專利名稱：：局部缺血生物標(biāo)記物及其在預(yù)測手術(shù)造成的不良神經(jīng)事件中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及預(yù)測術(shù)后不良神經(jīng)事件風(fēng)險(xiǎn)的方法，特別涉及預(yù)定進(jìn)行手術(shù)患者血液中NR2肽和抗體的片全測方法，及利用該測試結(jié)果預(yù)測術(shù)后病人發(fā)生中風(fēng)、短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)或其它局部缺血引起的事件的可能性的方法。該測試特別有益于患有預(yù)先存在心血管疾病、腦血管疾病、高血壓、糖尿病或頸動(dòng)脈血管雜音等可能患手術(shù)造成的不良神經(jīng)事件的，但其術(shù)后風(fēng)險(xiǎn)尚未完全明了的患者。該測試的診斷和預(yù)后功能有希望降低手術(shù)室發(fā)病率和死亡率，改善對(duì)預(yù)定進(jìn)行手術(shù)的心腦血管患者的管理。
背景技術(shù)：
：手術(shù)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)帶來的損害是對(duì)神經(jīng)元直接的毒性效應(yīng)和因全身性低氧和局部缺血引起的繼發(fā)性損害的組合。中風(fēng)或是閉塞性的(由于血管的堵塞)，或是出血性的(由于血管出血)，但兩種情形都引起腦血液供應(yīng)不足，導(dǎo)致:帔稱為局部缺血的病癥。灶性腦損害與常發(fā)生于心博停止或低灌注狀態(tài)下的全腦缺氧性損害不同(GrahamSH,ChenJ.JCerebBloodFlow2001;21:99-109)。當(dāng)灶性腦損害發(fā)生時(shí)，局部缺血中心形成，特征性地被半影區(qū)的存活細(xì)胞所環(huán)繞，這些存活細(xì)胞阻止了(至少是延遲了)梗塞的擴(kuò)張和腦損害的程度(DeshpandeJ,etal.ExpBrainRes1992;88:91-105;MatsuiT,etal.JCerebBloodFlowMetab2002;22:711-722)。而當(dāng)全腦缺血發(fā)生時(shí)，最易損區(qū)位于頂葉皮質(zhì)和基底神經(jīng)節(jié)，在該區(qū)域可以觀察到凋亡事件的發(fā)生(KjosBO,Brant-ZawadzkiM,YoungRG.AmJRoentgenol1983;141:1227-1232)。在過去10年中，已提出了幾種預(yù)測和診斷腦損害的生物標(biāo)記物。有關(guān)S100B與中風(fēng)、創(chuàng)傷性腦損害和心博停止后引發(fā)的腦損害具有相關(guān)性的報(bào)道激發(fā)了人們對(duì)心外科手術(shù)中以血清S100B做為神經(jīng)學(xué)和神經(jīng)認(rèn)知結(jié)果評(píng)價(jià)的生物標(biāo)記物的巨大興趣(AbrahaHD,etal.AnnClinBiochem1997;34:366-370;ButtnerT,etal.Stroke1997;28:1961-1965;LynchJR,etal.Stroke2004;35:57-63)。S100B為一主要發(fā)現(xiàn)于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和Schwann細(xì)胞的鈣調(diào)節(jié)蛋白。另一心臟手術(shù)后腦血管事件的可能生物標(biāo)記物為C-反應(yīng)蛋白(CRP)，CRP為一種急性期反應(yīng)物和潛在系統(tǒng)炎癥的指示物。CRP為新型的動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成性疾病血漿標(biāo)記物和心血管疾病的預(yù)示物(RostNS,etal.Stroke2001;32:2575-79)。最近，N-曱基-D-天冬氨酸(NMDA)受體肽及其抗體被提議做為潛在的腦局部缺血和中風(fēng)的神經(jīng)毒性的標(biāo)記物(DambinovaSA,etal.Stroke2002;33:1181-1182;DambinovaSA，etal.ClinChem2003;49:1752-1762)。NMDA受體是腦特異性的。如神經(jīng)元死亡或腦局部缺血，NMDA受體肽片段斷裂，出現(xiàn)在血流中，并引發(fā)抗體響應(yīng)，在血樣中可同時(shí)檢測到肽片段和抗體(DambinovaSA,etal.Stroke2002)。患急性局部缺血性中風(fēng)的成年患者NMDA肽或抗體，或其組合水平升高，并與腦掃描儀(MRI)確定的腦損害程度和患者神經(jīng)認(rèn)知狀態(tài)相關(guān)(DambinovaSA,etal.ClinChem2003;49:1752-1762)。常規(guī)應(yīng)用具有潛在診斷或預(yù)后能力的特異性生物標(biāo)記物能大大提高手術(shù)中心腦血管患者的管理和治療效果，特別是心臟手術(shù)包括心肺分流術(shù)患者(CPB)。腦部并發(fā)癥為伴心肺分流術(shù)心臟手術(shù)后死亡或殘廢的主要因素。在手術(shù)期內(nèi)，中風(fēng)的發(fā)生率在1%和5%之間(GardnerTJ,etal.AnnThoracSurg1985;40:574-581;MurkinJM,etal.JThoracCardiovascSurg1995;110:349-362;RoachGW,etal.NEnglJMed1996;335:1857-1863;LibmanRB,etal.ArchNeurol1997;54:83-87;CarrascalY,etal.EurNeurol1999;41:128-134),并且其發(fā)生率與升高的死亡率相關(guān)(RoachGW,etal.NEn—glJMed1996;335:1857-1863;CarrascalY,etal.EurNeurol1999;41:128-134)。盡管中風(fēng)為明顯的并發(fā)癥，神經(jīng)認(rèn)知紊亂和精神錯(cuò)亂為更微妙的并發(fā)癥，神經(jīng)認(rèn)知紊亂對(duì)術(shù)后護(hù)理和因此延長住院治療相關(guān)費(fèi)用的影響是巨大的。全腦局部缺血與心血管系統(tǒng)疾病有關(guān)，并造成神經(jīng)認(rèn)知能力的惡化和神經(jīng)學(xué)并發(fā)癥。多項(xiàng)研究采用一系列的神經(jīng)認(rèn)知測試技術(shù)，才艮道了心臟手術(shù)后常發(fā)生輕度神經(jīng)心理損傷(MurkinJM,etal.JThoracCardiovascSurg1995;110:349-362;ShawPJ,etal.QJMed1987;239:259-268;McKha皿GM,etal.AnnThroracSurg1997;63:510-515;McKhannetal.Lancet1997;349:1282-1284)。但單獨(dú)的神經(jīng)認(rèn)知測試并不能預(yù)測術(shù)后不良神經(jīng)事件?；谕饪剖中g(shù)前風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)和與手術(shù)方法有關(guān)機(jī)制，定義心臟手術(shù)相關(guān)的腦部功能紊亂決定因素，對(duì)降低源于該方法的風(fēng)險(xiǎn)和提高患者治療效果非常重要。當(dāng)前可以通過比較手術(shù)前和手術(shù)后臨床和神經(jīng)心理學(xué)評(píng)價(jià)，或采用成像技術(shù)(CT或MRI)檢測形態(tài)學(xué)改變，回顧性評(píng)價(jià)因心臟手術(shù)導(dǎo)致的腦損害。遺憾的是，神經(jīng)心理學(xué)評(píng)價(jià)需要時(shí)間，專家工作人員與患者的配合。另外，神經(jīng)影像(特別是MRI)非常昂貴，并且可能對(duì)術(shù)后患者造成壓力或風(fēng)險(xiǎn)。因此，獲得一種能檢測腦損害和預(yù)測進(jìn)一步腦損害的生物標(biāo)記物具有相當(dāng)大的實(shí)際價(jià)值。發(fā)明目的本發(fā)明的一個(gè)目的是通過手術(shù)前測定患者血液或其它生物體液中的生物標(biāo)記物，準(zhǔn)確預(yù)測預(yù)定進(jìn)行手術(shù)患者不良神經(jīng)事件，包括短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)、中風(fēng)和神經(jīng)認(rèn)知功能紊亂的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明另一目的是在具有上述不良事件特別風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)定進(jìn)行手術(shù)患者中，包括具有預(yù)先存在心腦血管損害或急性局部缺血應(yīng)激，或糖尿病患者中，評(píng)價(jià)局部缺血誘導(dǎo)的不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)。另外，本發(fā)明的另一目的是在手術(shù)前，手術(shù)中和手術(shù)后更有效選擇介入策略，包括監(jiān)控方案和進(jìn)行神經(jīng)保護(hù)治療以阻止腦局部缺血引起的損害，以降低術(shù)后不良神經(jīng)事件風(fēng)險(xiǎn)。發(fā)明簡述提供了方法和試劑盒，可根據(jù)患者血流中NMDA受體肽和抗體的存在及數(shù)量，評(píng)價(jià)術(shù)后患者患不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)。在成年患者中手術(shù)前臨床預(yù)測定的NMDA受體肽和抗體的截?cái)嘀凳刮覀兡軌蜿U釋該肽和抗體測試在評(píng)價(jià)神經(jīng)不良事件(包括TIA和中風(fēng))中的高效特性和臨床應(yīng)用。分析手術(shù)前后NMDA肽和抗體的分布表明，當(dāng)單獨(dú)和結(jié)合MMSE(簡易精神狀態(tài)檢查)成分評(píng)分時(shí)，這些標(biāo)記物對(duì)神經(jīng)并發(fā)癥都具有較高的預(yù)測價(jià)值。已經(jīng)建立了基于該測試結(jié)果的規(guī)避和降低風(fēng)險(xiǎn)的診斷和治療方法。本發(fā)明的方法特別優(yōu)選NMDA受體NR2A和NR2B亞基的血液水平，特別是源自NR2A和NR2B亞基N-末端結(jié)構(gòu)域的肽片段的水平，非常準(zhǔn)確預(yù)測手術(shù)后不良神經(jīng)事件。在一項(xiàng)預(yù)期的、盲法的、多中心、量度心肺分流術(shù)患者中風(fēng)或TIA發(fā)生率的臨床研究中，當(dāng)患者血清中抗體高于2.0ng/ml時(shí)，該方法能預(yù)測96.2%患者將患中風(fēng)或TIA,當(dāng)患者血清中抗體低于2.0ng/ml時(shí)，該方法能預(yù)測95.6%患者將不患中風(fēng)或TIA。相比之下，鈣調(diào)節(jié)蛋白S100B,被廣泛研究用于心臟手術(shù)神經(jīng)學(xué)預(yù)后的潛在生物標(biāo)記物，卻不能預(yù)測患者是否將患TIA或中風(fēng)。CRP(C-反應(yīng)蛋白)，也^^良道做為一種血栓形成疾病的標(biāo)記物和腦血管疾病的預(yù)示物，同樣不能預(yù)測患者是否將患TIA或中風(fēng)。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供了一種在手術(shù)前幫助評(píng)價(jià)表觀健康的人受試者中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括(a)從受試者中獲得測試樣品；(b)分析測試樣品中NR2抗原或NR2抗體，或其組合的有無或含量；將步驟(b)的結(jié)果與NR2抗原或NR2抗體，或其組合的相應(yīng)參考量進(jìn)行比較，其中NR2抗原或NR2抗體，或其組合的相應(yīng)參考量來自表觀健康的人受試者群體。當(dāng)發(fā)現(xiàn)不能接受的TIA或中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，本發(fā)明進(jìn)一步包括提供監(jiān)控方案和神經(jīng)保護(hù)治療以規(guī)避(managing)或降低該風(fēng)險(xiǎn)。例如，當(dāng)觀察到NMDA受體肽或抗體達(dá)到危險(xiǎn)水平時(shí)，該患者可以服用各種已知的有益于心血管系統(tǒng)的藥物，降低中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)，包括各種抗血小板藥物、抗凝血?jiǎng)?、降脂藥、血壓調(diào)節(jié)藥物(如果觀察到高血壓的情況)和手術(shù)千預(yù)。另外，應(yīng)制定嚴(yán)格的監(jiān)控方案，其中應(yīng)一次或多次監(jiān)測NR2水平，包括手術(shù)前，手術(shù)中或手術(shù)后立即測定。本發(fā)明的另一優(yōu)點(diǎn)將在隨后的描述中做部分闡明，而另外部分從描述來看可以說是顯而易見的，或可以從實(shí)踐本發(fā)明中獲知。通過在所附權(quán)利要求中特別提出的要點(diǎn)和組合，可以認(rèn)識(shí)和獲知本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。需理解的是，如權(quán)利要求所主張，前述的一般筒述和隨后的詳述僅作為示范和說明之用，并非對(duì)本發(fā)明的限制。發(fā)明詳述通過參考本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案和本文包含的實(shí)施例的詳述可更容易的理解本發(fā)明。術(shù)語的定義和應(yīng)用如隨后的專利說明書和權(quán)利要求中所使用的單數(shù)形式的"一個(gè)"和"那個(gè)，，也包括復(fù)數(shù)指示物，除非上下文中已清楚的指明。因此，例如，提及的"一個(gè)片段"包括了片段混合物，提及的"一種cDNA寡核甘酸"包括了多于一種寡核甘酸，依此類推。NMDA受體是一種配基門控離子通道家族成員之一，可優(yōu)先結(jié)合N-曱基-D-天冬氨酸，并調(diào)節(jié)腦中多數(shù)興奮性神經(jīng)傳遞(DmgledineR.etal.,PharmacolRev.1999Mar;51(l):7-61)。文獻(xiàn)凈良道該受體包括幾種亞基如NR1、NR2A、NTR2B、NR2C、NR2D和NR3A，它們可完成截然不同的藥理學(xué)功能。NR1(X58633)、NR2A(U09002)和NR2B(U28861)的GenEMBL檢索號(hào)已有報(bào)道，Dambinova在專利WO02/12892中對(duì)其進(jìn)行了描述。"腦"NMDA受體是指存在于腦部的受體，與僅出現(xiàn)于腦外人機(jī)體的器官中的NMDA受體不同。NMDA受體肽是指全長的NMDA受體蛋白、天然的全長NMDA受體片段肽片段或其類似物、衍生物、片段或其重組的多元片段(a/k/a重組體)。NH2肽包括全長的NR2A、NR2B、NR2C和NR2D亞基，還包括其片段、類似物、衍生物或重組片段。NR2A、NR2B、NR2C或NR2D肽是指全長天然NR2A、NR2B、NR2C或R2D肽亞基、或其片段、類似物、衍生物或重組片段。如Dambinova的專利WO02/12892中所描述，NR2A和NR2B肽N-端結(jié)構(gòu)域是指全長NR2A和NR2B亞基，或其片段、類似物、衍生物或重組片段的氨基酸N-末端結(jié)構(gòu)域片段。循環(huán)NMDA受體肽是指穿過血腦屏障進(jìn)入全身血液循環(huán)的NMDA受體肽，及其在血流中產(chǎn)生的片段。特別優(yōu)選的循環(huán)NMDA受體肽是指包含一段或多段NR2A和NR2B亞基共有片段序列的NMDA受體肽。該肽可以包含一個(gè)，或兩個(gè)，或多個(gè)離散存在于天然NR2肽骨架上的上述序列，并或于體內(nèi)或體外重組成連續(xù)片段。肽"類似物"是指含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失、插入或重排的肽。例如，眾所周知，在蛋白質(zhì)生物化學(xué)領(lǐng)域中，每種氨基酸屬于某一具有特定尺寸或特征(如電荷、疏水性和親水性)的氨基酸組，可經(jīng)常被另外氨基酸取代而不改變蛋白的活性，特別是在與生物學(xué)活性無直接關(guān)系區(qū)域的取代。因此，如果一NMDA肽類似物包含了某位點(diǎn)的氨基酸取代、缺失、插入或重排，而激發(fā)的抗類似物的抗體仍特異性抗NMDA肽，該類似物對(duì)本發(fā)明是是有益的。除非有相反的聲明，本文中應(yīng)用的NMDA肽類似物是指至少具有與天然NMDA肽氨基酸80%—致性的肽序列，盡管也包括含有至少85%、90%或95%—致性的肽序列。通過比較類似物和天然NMDA確定氨基酸的一致性。排列兩條氨基酸序列使得沿序列長度方向共有氨基酸數(shù)目最大化，在排列中，單條或兩條序列中的缺口是允許的，以使共有氨基酸數(shù)目最大化。氨基酸一致性百分?jǐn)?shù)取下面兩個(gè)數(shù)字中較大的那個(gè)數(shù)字(l)兩種肽在排列中共有的氨基酸數(shù)目除以NMDA類似物氨基酸數(shù)目，乘以100%,或(2)兩種肽在排列中共有的氨基酸數(shù)目除以天然NMDA氨基酸數(shù)目，乘以100%。NMDA衍生物包括天然的NMDA和通過化學(xué)法或酶法對(duì)一個(gè)或多個(gè)組成氨基酸衍生化得到的NMDA類似物及其片段，所述的衍生化包括側(cè)鏈修飾、骨架修飾、N-或C-末端修飾，修飾方法例如乙酰化、羥基化、甲基化、氨基化、磷酸化或糖基化。該術(shù)語還包括NMDA鹽，例如NMDA鋅和NMDA銨。蛋白或肽的"直接"測定意味著對(duì)生物樣品中該蛋白或肽自身進(jìn)行測定，這與其它非直接測定蛋白或肽的方法相反，如測定蛋白或肽的自身抗體，來自該肽或亞基的其它肽片段，或與表達(dá)該蛋白或肽相關(guān)的cDNA。術(shù)語"抗體"同義于"免疫球蛋白"。如本文所用的術(shù)語"抗體"包括天然抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、重組DNA抗體和具有生物活性的抗體衍生物，例如Fab'、F(ab')2或Fv，還有單結(jié)構(gòu)i或和單鏈抗體。具有生物活性的抗體衍生物只要保持結(jié)合特異性抗原的能力，也包含在該定義中。所以，NR2抗體至少具有結(jié)合一種NR2肽的能力。討論在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在手術(shù)前幫助評(píng)價(jià)表觀健康的人受試者中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括(a)從受試者中得到測試樣品；(b)分析測試樣品中NR2抗原或抗體及其結(jié)合物的有無或含量。將步驟(b)的結(jié)果與NR2抗原和NR2抗體，或其組合的相應(yīng)參考量進(jìn)^f亍比較，其中NR2抗原和NR2抗體，或其組合的相應(yīng)參考量來自表^L健康的人受試者群體。用另一種方式陳述，本發(fā)明提供了一種預(yù)測術(shù)后的不良神經(jīng)事件的方法，包括(a)提供預(yù)定進(jìn)行手術(shù)的患者(b)測定所述患者生物體液中循環(huán)的腦NMDA受體肽初始水平；和(c)將所述NMDA受體肽水平與患手術(shù)造成的不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)關(guān)^:起來。當(dāng)患者被測試在其血流中含有危險(xiǎn)水平的NMDA受體肽或抗體時(shí)，最好在手術(shù)前和手術(shù)期間對(duì)患者進(jìn)行多次測試。另外，因?yàn)榛颊呓?jīng)常直到手術(shù)后不久才患不良神經(jīng)事件，最好于手術(shù)后下述一個(gè)或多個(gè)時(shí)間段l小時(shí)、3小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、3天、7天或30天時(shí)，對(duì)患者進(jìn)行一次或多次附加測試。所以，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明進(jìn)一步包括(a)所述患者進(jìn)行所述手術(shù)后，測定其NMDA受體肽的后繼水平；(b)確定所述的初始水平和后繼水平是否具有差異；和(c)將所述的初始水平和繼發(fā)水平的差異與或正在發(fā)生的或在近期可能發(fā)生不良神經(jīng)事件關(guān)聯(lián)起來?？梢栽陬A(yù)定進(jìn)行手術(shù)的成年人或兒童中實(shí)施該方法，在一項(xiàng)特別重要的實(shí)施方案中，在具有特高風(fēng)險(xiǎn)患神經(jīng)后遺癥的新生兒患者或嬰兒中實(shí)施了本方法。該方法特別有益于評(píng)價(jià)已有患神經(jīng)事件傾向的患者，例如患有糖尿病、動(dòng)脈石更化癥、高血壓或先前懷ll:或確定的TIA或中風(fēng)等病史的患者。該方法還可以與MMSA測試聯(lián)合，手術(shù)前預(yù)測不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)。手術(shù)前方位、注意力和回憶的MMSA組成得分的降低與手術(shù)后不久的精神錯(cuò)亂和腦血管事件相關(guān)。本發(fā)明可預(yù)測的各類型神經(jīng)事件總體上可以被腦部局部缺血所誘導(dǎo)，特別是被腦氧供應(yīng)不足引起的腦局部缺血事件所誘導(dǎo)(不同于腦部血管破裂而引起的失血事件)。這些事件或集中在腦部一特定區(qū)域，發(fā)生于中風(fēng)或TIA;或分散于全腦，發(fā)生于儋妄。不良神經(jīng)事件的特征為精神錯(cuò)亂或被診斷為TIA或局部缺血性中風(fēng)。供氧有可能被打折扣，可歸因于患者身體狀況(這見于某種血液病如貧血癥)，但更通常是由手術(shù)事件所引發(fā)。如果不良神經(jīng)事件于手術(shù)中，或手術(shù)完成后30天內(nèi)發(fā)生，盡管如果需要，發(fā)生的該不良事件可以被確定在一個(gè)時(shí)間框中，如7天、3天、2天或1天，該不良事件可以#支稱為"源自手術(shù)的"或"手術(shù)造成的(fromsurgery)"。本發(fā)明的預(yù)后方法可以預(yù)測源自任何種類手術(shù)的不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)，盡管臨時(shí)減緩或中止腦部供氧的創(chuàng)傷外科手術(shù)將獲益最大。例如，該方法應(yīng)于任何閉塞或阻斷正常血液循環(huán)的，導(dǎo)致手術(shù)期間發(fā)生微栓子或大栓子、異常腦灌注、灌注性損傷或炎癥或神經(jīng)體液反應(yīng)的心臟手術(shù)前實(shí)施。本發(fā)明特別用于預(yù)測實(shí)施了心肺分流術(shù)患者不良神經(jīng)事件的發(fā)生率。本測試方法的實(shí)施基于對(duì)4壬何循環(huán)的NMDA受體肽的測定，可以用任何直4妄或間4妻的測定方法實(shí)施本方法。因此，例如，可間接測定肽抗體水平，編碼肽的cDNA表達(dá)水平，或測定肽本身的方法的確定循環(huán)肽的水平。因此，在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，其中通過將所述生物體液與一固定的抗體或其片段(例如結(jié)合到載體如微孔板或珠上或小顆粒上的抗體或其片段)進(jìn)行接觸，直接測定循環(huán)中一種或多種循環(huán)的腦NMDA受體肽，確定所述肽水平。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種方法，其中通過將所述生物體液與固定的腦NMDA受體肽接觸，測定結(jié)合到固定化肽上的抗體水平，確定所述抗體水平。另外，最好還要測定NMDA受體的各種亞基和片段。例如，優(yōu)選通過測定NR2A肽或NR2B肽實(shí)施該方法，進(jìn)一步優(yōu)選二者同時(shí)測定。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過測定一個(gè)或多個(gè)與天然NR2A和NR2B序列共有的肽序列，一個(gè)或多個(gè)與NR2A和NR2BN末端結(jié)構(gòu)域序列共有的肽序列，或其抗體實(shí)施本方法。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法中測定了包含腦NMDA受體NR2A和NR2B亞基N-末端2、7和14KD片段的循環(huán)肽?？梢岳脦缀?practically)任何表達(dá)或含有循環(huán)腦NMDA受體或這種受體標(biāo)記物的生物體液實(shí)施本方法，包括血液、尿液、血漿、血清、腦脊液、唾液、汗液或腦組織。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，生物體液為血漿或血清，在一更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，血漿或血清按約1:50進(jìn)行稀釋。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，基于預(yù)先確定的肽水平截?cái)嘀?，?duì)風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。因此，例如，實(shí)驗(yàn)方法和臨床都表明，血漿或血清中NR2A/BN-末端結(jié)構(gòu)域抗體水平大于2.0、1.8、1.5或1.0ng/ml，或相當(dāng)于NR2A/BN-末端結(jié)構(gòu)域循環(huán)肽的NMDA水平大于200、100或50pg/ml，對(duì)正在進(jìn)行手術(shù)的患者而言，這非常明確的預(yù)示了神經(jīng)不良事件。相反，血漿或血清中NR2A/BN-末端結(jié)構(gòu)域抗體水平小于2.0、1.8、1.5或1.0ng/ml，或相當(dāng)于NR2A/BN-末端結(jié)構(gòu)i或循環(huán)肽的NMDA水平小于200、100、或50pg/ml，這非常明確的預(yù)測了手術(shù)期間不良神經(jīng)事情不會(huì)發(fā)生。優(yōu)選的抗體截?cái)嘀禐?.0ng/ml。至今為止，在實(shí)施例中報(bào)道的一項(xiàng)有前景的臨床研究中，手術(shù)前肽/抗體測試陽性的患者(分別〉200pg/ml和>2.0ng/ml)較測試陰性患者(<2.0ng/ml)患手術(shù)造成的神經(jīng)事件的可能性高18倍。根據(jù)臨床測試結(jié)果，女性神經(jīng)并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)率高于男性，而不良神經(jīng)事件在老年患者中(>70歲)更是常見。另外，NIHSS評(píng)分增加合并NR2抗體和肽濃度的升高(分別>2.0ng/m和〉200pg/ml)預(yù)示正在進(jìn)行手術(shù)患者發(fā)生TIA/中風(fēng)。但是手術(shù)前僅用NIHSS不能預(yù)測不良神經(jīng)事件。基于測試結(jié)果，可采用各種方案降低不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)，使手術(shù)如期進(jìn)行。例如，如患者有患手術(shù)造成的不良事件風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，該方法進(jìn)一步包括(i)對(duì)所述患者進(jìn)行神經(jīng)保護(hù)治療，或(ii)執(zhí)行一項(xiàng)監(jiān)控計(jì)劃，監(jiān)控不良神經(jīng)事件發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)或發(fā)生率。神經(jīng)保護(hù)治療包括藥物方案，例如抗血小板劑、抗凝血?jiǎng)⒔抵幒徒笛獕核幬?。另外，如患者有患手術(shù)造成的不良事件風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，該方法進(jìn)一步包括，任選(optionally)分析所述患者由MRI界定的新的梗塞面積，對(duì)所述患者進(jìn)行神經(jīng)手術(shù)或血管手術(shù)，例如，頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)、直4妻動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)、血管形成術(shù)和支架植入術(shù)、顱內(nèi)外血管搭橋術(shù)和才侏?jiǎng)用}移位術(shù)?？梢酝ㄟ^應(yīng)用任何已知的診斷技術(shù)實(shí)施本方法，包括免疫;兄;定反應(yīng)(IP)、間接免疫熒光法(IIF)、免疫斑點(diǎn)和免疫印記(IB)(WesternBlot)、直接和間接酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)、放射免疫分析-(RIA)、對(duì)流免疫電泳(CIE)、流式細(xì)胞術(shù)(FC)、膠乳凝集、側(cè)流、熒光偏振分析或微陣列。在一特定的實(shí)施方案中，利用固定化的固相支持物俘獲、測量NMDA肽標(biāo)記物實(shí)施本發(fā)明。因而，本發(fā)明才是供一種預(yù)測術(shù)后不良神經(jīng)事件的方法，包括(a)提供預(yù)定進(jìn)行手術(shù)的患者；(b)將來自所述患者的生物樣品與包含NR2肽或NR2抗體的固定化固相支持物接觸足夠時(shí)間，以使所述生物樣品中的所述NR2肽或所述NR2抗體和所述NR2抗體與所述NR2肽之間形成一種復(fù)合物；(c)將所迷的復(fù)合物與連接到信號(hào)產(chǎn)生化合物上的指示劑接觸以產(chǎn)生信號(hào)；(d)測定產(chǎn)生的信號(hào)；(e)將產(chǎn)生的信號(hào)與所述樣品中的所述NR2肽或NR2抗體水平聯(lián)系起來；和(f)將所述樣品中的所述NR2肽或NR2抗體水平與所述不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)聯(lián)系起來。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，指示劑包括連接到辣根過氧化物酶的雞抗人或(兔或馬等)抗人IgG。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，固相支持物為一聚合物基體。該聚合物基體更優(yōu)選為聚丙烯酸酯、聚苯乙烯或聚丙烯。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，固相支持物為一微孔板。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，固相支持物為一硝化纖維膜或帶電荷的尼龍膜。在另一實(shí)施方案中，采用凝集法實(shí)施本方法。在該實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種預(yù)測手術(shù)造成的不良神經(jīng)事件的方法，包括(a)提供預(yù)定進(jìn)行手術(shù)的患者；(b)將來自所述患者的生物樣品與包含NR2肽或NR2抗體的凝集載體接觸足夠時(shí)間，以使所述生物樣品中的所凝集復(fù)合物；(c)使凝集復(fù)合物產(chǎn)生信號(hào)；(d)將所述的信號(hào)與一種或多種NR2肽標(biāo)記物聯(lián)系起來；和(e)將所述樣品中的所述NR2肽或NR2抗體水平與所述不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)聯(lián)系起來。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的"足夠時(shí)間，，少于30、20、15min或甚至10min。Beltz,G.A.等在《分子探針技術(shù)和醫(yī)學(xué)應(yīng)用》中(MolecularProbes:TechniquesandMedicalApplications,A.Albertinietal.,eds.,RavenPress,NewYork,1989,),描述了乳膠凝集分析，通過引用并入本文中。在乳膠凝集分析中，將激發(fā)的抗特定生物標(biāo)記物抗體固定到乳膠顆粒上。在待測定的適當(dāng)稀釋的血清中加入一滴乳膠顆斗立，輕輕搖動(dòng)卡片加以混合。如樣品無足夠水平的生物標(biāo)記物，乳^1交顆粒仍保持懸浮，保持平靜的、乳狀外觀。但如果生物標(biāo)記物與存在的抗體發(fā)生了反應(yīng)，乳膠顆粒叢聚成可見的聚集物?？捎镁奂治龇z測生物標(biāo)記物，其中將相應(yīng)的抗體固定在除乳膠珠外的合適的顆粒上，例如，白明膠、紅細(xì)胞、尼龍、脂質(zhì)體、金顆粒等等。與沉淀反應(yīng)相似，抗體的存在將會(huì)引起凝集，可用如散射比濁法、濁度法、紅外分光光度法、目視檢驗(yàn)法和比色法等等進(jìn)行檢測。在本文中一般應(yīng)用的術(shù)語"乳膠凝集"，是指任何基于形成可檢測凝集物的方法，而不限于應(yīng)用乳膠做為免疫吸附基質(zhì)。優(yōu)選的凝集法用基質(zhì)是以乳膠為基礎(chǔ)的，例如聚苯乙烯和聚丙烯，特別是聚苯乙烯，其它已知的基底包括玻璃、紙、右旋糖香和尼龍形成的珠子。固定化的抗體可以通過例如酰胺和酯連接的共價(jià)鍵、離子吸引或吸附技術(shù)，共價(jià)的、離子的或物理的結(jié)合到固相免疫吸附劑上。本領(lǐng)域技術(shù)人員利用常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法將知道很多其它適合結(jié)合抗體的載體，或能夠利用常規(guī)實(shí)驗(yàn)探知該類載體?？梢杂脗鹘y(tǒng)方法制備本發(fā)明使用的抗體。例如用NMDA蛋白的肽，采用標(biāo)準(zhǔn)方法制備多克隆抗血清或單克隆抗體。以免疫原形式的肽(最優(yōu)為NR2A和/或NR2B受體，NR2A和/或NR2B受體的抗原決定簇，或其類似物或衍生物)免疫哺乳動(dòng)物(例如小鼠、倉鼠或兔)，引發(fā)抗體響應(yīng)。能賦予肽免疫原性的技術(shù)包括將肽與載體偶聯(lián)或其它技術(shù)是本領(lǐng)域公知的。例如，肽可以在佐劑的存在下給藥?？梢詼y定血漿或血清中抗體的滴度監(jiān)控免疫的進(jìn)程。可以采用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA或其它免疫分析方法，以免疫原為抗原，評(píng)價(jià)抗體水平。免疫后，收集抗血清，如果需要，可以從血清中分離多克隆抗體。要生產(chǎn)單克隆抗體>從免疫動(dòng)物中收集抗體產(chǎn)生細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)，采用標(biāo)準(zhǔn)的體細(xì)胞融合程序與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，使這些細(xì)胞得以永生，得到雜交瘤細(xì)胞。該技術(shù)(例如，雜交瘤技術(shù)最早由KohlerandMilstein(Nature256,495-497(1975)建立)還包括其它技術(shù)，例如人B細(xì)胞雜交瘤沖支術(shù)(Kozboretal.,Immunol.Today4,72(1983))，產(chǎn)生人單克隆抗體的EBV-雜交瘤技術(shù)(Coleetal.MonoclonalAntibodiesinCancerTherapy(1985)AllenR.Bliss，Inc.,pages77-96),組合抗體庫的篩選技術(shù)(Huseetal.,Science246,1275(1989》是該
技術(shù)領(lǐng)域：
所共知的。采用免疫化學(xué)法篩選雜交瘤細(xì)胞，生產(chǎn)可與肽發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，并分離單克隆抗體。因此，本發(fā)明還專注于可分泌對(duì)本文描述的NR2A或NR2BNMDA肽及其片段具有特異性的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。在一實(shí)施方案中，采用一試劑盒實(shí)施本方法，該試劑盒在工廠里以人血液中純化的抗體或肽加以校準(zhǔn)。因此，在另一實(shí)施方案中，在如下條件下實(shí)施本方法(a)用診斷試劑盒測定所述生物體液中NR2抗體或肽水平；(b)所述試劑盒包括結(jié)合的NR2肽或抗體；和(c)針對(duì)抗體或肽標(biāo)準(zhǔn)品生產(chǎn)所述試劑盒，所述抗體或肽標(biāo)準(zhǔn)品包括/人人血液中純化的免疫^求蛋白G或肽的片段。另外，可以用市售的化學(xué)發(fā)光技術(shù)實(shí)施本方法。例如，該方法可以采用雙位點(diǎn)夾心免疫分析，該方法利用直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)，所用2個(gè)單克隆抗體為恒定量。液體試劑中的一抗可以為吖咬酯標(biāo)記的對(duì)肽的第一部分具特異性的單克隆鼠抗人NMDA受體肽BNP的F(ab')2片段。固相支持物上二抗可以為生物素標(biāo)記的對(duì)肽另一部分具特異性的單克隆鼠抗人抗體，該抗體可以連接到鏈酶親和素功能化的磁性微粒上。混合患者樣品和兩種抗體可形成免疫復(fù)合物。沖洗去除任何未結(jié)合的抗體綴合物，然后利用照度計(jì)測定免疫復(fù)合物的化學(xué)發(fā)光?？捎萌缦路椒ㄉa(chǎn)本發(fā)明用以測定自身抗體水平的免疫吸收劑。將受體蛋白的一個(gè)片段固定在合適的載體如聚苯乙烯或硝化纖維上，優(yōu)選通過共價(jià)鍵或離子鍵。如果釆用免疫學(xué)檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)的聚苯乙烯多孔板，首先對(duì)其進(jìn)行硝化處理，；^而在板表面形成游離硝基，然后被還原為氨基，用戊二醛做為連接劑激活。然后，為化學(xué)固定各受體蛋白的免疫原片段，將激活的板與250nM的目的肽在一定溫度下孵育一定時(shí)間(即4°C約16h)以確保固定化。通過離子相互作用，將各受體蛋白的片段固定在硝化纖維素條上來生產(chǎn)免疫吸附劑也是可行的。將從哺乳動(dòng)物腦中分離的各受體蛋白片段點(diǎn)樣到硝化纖維素上，于37C保溫15mm。用0.5%的Tween-20溶液洗滌硝化纖維素，在室溫下干燥生成的免疫吸附劑，在干燥的條件下保存1年。實(shí)施例提出下述實(shí)施例的目的是向本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員充分公開并描述如何制備和評(píng)價(jià)本文要求保護(hù)的化合物。這些實(shí)施例僅做為本發(fā)明示范之用，并非限制發(fā)明者視其為他們的發(fā)明的范圍。盡管已付出較多努力確保數(shù)字(如數(shù)量，溫度等)的準(zhǔn)確性，但一些錯(cuò)誤和偏差還是應(yīng)考慮到的。除非特別指出，份是指重量份，溫度單位為。C或在室溫下，壓力等于或接近大氣壓。實(shí)施例1:NMDA肽測試優(yōu)選的NR2肽檢驗(yàn)方法是用膠乳凝集免疫分析法定量測定血液中的NR2肽。將血樣與偶聯(lián)到乳膠珠上的抗體混合，10min內(nèi)目檢可見凝集現(xiàn)象。將血樣加入到檢測設(shè)備的樣品孔道中，通過過濾器將紅細(xì)胞與血漿分離。通過毛細(xì)管作用將預(yù)先定量的血漿轉(zhuǎn)移到反應(yīng)室中，在此與乳膠試劑(抗體包裏的乳膠珠)反應(yīng)形成復(fù)合物，該復(fù)合物是肉眼可見的。在此報(bào)道的實(shí)施例中，采用的一組校準(zhǔn)物濃度為100-5000pg/ml，采用的標(biāo)準(zhǔn)中NR2肽的"低"和"高"值分別為(〈200pg/ml)和(1000pg/ml)。實(shí)施例2NR2抗體分析快速測試法(CIS-LA抗體測試)是以膠乳凝集技術(shù)為基礎(chǔ)的。CIS-LA抗體分析法應(yīng)用具有內(nèi)嵌放大設(shè)備的三倍凹載片以肉眼檢測反應(yīng)，提供快速的"是"或"否"回答。在該分析中，血清樣品與偶聯(lián)到有色乳膠顆粒上的NR2肽混合，2~5分鐘內(nèi)從內(nèi)置的放大設(shè)備中可以肉眼觀察到凝集形成或用濁度計(jì)指示凝集形成?；颊邩悠分械腎gG濃度以ng/ml表示，根據(jù)一組0-100ng/ml的校準(zhǔn)物繪制的校準(zhǔn)曲線以及NR2肽的"低"和"高"值分別為(〈200pg/ml)和(1000pg/ml)的標(biāo)準(zhǔn)而定。實(shí)施例3:成年手術(shù)患者中NR2抗體評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)了30名安排進(jìn)行CPB手術(shù)成年患者手術(shù)前，手術(shù)后24h和48h血清中NR2抗體水平，記錄不良事件。結(jié)果見下面表l。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>IS-局部缺血性中風(fēng)；C-精神錯(cuò)亂；D-定向知覺的迷失；DM-糖尿病*吞咽困難；**精神狀態(tài)改變實(shí)施例4:手術(shù)中和手術(shù)后NR2肽水平和抗體的評(píng)價(jià)在美國每年有超過32000個(gè)嬰兒出生時(shí)患有先天性心臟缺陷(每125到150個(gè)就有1個(gè))。患者JT(出生日期06/25/04)于2004年12月7日用CPB進(jìn)行了手術(shù)修復(fù)先天性心臟缺陷。對(duì)衡量精神狀態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力的神經(jīng)發(fā)育評(píng)分(關(guān)于早期學(xué)習(xí)的Mullen量表(MullenScalesofEarlyLearning),MSEL)進(jìn)行手術(shù)前評(píng)價(jià)，結(jié)果見下表2。該嬰兒表現(xiàn)出較低評(píng)分和衰退的視覺、語言能力和運(yùn)動(dòng)缺陷。表2<table>complextableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>患者JT血液中NR2肽/抗體監(jiān)測結(jié)果見表3。從插管直到CPB結(jié)束，都可檢測到異常高水平的肽和抗體。手術(shù)前NR2肽/抗體高于正常水平的數(shù)據(jù)與手術(shù)前MSEL評(píng)分表現(xiàn)出良好的相關(guān)性，并確認(rèn)了因CPB導(dǎo)致的腦損害和不良神經(jīng)事件。年齡相當(dāng)?shù)臒o先天性心臟缺陷的對(duì)照組嬰兒中(11=7)，NR2肽水平為0.2-0.4ng/ml，NR2抗體為0.4-0.8ng/ml。表3<table>complextableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>實(shí)施例5:CIS-LA抗體測試的性能特征表4為列出了CPB患者中進(jìn)行的研究結(jié)果，用以評(píng)價(jià)手術(shù)前NR2抗體水平預(yù)測不良神經(jīng)事件可能性的能力。該結(jié)果按患者血清中NR2Ab不同的截?cái)嘀堤峁?，并根?jù)有無術(shù)后不良事件再進(jìn)行細(xì)分。如果在CBP術(shù)后28天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)患者患精神錯(cuò)亂、TIA和中風(fēng)，基于NIHSS評(píng)分大于9，該患者4支認(rèn)為患不良反應(yīng)事件。如果患者并未患任何不良神經(jīng)事件，一皮分配到"無不良神經(jīng)事件"組。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表5提供了NR2抗體濃度從1.5~2.0ng/ml六個(gè)不同截?cái)嘀档脑敿?xì)分析，闡明了各截?cái)嘀翟陬A(yù)測不良神經(jīng)事件中的效果。盡管對(duì)兩組而言，截?cái)嘀祻?.5到2.0ng/ml,事件率都有所增加，但在"神經(jīng)不良事件，，組中增加的更快。因此，在分析范圍內(nèi)，風(fēng)險(xiǎn)率增加顯著，最大風(fēng)險(xiǎn)率對(duì)應(yīng)為2.0ng/mL(ClinChem,2003)。96.0%(24/25)的外科手術(shù)前NR2抗體濃度^2.0ng/ml的患者在CPB后48h內(nèi)發(fā)生了神經(jīng)并發(fā)癥，形成對(duì)比的是NR2抗體濃度<2.0ng/ml的患者僅為5.4%，這使該標(biāo)記物預(yù)測術(shù)后神經(jīng)不良事件的能力增加17.9倍(95%CI,11.6-27.6)。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>]:手術(shù)前NR2抗體陽性患者的事件率與手術(shù)前NR2抗體陰性患者事件率比值2:風(fēng)險(xiǎn)率單側(cè)95%置信下限當(dāng)前，至少30%經(jīng)歷心臟手術(shù)患者術(shù)后患有神經(jīng)認(rèn)知缺陷。基于獲得的神經(jīng)事件可能性比17.9，手術(shù)前測定的NR2抗體濃度大于2.0ng/ml,將預(yù)測89%患者手術(shù)后的神經(jīng)并發(fā)癥。圖1為三條基于NR2測試數(shù)據(jù)的ROC曲線。手術(shù)后NR2抗體的曲線下面積(AUO0.814)表明NR2抗體標(biāo)記物具有較高的手術(shù)前預(yù)測神經(jīng)不良事件的能力。實(shí)施例6:手術(shù)前和手術(shù)后NR2抗體分布(分類)的分析圖2顯示了CPB前NR2抗體標(biāo)記物對(duì)TIA/中風(fēng)較高的預(yù)測價(jià)值。在整個(gè)研究過程中所有時(shí)間點(diǎn)，無神經(jīng)不良事件(神經(jīng)代碼O)患者血清樣品中NR2抗體濃度保持在截?cái)嘀?.0ng/ml之下。相反，具有神經(jīng)不良事件(NHSS評(píng)分>9)的多數(shù)患者在手術(shù)前，手術(shù)后24h和48h，NR2抗體值升高，在截?cái)嘀?.0ng/ml之上。對(duì)患者手術(shù)前，手術(shù)后24h和48hNR2抗體分布的詳細(xì)分析表明，NR2抗體能可靠的在手術(shù)前無神經(jīng)并發(fā)癥但NR2值低于截?cái)嘀祷颊咧薪沂揪哂猩窠?jīng)并發(fā)癥患者。NR2抗體生物標(biāo)記物對(duì)手術(shù)后24hNIHSS評(píng)分的降低(即惡化)非常敏感。結(jié)論在整個(gè)申請(qǐng)中，參考了各種出版物。將這些出版物的公開內(nèi)容通過引用作為一個(gè)整體并入本申請(qǐng)中，以更充分描述本發(fā)明所屬技術(shù)的發(fā)展水平。很顯然，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的各種修改和變化，都包含在本發(fā)明的范圍和精神之內(nèi)。本發(fā)明的其它實(shí)施方案，通過思考公開說明書和本發(fā)明的實(shí)踐，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，都是顯而易見的。本發(fā)明的說明書和實(shí)施例其用意是僅做為示范，本發(fā)明真正的范圍和精神通過如下權(quán)利要求指出。權(quán)利要求1.一種在手術(shù)前幫助評(píng)價(jià)表觀健康的人受試者中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括a)從受試者獲得測試樣品；b)分析獲得的測試樣品，確定NMDA受體肽或抗體，或其組合的存在或初始水平；c)將步驟(b)的結(jié)果與NMDA受體肽或抗體，或其組合的相應(yīng)參考量進(jìn)行比較，其中的相應(yīng)參考量得自表觀健康的人受試者群體。2.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括a)評(píng)價(jià)所述患者不良神經(jīng)事件的一種或多種額外風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)的有無；和b)將一種或多種額外風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)的有無與所迷的患手術(shù)造成的不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)聯(lián)系起來。3.權(quán)利要求1的方法，如果所述患者有患手術(shù)造成的不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)，則所述方法進(jìn)一步包括(i)對(duì)所述患者進(jìn)行神經(jīng)保護(hù)治療，或(ii)實(shí)施一項(xiàng)監(jiān)控計(jì)劃，監(jiān)控不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)或發(fā)生。4.權(quán)利要求1的方法，如果所述患者有患手術(shù)造成的不良神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)，則所述方法進(jìn)一步包括分析所述患者通過MRJ界定的新的梗塞面積，并對(duì)所述患者進(jìn)行神經(jīng)手術(shù)。5.權(quán)利要求1的方法，其中所述的不良神經(jīng)事件為局灶性缺血神經(jīng)事件。6.權(quán)利要求1的方法，其中所述的不良神經(jīng)事件的特征為精神錯(cuò)亂、TIA或局部缺血性中風(fēng)。7.權(quán)利要求1的方法，其中所述的不良神經(jīng)事件發(fā)生于所述的手術(shù)中，或手術(shù)72小時(shí)內(nèi)。8.權(quán)利要求l的方法，其中所述的NMDA受體肽包括腦NMDA受體NR2亞基的片l爻。9.權(quán)利要求l的方法，其中所迷的NMDA受體肽包括腦NMDA受體NR2A亞基的片段、腦NMDA受體NR2B亞基的片段，或其組合。10.權(quán)利要求l的方法，其中所述的NMDA受體肽包括腦NMDA受體NR2A亞基的N-末端結(jié)構(gòu)域或其片段、腦NMDA受體NR2B亞基的N-末端結(jié)構(gòu)域或其片段，或其組合。11.權(quán)利要求1的方法，其中a)所述的生物體液為血清；b)在所述的生物體液中，對(duì)應(yīng)于NR2A/BN末端結(jié)構(gòu)域抗體的抗體初始水平高于2.0、1.8、1.5或1.0ng/ml,或?qū)?yīng)于NR2A/BN末端結(jié)構(gòu)域循環(huán)肽的NMDA肽水平高于200、100或50pg/ml，與患所述神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)；c)在所述的生物體液中，對(duì)應(yīng)于NR2A/BN末端結(jié)構(gòu)域抗體的抗體初始水平低于2.0、1.8、1.5或1.0ng/ml,或?qū)?yīng)于NR2A/BN末端結(jié)構(gòu)域循環(huán)肽的NMDA肽水平低于200、100或50pg/ml，與患所述神經(jīng)事件的風(fēng)險(xiǎn)不相關(guān)。12.權(quán)利要求l的方法，進(jìn)一步包括a)在所述手術(shù)后，測定所述患者NMDA受體肽或抗體的后繼水平；b)確定所迷的初始水平和后繼水平之間是否有實(shí)質(zhì)性差異；c)將所述初始水平和后繼水平的實(shí)質(zhì)性差異與不良神經(jīng)事件關(guān)l關(guān)起來；和d)將所述初始水平和后繼水平的無實(shí)質(zhì)性差異與無不良神經(jīng)事件關(guān)聯(lián)起來。13.權(quán)利要求1的方法，其中所述的手術(shù)包括麻醉。14.權(quán)利要求1的方法，其中所述的手術(shù)包括心肺分流術(shù)。15.權(quán)利要求1的方法，其中所述的患者為有患神經(jīng)后遺癥風(fēng)險(xiǎn)的新生兒或嬰兒。16.權(quán)利要求1的方法，其中進(jìn)行所述的測試前，所述患者被診斷為患有糖尿病、動(dòng)脈硬化癥，或先前懷疑的中風(fēng)或TIA。17.權(quán)利要求1的方法，其中所述的生物液體包括包括血液、尿液、血漿、血清、腦脊液、唾液、汗液或腦組織。18.權(quán)利要求1的方法，其中a)用診斷試劑盒^r測所述生物體液中NMDA受體抗體水平；b)所述的診斷試劑盒包含結(jié)合的NMDA受體肽；和c)針對(duì)抗體標(biāo)準(zhǔn)品生產(chǎn)所述試劑盒，所述抗體標(biāo)準(zhǔn)品包括從人血中純化的免疫球蛋白G組分。19.權(quán)利要求1的方法，通過直接或間接ELISA、RIA、免疫斑點(diǎn)、免疫印記、膠乳凝集、側(cè)流、熒光偏振分析或微陣列法加以實(shí)全文摘要本發(fā)明提供了預(yù)測手術(shù)造成的不良神經(jīng)事件發(fā)生率的方法。這類不良事件包括，如中風(fēng)、譫妄和短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)。本方法基于這一發(fā)現(xiàn)循環(huán)腦NMDA受體肽和抗體可用來鑒別易患不良神經(jīng)事件的患者。本發(fā)明還提供了實(shí)踐本發(fā)明預(yù)測方法的診斷方法，以及減少手術(shù)造成的不良神經(jīng)事件風(fēng)險(xiǎn)的干預(yù)策略(圖1)。文檔編號(hào)G01N33/53GK101208601SQ200680009798公開日2008年6月25日申請(qǐng)日期2006年1月24日優(yōu)先權(quán)日2005年1月25日發(fā)明者S·A·達(dá)姆比諾瓦申請(qǐng)人:Cis生物科技公司