專利名稱：一種石灰?guī)r高效侵蝕放線菌嗜熱一氧化碳鏈霉菌nl-1及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng) 域，具體涉及一種石灰?guī)r高效侵蝕放線菌嗜熱一氧化碳鏈霉菌(Streptomyces thermocarboxydus') NL-1 及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
客土噴播技術(shù)是將植物種子和生長(zhǎng)基質(zhì)材料的混合物均勻、高壓噴播在巖土坡面上的綠化技術(shù)。該技術(shù)主要是針對(duì)巖石等硬質(zhì)邊坡研發(fā)的一種綠化技術(shù)。目前已廣泛應(yīng)用于水利、公路、鐵路等工程的坡面綠化中。但是，該技術(shù)針對(duì)于巖坡實(shí)現(xiàn)綠化必須具備兩個(gè)條件:一是巖面上有植物賴以持續(xù)生長(zhǎng)的種植基質(zhì)；二是種植基質(zhì)能長(zhǎng)久固定在巖面上，抗風(fēng)吹、暴雨和流水的沖蝕。然而在實(shí)際工程中，目前的客土噴播技術(shù)，難以解決上述兩個(gè)技術(shù)難題，噴播基質(zhì)難以長(zhǎng)久的維持在巖石坡面上，使得這一技術(shù)的利用受到很多的限制。顯然噴播基質(zhì)已經(jīng)成為巖石邊坡客土噴播技術(shù)的核心內(nèi)容，這種基質(zhì)不僅要求提供適宜護(hù)坡植被生長(zhǎng)的土壤性質(zhì)，還要求具有粘著在巖石坡面上的粘結(jié)功能，與坡面實(shí)現(xiàn)完全長(zhǎng)久的融合。巖石侵蝕微生物菌群能加速巖石的土壤化進(jìn)程，快速形成適應(yīng)植物生存所需的土壤，模擬自然生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)巖石侵蝕成土的演替，為植物生長(zhǎng)源源不斷地提供營(yíng)養(yǎng)成分。在巖石侵蝕微生物菌群的作用下，在巖體和噴播基質(zhì)間形成了一個(gè)界面一生育基盤。這種生育基盤，既解決了巖面上植物賴以持續(xù)生長(zhǎng)的種植基質(zhì)問題(包括提供營(yíng)養(yǎng)元素)，也解決了種植基質(zhì)能永久固定在巖面，實(shí)現(xiàn)巖面和種植基質(zhì)的融合，促進(jìn)了種植基質(zhì)和巖石的物質(zhì)循環(huán)。顯然，篩選高效巖石侵蝕微生物菌株是客土噴播覆綠技術(shù)長(zhǎng)期維持和廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵。目前，國(guó)內(nèi)針對(duì)不同巖石，篩選適宜的高效巖石侵蝕微生物菌株還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的:針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種石灰?guī)r高效侵蝕放線菌嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1，為巖石高效侵蝕微生物菌庫的建立提供菌種支持。本發(fā)明的另一目的是提供上述石灰?guī)r高效侵蝕放線菌嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1的應(yīng)用。技術(shù)方案:為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種石灰?guī)r高效侵蝕放線菌，其分類命名為嗜熱一氧化碳鏈霉菌(51 trep tomycesthermocarboxydus ) NL-1，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)CCTCC NO:M2012460，保藏日期:2012年11月19日；保藏單位地址:中國(guó)武漢武漢大學(xué)。所述的石灰?guī)r高效侵蝕放線菌在侵蝕巖石中的應(yīng)用。所述的巖石為石灰?guī)r石。嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1,是從南京市幕府山裸露巖壁(其為石灰?guī)r，主要由CaCO3組成，富含Ca)表面篩選獲得的，能加速石灰?guī)r石中Ca、Mg等元素釋放。
嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1菌株主要生物學(xué)特征:在改良的高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基28°C條件下培養(yǎng)，菌絲體深入培養(yǎng)基內(nèi)，孢子絲成鏈狀，孢子直行，中長(zhǎng)，成橢圓形，表面凹凸不平。嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1菌株16S rDNA基因序列，見SEQ ID N0.1所示。將所測(cè)16S rDNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進(jìn)行BLAST比對(duì)。結(jié)果表明，嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1菌株與Stre/ (OffiiFce1S thermocarboxydus的相似度為99%。結(jié)合形態(tài)特征及16SrDNA序列分析，鑒定為嗜熱一氧化碳鏈霉菌iStreptomyces thermocarboxydus) NL-1。有益效果:與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明篩選出的高效侵蝕巖石放線菌嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1，對(duì)石灰?guī)r均有很強(qiáng)的侵蝕能力，能促進(jìn)巖石中Ca等主要離子的釋放，加速石灰?guī)r侵蝕成土 ；能降低噴播基質(zhì)容重，增強(qiáng)噴播基質(zhì)的抗沖性和抗剪性，具有很好的應(yīng)用開發(fā)前景。


圖1是幕府山裸露巖壁上的米樣菌落 圖2是改良的高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基上的嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1菌落 圖3是嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1發(fā)酵培養(yǎng)15d，加菌發(fā)酵液與不加菌對(duì)照的可溶性Ca、Mg的比較結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。實(shí)施例1囷株的犾得和鑒定:
采集石灰?guī)r(江蘇省南京市幕府山)裸巖表面的菌落(見圖1)，采用稀釋平板法，在28°C培養(yǎng)箱中，以改良的高氏一號(hào)培養(yǎng)基(lg KNO3, 20g可溶性淀粉，0.5g K2HPO4,0.5gMgSO4 *7H20,0.5g NaCl,0.0lg FeSO4,18g 瓊脂粉，IOOOmL 蒸餾水，每 300mL 培養(yǎng)基中加入3%重鉻酸鉀ImL)培養(yǎng)4 7(1，挑取單菌落，反復(fù)劃線純化，并將所得菌株分別接種于改良的高氏一號(hào)培養(yǎng)基斜面上，4°C冰箱保存，獲得純菌株。該菌株主要生物學(xué)特征:在改良的高氏一號(hào)培養(yǎng)基28°C條件下培養(yǎng)(見圖2)，菌絲體深入培養(yǎng)基內(nèi)，孢子絲成鏈狀，孢子直行，中長(zhǎng)，成橢圓形，表面凹凸不平。取少量純菌株接種于裝有50mL改良的高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，28°C,180r/min震蕩培養(yǎng)72h。按照常規(guī)方法，提取菌株DNA測(cè)序。得16S rDNA基因序列，見SEQ ID N0.1所示。將所測(cè)16S rDNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進(jìn)行BLAST比對(duì)。結(jié)果表明，該菌株與Streptomyces 的相似度為99%。結(jié)合形態(tài)特征及16S rDNA序列分析,鑒定為嗜熱一氧化碳鏈霉菌iStreptomyces thermocarboxydus.m實(shí)施例2菌株的石灰?guī)r侵蝕能力:
用接種針取少量純菌株接種于裝有50mL改良的高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，28°C，180r/min震蕩培養(yǎng)72h，得到活化菌種。取上述菌液2mL，接種于裝有50mL發(fā)酵培養(yǎng)基(lg KNO3, 20g可溶性淀粉，0.5gK2HPO4,0.5g MgSO4 *7H20,0.5g NaCl,0.0lg FeSO4, IOg 石灰?guī)r石粉(清洗過的幕府山巖石，過200目篩，主要相關(guān)化學(xué)成分見表I )，蒸餾水lOOOmL，pH 7.0 7.5)的250mL三角瓶中，25°C，180r/min 震蕩培養(yǎng)。表I幕府山石灰?guī)r的主要相關(guān)化學(xué)成分
權(quán)利要求
1.一種石灰?guī)r高效侵蝕放線菌,其分類命名為嗜熱一氧化碳鏈霉菌(Streptomycesthermocarboxydus ) NL-1，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)CCTCC NO:M2012460，保藏日期:2012年11月19日；保藏地址:中國(guó)武漢武漢大學(xué)。
2.權(quán)利要求1所述的石灰?guī)r高效侵蝕放線菌在侵蝕巖石中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用， 其特征在于:所述的巖石為石灰?guī)r石。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種石灰?guī)r高效侵蝕放線菌嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1及其應(yīng)用，石灰?guī)r高效侵蝕放線菌的分類命名為嗜熱一氧化碳鏈霉菌(Streptomycesthermocarboxydus)NL-1，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)CCTCCNOM2012460，保藏日期2012年11月19日；保藏單位地址中國(guó)武漢武漢大學(xué)。本發(fā)明的高效侵蝕巖石放線菌菌株嗜熱一氧化碳鏈霉菌NL-1，對(duì)石灰?guī)r有很強(qiáng)的侵蝕能力，能促進(jìn)巖石中Ca、Mg等主要離子的釋放，加速石灰?guī)r侵蝕成土；能降低噴播基質(zhì)容重，增強(qiáng)噴播基質(zhì)的抗沖性和抗剪性，具有很好的應(yīng)用開發(fā)前景。
文檔編號(hào)C09K17/14GK103103151SQ20131001861
公開日2013年5月15日 申請(qǐng)日期2013年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月18日
發(fā)明者張金池, 王廣林, 王麗, 張波 申請(qǐng)人:南京林業(yè)大學(xué)