專利名稱：測量凝血的方法和裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于執(zhí)行分析以測定樣品中一種或多種分析物的存在、具體為測量凝
血的微流體系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
凝血是一個(gè)復(fù)雜的過程，涉及三種相互作用的組分血管，凝血因子和血小板。存 在兩種已被很好認(rèn)識(shí)的凝血途徑外源性或促凝血酶原激酶控制的、以及內(nèi)源性或凝血酶 原/纖維蛋白原控制的凝血途徑。外源性和內(nèi)源性途徑都導(dǎo)致凝血酶的產(chǎn)生，這是一種催 化纖維蛋白原向纖維蛋白轉(zhuǎn)化的蛋白水解酶?？扇苄匝獫{蛋白纖維蛋白原通過凝血酶的作 用轉(zhuǎn)化成不溶性纖維蛋白，導(dǎo)致測試樣品從液體變?yōu)槟Y(jié)的形式。 在臨床分析測試中，凝血分析測試測量纖維蛋白凝塊形成所需的時(shí)間。有許多 類型的凝血分析。它們包括凝血酶原時(shí)間(PT)、部分促凝血酶原激酶時(shí)間(PTT)、活化的 部分促凝血酶原激酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原分析、凝血酶凝血時(shí)間(TCT)、活化凝血時(shí)間 (ACT)和其它。兩種最常用的凝血測試是PT和APTT分析。這兩種測試都測量凝血時(shí)間，以 評估患者的基線止血狀態(tài)或監(jiān)測對抗凝劑療法的反應(yīng)，以及凝血系統(tǒng)的總體功能和狀態(tài)。
PT測試用于評估外源性和共同途徑凝血系統(tǒng)，并用于監(jiān)測長期抗凝劑療法。長期 抗凝劑療法的常見藥物是華法令異丙醇鈉籠形包合物，通常所知的商標(biāo)名為COUMADIN ,由 Bristol Myers Squibb銷售。華法令及其類似物通過有效阻斷維生素K依賴性凝血因子的 生物合成，來誘導(dǎo)抗凝作用。因?yàn)镻T測試測量了凝血時(shí)間，因此可以測定血液中抗凝劑的 有效量。 第二種常規(guī)使用的分析是APTT測試，廣泛用于監(jiān)測肝素療法，以篩查包含在源性 和共同凝血系統(tǒng)中的凝血因子的缺陷。肝素通過與被稱為抗凝血酶III的血漿輔因子結(jié)合 并形成復(fù)合物，來發(fā)揮其抗凝作用。 除了上述之外，F(xiàn)DA已經(jīng)批準(zhǔn)了幾種蛋白C分析進(jìn)行臨床應(yīng)用，它們廣義上可以分 成三種類型抗原性，發(fā)色性/酰胺水解性，和凝血測量?？乖苑治霭‥LISA、EIA和RIA 類型的測試。這些分析不確定蛋白是否具有功能，因?yàn)榭贵w不針對與功能活性有關(guān)的表位。
發(fā)色性/酰胺水解活分析依靠酶的活性位點(diǎn)裂解小的合成底物以釋放出色彩鮮 明的產(chǎn)物的能力。在活化的蛋白C對合成底物的活性與對天然生物學(xué)底物的活性之間可能 存在差異。此外，合成底物沒有測試酶的其它功能特征(即輔因子相互作用)。
凝血測量分析需要在樣品分析前產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品需要首先稀釋，進(jìn)行溫育以 活化蛋白C，然后啟動(dòng)凝血級聯(lián)。使用凝血時(shí)間與蛋白C活性之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線來內(nèi)推未知樣 品的蛋白C活性。盡管在實(shí)驗(yàn)室程序中存在差異，但當(dāng)打開新的試劑批次、或當(dāng)對照不在其 規(guī)定的范圍內(nèi)時(shí)，常規(guī)要對被測試的每組患者樣品重復(fù)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
在這些方法的使用中存在許多缺點(diǎn)。例如，試劑對熱敏感，在使用前需要冷藏。一 旦將干燥的試劑復(fù)溶，它必須在幾小時(shí)內(nèi)使用，否則將丟棄。此外，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備由于所用的 技術(shù)復(fù)雜而相對較大，昂貴，并且由于檢測方法的復(fù)雜性，被設(shè)計(jì)成由經(jīng)過訓(xùn)練的人員來使 用。此外，通常也需要大血樣。因此，對于精確、方便和廉價(jià)地檢測和測定凝血時(shí)間的分析 系統(tǒng)，存在著需求。
發(fā)明概述 本發(fā)明提供了用于執(zhí)行分析以測定血樣凝結(jié)所需時(shí)間的裝置和方法。裝置包含 涂有一種或多種凝血?jiǎng)┑姆磻?yīng)室。將一滴血液或等同物放置在加樣端口上，并與反應(yīng)室中 的凝血?jiǎng)┙佑|。任選，樣品可以被稀釋。接觸可以通過任何方式，例如通過將盒沿著x、 y 和z軸傾斜。血樣可以通過反應(yīng)室前后移動(dòng)，直到血液凝結(jié)。凝血過程形成的纖維蛋白叢 (fibrin stands)，阻止了血液樣品的流動(dòng)。凝結(jié)時(shí)間是從樣品進(jìn)入反應(yīng)室到樣品的運(yùn)動(dòng)或 流動(dòng)停止、或毛細(xì)管中產(chǎn)生的波幅從最初的無凝血狀態(tài)發(fā)生改變時(shí)的總時(shí)間。
在參考了下面的詳細(xì)描述后，本發(fā)明的這些以及其它方面將變得了然。此外，在本 文中提出的各種參考文獻(xiàn)更詳細(xì)地描述了某些程序或組合物，因此以其全文引為參考。
附圖簡述

圖1顯示了用后即可丟棄條的透視圖，其具有一組互連反應(yīng)室和在一個(gè)室中的可
移動(dòng)元件。 詳細(xì)描述 所有在本文中引用的出版物、專利和專利申請，不論是在上文還是下文中的，在此 以其全文引為參考。 除非另有指明，在本申請、包括說明書和權(quán)利要求書中使用的下列術(shù)語，具有下面 給出的定義。必須指出，當(dāng)用在說明書和隨附的權(quán)利要求書中時(shí)，不帶數(shù)量的指稱物包括了 復(fù)數(shù)形式，除非上下文明確有另外的表示。 本文中使用的術(shù)語"對象"包括哺乳動(dòng)物和非哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物的例子包括但 不限于哺乳動(dòng)物綱的任何成員人類，非人類靈長動(dòng)物例如黑猩猩，以及其它猿和猴物種； 農(nóng)場動(dòng)物例如牛、馬、綿羊、山羊、豬；家養(yǎng)動(dòng)物例如兔、狗和貓；實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物包括嚙齒動(dòng)物， 例如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳動(dòng)物的例子包括但不限于鳥、魚等。該術(shù)語不指定具體的 年齡或性別。 本文使用的"固體支持物"是指固體表面，例如塑料板、磁珠、乳膠珠、微孔板的孔、 玻璃板、尼龍、瓊脂糖、丙烯酰胺等。 本發(fā)明涉及測量凝血時(shí)間的方法和微流體裝置。典型的微流體裝置顯示在圖1 中。裝置含有盒100，盒100具有涂有一種或多種凝血?jiǎng)├缃M織因子或其它凝血?jiǎng)┑姆?應(yīng)室110和120。反應(yīng)室110和120可以通過一個(gè)或多個(gè)毛細(xì)管通道與血液儲(chǔ)存槽(blood reservoir) 130、不凝血參比端口 140和加樣端口 150流體連通。將一滴血液或等同物放置 在加樣端口 150上。任選，可以將稀釋劑放置在儲(chǔ)存槽150中，由此血樣與稀釋劑的混合可 以任選提供稀釋的血樣。然后可以將血樣與凝血?jiǎng)┰诜磻?yīng)室110和/或120中接觸。接觸 可以通過任何方式，例如通過機(jī)械移動(dòng)儲(chǔ)存槽130的薄膜，使得毛細(xì)管復(fù)合體中的樣品可 以以給定的頻率和幅度，與薄膜致動(dòng)器同步移位，或者通過將盒沿著x、y和z軸傾斜。血樣 可以通過反應(yīng)室110和120前后移動(dòng)，直到血液凝結(jié)。凝血過程形成的纖維蛋白架阻止了血液樣品的流動(dòng)，也改變了由薄膜動(dòng)作產(chǎn)生的波形的幅度。凝血時(shí)間是從樣品進(jìn)入反應(yīng)室 110和120到波形的幅度改變、和/或樣品的運(yùn)動(dòng)或流動(dòng)停止時(shí)的總時(shí)間。
盒100可以是長方形、圓形、橢圓形或任何形狀，并可以由適合的材料制成，所 述材料根據(jù)其性質(zhì)進(jìn)行選擇，例如良好的導(dǎo)熱性、適于光透射的透明性、易于焊接的機(jī)械 性質(zhì)、允許均勻涂層和試劑穩(wěn)定性的表面性質(zhì)、以及對液體介質(zhì)中性以防止對分析的干 擾。為此，適合的塑料包括具有高的自由表面能和低的水吸附性的塑料，包括PETG、聚酯 (Mylar )、聚碳酸酯(Lexan⑧)、聚氯乙烯、聚苯乙烯、SAN、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯 (ABS)，特別是由Borg Warner在商標(biāo)名Cycolac下提供的ABS，等等?？蛇x地或等價(jià)地，可 商購的模制盒可用于實(shí)施本發(fā)明。 盒100可以具有涂有一種或多種凝血?jiǎng)├缃M織因子的反應(yīng)室110和120。每個(gè) 反應(yīng)室可以優(yōu)選暴露于大氣。在本發(fā)明的一個(gè)方面，反應(yīng)室110和120可以具有遍布的障 礙物128。障礙物128可以是任何形狀，例如圓筒或柱形，在它們之間具有空隙，允許血樣前 后流動(dòng)，直到凝結(jié)。在本發(fā)明的另一方面，反應(yīng)室110和120不具有障礙物128。
血樣可以通過傳統(tǒng)方式從患者獲得，例如靜脈穿剌或扎手指。樣品可以通過加樣 端口 150施加到盒100上。在本發(fā)明的一個(gè)方面，從患者獲得的血樣在本發(fā)明的方法和裝 置中無需附加的操作即可使用。或者，從患者獲得的血樣可以被處理，以完全或部分地除去 血紅細(xì)胞。血紅細(xì)胞可以通過任何已知的方法移除，例如離心、將樣品與血紅細(xì)胞凝集劑反 應(yīng)、或通過使用血紅細(xì)胞過濾器。在實(shí)施方法中使用血漿，可以通過例如允許成像系統(tǒng)更好 地監(jiān)測血液中發(fā)生的物理變化，例如纖維蛋白原物理聚合成纖維蛋白，來提供更好的準(zhǔn)確 度和精確性。 在凝結(jié)前，血液或血漿可以任選用稀釋劑進(jìn)行稀釋。稀釋劑可以簡單地是水性溶 液，或者它可以是非水性溶液，并任選可以包含各種添加劑，例如鹽、蛋白、糖、糖類、金屬離 子例如鈣、鎂、鑭系元素等。某些稀釋劑的配方可以包括含有明膠的組合物和乳液。稀釋劑 典型是緩沖溶液，例如檸檬酸緩沖液。稀釋劑可以放置在儲(chǔ)存槽130、加樣端口 150或不凝 血孔140中。 然后可以將未稀釋的樣品或稀釋過的樣品移動(dòng)到反應(yīng)室110和120中，以便進(jìn)行 凝血分析。在本發(fā)明的一個(gè)方面，樣品可以使用壓力來移動(dòng)。例如，儲(chǔ)存槽130可以是與薄 膜組合的彎曲元件，或柔性的、可壓縮的、可緊縮的、可膨脹的或可壓力移動(dòng)的層或元件。薄 膜的位置要使得薄膜的一個(gè)表面暴露于環(huán)境，而薄膜的第二個(gè)表面限定出儲(chǔ)存槽130的內(nèi) 腔部分，薄膜的移動(dòng)引起內(nèi)腔中壓力的改變。壓力的改變引起血樣進(jìn)出反應(yīng)室110和120、 以及進(jìn)出不凝血參比端口 140和加樣端口 150的運(yùn)動(dòng)。優(yōu)選，儲(chǔ)存槽130的薄膜可以機(jī)械 運(yùn)動(dòng)，使得毛細(xì)管復(fù)合體中的血樣以給定的頻率和幅度位移。 本發(fā)明的凝血分析包括凝血酶原時(shí)間(PT)、部分促凝血酶原激酶時(shí)間(PTT)、活 化的部分促凝血酶原激酶時(shí)間(APTT)、凝血酶凝血時(shí)間(TCT)、纖維蛋白原、肝素管理測試 (HMT)、魚精蛋白響應(yīng)時(shí)間(PRT)、肝素響應(yīng)時(shí)間(HRT)、低分子量肝素(L麗H)、低范圍肝素 管理測試(LHMT)和蛇靜脈酶(ecarin)凝血時(shí)間(ECT)，這些測試每種的試劑都如本領(lǐng)域中 所述?？梢詫⒂糜谝环N或多種分析的試劑放置在一個(gè)或兩個(gè)反應(yīng)室110和120中。試劑可 以施加在反應(yīng)室的所有表面上，或僅僅施加在障礙物128上。將用于分析的試劑放置在反 應(yīng)室110和120之一中， 一個(gè)反應(yīng)室用作活性對照，反應(yīng)室140用作不凝血對照，因?yàn)樵撌抑袑⒉话l(fā)生凝血?；蛘?，每個(gè)反應(yīng)室110和120可以具有不同的凝血分析試劑。例如，反應(yīng) 室110可以具有用于PT分析的試劑，而反應(yīng)室120可以具有用于HRT分析的試劑。
例如，如果凝血分析是PT，可以使用任何來源的促凝血酶原激酶。例如，促凝血酶 原激酶可以從商業(yè)來源購買，或者它可以從人類胎盤、兔腦、牛腦、公牛腦和人腦中提取。也 可以使用通過重組DNA技術(shù)生產(chǎn)的促凝血酶原激酶。典型的來源是兔腦。兔腦粉是可商購 的，它可以按照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)如下進(jìn)行分離從例如新西蘭白兔中取出剝離了相連的血管的全 腦，將兔全腦在Waring混合器中、在過量丙酮中勻漿以產(chǎn)生漿液，并將漿液在真空下干燥，
以產(chǎn)生在真空下、在-2(rc儲(chǔ)存時(shí)穩(wěn)定的兔腦粉末。粉末狀牛腦、粉末狀公牛腦、粉末狀人
腦、通過重組DNA技術(shù)生產(chǎn)的粉末狀促凝血酶原激酶、以及粉末狀人胎盤，可以以類似的方 式或通過眾所周知的技術(shù)方法來制備。 然后可以將粉末狀促凝血酶原激酶源，例如兔腦粉末或人胎盤粉末，在水性溶液 中進(jìn)行提取，以制備促凝血酶原激酶提取物。水性溶液可以是溫暖的鹽水溶液，任選含有金 屬離子螯合劑。金屬離子螯合劑可以是檸檬酸、檸檬酸鹽、乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二醇雙 氨乙基醚四乙酸(EGTA)，及其鹽。粉末狀腦物質(zhì)使用水性溶液提取，促凝血酶原激酶分離在 上清液中?？梢詫⑸锨逡弘x心以分離促凝血酶原激酶，然后可以將分離的促凝血酶原激酶 冷凍干燥。 然后可以通過將通過上述過程制備的促凝血酶原激酶提取物與f丐離子進(jìn)行混合， 來制備促凝血酶原激酶試劑。通過該過程制備的促凝血酶原激酶可以、但不是必須在最終 試劑中包含金屬離子螯合劑。可以使用任何來源的鈣離子，例如氯化鈣、酒石酸鈣、葡萄糖 酸鈣、檸檬酸鈣或乳酸鈣等。這樣制備的或從商業(yè)來源獲得的促凝血酶原激酶試劑可以放 置在反應(yīng)室110和120中。 在另一個(gè)實(shí)施例中，凝血分析可以是蛋白C激活劑分析，說明了使用了蛋白C激活 劑分析的本發(fā)明方法和裝置。該分析使用的試劑含有內(nèi)源凝血途徑或因子X的引發(fā)劑，蛋 白C激活劑(例如凝血調(diào)節(jié)蛋白、ProtacTM、其它催化性或化學(xué)計(jì)量激活劑)，鈣離子，一種 或多種在凝血級聯(lián)中與鈣結(jié)合位點(diǎn)相互作用的金屬化合物、優(yōu)選為一種或多種鑭系金屬化 合物，以及任選的增量劑和/或穩(wěn)定劑。 蛋白C的濃度可以與凝血時(shí)間、凝塊形成的速度、最終凝塊的完整性(即凝塊強(qiáng) 度)或其任何組合相關(guān)聯(lián)。分析可以針對標(biāo)準(zhǔn)對照血漿進(jìn)行校正，以建立測量信號(hào)與蛋白 C濃度之間的關(guān)系。如果需要，標(biāo)準(zhǔn)對照曲線可以在樣品測量之前立即產(chǎn)生，或者可以是紙 質(zhì)的或電子儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)對照曲線。 上面描述的全血或血槳樣品可以原樣使用，或可以在蛋白C缺乏的血槳中稀釋， 優(yōu)選1份樣品對5份該缺乏血漿，以降低干擾物質(zhì)的濃度并補(bǔ)充任何可能由于遺傳或臨床 病癥而缺乏的凝血因子。此外，如果需要，可以向稀釋樣品中加入聚凝胺或另一種肝素拮抗 劑。 在本發(fā)明的蛋白C分析中，將樣品定位于含有蛋白C分析試劑的反應(yīng)室110和 120。該蛋白C分析試劑含有蛋白C激活劑、內(nèi)源凝血途徑或因子X的引發(fā)劑、鈣離子、以及 任選的一種或多種鑭系金屬化合物。 在蛋白C分析中，反應(yīng)以初始延遲時(shí)間開始，在此期間，據(jù)認(rèn)為，凝血調(diào)節(jié)蛋白捕 獲凝血酶并活化蛋白C，樣品的凝結(jié)在大約至少200秒后、優(yōu)選大約至少250秒后、更優(yōu)選大約至少300秒后開始。初始延遲時(shí)間可以在幾秒到大約5-7分鐘之間變化。 在本發(fā)明的蛋白C分析中，內(nèi)源凝血途徑或因子X的引發(fā)劑可以是任何能夠觸
發(fā)凝血級聯(lián)的物質(zhì)，例如ThromboScreen Kontact ,可以從Pacific Hemostasis of
Huntersville， N. C.商購。也可以使用因子X、凝血酶原時(shí)間(PT)和活化的部分促凝血酶
原激酶時(shí)間(APTT)的其它凝結(jié)引發(fā)劑，包括從純化的組分復(fù)溶的試劑。蛋白C激活劑優(yōu)選
為按照上面的描述制備或從商業(yè)來源獲得的凝血調(diào)節(jié)蛋白。 另一方面，本發(fā)明的裝置和方法可用于細(xì)菌內(nèi)毒素的凝結(jié)和/或發(fā)色測試。細(xì)菌 內(nèi)毒素主要是源自于革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞膜的脂多糖組分。這些測試大部分利用了來自 美國鱟(Limulus Polyphemus)的鱟變形細(xì)胞裂解物(LAL) 。 LAL暴露于細(xì)菌內(nèi)毒素或葡聚 糖，觸發(fā)了原始的凝血系統(tǒng)，導(dǎo)致將液體LAL轉(zhuǎn)化成固化的凝膠凝塊，類似于哺乳動(dòng)物血漿 凝結(jié)分析。該測試、以及利用可選的生物系統(tǒng)(即東方鱟(Tachypleus)變形細(xì)胞裂解物)、 這些系統(tǒng)的純化成分、重組蛋白單獨(dú)或與其它凝血系統(tǒng)成分、結(jié)構(gòu)蛋白、蛋白酶抑制劑或激 活劑相組合作出的任何修改，也很適合用于本發(fā)明的裝置和方法。該測試系統(tǒng)的用途包括 但不限于定量腸胃外藥物、灌洗流體、透析溶液、WFI、和醫(yī)學(xué)裝置以及IVD產(chǎn)品和加工材料 中的內(nèi)毒素水平。使用本發(fā)明的裝置和方法對細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)行的凝結(jié)和/或發(fā)色測試，在 監(jiān)測內(nèi)毒素血癥和敗血癥患者中也發(fā)現(xiàn)了用途。 在本發(fā)明的一個(gè)方面，樣品在反應(yīng)室110和120中以及在不凝血參比端口 140中 位移的頻率和/或幅度，可以作為時(shí)間的函數(shù)進(jìn)行測量。參比端口 140中的樣品將不凝結(jié)， 因?yàn)槟巹┲环胖迷诜磻?yīng)室110和/或120中。樣品在反應(yīng)室110和120中位移的頻率 和/或幅度，可以與樣品在不凝血參比端口 140中的頻率和/或幅度進(jìn)行比較。與不凝血 參比端口 140相比，樣品在反應(yīng)室110和120中位移的頻率和/或幅度的變化，指示了樣品 在凝結(jié)時(shí)間點(diǎn)從液體向纖維狀凝膠的轉(zhuǎn)變。典型地，不凝血參比端口 140可以保持向大氣 開放，以緩沖沖著凝血反應(yīng)孔的力，由此允許在凝塊一形成時(shí)就檢測到它。沒有不凝血通道 吸收附加的力，捕獲得較弱的凝塊可能從柱上裂開，或?qū)е缕錂z測的延遲。
凝結(jié)時(shí)間可以通過檢測液體樣品在與凝血試劑接觸后物理變化的改變程度來檢 測。物理變化可以是任何變化，例如濁度(包括吸光度)、粘度、介電常數(shù)等。優(yōu)選，物理變 化通過光學(xué)測量檢測運(yùn)動(dòng)和或波的性質(zhì)、或通過濁度(或吸光值)來檢測。
儲(chǔ)存槽130上的膜或薄膜通?？梢砸越o定的頻率振動(dòng)活動(dòng)。薄膜的運(yùn)動(dòng)將血液 樣品全部通過光學(xué)路徑(沿著毛細(xì)管的長度)移動(dòng)，可以光學(xué)觀察到正弦波。當(dāng)凝膠形成 (在凝結(jié)點(diǎn))時(shí)，凝塊中的纖維蛋白網(wǎng)纏繞在柱周圍，具體反應(yīng)孔中的運(yùn)動(dòng)停止。然而參比 垛口 140中的運(yùn)動(dòng)繼續(xù)，光學(xué)元件將參比端口 140中波的運(yùn)動(dòng)針對反應(yīng)室110和120中的 進(jìn)行匹配。在另一方面，反應(yīng)室110可以用作具有固定凝血時(shí)間的對照，而反應(yīng)室120可以 用于可變的患者樣品的測試區(qū)。 反應(yīng)孔可以相對于毛細(xì)管系統(tǒng)的其余部分制造得更深，以增加波形的尺寸。
除了光學(xué)元件之外，可以使用其它方法來檢測凝結(jié)的血液樣品。例如，液體樣品 的濁度(或吸光度)可以容易地通過光學(xué)監(jiān)測，可以使用可商購的裝置例如STAT MUN0 SYSTEM Quick Turbo II(由A &T Corp.制造)、自動(dòng)化分析儀Multiple Chemistry Unit 502X(由A & TCorp.制造)、自動(dòng)化分析儀Automatic Analyzer 7070 (由Hitachi Ltd. 制造)等，容易地檢測濁度變化的程度。
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例如，濁度測量可以使用自動(dòng)化分析儀Multiple Chemistry Unit502X來進(jìn)行，其 中可以選擇340到795nm之間的兩種波長作為測量波長。通過在數(shù)秒內(nèi)進(jìn)行的間歇測量， 可以同時(shí)測量選定的兩種波長。 盡管已經(jīng)參考優(yōu)選實(shí)施方案和各種可替代實(shí)施方案對本發(fā)明進(jìn)行了具體的顯示 和描述，但相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員將會(huì)理解，可以對其進(jìn)行各種形式和細(xì)節(jié)上的改變而 不背離本發(fā)明的精神和范圍。所有在本申請中引用的已出版的專利和出版物，在此以其全 文引為參考。
權(quán)利要求
一種盒，其含有兩個(gè)反應(yīng)室、血液儲(chǔ)存槽、參比端口和加樣端口，其中兩個(gè)反應(yīng)室通過毛細(xì)管通道與血液儲(chǔ)存槽流體連通，血液儲(chǔ)存槽通過毛細(xì)管通道與參比端口流體連通，參比端口通過毛細(xì)管通道與加樣端口流體連通，并且其中儲(chǔ)存槽包括用于移動(dòng)毛細(xì)管通道內(nèi)樣品的薄膜。
2. 權(quán)利要求l的盒，其中基材選自塑料、玻璃、尼龍、金屬及其組合。
3. 權(quán)利要求2的盒，其中基材是塑料。
4. 權(quán)利要求l的盒，其中反應(yīng)室含有凝血?jiǎng)?br> 5. 權(quán)利要求4的盒，其中凝血?jiǎng)┯糜谶x自下面的分析凝血酶原時(shí)間(PT)、部分促凝血 酶原激酶時(shí)間(PTT)、活化的部分促凝血酶原激酶時(shí)間(APTT)、凝血酶凝血時(shí)間(TCT)、纖 維蛋白原、肝素管理測試(HMT)、魚精蛋白響應(yīng)時(shí)間(PRT)、肝素響應(yīng)時(shí)間(HRT)、低分子量 肝素(L麗H)、低范圍肝素管理測試(LHMT)、蛇靜脈酶凝血時(shí)間(ECT)及其組合。
6. 權(quán)利要求5的盒，其中分析是PT。
7. 權(quán)利要求5的盒，其中分析是APTT。
8. —種用于測定凝血時(shí)間的方法，所述方法包括提供包含兩個(gè)反應(yīng)室、血液儲(chǔ)存槽、參比端口和加樣端口的盒，其中兩個(gè)反應(yīng)室通過毛 細(xì)管通道與血液儲(chǔ)存槽流體連通，血液儲(chǔ)存槽通過毛細(xì)管通道與參比端口流體連通，參比 端口通過毛細(xì)管通道與加樣端口流體連通；將樣品放置在加樣端口中；將用于分析的凝血?jiǎng)┓胖迷谥辽僖粋€(gè)反應(yīng)室中；將稀釋劑經(jīng)樣品端口移動(dòng)到混合孔中，并將樣品與稀釋劑混合以提供稀釋的樣品；將樣品移動(dòng)到反應(yīng)室中；以及測定樣品凝結(jié)的時(shí)間。
9. 權(quán)利要求8的方法，其中基材選自塑料、玻璃、尼龍、金屬及其組合。
10. 權(quán)利要求9的方法，其中基材是塑料。
11. 權(quán)利要求9的方法，其中樣品是血液或血漿。
12. 權(quán)利要求8的方法，其中反應(yīng)室含有凝血?jiǎng)?br> 13. 權(quán)利要求12的方法，其中凝血?jiǎng)┯糜谶x自下面的分析凝血酶原時(shí)間(PT)、部 分促凝血酶原激酶時(shí)間(PTT)、活化的部分促凝血酶原激酶時(shí)間(APTT)、凝血酶凝血時(shí)間 (TCT)、纖維蛋白原、肝素管理測試(HMT)、魚精蛋白響應(yīng)時(shí)間(PRT)、肝素響應(yīng)時(shí)間(HRT)、 低分子量肝素(L麗H)、低范圍肝素管理測試(LHMT)、蛇靜脈酶凝血時(shí)間(ECT)及其組合。
14. 權(quán)利要求13的方法，其中分析是PT。
15. 權(quán)利要求13的方法，其中分析是APTT。
16. 權(quán)利要求8的方法，其中樣品凝結(jié)的時(shí)間通過光學(xué)方法測定。
17. 權(quán)利要求8的方法，其中樣品凝結(jié)的時(shí)間通過濁度測量來測定。
18. 權(quán)利要求8的方法，其中儲(chǔ)存槽包括用于移動(dòng)毛細(xì)管通道內(nèi)樣品的薄膜。
19. 權(quán)利要求8的方法，還包括將稀釋劑放置在儲(chǔ)存槽中。
全文摘要
本發(fā)明提供了執(zhí)行分析以測定血液樣品凝結(jié)所需時(shí)間的裝置和方法。裝置包含涂有一種或多種凝血?jiǎng)┑姆磻?yīng)室。將一滴血液或等同物放置在加樣端口上，稀釋，并與反應(yīng)室中的凝血?jiǎng)┙佑|。稀釋后的血樣可以通過反應(yīng)室前后移動(dòng)，直到血液凝結(jié)。凝血過程形成的纖維蛋白架阻止了血樣流入反應(yīng)室。凝血時(shí)間是從樣品進(jìn)入反應(yīng)室到反應(yīng)室中的波形發(fā)生變化、或樣品的運(yùn)動(dòng)或流動(dòng)停止時(shí)的總時(shí)間，可以通過濁度來測量。
文檔編號(hào)G01R27/08GK101720432SQ200880020722
公開日2010年6月2日 申請日期2008年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月20日
發(fā)明者伊曼紐爾·C·埃姆帕克, 威爾瑪·曼甘 申請人:Mec戴內(nèi)米克公司