。在天然植物中，絕大多數(shù)黃酮類化合物以苷的形 式存在，少數(shù)以游離形式存在。
黃酮類化合物具有多種重要的生理功能。如清除自由基作用、延緩衰老作 用、抗菌作用、抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)或抗癌作用、解痙攣?zhàn)饔?、降低血壓作用?女性激素樣作用、抑制膽堿酷酶作用、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈的作用等。此外，大量研 究還表明黃酮類化合物有降血脂、止血、鎮(zhèn)咳祛痰、降低血管脆性、抑制血小 板聚集等作用?；邳S酮類化合物的諸多重要生理功能，對(duì)黃酮類化合物的研 究備受關(guān)注，顯示出活躍的研究領(lǐng)域，尤其其分析測(cè)定方法的研究。
目前分析黃酮類化合物的方法主要有分光光度法、熒光光度法、高效液 相色譜法、毛細(xì)管電泳法、化學(xué)發(fā)光法、極譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。使用光 度法測(cè)定不同試樣中黃酮含量的最多。但光度法中存在顯色穩(wěn)定性問題，影響 測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度。其他方法如高效液相色譜法等，具有分離效果好、分析速 度快、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但設(shè)備昂貴，不容易普及，使用受到限制。所以尋找 探索操作相對(duì)簡(jiǎn)單、容易普及的有效的黃酮類化合物的測(cè)定方法具有重要的意 義。
我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)，采用單掃描示波極譜法測(cè)定黃酮類化合物，其極譜波 峰形完整、體系穩(wěn)定，靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，應(yīng)用于木欖葉黃酮類物質(zhì)提取液 中總黃酮的測(cè)定，選擇性強(qiáng)，干擾少，重復(fù)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、可操作性強(qiáng)的 定紅樹木欖中總黃 酮含量的方法。本發(fā)明可由以下方法來實(shí)現(xiàn) (1)采集紅樹木欖葉，清水洗凈，置陰涼通風(fēng)處晾干，粉碎，以60%的乙 醇為提取劑，料液比l : 20，在85'C下水浴提取2h，連續(xù)重復(fù)提取2次，合并提 取液。(2)將提取液經(jīng)聚酰胺柱層析分離，分離液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮制得待測(cè) 液，供總黃酮含量測(cè)定。(3)以蘆丁為對(duì)照品，用甲醇配制成蘆丁儲(chǔ)備液，再 適當(dāng)稀釋作為戸丁標(biāo)準(zhǔn)工作液。以硼砂緩沖溶液(pH=9.18)為底液，分別對(duì)蘆 丁標(biāo)準(zhǔn)工作液和由(2)制得的待測(cè)液在該底液中進(jìn)行極譜線性掃描，得到極譜 圖，比較二者的極譜圖，從而得到其極譜特性。(4)配制蘆丁梯度系列標(biāo)準(zhǔn)溶 液，以硼砂為底液，在與(3)相同的條件下，分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的峰電流， 以蘆丁溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰電流為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(5〉取一定量由 (2)制得的待測(cè)液，在與以上相同的條件下測(cè)定其極譜波的峰電流，利用標(biāo)準(zhǔn) 曲線，得到對(duì)應(yīng)此待測(cè)液中總黃酮的濃度，進(jìn)而求得木欖葉中總黃酮的含量。 本發(fā)明具有如下特點(diǎn).-
1、 方法操作簡(jiǎn)單。在使用本發(fā)明測(cè)定黃酮含量中，除了底液硼砂外，不需 另加其他任何試劑，步驟少，簡(jiǎn)捷方便。
2、 選擇性好，干擾少。在樣品的極譜波附件無其他雜峰，且峰形完整。
3、 體系穩(wěn)定，極譜波峰形穩(wěn)定。
4、 線性范圍較寬。


圖l為本發(fā)明紅樹木欖葉總黃酮提取液的極譜圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施實(shí)例l
紅樹木欖中總黃酮的測(cè)定
(1) 將采集來的紅樹木欖葉，清水洗凈，置陰涼通風(fēng)處晾干，粉碎，作為木 欖葉分析試樣。以60%的乙醇為提取劑，料液比l : 20，在85。C下水浴提取2h， 連續(xù)重復(fù)提取2次，合并提取液經(jīng)聚酰胺柱層析分離，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮制得待測(cè)液，
供總黃酮含量測(cè)定用。
(2) 以蘆丁為對(duì)照品，用甲醇配制成10.0mg/m啲蘆丁儲(chǔ)備液，再稀釋至l.O mg/ml，作為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作液。以硼砂緩沖溶液(pH=9.18)為底液，分別對(duì)蘆 丁標(biāo)準(zhǔn)工作液和由(1)制得的待測(cè)液在該底液中進(jìn)行極譜線性掃描，得到極譜 圖，極譜波峰電位為-1.636V(wSCE)，而且峰電流的大小隨蘆丁含量的增大而 增大，并呈良好線性關(guān)系。(3) 取小同量1.0mg/ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作液，配制成梯度系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以硼砂 為底液，在與(2)相同的條件下，分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的峰電流，以蘆丁溶液 濃度為橫坐標(biāo)，峰電流為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(4) 取一定量由(1)制得的待測(cè)液，在與以上相同的條件下測(cè)定其極譜波 的峰電流，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到對(duì)應(yīng)此待測(cè)液中總黃酮的濃度，進(jìn)而求得木欖 葉中總黃酮的含量。
權(quán)利要求
1、一種紅樹木欖中總黃酮的測(cè)定方法，其特征在于(1)以干燥粉碎的木欖葉為分析試樣，60％的乙醇為提取劑，料液比1∶20，在85℃下水浴提取2h，連續(xù)重復(fù)提取2次，提取液經(jīng)聚酰胺柱層析分離后，以蘆丁為對(duì)照品，考察其極譜特性；(2)以蘆丁為對(duì)照品，配制標(biāo)準(zhǔn)系列，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定木欖葉提取分離液中總黃酮的含量。
2、 據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅樹木欖中總黃酮的測(cè)定方法，其特征在于-對(duì)蘆丁對(duì)照品及提取液分別進(jìn)行單掃描示波極譜特性考察，峰電位為-1.636 V(vs'SCE)。
3、 據(jù)權(quán)利要求2所述的一種紅樹木欖中總黃酮的測(cè)定方法，其特征在于 其特征在于該極譜特性要求的介質(zhì)為PH=9. 18的硼砂緩沖溶液。
4、 據(jù)權(quán)利要求2所述的一種紅樹木欖中總黃酮的測(cè)定方法，其特征在于 極譜波峰電流與蘆丁含量在0. 06 1. 2mg L—i范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
全文摘要
一種紅樹木欖中總黃酮含量的測(cè)定方法，取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作液，以硼砂緩沖溶液為底液，進(jìn)行線性掃描得到極譜圖，峰電流的大小隨蘆丁含量的增大而增大，并呈良好的線性關(guān)系。取不同量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作液，配制成梯度系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以硼砂為底液，分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的峰電流，以蘆丁溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰電流為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取一定量由紅樹木欖樣制得的待測(cè)液，在與蘆丁對(duì)照品相同的極譜條件下掃描該待測(cè)液的極譜波，并測(cè)定其峰電流值，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線查得與此峰電流值對(duì)應(yīng)的待測(cè)液中總黃酮的濃度，進(jìn)而即可求得試樣中總黃酮的含量。本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)單、體系穩(wěn)定、線性范圍寬等特點(diǎn)，用于紅樹木欖中總黃酮含量的測(cè)定，選擇性強(qiáng)，干擾少，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度高。
文檔編號(hào)G01N27/48GK101639460SQ20091003942
公開日2010年2月3日 申請(qǐng)日期2009年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月8日
發(fā)明者范潤(rùn)珍 申請(qǐng)人:廣東海洋大學(xué)