專利名稱：一種診斷細(xì)菌性陰道病的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種診斷細(xì)菌性陰道病的方法，屬于醫(yī)學(xué)臨床診斷領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
細(xì)菌性陰道病是婦產(chǎn)科最常見的疾病之一，由于臨床表現(xiàn)較輕，常常不為人們所注意，有近半數(shù)患者可無癥狀且治療后易于復(fù)發(fā)，但近年來國外學(xué)者發(fā)現(xiàn)本病是造成不孕癥、宮外孕、妊娠失敗、早產(chǎn)、盆腔炎和泌尿系感染的主要原因，BV診斷的傳統(tǒng)方法是Amsel臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，但在臨床實踐中上述診斷方法實際操作較為煩瑣、費(fèi)時且要借助大量的主觀判斷，影響了細(xì)菌性陰道病的準(zhǔn)確診斷，檢測十分有限。為此人們曾進(jìn)行一些改進(jìn)，公開號CN1401789，曾公開了一種通過檢測陰道的加德納菌來診斷細(xì)菌性陰道病診斷的方法；公開號CN1405562A，公開了一種通過測定唾液酸酶來診斷細(xì)菌性陰道病的方法。
上述專利所披露的分別局限于陰道的加德納菌及產(chǎn)生唾液酸酶的陰道厭氧菌，均忽視了產(chǎn)H2O2乳酸桿菌在診斷細(xì)菌性陰道病的作用，隨著對BV發(fā)病機(jī)制的不斷深入了解，認(rèn)為陰道中產(chǎn)H2O2乳桿菌的缺失是造成細(xì)菌性陰道病的主要原因之一，陰道分泌物中H2O2濃度過低，致使陰道內(nèi)厭氧菌過度生長，導(dǎo)致細(xì)菌性陰道病的發(fā)生。由于細(xì)菌性陰道病為多種厭氧菌過度繁殖引起的復(fù)合感染，并不是單一細(xì)菌引起，通過上述專利檢測會出現(xiàn)一些假陰性的結(jié)果(如過度生長的厭氧菌是不產(chǎn)生唾液酸酶的菌株或者是產(chǎn)酶量少的厭氧菌)。目前在診斷細(xì)菌性陰道病中往往忽視了乳桿菌代謝產(chǎn)物-H2O2濃度的變化，影響了細(xì)菌性陰道病的準(zhǔn)確檢測。本發(fā)明目的在于避免上述現(xiàn)有的技術(shù)的不足之處，提供一種診斷細(xì)菌性陰道病的方法，該方法是測定唾液酸酶活性同時測定陰道分泌物中H2O2濃度變化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種診斷細(xì)菌性陰道病的方法，該方法包括測定唾液酸酶活性和測定陰道分泌物中H2O2濃度變化。
本發(fā)明的方法包括測定唾液酸酶活性和測定陰道分泌物中H2O2濃度變化，包括本發(fā)明的唾液酸酶活性測定方法根據(jù)文獻(xiàn)報道(R.Wiggins，T.Crowley，P.J.Horner，et al.Use of 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-a-D-N-Acetylneuraminic Acid ina Novel Spot Test To Identify Sialidase Activity in Vaginal Swabs from Womenwith Bacterial Vaginosis Journal of Clinical Microbiology，2000，383096-3097.)，具體方法如下將患者的陰道分泌物樣本放入裝有具有乙酰神經(jīng)氨酸類(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-a-D-N-Acetylneuraminic Acid)底物及顏色反應(yīng)活性的結(jié)合物的玻璃管中，于37℃保溫10min，加入顯色劑，由顏色判定結(jié)果。加入1mol/L的NaOH 1～2滴，呈變色，判定為陽性。反之唾液酸酶缺乏時，遇NaOH后呈不變色，判定為陰性。不變色表示結(jié)果為陰性，變色表示結(jié)果為陽性。
本發(fā)明的測定陰道分泌物中H2O2濃度的方法如下采用高效液相色譜法(HPLC)測量陰道分泌物中H2O2濃度1.儀器島津LC-3A高效液相色譜儀，UVD-2紫外檢測器。
2.化學(xué)品(1)標(biāo)準(zhǔn)樣品H2O2。
(2)甲醇、乙醇和乙酸均為分析純(3)水Millipore-Q超純水3.色譜條件(1)色譜柱YWGC18，250mm×4.5mm，10μm(大連依利特公司)。
(2)流動相為甲醇∶水0-85∶15-100(3)流速0.8ml/min(4)波長254nm陰道分泌物中唾液酸酶活性陽性，同時陰道分泌物中H2O2濃度＜正常值，判定細(xì)菌性陰道病。陰道分泌物中唾液酸酶活性陰性，同時陰道分泌物中時H2O2濃度≥正常，判定非細(xì)菌性陰道病。陰道分泌物中唾液酸酶活性陰性，同時陰道分泌物中H2O2濃度＜正常，判定亞非細(xì)菌性陰道病。
具體實施例方式為了進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明，如下提供診斷細(xì)菌性陰道病的方法的實施例。然而應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的范圍不因這些實施例而受到限制。
1、檢測步驟(1)用消毒拭子盡可能多的收集病人的陰道分泌物(采樣前病人不得在24小時內(nèi)使用陰道乳狀藥劑，不能收集宮頸外的陰道分泌物)。將樣品平均分為兩份，一份用作檢測唾液酸酶活性，另一份用作檢測H2O2濃度。
(2)將患者的陰道分泌物樣本放入裝有具有乙酰神經(jīng)氨酸類(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-a-D-N-Acetylneuraminic Acid)底物及顏色反應(yīng)活性結(jié)合物的玻璃管中，置于37℃，溫浴10分鐘。
(3)取出顯色瓶，加1～2滴顯色劑至瓶有拭子的測試管中，輕搖均勻。
(4)加入顯色劑三分鐘之內(nèi)，立即觀察顏色反應(yīng)。
(5)采用高效液相色譜法(HPLC)測量陰道分泌物中H2O2濃度。
2、結(jié)果判定當(dāng)陰道分泌物樣本放入裝有具有乙酰神經(jīng)氨酸類的底物及顏色反應(yīng)活性結(jié)合物的玻璃管中，發(fā)生顏色改變，同時樣本中H2O2濃度低于正常值，判定細(xì)菌性陰道病。當(dāng)陰道分泌物樣本放入裝有具有乙酰神經(jīng)氨酸類的底物及顏色反應(yīng)活性結(jié)合物的玻璃管中，不發(fā)生顏色改變，同時H2O2濃度≥正常，判定非細(xì)菌性陰道病。當(dāng)陰道分泌物樣本放入裝有具有乙酰神經(jīng)氨酸類的底物及顏色反應(yīng)活性結(jié)合物的玻璃管中，不發(fā)生顏色改變，H2O2濃度＜正常，判定亞BV，需進(jìn)一步檢查。
權(quán)利要求
1.一種根據(jù)陰道分泌物中唾液酸酶活性和H2O2濃度變化作為診斷細(xì)菌性陰道病的方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，陰道分泌物中唾液酸酶活性陽性，同時陰道分泌物中H2O2濃度＜正常值，判定細(xì)菌性陰道病。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，陰道分泌物中唾液酸酶活性陰性，同時陰道分泌物中時H2O2濃度≥正常，判定非細(xì)菌性陰道病。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，陰道分泌物中唾液酸酶活性陰性，同時陰道分泌物中H2O2濃度＜正常，判定亞細(xì)菌性陰道病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種診斷細(xì)菌性陰道病的方法。通過測定陰道分泌物中唾液酸酶活性和H
文檔編號G01N21/78GK1825116SQ200510053328
公開日2006年8月30日 申請日期2005年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月27日
發(fā)明者樓永良 申請人:溫州醫(yī)學(xué)院