專利名稱：一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法，屬于藥物的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
本藥物組合物以燈盞花素、赤芍或白芍為原料制成，其特征在于按照重量份數(shù)計算，它由燈盞花素0.2～10份、赤芍或白芍500～2500份經(jīng)提取精制而成；或是由相應(yīng)重量份燈盞花素與相應(yīng)重量份赤芍或白芍藥材經(jīng)提取后得到的藥材提取物制作而成；本藥物組合物為綜合中醫(yī)藥理論與現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)原理組配而成，具有活血化淤、通脈舒絡(luò)、改善血循環(huán)和代謝作用功效，適用于中風瘀血阻絡(luò)證之半身不遂，口眼歪斜，言語謇澀，苔薄白或薄白膩，脈沉細等，以及腦梗塞有上述見癥狀者，臨床上除用于治療冠心病、心絞痛、心律失常、腦血栓、老年性癡呆等心腦血管疾病外，還用于肝腎綜合癥、心肺病、糖尿病及其并發(fā)癥等疾病。心腦血管疾病如冠心病、腦血栓、老年性癡呆等均是當今世界最常見和危害最大的疾病之一，在許多國家已成為人口死亡的主要原因之一。據(jù)調(diào)查，近年來該類疾病的發(fā)病率有逐年增高趨勢，而且中、青年患者不斷增加，已成為危害我國人民健康的常見病、多發(fā)病。為了更好的控制該藥物組合物的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產(chǎn)品質(zhì)地，本申請人建立了該藥物組合物的質(zhì)量控制方法。目前，沒有關(guān)于該組方產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法的任何現(xiàn)有技術(shù)，在含有燈盞花素、赤芍或白芍的其他藥物制劑中，一般僅以野黃芩苷、芍藥苷為檢測指標。但燈盞花素、赤芍或白芍的化學(xué)成分有幾十種，如果用其一、二種活性成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更不用說無藥效性的指標成分了。因此，申請人不僅研究了以燈盞花素、赤芍或白芍的活性成分或特征成分而進行的鑒別與含量測定方法，更建立了指紋圖譜的技術(shù)方案，對其物質(zhì)群整體予以控制，從整體上有效的表征其質(zhì)量。中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特征性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜。在現(xiàn)階段，中藥大多數(shù)的有效成分沒有明確的情況下，指紋圖譜對于有效控制本發(fā)明產(chǎn)品的質(zhì)量，具有有益的效果。鑒別、含量測定、指紋圖譜聯(lián)合應(yīng)用，覆蓋面廣，特異性強，是本質(zhì)量控制方法突出的實質(zhì)性特點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法，這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)提供了檢測的指標、檢測的手段、技術(shù)方法等等；以便更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產(chǎn)品質(zhì)地。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的一種以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)以燈盞花素、白芍或赤芍中全部或部分成分特征為主的指紋圖譜測試方法；(2)赤芍或白芍藥材、野黃芩苷、芍藥苷、沒食子酸中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、芍藥苷、赤芍總苷或白芍總苷中全部或部分成分的含量測試方法。
所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內(nèi)容(1)供試品溶液的制備取待測藥物組合物適量，以水或甲醇或乙醇中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制備供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取野黃芩苷或芍藥苷，水或甲醇或乙醇中的一種或幾種為溶劑，溶解至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相A為50～100％乙腈或50～100％甲醇，流動相B為0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1％～3％冰醋酸或0.1％～3％甲酸或0.03％～1％磷酸溶液，梯度洗脫，流動相A比例變化范圍為10～85％，流速為0.5～1.5ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～50℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、白芍或赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測藥物組合物中以燈盞花素、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；
II.非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±20％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±35％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±40％。
所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內(nèi)容(1)供試品溶液的制備精密稱取待測藥物組合物適量，加水稀釋或溶解，制成每1ml含1mg的溶液，濾過，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流動相B的比例由85％降至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、白芍或赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3～12個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測藥物組合物中以燈盞花素、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±20％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±25％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內(nèi)容a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述溶液適量，點于同一硅膠薄層板或聚酰胺薄膜上，以甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲酸或乙酸＝5～12∶0.5～5∶0.02～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含三氯化鋁或三氯化鐵顯色劑，烘烤或不烘烤，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點；b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2％～3％冰醋酸水溶液或0.2％～3％甲酸水溶液或0.01％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～75∶85～25為流動相，檢測波長為200～410nm中的一種或幾種；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、藥物組合物中赤芍或白芍藥材、芍藥苷、沒食子酸中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加乙醇或甲醇或正丁醇或水中的一種或幾種為溶劑提取，制備供試品溶液；取赤芍或白芍對照藥材，參照供試品溶液制備方法，制成對照藥材溶液；取芍藥苷對照品、沒食子酸對照品的一種或兩種，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述對照溶液中的一種或兩種及供試溶液適量，分別點于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲醇或乙醇-甲酸或乙酸＝2～10∶0.5～5∶0.5～5∶0.01～5為展開劑，展開，取出，晾干，先后或分別噴以含三氯化鐵的顯色劑或含三氯化鋁的顯色劑或含硫酸的顯色劑或含香草醛的顯色劑中的一種或幾種，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點；
d、藥物組合物中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～60∶85～40流動相，檢測波長為200～410nm中的一個或幾個；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內(nèi)容a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述溶液適量，以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑；b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、藥物組合物中赤芍或白芍藥材、芍藥苷、沒食子酸中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取芍藥苷、沒食子酸對照品中的一種或兩種，制備對照品溶液；取赤芍或白芍藥材，參照供試品溶液的制法制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取對照藥材溶液或?qū)φ掌啡芤褐械囊环N或兩種、及供試溶液適量，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸＝6∶1.5∶1.5∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，先噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；再噴以香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；
d、藥物組合物中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取或稀釋，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內(nèi)容a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測定取待測藥物組合物適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2％～3％冰醋酸水溶液或0.2％～3％甲酸水溶液或0.01％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～65∶85～35為流動相，檢測波長為200～410nm中的一種或幾種；采用液相色譜法試驗，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，以外標一點法或標準曲線法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于16mg；b、藥物組合物中芍藥苷的含量測定取待測藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或稀釋至合適濃度，濾過，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝12～60∶88～40流動相，檢測波長為200～410nm中的一個或幾個；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法或標準曲線法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含芍藥苷的不得少于15mg；c、藥物組合物中赤芍總苷或白芍總苷的含量測定取待測藥物組合物適量，置量瓶中，加強堿溶液適量使稀釋或溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置具塞試管中，置沸水浴水解0.5小時～5小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至量瓶中，用甲醇或乙醇或流動相反復(fù)蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以苯甲酸對照品的制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝10～60∶90～40流動相，檢測波長為200～410nm波長范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法或標準曲線法進行計算含量后再由公式白芍總苷或赤芍總苷含量％＝苯甲酸含量％×480.48/122.13，計算白芍總苷或赤芍總苷的含量，各制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含白芍總苷或赤芍總苷的限度不得少于20mg。
所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內(nèi)容a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測定取待測藥物組合物適量，精密稱定或量取，加甲醇提取或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；以外標一點法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于32mg；b、藥物組合物中芍藥苷的含量測定取待測藥物組合物適量，精密稱定或量取，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含芍藥苷的不得少于30mg；c、藥物組合物中赤芍總苷或白芍總苷的含量測定取待測藥物組合物適量，精密稱定或量取，置量瓶中，加5％氫氧化鈉溶液適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置具塞試管中，置沸水浴水解2小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用甲醇或流動相反復(fù)蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以苯甲酸對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液＝30∶70為流動相，檢測波長為230nm，柱溫35℃；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，白芍總苷或赤芍總苷含量＝苯甲酸含量×480.48/122.13，計算白芍總苷或赤芍總苷的含量，藥物組合物每日用劑量中含白芍總苷或赤芍總苷的限度不得少于40mg。
所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的含量測定結(jié)果，按照重量百分比計算，野黃芩苷、芍藥苷、總黃酮、赤芍總苷或白芍總苷中的全部或部分物質(zhì)的總量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能更加完善的控制以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量。中藥成分復(fù)雜，如果只用其中一、兩種成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更無法判斷其藥效的指標成分。因此本申請人從指紋圖譜、鑒別和含量測定三個方面來全面控制注射劑的質(zhì)量。由于藥物組合物中的每種原料所含的化學(xué)成分都很復(fù)雜，并且制劑成型后相互干擾，對鑒別、含量測定、指紋圖譜均會造成較大影響。原來曾適用于單個原料的鑒別、含量測定或指紋圖譜測試方法，在用于測試含有該原料的的藥物組合物時往往無法實施。因此，藥物組合物的質(zhì)量控制方法必須在原單個原料相應(yīng)方法的基礎(chǔ)上作以較大改進，或放棄原方法而建立完全不同的新方法。也就是說，本發(fā)明所述的質(zhì)控方法并非是組合物中單個原料質(zhì)控方法的簡單疊加，而是經(jīng)大量試驗研究后發(fā)明的。
而只有采用本發(fā)明的條件，才能得到理想的鑒別、含量測定和指紋圖譜質(zhì)控效果。
通過實驗證明，本發(fā)明質(zhì)量控制方法對以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度、穩(wěn)定性均較高。
實驗例1 注射用無菌粉末中以燈盞花素、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的制備1.色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)Kromasil C18(200mm×4.6mm，5μm)、Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號的色譜柱均可達到較好的分離效果，其中Diamonsil C18色譜柱分離效果最好，柱效最高。故選用Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)為實驗研究柱。
2.流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(50∶50)；(3)甲醇-1％冰醋酸(10∶90)；(4)乙腈溶液-0.5％磷酸(梯度洗脫)；(5)甲醇溶液-0.005moL/L磷酸二氫鈉(梯度洗脫)；(6)乙腈溶液-0.1％磷酸(梯度洗脫)等6種流動相系統(tǒng)；結(jié)果顯示流動相(1)條件下，峰形拖尾，分離不好；流動相(2)條件下，峰形拖尾，峰與峰重疊較多；流動相(3)條件下，1小時內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(4)、(5)、(6)條件下，50～100％乙腈或50～100％甲醇-0.005mol/L～0.3nol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1％～3％冰醋酸或0.1％～3％甲酸或0.03％～1％磷酸溶液＝10～85∶90～15范圍內(nèi)，梯度洗脫，可獲較佳效果；最佳條件為流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸，梯度洗脫，從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流速為1.0ml/min，在該條件下，峰形好，出峰快而完全且分布均勻。
3.檢測波長的確定在上述最佳流動相條件下，分別考察了190～410nm下的色譜峰情況，結(jié)果表明，230nm檢測時能兼顧各成分色譜峰的峰度、分離度和基線，效果最佳，故選擇230nm為本品指紋圖譜檢測波長。
4.儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的LC-10Avp高效液相色譜儀，WML-2010色譜工作站，柱溫40℃。
5.供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。
6.參照物溶液的制備稱取野黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1ml約含0.15mg的溶液，搖勻，即得。
7.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)根據(jù)10批樣品制定標準指紋圖譜，并制定待測藥物組合物的指紋圖標準如下I.待測藥物組合物的的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值相對偏差不得超過±10％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±20％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±25％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；
實驗例2注射液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法為了突出燈盞化素的特征，選擇了野黃芩苷作為其特征斑點，但是由于制劑中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分(如赤芍中的芍藥苷、芍藥苷等)，只有排除這些成分的干擾，才能獲得理想的色譜效果。薄層色譜法效果優(yōu)劣的關(guān)鍵因素為展開條件，特別是展開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，部分展開條件與結(jié)果如下注射液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法條件 問題正己烷-苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶5∶10∶4)硅膠H薄層板對照品展開至前沿醋酸乙酯-苯-乙酸(5∶4∶3)聚酰胺薄膜分離不清晰，陰性有干擾醋酸乙酯-苯-甲酸(5∶4∶3)硅膠G薄層板 分離不清晰氯仿-醋酸乙酯-甲醇(7∶2∶4)硅膠GF254薄層板 分離不清晰甲苯-醋酸乙酯(8∶1)硅膠H薄層板 分離不清晰甲苯-醋酸乙酯-甲酸(10∶5∶0.01)聚酰胺薄膜 陰性有干擾甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7∶2∶1)聚酰胺薄膜 分離清晰，Rf值適中，陰性無干擾經(jīng)過篩選，確定了最佳展開條件以聚酰胺薄膜為固定相，以甲醇∶醋酸乙酯∶甲酸(7∶2∶1)為展開劑，在此條件下，野黃芩苷的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。
實驗例3注射用濃溶液芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別方法為了突出赤芍或白芍藥材的特征，選擇了赤芍或白芍藥材、芍藥苷、沒食子酸作為其特征斑點，但是由于制劑中存在較多與芍藥苷、沒食子酸結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分(如燈盞花素中的野黃芩苷等)。只有排除這些成分的干擾，才能獲得理想的色譜效果。薄層色譜法效果優(yōu)劣的關(guān)鍵因素為展開條件，特別是展開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，部分展開條件與結(jié)果如下注射用濃溶液芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別條件 問題三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇(7∶6∶5)硅膠G薄層板 對照品展開至前沿二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶6∶5)硅膠GF254薄層板 陰性有干擾三氯甲烷-乙醇-冰醋酸(7∶2∶2)硅膠H薄層板分離不清晰三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸(7∶1∶2)硅膠G薄層板 分離不清晰丙酮-醋酸乙酯-冰醋酸(7∶1∶2)硅膠H薄層板分離不清晰，陰性有干擾三氯甲烷-丁酮-乙醇-甲酸(8∶3∶3∶2)硅膠GF254薄層板 分離不清晰三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶1.5∶1.5∶0.5)硅膠G薄層 分離清晰，Rf值適中，陰性無板 干擾經(jīng)過篩選，確定了最佳展開條件以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷∶醋酸乙酯∶甲醇∶甲酸(6∶1.5∶1.5∶0.5)為展開劑，在此條件下，芍藥苷、沒食子酸的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。
實驗例4 注射用無菌粉末中野黃芩苷的含量測定1 儀器與試藥1.1主要儀器高效液相色譜儀 LC-2010AHT SHIMADZU紫外/可見分光光度儀 TU-1810SPC 北京普析通用儀器有限公司電子分析天平BP211D SARTORIUS超聲波清洗機KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司1.2試藥野黃芩苷 中國藥品生物制品檢定所甲醇 分析純 北京化工廠乙腈 色譜純 迪馬公司磷酸 分析純 北京化學(xué)試劑公司2 野黃芩苷由中國藥品生物制品檢定所提供野黃芩苷，經(jīng)高效液相色譜法(歸一化法)測定純度為96.40％，符合含量測定用對照品要求(在測定中，按照96.40％的純度進行折算)。
3 檢測波長的選擇取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.0463mg的溶液，在190～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，野黃芩苷在284nm及335nm處有最大吸收，根據(jù)《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑》相關(guān)品種并結(jié)合文獻報道，選擇335nm作為野黃芩苷含量測定的檢測波長。
4 色譜條件色譜儀SHIMADZU LC-2010AHT；色譜柱Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；流動相甲醇-0.1％磷酸(50∶50)；流 速1.0ml/min；進樣量10μl；檢測波長335nm。
供試品溶液的制備取本品粉末約20mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
根據(jù)上述色譜條件得到野黃芩苷對照品、供試品色譜圖，其理論板數(shù)n均大于5000，野黃芩苷色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5，溶劑無干擾。
5 提取時間的選擇取本品粉末約20mg(共6份)，精密稱定，分置50ml量瓶中，加甲醇適量，分別超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5、10、20min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
提取時間考察提取時間(min)含量(mg/瓶)5 28.4610 28.5520 28.43結(jié)果表明，超聲處理5min即可提取完全。
6 線性關(guān)系考察精密量取野黃芩苷對照品溶液(0.978mg/ml)0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定。以峰面積為縱坐標，野黃芩苷量(μg)為橫坐標作圖，繪制標準曲線。
野黃芩苷標準曲線測定結(jié)果編號 野黃芩苷量(μg) 根據(jù)純度的折算 峰面積量(μg)1 0.0000 0.0000 02 0.1956 0.1886 6037223 0.3912 0.3771 12240784 0.5868 0.5657 18353745 0.7824 0.7542 25056786 0.9780 0.9428 3038182回歸方程Y＝3259091.50x-1830.06相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999結(jié)果表明野黃芩苷在0.1886μg～0.9428μg范圍內(nèi)線性良好。
經(jīng)計算，野黃芩苷的標準曲線過原點，因此選用外標一點法測定野黃芩苷的含量。
7 精密度實驗精密吸取同一份野黃芩苷對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定5次，考察對照品溶液精密度，測定結(jié)果見表33。
精密度試驗試驗次數(shù) 12345平均值RSD(％)峰面積 1572015 1570202 1566206 1559384 15570171564965 0.42結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
8 供試品溶液穩(wěn)定性實驗取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、8、24小時精密吸10μl，注入液相色譜儀，測定。
供試品溶液穩(wěn)定性實驗時間(h) 0 2 4 8 24 均值 RSD(％)含量(mg/瓶) 28.54 29.13 28.7629.05 29.1228.92 0.90結(jié)果表明，供試品溶液24小時內(nèi)穩(wěn)定性良好。
9 重復(fù)性實驗取本品，按供試品溶液的制備和測定法項下進行操作。
重復(fù)性實驗編號 12345平均值RSD(％)含量(mg/瓶) 28.47 28.2628.9228.1529.04 28.57 1.38結(jié)果表明，重復(fù)性良好。
10 加樣回收實驗采用加樣回收法，取本品粉末約10mg(共6份)，精密稱定，分置50ml量瓶中，分別精密加入野黃芩苷對照品溶液(1.107mg/ml)1.6ml、2.0ml和2.4ml(各兩份)，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。(樣品中野黃芩苷的含量為23.56％)加樣回收實驗供試品稱樣 供試品中純品 野黃芩苷加入量 折算后 測量值 回收率編號量(mg)量(mg) (mg) (mg) (mg) (％)1 10.69 2.5186 1.7712 1.7074 4.1836 97.522 9.57 2.2547 1.7712 1.7074 3.9047 96.643 10.24 2.4125 2.214 2.1343 4.5067 98.124 11.21 2.6411 2.214 2.1343 4.7248 97.63
5 10.02 2.3607 2.6568 2.56124.900199.156 11.96 2.8178 2.6568 2.56125.349398.84平均回收率＝97.46％，RSD＝1.25％，結(jié)果表明，回收率良好。
11 樣品含量測定取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測定法項下的操作。
野黃芩苷含量測定批號野黃芩苷含量(mg/瓶)1 29.122 28.643 28.58實驗例5注射用無菌粉末中芍藥苷的含量測定1 儀器、試藥儀器JASCO 1580型高效液相色譜儀鉆石C18色譜柱250×4.6mm 5um迪馬公司SARTARIUS BP211D電子分析天平試劑 乙腈色譜純Fisher公司甲醇分析純北京化工廠磷酸二氫鈉 分析純北京化學(xué)試劑公司2 色譜分析條件色譜柱Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；流動相甲醇-0.1％甲酸(40∶60)流速1.0ml/min柱溫室溫進樣量10ul檢測波長230nm根據(jù)上述色譜條件得到芍藥苷對照品、樣品色譜圖，理論板數(shù)均大于3000。
3 測定波長的選擇經(jīng)紫外掃描，芍藥苷在230nm波長處有最大吸收，故選定230nm為測定波長。
4 對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器干燥36小時的芍藥苷對照品10mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含芍藥苷0.1mg)。
5 供試品溶液的制備取裝量差異項下本品5瓶，取內(nèi)容物，混勻，取約0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理(功率250W，頻率33KHz)10分鐘使溶解，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續(xù)濾液，即得。
6 陰性對照試驗為考察其它輔料是否干擾芍藥苷的測定，除赤芍或白芍外，按處方比例稱取其它輔料與供試品溶液同法制成陰性對照溶液并測定。結(jié)果表明，陰性樣品對芍藥苷的含量測定無干擾。
7 線性關(guān)系的考察精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器干燥36小時的芍藥苷對照品11.48mg，置10ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分別置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10ul注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定。以峰面積為縱坐標，芍藥苷量(ug)為橫坐標作圖，繪制標準曲線。
回歸方程為Y＝1270296.82X+2219.70γ＝0.9999芍藥苷在0.4592～2.2960ug范圍內(nèi)線性良好。
標準曲線測定數(shù)據(jù)編號 芍藥苷量(ug) 峰面積10.4592 565516.520.9184 117149031.3776 178388541.8368 234430052.2960 28957138 供試品溶液穩(wěn)定性試驗取同一份供試品溶液的制備和測定法項下操作，每隔1小時重復(fù)測定1次，結(jié)果表明在4小時之內(nèi)，供試品溶液穩(wěn)定。
穩(wěn)定性試驗時間(h)01234平均RSD芍藥苷(mg/瓶) 50.1449.8149.9650.0550.12 50.04 0.209 精密度試驗精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥器干燥36小時的芍藥苷對照品11.56mg，按正文對照品溶液的制備和測定法項下操作，重復(fù)測5次，結(jié)果如下精密度試驗試驗編號12345平均RSD峰面積 1374344 1376226 1378443 1375983 1376550 1376309 0.1110 重復(fù)性試驗取本品5份，精密稱定，按正文供試品溶液的制備和測定法項下操作，結(jié)果如下
重復(fù)性試驗試驗編號12345平均RSD芍藥苷(mg/瓶) 47.2647.8146.9448.6148.35 47.79 1.4811 回收率試驗采用加樣回收法，精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器干燥36小時的芍藥苷約41.07mg，置25ml量瓶中，加入甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。
精密稱取已知含量的本品內(nèi)容物約10mg，再精密量取對照品溶液2ml，共置50ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理使溶解，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45um)濾過，精密吸取續(xù)濾液10ul注入液相色譜儀，測定，即得，平行試驗5份。
回收率試驗內(nèi)容物稱量 內(nèi)容物中芍藥 芍藥苷加入編號測量值(mg) 回收率(％)(mg) 苷量(mg) 量(mg)112.14 3.2613.2856 6.520 99.19211.14 2.9933.2856 6.261 99.46312.531 3.3673.2856 6.558 97.12411.399 3.0633.2856 6.299 98.49511.671 3.1363.2856 6.379 98.70平均回收率＝98.59％，RSD＝0.92％，結(jié)果表明，回收率良好。
12 樣品的測定按正文供試品溶液的制備和測定法項下操作，測定三批樣品，結(jié)果如下樣品含量測定批號芍藥苷含量(mg/瓶)1批 47.792批 46.843批 48.2具體實施方式
實施例1采用液相色譜法測定注射用無菌粉末中以燈盞花素、赤芍成分特征為主的指紋圖譜。
(1)供試品溶液的制備精密稱取樣品粉末適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；
(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)以燈盞花素和赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有5個；(5)以上述方法作為中藥復(fù)方制劑中以燈盞花素、赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜，應(yīng)符合下列要求I.待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±20％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±25％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％。
實施例2采用液相色譜法測定注射用濃溶液中以燈盞花素、白芍成分特征為主的指紋圖譜。
(1)供試品溶液的制備精密量取樣品適量，加乙醇稀釋10倍，搖勻，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加95％乙醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為50％乙腈，流動相B為0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至60分鐘，流動相A的比例由20％升至85％，流速為1.2ml/min，檢測波長為360±2nm，柱溫為50℃；(4)以燈盞花素和白芍成分特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有6個；(5)以上述方法作為中藥復(fù)方制劑中以燈盞花素、白芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜，應(yīng)符合下列要求I.待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±20％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±35％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±40％。
實施例3采用液相色譜法測定注射液中以燈盞花素、赤芍成分特征為主的指紋圖譜。
(1)供試品溶液的制備取樣品，用0.45μm的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取芍藥苷適量，加50％乙醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為甲醇，流動相B為0.1％冰醋酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至40分鐘，流動相A的比例由10％升至50％，從40分鐘至60分鐘，流動相A的比例由50％升至80％，從60分鐘至65分鐘，流動相A的比例由80％降至10％，流速為0.8ml/min，檢測波長為190±2nm，柱溫為20℃；(4)以燈盞花素和赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3個；(5)以上述方法作為中藥復(fù)方制劑中以燈盞花素、赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜，應(yīng)符合下列要求
I.待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±35％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±40％。
實施例4采用液相色譜法測定注射用無菌粉末中以燈盞花素、赤芍成分特征為主的指紋圖譜。
(1)供試品溶液的制備精密稱取樣品粉末適量，加80％甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加80％甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為0.005mol/L磷酸二氫鈉溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至60分鐘，流動相A的比例由10％升至70％，流速為1.2ml/min，檢測波長為410±2nm，柱溫為40℃；(4)以燈盞花素和赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有20個；(5)以上述方法作為中藥復(fù)方制劑中以燈盞花素、赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜，應(yīng)符合下列要求I.待測中藥復(fù)方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％；實施例5注射用無菌粉末中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品0.1g，加甲醇20ml提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑。
實施例6注射用無菌粉末中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品0.1g，加50％乙醇20ml提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加50％7醇制成每1ml含1mg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲醇-甲酸乙酯-甲酸＝10∶4∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁乙醇溶液，105℃烘5分鐘，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例7注射液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品2ml，蒸干，殘渣加甲醇10ml提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各2μl，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以乙醇-醋酸丁酯-甲酸＝5∶0.5∶3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以4％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑。
實施例8注射用濃液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品2ml，用5倍量乙醇稀釋，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10μl，分別點于同一聚酰胺膜上，以乙醇-醋酸丁酯-冰醋酸＝12∶5∶0.02為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鋁乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例9注射用無菌粉末中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取樣品20mg，加甲醇20ml提取，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的對照溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；吸取上述溶液各10μl，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；實施例10注射用濃溶液中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取樣品0.2ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg的對照溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.01％磷酸水溶液＝75∶25為流動相，檢測波長為200nm；吸取上述溶液適量，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；
實施例11注射液中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取樣品2ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加乙醇制成每1ml含0.05mg的對照溶液，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液＝15∶85為流動相，檢測波長為410nm；吸取上述溶液各15μl，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；實施例12注射用無菌粉末中芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別方法取樣品0.2g，加甲醇20ml提取，制備供試品溶液；另取芍藥苷、沒食子酸對照品，加甲醇制成每ml含芍藥苷2mg、沒食子酸0.5mg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供試溶液與對照溶液適量，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸＝6∶1.5∶1.5∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，先噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；再噴以5％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；實施例13注射用濃溶液中白芍藥材、芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別方法取樣品0.2ml，加甲醇20ml稀釋，制備供試品溶液；另取芍藥苷、沒食子酸對照品，加甲醇制成每ml含芍藥苷2mg、沒食子酸0.5mg的對照品溶液；取白芍藥材0.5g，加甲醇20ml提取，制備對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供試溶液與對照溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-醋酸乙酯-乙醇-甲酸＝10∶0.5∶5∶5為展開劑，展開，取出，晾干，先噴以10％三氯化鋁乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；再噴以10％香草醛硫酸溶液，加熱斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；實施例14注射液中芍藥苷的薄層色譜鑒別方法取樣品2ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每ml含芍藥苷1mg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供試溶液與對照溶液1～20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-醋酸丁酯-甲醇-甲酸＝2∶5∶5∶0.01為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；實施例15注射用無菌粉末中芍藥苷的液相色譜鑒別方法
取樣品10mg，加甲醇20ml提取，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取芍藥苷對照品加甲醇制成每ml含0.1mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；吸取供試溶液與對照溶液各20μl，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例16注射用濃溶液中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取樣品0.1ml，加甲醇30ml稀釋，制備供試品溶液；取芍藥苷對照品加甲醇制成每ml含0.1mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％磷酸＝15∶85為流動相，檢測波長為200nm；吸取供試溶液與對照溶液各6μl，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例17注射液中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取樣品1ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；取芍藥苷對照品加95％乙醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.005mol/L磷酸二氫鉀溶液＝60∶40為流動相，檢測波長為410nm；吸取供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例18注射用無菌粉末中野黃芩苷的含量測定取樣品20mg，精密稱定，加甲醇50ml提取，制備供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每ml含0.1mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；精密吸取供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于20mg；實施例19注射用濃溶液中野黃芩苷的含量測定精密量取樣品0.2ml，加乙醇50ml稀釋，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加乙醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.005mol/L磷酸二氫鈉溶液＝65∶35為流動相，檢測波長為200nm；精密吸取供試溶液與對照溶液各20μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于20mg；實施例20注射液中野黃芩苷的含量測定精密量取樣品0.5ml，加甲醇50ml稀釋，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-3％甲酸水溶液＝15∶85為流動相，檢測波長為410nm；精密吸取供試溶液與對照溶液各5μl，注入液相色譜儀，以標準曲線法進行計算，制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于16mg；實施例21注射用無菌粉末中芍藥苷的含量測定取樣品20mg，精密稱定，加甲醇50ml提取，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成每ml含0.1mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；精密吸取供試溶液10μl，對照溶液20μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于32mg；實施例22注射用無菌粉末中芍藥苷的含量測定取樣品100mg，精密稱定，加甲醇100ml提取，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成每ml含0.02mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％磷酸溶液＝12∶88為流動相，檢測波長為200nm；精密吸取供試溶液5μl，對照溶液10μl，注入液相色譜儀，以標準曲線法進行計算，制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于20mg；實施例23注射液中芍藥苷的含量測定精密量取樣品1ml，加甲醇稀釋至10ml，制備供試品溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.005mol/L磷酸二氫鈉溶液＝60∶40為流動相，檢測波長為410nm；精密吸取供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以標準曲線法進行計算，制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于15mg；實施例24注射用濃溶液中芍藥苷的含量測定精密量取樣品0.2ml，加甲醇稀釋至25ml，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-3％冰醋酸水溶液＝30∶70為流動相，檢測波長為236nm；精密吸取供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以標準曲線法進行計算，制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于30mg；實施例25注射液中赤芍總苷的含量測定精密量取樣品1ml，置10ml量瓶中，加5％氫氧化鈉溶液并定至刻度，搖勻，精密量取5ml，置具塞試管中，置沸水浴水解2小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用甲醇反復(fù)蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取苯甲酸對照品，加甲醇制成每ml含苯甲酸0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液＝30∶70為流動相，檢測波長為230nm，柱溫35℃；精密吸取供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，赤芍總苷含量＝苯甲酸含量×480.48/122.13，計算赤芍總苷的含量，中藥復(fù)方制劑每日用劑量中含白芍總苷或赤芍總苷的限度不得少于25mg。
實施例26注射用濃溶液中白芍總苷的含量測定精密量取樣品0.5ml，置10ml量瓶中，加10％氫氧化鉀溶液并定至刻度，搖勻，精密量取5ml，置具塞試管中，置沸水浴水解5小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用乙醇反復(fù)蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取苯甲酸對照品，加甲醇制成每ml含苯甲酸0.03mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-3％冰醋酸溶液＝10∶90為流動相，檢測波長為200nm，柱溫20℃；精密吸取供試溶液與對照溶液各20μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，白芍總苷含量＝苯甲酸含量×480.48/122.13，計算白芍總苷含量，制劑每日用劑量中含白芍總苷的限度不得少于40mg。
實施例27注射用無菌粉末中白芍總苷的含量測定精密量取樣品0.5g，置10ml量瓶中，加5％氫氧化鉀溶液溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取5ml，置具塞試管中，置沸水浴水解0.5小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用乙醇反復(fù)蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取苯甲酸對照品，加甲醇制成每ml含苯甲酸0.08mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.005mol/L磷酸二氫鉀溶液＝60∶40為流動相，檢測波長為410nm，柱溫60℃；精密吸取供試溶液與對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，以標準曲線法進行計算，白芍總苷含量＝苯甲酸含量×480.48/122.13，計算白芍總苷含量，制劑每日用劑量中含白芍總苷的限度不得少于20mg。
權(quán)利要求
1.一種以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)以燈盞花素、白芍或赤芍中全部或部分成分特征為主的指紋圖譜測試方法；(2)赤芍或白芍藥材、野黃芩苷、芍藥苷、沒食子酸中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、芍藥苷、赤芍總苷或白芍總苷中全部或部分成分的含量測試方法。
2.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內(nèi)容(1)供試品溶液的制備取待測藥物組合物適量，以水或甲醇或乙醇中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制備供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取野黃芩苷或芍藥苷，水或甲醇或乙醇中的一種或幾種為溶劑，溶解至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相A為50～100％乙腈或50～100％甲醇，流動相B為0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1％～3％冰醋酸或0.1％～3％甲酸或0.03％～1％磷酸溶液，梯度洗脫，流動相A比例變化范圍為10～85％，流速為0.5～1.5ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～50℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、白芍或赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測藥物組合物中以燈盞花素、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測藥物組合物的指紋圖譜，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.待測藥物組合物的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.80～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±20％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±35％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±40％。
3.按照權(quán)利要求2所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內(nèi)容(1)供試品溶液的制備精密稱取待測藥物組合物適量，加水稀釋或溶解，制成每1ml含1mg的溶液，濾過，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流動相B的比例由85％降至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞花素、白芍或赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有3～12個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測藥物組合物中以燈盞花素、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測藥物組合物的指紋圖譜，應(yīng)符合下列要求中的部分或全部I.待測藥物組合物的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±20％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±25％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應(yīng)峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％。
4.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內(nèi)容a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述溶液適量，點于同一硅膠薄層板或聚酰胺薄膜上，以甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲酸或乙酸＝5～12∶0.5～5∶0.02～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含三氯化鋁或三氯化鐵顯色劑，烘烤或不烘烤，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點；b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2％～3％冰醋酸水溶液或0.2％～3％甲酸水溶液或0.01％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～75∶85～25為流動相，檢測波長為200～410nm中的一種或幾種；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、藥物組合物中赤芍或白芍藥材、芍藥苷、沒食子酸中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加乙醇或甲醇或正丁醇或水中的一種或幾種為溶劑提取，制備供試品溶液；取赤芍或白芍對照藥材，參照供試品溶液制備方法，制成對照藥材溶液；取芍藥苷對照品、沒食子酸對照品的一種或兩種，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述對照溶液中的一種或兩種及供試溶液適量，分別點于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲醇或乙醇-甲酸或乙酸＝2～10∶0.5～5∶0.5～5∶0.01～5為展開劑，展開，取出，晾干，先后或分別噴以含三氯化鐵的顯色劑或含三氯化鋁的顯色劑或含硫酸的顯色劑或含香草醛的顯色劑中的一種或幾種，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點；d、藥物組合物中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～60∶85～40流動相，檢測波長為200～410nm中的一個或幾個；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
5.按照權(quán)利要求4所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內(nèi)容a、藥物組合物中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述溶液適量，以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑；b、藥物組合物中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、藥物組合物中赤芍或白芍藥材、芍藥苷、沒食子酸中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取芍藥苷、沒食子酸對照品中的一種或兩種，制備對照品溶液；取赤芍或白芍藥材，參照供試品溶液的制法制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取對照藥材溶液或?qū)φ掌啡芤褐械囊环N或兩種、及供試溶液適量，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸＝6∶1.5∶1.5∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，先噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；再噴以香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點；d、藥物組合物中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測藥物組合物適量，加甲醇提取或稀釋，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
6.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內(nèi)容a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測定取待測藥物組合物適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2％～3％冰醋酸水溶液或0.2％～3％甲酸水溶液或0.01％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～65∶85～35為流動相，檢測波長為200～410nm中的一種或幾種；采用液相色譜法試驗，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，以外標一點法或標準曲線法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于16mg；b、藥物組合物中芍藥苷的含量測定取待測藥物組合物適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或稀釋至合適濃度，濾過，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝12～60∶88～40流動相，檢測波長為200～410nm中的一個或幾個；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法或標準曲線法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含芍藥苷的不得少于15mg；c、藥物組合物中赤芍總苷或白芍總苷的含量測定取待測藥物組合物適量，置量瓶中，加強堿溶液適量使稀釋或溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置具塞試管中，置沸水浴水解0.5小時～5小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至量瓶中，用甲醇或乙醇或流動相反復(fù)蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以苯甲酸對照品的制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝10～60∶90～40流動相，檢測波長為200～410nm波長范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法或標準曲線法進行計算含量后再由公式白芍總苷或赤芍總苷含量％＝苯甲酸含量％×480.48/122.13，計算白芍總苷或赤芍總苷的含量，各制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含白芍總苷或赤芍總苷的限度不得少于20mg。
7.按照權(quán)利要求6所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內(nèi)容a、藥物組合物中野黃芩苷的含量測定取待測藥物組合物適量，精密稱定或量取，加甲醇提取或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；以外標一點法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于32mg；b、藥物組合物中芍藥苷的含量測定取待測藥物組合物適量，精密稱定或量取，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，藥物組合物中每日用劑量含芍藥苷的不得少于30mg；c、藥物組合物中赤芍總苷或白芍總苷的含量測定取待測藥物組合物適量，精密稱定或量取，置量瓶中，加5％氫氧化鈉溶液適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置具塞試管中，置沸水浴水解2小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用甲醇或流動相反復(fù)蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以苯甲酸對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液＝30∶70為流動相，檢測波長為230nm，柱溫35℃；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，白芍總苷或赤芍總苷含量＝苯甲酸含量×480.48/122.13，計算白芍總苷或赤芍總苷的含量，藥物組合物每日用劑量中含白芍總苷或赤芍總苷的限度不得少于40mg。
8.按照權(quán)利要求6或7所述的以燈盞花素、赤芍或白芍制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述藥物組合物的含量測定結(jié)果，按照重量百分比計算，野黃芩苷、芍藥苷、總黃酮、赤芍總苷或白芍總苷中的全部或部分物質(zhì)的總量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由燈盞花素和赤芍(或白芍)制成的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法包括該組方制劑中燈盞花素、赤芍(或白芍)的指紋圖譜測試方法和/或鑒別測試方法和/或含量測定方法，本發(fā)明為該組方制劑的質(zhì)量控制提供了一種可靠、穩(wěn)定、全新的方法，使該制劑的工藝控制更加嚴格合理，質(zhì)量更加穩(wěn)定，同時為大生產(chǎn)提供了可靠穩(wěn)定的檢測方法，為確?；颊哂盟幍陌踩?、有效性提供了數(shù)字化的說明。
文檔編號G01N30/90GK1951431SQ200610152979
公開日2007年4月25日 申請日期2006年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月22日
發(fā)明者于文風 申請人:北京奇源益德藥物研究所