一種無(wú)佐劑b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種無(wú)佐劑b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑的制備方法，包括配方、混合料預(yù)備和凍干工藝。本發(fā)明采用在凍干工藝的真空冷凍升華干燥去除自由水的過(guò)程中，控制瓶裝料的溫度在自由水與結(jié)合水的共溶點(diǎn)以下來(lái)消除CRM197蛋白的聚集；在真空升溫解吸干燥去除自由水的過(guò)程中，控制瓶裝料的溫度在降解點(diǎn)以下來(lái)消除Hib莢膜結(jié)構(gòu)的降解，使b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑無(wú)需添加佐劑的技術(shù)方案，克服了現(xiàn)有技術(shù)存在蛋白聚集、結(jié)構(gòu)降解、需加佐劑的問(wèn)題與不足，使b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑，達(dá)到了消除蛋白聚集和結(jié)構(gòu)降解，無(wú)需加佐劑的目的。
【專利說(shuō)明】一種無(wú)佐劑b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種疫苗凍干制劑的制備方法，具體是指用于將b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗制成凍干制劑的一種無(wú)佐劑b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗，學(xué)名b型流感嗜血桿菌莢膜寡糖與CRM197蛋白結(jié)合物，又稱Hib-CRM197蛋白結(jié)合物，是一種用于預(yù)防兒童b型流感的疫苗；b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗有凍干制劑和液態(tài)制劑兩種劑型，這兩種劑型在多糖含量及分子大小與分布等質(zhì)量指標(biāo)上均保持一致；其中，凍干制劑穩(wěn)定性高，無(wú)需添加防腐劑，且能夠延長(zhǎng)保存期和有效期。
[0003]b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑，簡(jiǎn)稱b型凍干疫苗；b型凍干疫苗的品質(zhì)取決于冷凍干燥工藝曲線，簡(jiǎn)稱凍干工藝；現(xiàn)有技術(shù)的凍干工藝使制備的b型凍干疫苗中的CRM197蛋白存在聚集現(xiàn)象，以及Hib莢膜結(jié)構(gòu)(核糖基核糖醇磷酸聚合物)存在降解現(xiàn)象，參閱圖3并對(duì)照?qǐng)D1，使得b型凍干疫苗的生物活性下降，為此需要在b型凍干疫苗中添加佐劑以增強(qiáng)免疫受體的應(yīng)答強(qiáng)度；然而，疫苗佐劑的負(fù)作用會(huì)因不同的生物受體而各異，而理想的疫苗應(yīng)該無(wú)需添加佐劑；因此，現(xiàn)有技術(shù)存在蛋白聚集、結(jié)構(gòu)降解、需加佐劑的問(wèn)題與不足。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題與不足，本發(fā)明采用在凍干工藝的真空冷凍升華干燥去除自由水的過(guò)程中，控制瓶裝料的溫度在自由水與結(jié)合水的共溶點(diǎn)以下來(lái)消除CRM197蛋白的聚集；在真空升溫解吸干燥去除自由水的過(guò)程中，控制瓶裝料的溫度在降解點(diǎn)以下來(lái)消除Hib莢膜結(jié)構(gòu)的降解，使b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑無(wú)需添加佐劑的技術(shù)方案，提供一種無(wú)佐劑b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑的制備方法，旨在使b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑，達(dá)到消除蛋白聚集和結(jié)構(gòu)降解，無(wú)需加佐劑的目的。
[0005]本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的:一種無(wú)佐劑b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑的制備方法，包括配方、混合料預(yù)備和凍干工藝，其中，
[0006]所述的配方為，
[0007]原料:Hib_CRM197蛋白結(jié)合物原漿；
[0008]稀釋劑:注射用水；
[0009]凍干保護(hù)劑:蔗糖，分析純；
[0010]所述的混合料預(yù)備為:室溫下，將所述配方中的原料置于中性硼硅玻璃質(zhì)的攪拌釜中，用所述稀釋劑將所述原料攪拌稀釋至20?25微克/毫升，獲得稀料；之后，將所述凍干保護(hù)劑按2.5毫克/毫升所述稀料的比例投入攪拌釜中攪拌混合，攪拌轉(zhuǎn)速100轉(zhuǎn)/分鐘，混合攪拌用時(shí)5分鐘，獲得含有凍干保護(hù)劑的，混合料；之后，將所述混合料按0.5ml/瓶分裝于中性硼硅玻璃質(zhì)注射劑瓶中，獲得瓶裝料，待用；
[0011]所述的凍干工藝，包括預(yù)凍階段、升華干燥階段、解吸干燥階段；其中，
[0012]一、預(yù)凍階段:
[0013]將所述瓶裝料開口置于真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行深冷預(yù)凍；冷阱溫度? -801，氣壓為一個(gè)大氣壓，瓶裝料溫度為-55?-45X:，用時(shí)2?3小時(shí)；
[0014]二、升華干燥階段:
[0015]所述瓶裝料仍然留在真空冷凍干燥機(jī)中，
[0016]冷阱溫度? -801，真空度? 5？?分二步進(jìn)行升華干燥；
[0017]升華干燥步驟1:瓶裝料溫度為-35?-30X:，用時(shí)12小時(shí)；
[0018]升華干燥步驟2:瓶裝料溫度為-20?-101:，用時(shí)8小時(shí)；
[0019]三、解吸干燥階段:
[0020]所述瓶裝料仍然留在真空冷凍干燥機(jī)中，
[0021]冷阱溫度? -801，真空度? 5？?進(jìn)行解吸干燥；
[0022]瓶裝料溫度為15?201，用時(shí)10小時(shí)；
[0023]取出，封蓋，獲得無(wú)佐劑6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑制品。
[0024]有益效果
[0025]本發(fā)明制備的6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑制品，水分含量為1.89%，經(jīng)八0細(xì)!'106 蛋白質(zhì)層析儀檢測(cè)，參閱圖2并對(duì)照?qǐng)D1，消除了蛋白聚集和結(jié)構(gòu)降解現(xiàn)象，無(wú)需添加佐劑，因而稱為無(wú)佐劑6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑。
[0026]上述，本發(fā)明采用在凍干工藝的真空冷凍升華干燥去除自由水的過(guò)程中，控制瓶裝料的溫度在自由水與結(jié)合水的共溶點(diǎn)以下來(lái)消除￠^1197蛋白的聚集；在真空升溫解吸干燥去除自由水的過(guò)程中，控制瓶裝料的溫度在降解點(diǎn)以下來(lái)消除11113莢膜結(jié)構(gòu)的降解，使6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑無(wú)需添加佐劑的技術(shù)方案，克服了現(xiàn)有技術(shù)存在蛋白聚集、結(jié)構(gòu)降解、需加佐劑的問(wèn)題與不足，所提供的一種無(wú)佐劑6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑的制備方法，使6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑，達(dá)到了消除蛋白聚集和結(jié)構(gòu)降解，無(wú)需加佐劑的目的。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0027]讀圖說(shuō)明:
[0028]圖1、圖2、圖3均為八1(1細(xì)!'11116 ？1118蛋白質(zhì)層析儀的檢測(cè)圖譜，簡(jiǎn)稱圖譜；其中，圖中曲線位于橫坐標(biāo)60“附近稱為聚集吸收段，所述聚集吸收段對(duì)應(yīng)的縱坐標(biāo)峰值表示多糖大分子聚集的吸收量值；圖中曲線位于橫坐標(biāo)120“附近稱為目標(biāo)結(jié)合物吸收段，所述目標(biāo)結(jié)合物吸收段對(duì)應(yīng)的縱坐標(biāo)峰值表示目標(biāo)結(jié)合物的吸收量值；圖中曲線位于橫坐標(biāo)18001附近稱為蔗糖吸收段，所述蔗糖吸收段對(duì)應(yīng)的縱坐標(biāo)峰值表示蔗糖吸收量值；
[0029]圖1是未稀釋未凍干前的6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗原液的圖譜，圖中顯示含有可忽略的蔗糖吸收量值；
[0030]圖2是本發(fā)明制備的6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑凍干后的圖譜；圖中的多糖大分子聚集的吸收量值低于-9.7—11，與圖1對(duì)比，在可忽略范圍內(nèi)；圖中可見添加的凍干保護(hù)劑蔗糖的吸收量值；
[0031]圖3是現(xiàn)有技術(shù)制備的6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑凍干后的圖譜；圖中的多糖大分子聚集的吸收量值高于-9.0—11，這表明(^1197蛋白發(fā)生了聚集，與圖1對(duì)比，超出了許可范圍；同時(shí)，目標(biāo)結(jié)合物的吸收量值因多糖大分子聚集的吸收量值的增高而下降，低于-9.5^11 ；這表明目標(biāo)結(jié)合物結(jié)構(gòu)，與圖1對(duì)比，發(fā)生了超出許可范圍的降解，因而需要添加佐劑；此外，圖中可見添加的凍干保護(hù)劑蔗糖的吸收量值。
實(shí)施例說(shuō)明
[0032]以下通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的一種無(wú)佐劑6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑的制備方法作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員可以參照實(shí)施例的配方及工藝方法制得無(wú)佐劑6型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑制品，但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的任何限制。

【具體實(shí)施方式】
[0033]
[0034]實(shí)施例
[0035]品名:無(wú)佐劑13型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑
[0036]配方:原料蛋白結(jié)合物原漿；
[0037]稀釋劑:注射用水；
[0038]凍干保護(hù)劑:蔗糖，分析純；
[0039]制備
[0040]制備條件、
[0041]環(huán)境氣壓:一個(gè)大氣壓；環(huán)境溫度:室溫；
[0042]設(shè)施、設(shè)備:無(wú)菌室；中性硼硅玻璃質(zhì)攪拌釜；中性硼硅玻璃質(zhì)注射劑瓶；真空冷凍干燥機(jī)
[0043]制備工藝:包括混合料預(yù)備、凍干工藝；
[0044]混合料預(yù)備:
[0045]將所述配方中的原料置于中性硼硅玻璃質(zhì)的攪拌釜中，用所述稀釋劑將所述原料攪拌稀釋至20?25微克丨毫升，獲得稀料；之后，將所述凍干保護(hù)劑按2.5毫克/毫升所述稀料的比例投入攪拌釜中攪拌混合，攪拌轉(zhuǎn)速100轉(zhuǎn)/分鐘，混合攪拌用時(shí)5分鐘，獲得含有凍干保護(hù)劑的，混合料；之后，將所述混合料按0.501/瓶分裝于中性硼硅玻璃質(zhì)注射劑瓶中，獲得瓶裝料，待用；
[0046]凍干工藝:
[0047]包括預(yù)凍階段、升華干燥階段、解吸干燥階段；
[0048]一、預(yù)凍階段:
[0049]將所述瓶裝料開口置于真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行深冷預(yù)凍；冷阱溫度? -801，氣壓為一個(gè)大氣壓，瓶裝料溫度為-55?-45X:，用時(shí)2?3小時(shí)；
[0050]二、升華干燥階段:
[0051]所述瓶裝料仍然留在真空冷凍干燥機(jī)中，
[0052]冷阱溫度? -801:，真空度? 5？^分二步進(jìn)行升華干燥；
[0053]升華干燥步驟1:瓶裝料溫度為-35?-30X:，用時(shí)12小時(shí)；
[0054]升華干燥步驟2:瓶裝料溫度為-20?-101:，用時(shí)8小時(shí)；
[0055]三、解吸干燥階段:
[0056]所述瓶裝料仍然留在真空冷凍干燥機(jī)中，
[0057]冷阱溫度< -80°C，真空度< 5Pa，進(jìn)行解吸干燥；
[0058]瓶裝料溫度為15?20°C，用時(shí)10小時(shí)；
[0059]取出，封蓋，獲得無(wú)佐劑b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑制品。
【權(quán)利要求】
1.一種無(wú)佐劑b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑的制備方法，包括配方、混合料預(yù)備和凍干工藝，其特征在于: 所述的配方為， 原料:Hib-CRM197蛋白結(jié)合物原漿； 稀釋劑:注射用水； 凍干保護(hù)劑:蔗糖，分析純； 所述的混合料預(yù)備為:室溫下，將所述配方中的原料置于中性硼硅玻璃質(zhì)的攪拌釜中，用所述稀釋劑將所述原料攪拌稀釋至20?25微克/毫升，獲得稀料；之后，將所述凍干保護(hù)劑按2.5毫克/毫升所述稀料的比例投入攪拌釜中攪拌混合，攪拌轉(zhuǎn)速100轉(zhuǎn)/分鐘，混合攪拌用時(shí)5分鐘，獲得含有凍干保護(hù)劑的，混合料；之后，將所述混合料按0.5ml/瓶分裝于中性硼硅玻璃質(zhì)注射劑瓶中，獲得瓶裝料，待用； 所述的凍干工藝，包括預(yù)凍階段、升華干燥階段、解吸干燥階段；其中， 一、預(yù)凍階段: 將所述瓶裝料開口置于真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行深冷預(yù)凍；冷阱溫度< -80°C，氣壓為一個(gè)大氣壓，瓶裝料溫度為-55?-45°C，用時(shí)2?3小時(shí)； 二、升華干燥階段: 所述瓶裝料仍然留在真空冷凍干燥機(jī)中， 冷阱溫度< _80°C，真空度< 5Pa，分二步進(jìn)行升華干燥； 升華干燥步驟1:瓶裝料溫度為-35?-30°C，用時(shí)12小時(shí)； 升華干燥步驟2:瓶裝料溫度為-20?-10°C，用時(shí)8小時(shí)； 三、解吸干燥階段: 所述瓶裝料仍然留在真空冷凍干燥機(jī)中， 冷阱溫度< _80°C，真空度< 5Pa，進(jìn)行解吸干燥； 瓶裝料溫度為15?20°C，用時(shí)10小時(shí)； 取出，封蓋，獲得無(wú)佐劑b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗凍干劑制品。
【文檔編號(hào)】F26B5/06GK104491854SQ201410817576
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年12月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月17日
【發(fā)明者】朱康華, 王磊, 劉海昌, 焦?jié)晌? 楊乾敏, 王德學(xué), 楊廷潺, 朱夢(mèng)丹 申請(qǐng)人:浙江衛(wèi)信生物藥業(yè)有限公司