專利名稱：人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種檢測試劑盒，具體涉及人類偏肺病毒的 間接免疫熒光檢測試劑盒.
背景技術(shù)：
人類偏肺病毒(Human Metapneumovirus, hMPV)為荷蘭學(xué)者于2001年首 次在兒童呼吸道感染標(biāo)本中分離得到的一種新的呼吸道病原體。該病毒可導(dǎo)致 人的上下呼吸道感染，其臨床特征類似于RSV (呼吸道合胞病毒)，主要癥狀包 括咳嗽、咽痛、呼吸困難、缺氧、喘息等。有報(bào)道hMPV是老人、兒童、免疫缺 陷者嚴(yán)重呼吸道感染疾病的常見病原體。
人類偏肺病毒已發(fā)現(xiàn)了七年，亞洲、北美洲、歐洲、南美洲、非洲、大洋 洲均有其感染的流行病學(xué)報(bào)告，呈現(xiàn)全球流行趨勢。在我國重慶和北京也有關(guān) 于hMPV感染的報(bào)道。血清學(xué)研究表明hMPV已經(jīng)在人群流行50年以上，大多數(shù) 人在5歲時(shí)均已感染過hMPV。其感染的臨床特征類似于RSV，癥狀主要包括咳嗽、 咽痛、發(fā)熱、呼吸困難、缺氧、喘息等。4 ~ 10. 8 %的呼吸道感染住院患兒同hMPV 有關(guān)。hMPV還是引起老人和免疫缺陷患者嚴(yán)重呼吸道感染疾病的常見病原體， 并可同其他一些病原體合并感染，如RSV， SARS-CoV (嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀 病毒)。由此可見，hMPV是一種常見的呼吸道病原體，建立快速準(zhǔn)確的檢測手段 對于其早期診斷治療具有重要意義。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢測試劑盒，它能 用于早期感染人類偏肺病毒的檢測，操作簡便、快速準(zhǔn)確，而且重復(fù)性好、通 用性好、經(jīng)濟(jì)實(shí)用。
本發(fā)明所述的人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢測試劑盒，包括分別包裝的
試劑A:鼠抗人類偏肺病毒單克隆抗體濃度為1%的BSA (牛血清白蛋白) 的體積百分比為1: 50 ~ 20000的溶液lml;試劑A的作用在于與人類偏肺病毒 的抗原結(jié)合。
試劑B:含吐溫-20的磷酸緩沖液(PBST) 100ml;試劑B為洗液，作用在 于洗去未結(jié)合的抗體。
試劑C: FITC標(biāo)記羊抗鼠IgG抗體試劑B的體積百分比為1: 10 ~ 1000 的溶液lml;試劑C的作用在于形成抗原一特異性抗體一熒光抗體的復(fù)合物；
試劑D:濃度為0.01% Evens blue (伊文思藍(lán))染液lml。試劑D的作用 是將背景細(xì)胞和組織染色，呈紅色熒光，與特異性黃綠色熒光形成鮮明的對比， 減少了非特異性熒光，便于分析和觀察。
所述的人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢測試劑盒，其所述的含吐溫-20的磷 酸緩沖液，為O. 8gNaCl; 0. 02g KC1; 0. 144g Na2HP04; 0. 024g KH2P04; 0.2ml Tween-20 (吐溫-20)溶于80ml蒸餾水，調(diào)整pH到6-8，最后加蒸餾水定容 到100 ml。
本試劑盒的特異性實(shí)驗(yàn)檢觀J Light Diagnostics Respiratory panel 1 DFA 免疫熒光試劑盒(購自美國W公司)中七種常見呼吸道病毒腺病毒，A型流感 病毒，B型流感病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型，副流感病毒3型，呼吸 道合胞病抗原玻片。特異性實(shí)驗(yàn)顯示檢測腺病毒,A型流感病毒，B型流感病毒，副流感病毒l 型，副流感病毒2型，副流感病毒3型，呼吸道合胞病毒抗原玻片，未見陽性細(xì) 胞，無交叉反應(yīng)。提示該試劑盒特異性很高。
本試劑盒的靈敏度實(shí)驗(yàn)在二十四孔板中培養(yǎng)Vero-E6細(xì)胞(非洲綠猴腎 細(xì)胞)，用DMEM(達(dá)爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基)培養(yǎng)基將病毒液按十倍梯度稀釋， 設(shè)10^10'倍稀釋七個(gè)梯度，設(shè)未接種病毒的細(xì)胞為陰性對照，病毒原液接種 細(xì)胞為陽性對照。待稀釋105倍病毒接種的細(xì)胞孔出現(xiàn)細(xì)胞病變后，刮下細(xì)胞， 制作抗原玻片，進(jìn)行免疫熒光檢測。同時(shí)吸取各孔上清用TCID5。(半數(shù)致死法) 法進(jìn)行病毒滴度測定。
靈敏度實(shí)驗(yàn)顯示分別檢測經(jīng)梯度稀釋接種到細(xì)胞中的病毒抗原，可見101 到l(T倍稀釋孔中陽性細(xì)胞逐漸減少，105倍稀釋孔中未見陽性細(xì)胞。重復(fù)檢測 五次，結(jié)果相同。測定104倍稀釋孔病毒滴度為10"TCID50/ml。提示該試劑盒 的靈敏度很高。
實(shí)驗(yàn)速度應(yīng)用本試劑盒進(jìn)行人類偏肺病毒的檢測，非常迅速。其他的一 些病毒檢測經(jīng)典方法，如病毒分離培養(yǎng)，需要1 ~ 2周時(shí)間，核酸擴(kuò)增法需要4 -6小時(shí)，而本試劑盒只需要大約2小時(shí)。
本發(fā)明的有益效果它能用于早期人類偏肺病毒感染的檢測，其靈敏度高、 特異性好、速度快，而且重復(fù)性好、經(jīng)濟(jì)實(shí)用，能為早期"^斷和治療提供可靠 的依據(jù)。


圖l是人類偏肺病毒感染檢測用玻片示意圖。 圖2是人類偏肺病毒感染陰性結(jié)果示意圖。圖3是人類偏肺病毒感染陽性結(jié)果示意圖(放大200倍)。 圖4是人類偏肺病毒感染陽性結(jié)果示意圖(放大400倍)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所述的人類偏肺病毒的間接免疫焚光檢測試劑盒，包括分別包裝的 試劑A:鼠抗人類偏肺病毒單克隆抗體濃度為1%的BSA (牛血清白蛋白)
的體積百分比為1: 50 ~ 20000的溶液lml;其中的鼠抗人偏肺病毒單克隆抗體
購自美國CHEMICON/仝司。
試劑B:含吐溫-2Q的磷酸緩沖液(PBST) 100 ml;試劑B為洗液；
試劑C: FITC標(biāo)記羊抗鼠IgG抗體試劑B的體積百分比為1: 10 ~ 1000
的溶液lml;其中的FITC (異>^氰酸熒光素)標(biāo)記羊抗鼠IgG (免疫球蛋白G)
抗體，購自美國CHEMICON公司；
試劑D:濃度為0. 01% Evens blue H尹文思藍(lán))染液lml。 所述的含吐溫-2Q的磷酸緩沖液為0. 8gNaCl; 0. 02gKCl; 0.144gNa風(fēng);
0. 024g KH2P04; 0. 2ml Tween-20 (吐溫-20 )溶于80ml蒸餾水，調(diào)整pH到6 ~
8，最后加蒸餾水定容到100 ml 。
實(shí)施例一臨床標(biāo)本的檢測，所用的人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢測試
劑盒，包括分別包裝的
試劑A:鼠抗人類偏肺病毒單克隆抗體濃度為1%的BSA (牛血清白蛋白)
的體積百分比為1: 50的溶液lml;其中的鼠抗人偏肺病毒單克隆抗體購自美國
CHEMICON公司；
試劑B:含吐溫-20的磷酸緩沖液(PBST) 100 ml;該含吐溫-20的磷酸緩 沖液為0. 8g NaCl; 0. 02g KC1; 0.144g Na2HP04; 0. 024g KH2PO" 0. 2ml Tween-20(吐溫-20)溶于80ml蒸餾水，調(diào)整pH到6,最后加蒸餾水定容到100 ml。
試劑C: FITC (異硫氰熒光素)標(biāo)記羊抗鼠IgG (免疫球蛋白G)抗體試 劑B的體積百分比為1: 10的溶液lml;
試劑D:濃度為0. 01% Evens blue H尹文思藍(lán))染液lml。
參見圖1、圖2 、圖3和圖4 ，使用以上試劑盒進(jìn)行檢測的步驟如下
(1) 取病人鼻咽分泌物，存標(biāo)本轉(zhuǎn)移液中，置于水上，迅速轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室； 充分吹打臨床標(biāo)本，1000rpm,4。C離心IO分鐘，棄去上清，PBS (石克酸緩沖液) 重懸；
(2) 滴加待檢測的細(xì)胞懸液至玻片孔中。室溫自然干燥后，將玻片置于4 C丙酮固定10分鐘。取出自然干燥；
(3) 每孔滴加4微升試劑A覆蓋抗原玻片孔，置濕盒，37"C30分鐘；試劑 B洗滌3次，每次5min'，
(4) 千燥后滴加試劑C，置濕盒內(nèi)37"C30分鐘； (5 )試劑B洗滌3次，每次10min;
(6) 干燥后試劑D染色5分鐘；
(7) 蒸餾水洗凈，自然干燥，甘油封片后置熒光顯微鏡下觀察；
(8) 設(shè)置未感染hMPV的Vero-E6細(xì)胞為陰性對照，在熒光顯微鏡x100 視野下至少可見100個(gè)細(xì)胞為有效玻片。細(xì)胞完整，形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，胞漿內(nèi)有 明亮的綠色熒光顆粒者為陽性細(xì)胞。檢驗(yàn)臨床標(biāo)本時(shí)以hMPV感染的Vero-E6細(xì) 胞作為陽性對照，每份標(biāo)本中可見至少兩個(gè)陽性細(xì)胞，陰性對照無特異性熒光， 陽性對照陽性著判為陽性。
實(shí)施例二臨床標(biāo)本的檢測，所用的人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢測試劑盒，包括分別包裝的
試劑A:鼠抗人類偏肺病毒單克隆抗體濃度為1°/。的BSA的體積百分比為1: 2000的溶液lml;
試劑B:含吐溫-20的磷酸緩沖液(PBST) 100 ml;該含吐溫-20的磷酸緩 沖液為O. 8gNaCl; 0.02gKCl; 0. 144g Na2HP04; 0. 024g KH2P04; 0. 2ml Tween-20 (吐溫-20)溶于80ml蒸餾水，調(diào)整pH到7，最后加蒸餾水定容到100 ml。 試劑C: FITC標(biāo)記羊抗鼠IgG抗體試劑B的體積百分比為1: 500的溶液
lml;
試劑D:濃度為0. 01% Evens blue (伊文思藍(lán))染液lml。 參見圖1 、圖2 、圖3和圖4 ，使用以上試劑盒進(jìn)^ff檢測的步驟如下
(1) 取病人鼻咽分泌物，存標(biāo)本轉(zhuǎn)移液中，置于水上，迅速轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室；
(2) 充分吹打臨床標(biāo)本，1000rpm,4X:離心IO分鐘，棄去上清，PBS重懸；
(3) 滴加待檢測的細(xì)胞懸液至玻片孔中。室溫自然干燥后，將玻片置于4 'C丙酮固定10分鐘。取出自然干燥；
(4) 每孔滴加4微升試劑A覆蓋抗原玻片孔，置濕盒，371C30分鐘； (5 )試劑B洗滌3次，每次5min; (6)干燥后滴加試劑C，置濕盒內(nèi)37匸30分鐘；
(7 )試劑B洗滌3次，每次10min;
(8) 干燥后試劑D染色5分^h
(9) 蒸餾水洗凈，自然干燥，甘油封片后置熒光顯孩t鏡下觀察；
(10) 設(shè)置未感染hMPV的Vero-E6細(xì)胞為陰性對照，x 100視野下至少可 見100個(gè)細(xì)胞為有效玻片。細(xì)胞完整，形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，胞漿內(nèi)有明亮的綠色熒光顆粒者為陽性細(xì)胞。檢驗(yàn)臨床標(biāo)本時(shí)以hMPV感染的Vero-E6細(xì)胞作為陽性對 照，每份標(biāo)本中可見至少兩個(gè)陽性細(xì)胞，陰性對照無特異性熒光，陽性對照陽 性著判為陽性。
實(shí)施例三臨床標(biāo)本的檢測，所用的人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢測試 劑盒，包括分別包裝的
試劑A:鼠抗人類偏肺病毒單克隆抗體濃度為"/。的BSA (牛血清白蛋白) 的體積百分比為1: 20000的溶液lml;
試劑B:含吐溫-20的磷酸緩沖液(PBST) 100 ml;該含吐溫-20的磷酸緩 沖液為0. 8g NaCl; 0. 02g KC1; 0. 144g Na2HP04; 0. 024g KH2P04; 0. 2ml Tween-20 (吐溫-20)溶于80ml蒸餾水，調(diào)整pH到8,最后加蒸餾水定容到100 ml,
試劑C: FITC (異硫氰熒光素)標(biāo)記羊抗鼠IgG (免疫球蛋白G)抗體試 劑B的體積百分比為1: 1000的溶液1ml;
試劑D:濃度為0.01% Evens blue (伊文思藍(lán))染液lml。
參見圖1、圖2 、圖3和圖4 ，使用以上試劑盒進(jìn)行檢測的步驟如下
(1) 取病人鼻咽分泌物，存標(biāo)本轉(zhuǎn)移液中，置于冰上，迅速轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室；
(2) 充分吹打臨床標(biāo)本，1000rpm，4r離心IO分鐘，棄去上清，PBS重懸；
(3) 滴加待檢測的細(xì)胞懸液至玻片孔中。室溫自然干燥后，將玻片置于4 'C丙酮固定10分鐘。取出自然干燥；
(4 )每孔滴加4微升試劑A覆蓋抗原玻片孔，置濕盒，37"C30分鐘；
(5 )試劑B洗滌3次，每次5min;
(6)千燥后滴加試劑C，置濕盒內(nèi)371C30分鐘；
(7 )試劑B洗滌3次，每次10min;(8) 干燥后試劑D染色5分鐘；
(9) 蒸餾水洗凈，自然干燥，甘油封片后置熒光顯微鏡下觀察；
(10) 設(shè)置未感染hMPV的Vero-E6細(xì)胞為陰性對照，x IOO視野下至少可 見100個(gè)細(xì)胞為有效玻片。細(xì)胞完整，形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，胞漿內(nèi)有明亮的綠色熒 光顆粒者為陽性細(xì)胞。檢驗(yàn)臨床標(biāo)本時(shí)以hMPV感染的Vero-E6細(xì)胞作為陽性對 照，每份標(biāo)本中可見至少兩個(gè)陽性細(xì)胞，陰性對照無特異性熒光，陽性對照陽 性著判為陽性。
實(shí)施例四培養(yǎng)病毒標(biāo)本的檢測，所用的人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢 測試劑盒，包括分別包裝的
試劑A:鼠抗人類偏肺病毒單克隆抗體濃度為1%的BSA (牛血清白蛋白) 的體積百分比為1: 50的溶液lml;
試劑B:含吐溫-20的磷酸緩沖液(PBST) 100 ml;該含吐溫-20的磷酸緩 沖液為O. 8gNaCl; 0. 02gKCl; 0. 144g Na2HP04; 0. 024g KH2P04; 0. 2ml Tween-20 (吐溫-20)溶于80ml蒸餾水，調(diào)整pH到6，最后加蒸餾水定容到100 ml。
試劑C: FITC (異硫氰熒光素)標(biāo)記羊抗鼠IgG (免疫球蛋白G)抗體試 劑B的體積百分比為1: 10的溶液1ml;
試劑D:濃度為0.01% Evens blue (伊文思藍(lán))染液lml。
參見圖l、圖2、圖3和圖4，使用以上試劑盒進(jìn)行檢測的步驟如下 (1)病毒接種培養(yǎng)Vero-E6細(xì)胞，待其長成單層平鋪孔底約70 ~ 80 % ， 棄去培養(yǎng)液，加入hMPV病毒液，置5。/。C02孵箱中371C孵育1小時(shí)。棄去病毒 液，加入病毒維持液，i丈入5。/。C02孵箱中37。C培養(yǎng)。約5-7天后，待感染細(xì) 胞出現(xiàn)明顯CPE后，刮下細(xì)胞。離心棄去病毒維持液，以PBS重懸；(2) 滴加待檢測的細(xì)胞懸液至玻片孔中。室溫自然干燥后，將玻片置于4 。C丙酮固定10分鐘。取出自然干燥；
(3) 每孔滴加4微升試劑A覆蓋抗原玻片孔，置濕盒，37'C30分鐘； (4 )試劑B洗滌3次，每次5min;
(5)干燥后滴加試劑C，置濕盒內(nèi)37。C30分鐘； (6 )試劑B洗滌3次，每次10min;
(7) 干燥后試劑D染色5分鐘；
(8) 蒸餾水洗凈，自然干燥，甘油封片后置熒光顯孩i鏡下觀察；
(9 )設(shè)置未感染hMPV的Vero-E6細(xì)胞為陰性對照，x 100視野下至少可見 IOO個(gè)細(xì)胞為有效玻片。細(xì)胞完整，形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，胞漿內(nèi)有明亮的綠色熒光顆 粒者為陽性細(xì)胞。檢驗(yàn)臨床標(biāo)本時(shí)以hMPV感染的Vero-E6細(xì)胞作為陽性對照， 每份標(biāo)本中可見至少兩個(gè)陽性細(xì)胞，陰性對照無特異性熒光，陽性對照陽性著 判為陽性。
實(shí)施例五培養(yǎng)病毒標(biāo)本的檢測，所用的人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢 測試劑盒，包括分別包裝的
試劑A:鼠抗人類偏肺病毒單克隆抗體濃度為1%的BSA (牛血清白蛋白) 的體積百分比為1: 2000的溶液lml;
試劑B:含吐溫-20的磷酸緩沖液(PBST) 100 ml;該含吐溫-20的磷酸緩 沖液為0. 8g NaCl; 0. 02g KC1; 0. 144g Na2HP04; 0. 024g KH2P04; 0. 2ml Tween-20 (吐溫-20)溶于80ml蒸餾水，調(diào)整pH到7，最后加蒸餾水定容到100 ml。
試劑C: FITC (異硫氰熒光素)標(biāo)記羊抗鼠IgG (免疫球蛋白G)抗體試 劑B的體積百分比為1: 500的溶液lml;試劑D:濃度為0.01% Evens blue H尹文思藍(lán))染液lml。
參見圖1、圖2 、圖3和圖4 ,使用以上試劑盒進(jìn)行檢測的步驟如下
(1) 病毒接種培養(yǎng)Vero-E6細(xì)胞，待其長成單層平鋪孔底約70 ~ 80 % ， 棄去培養(yǎng)液，加入hMPV病毒液，置5%C02孵箱中37n孵育1小時(shí)。棄去病毒 液，加入病毒維持液，放入5。/。C02孵箱中371C培養(yǎng)。約5~7天后，待感染細(xì) 胞出現(xiàn)明顯CPE后，刮下細(xì)胞。離心棄去病毒維持液，以PBS重懸；
(2) 滴加待檢測的細(xì)胞懸液至玻片孔中。室溫自然干燥后，將玻片置于4 。C丙酮固定10分鐘。取出自然千燥；
(3) 每孔滴加4微升試劑A覆蓋抗原玻片孔，置濕盒，37'C30分鐘； (4 )試劑B洗滌3次，每次5min;
(5)干燥后滴加試劑C,置濕盒內(nèi)37t:30分鐘； (6 )試劑B洗滌3次，每次10min;
(7) 干燥后試劑D染色5分鐘；
(8) 蒸餾水洗凈，自然干燥，甘油封片后置熒光顯農(nóng)i鏡下觀察；
(9 ) i殳置未感染hMPV的Vero-E6細(xì)胞為陰性對照，x 100 ;f見野下至少可見 IOO個(gè)細(xì)胞為有效玻片。細(xì)胞完整，形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，胞漿內(nèi)有明亮的綠色熒光顆 粒者為陽性細(xì)胞。檢驗(yàn)臨床標(biāo)本時(shí)以hMPV感染的Vero-E6細(xì)胞作為陽性對照， 每份標(biāo)本中可見至少兩個(gè)陽性細(xì)胞，陰性對照無特異性熒光，陽性對照陽性著 判為陽性。
實(shí)施例六培養(yǎng)病毒標(biāo)本的檢測，所用的人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢 測試劑盒，包括分別包裝的試劑A:鼠抗人類偏肺病毒單克隆抗體濃度為1%的BSA (牛血清白蛋白) 的體積百分比為1:20000的溶液lml;
試劑B:含吐溫-20的磷酸緩沖液(PBST) 100 ml;該含吐溫-20的磷酸緩 沖液為0. 8g NaCl; 0. 02g KC1; 0. 144g Na2HP04; 0. 024g KH2P04; 0. 2ml Tween-20 (吐溫-20)溶于80ml蒸餾水，調(diào)整pH到8，最后加蒸餾水定容到100 ml。
試劑C: FITC (異硫氰熒光素)標(biāo)記羊抗鼠IgG (免疫球蛋白G)抗體試 劑B的體積百分比為1: 1000的溶液lml;
試劑D:濃度為0.01% Evens blue U尹文思藍(lán))染液lml。
參見圖1、圖2 、圖3和圖4 ，使用以上試劑盒進(jìn)行檢測的步驟如下
(1) 病毒接種培養(yǎng)Vero-E6細(xì)胞，待其長成單層平鋪孔底約70~80%， 棄去培養(yǎng)液，加入hMPV病毒液，置5。/。C02孵箱中371C孵育1小時(shí)。棄去病毒 液，加入病毒維持液，》文入5。/。C02孵箱中37。C培養(yǎng)。約5 7天后，待感染細(xì) 胞出現(xiàn)明顯CPE后，刮下細(xì)胞。離心棄去病毒維持液，以PBS重懸；
(2) 滴加待檢測的細(xì)胞懸液至玻片孔中。室溫自然干燥后，將玻片置于4 。C丙酮固定10分鐘。取出自然干燥；
(3 )每孔滴加4微升試劑A覆蓋抗原玻片孔，置濕盒，37'C 30分鐘；
(4 )試劑B洗、滌3次，每次5min;
(5)干燥后滴加試劑C，置濕盒內(nèi)37'C30分鐘；
(6 )試劑B洗'滌3次，每次10min;
(7) 干燥后試劑D染色5分鐘；
(8) 蒸餾水洗凈，自然干燥，甘油封片后置熒光顯孩i:鏡下觀察；設(shè)置未感染。
(9 ) hMPV的Vero-E6細(xì)胞為陰性對照，x 100 ^見野下至少可見100個(gè)細(xì)胞 為有效玻片。細(xì)胞完整，形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，胞漿內(nèi)有明亮的綠色熒光顆粒者為陽 性細(xì)胞。檢驗(yàn)臨床標(biāo)本時(shí)以hMPV感染的Vero-E6細(xì)胞作為陽性對照，每份標(biāo)本 中可見至少兩個(gè)陽性細(xì)胞，陰性對照無特異性熒光，陽性對照陽性著判為陽性。
權(quán)利要求
1、人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢測試劑盒，包括試劑A鼠抗人類偏肺病毒單克隆抗體濃度為1％的BSA(牛血清白蛋白)的體積百分比為150～20000的溶液1ml；試劑B含吐溫-20的磷酸緩沖液(PBST)100ml；試劑CFITC標(biāo)記羊抗鼠IgG抗體試劑B的體積百分比為1∶10～1000的溶液1ml；試劑D濃度為0. 01％Evensblue(伊文思藍(lán))染液1ml。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢測試劑盒，其特 征是所述的含吐溫-20的磷酸緩沖液，為0. 8g NaCl; 0. 02g KC1; 0. 144g Na風(fēng); 0. 024g KH2P04; 0. 2ml Tween-20 (吐溫-20 )溶于80ml蒸餾水，調(diào)整pH到6 ~ 8，最后加蒸餾水定容到100 ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及人類偏肺病毒的間接免疫熒光檢測試劑盒，包括試劑A鼠抗人類偏肺病毒單克隆抗體∶濃度為1％的BSA(牛血清白蛋白)的體積百分比為1∶50～20000的溶液1ml；試劑B含吐溫-20的磷酸緩沖液(PBST)100ml；試劑CFITC標(biāo)記羊抗鼠IgG抗體∶試劑B的體積百分比為1∶10～1000的溶液1ml；試劑D濃度為0.01％Evens blue(伊文思藍(lán))染液1ml。本發(fā)明的有益效果它能用于早期人類偏肺病毒感染的檢測，其靈敏度高、特異性好、速度快，而且重復(fù)性好、經(jīng)濟(jì)實(shí)用，能為早期診斷和治療提供可靠的依據(jù)。
文檔編號G01N33/577GK101446592SQ200810237020
公開日2009年6月3日 申請日期2008年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月31日
發(fā)明者妍 任, 耀 趙, 趙曉東 申請人:重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院