專利名稱：一種石灰?guī)r高效侵蝕真菌卵形孢球托霉nl-15及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種石灰?guī)r高效侵蝕真菌卵形孢球托霉NL-15及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
客土噴播技術(shù)是將植物種子和生長基質(zhì)材料的混合物均勻、高壓噴播在巖土坡面上的綠化技術(shù)。該技術(shù)主要是針對巖石等硬質(zhì)邊坡研發(fā)的一種綠化技術(shù)。目前已廣泛應(yīng)用于水利、公路、鐵路等工程的坡面綠化中。但是，該技術(shù)針對于巖坡實(shí)現(xiàn)綠化必須具備兩個條件:一是巖面上有植物賴以持續(xù)生長的種植基質(zhì)；二是種植基質(zhì)能長久固定在巖面上，抗風(fēng)吹、暴雨和流水的沖蝕。然而在實(shí)際工程中，目前的客土噴播技術(shù)，難以解決上述兩個技術(shù)難題，噴播基質(zhì)難以長久的維持在巖石坡面上，使得這一技術(shù)的利用受到很多的限制。顯然噴播基質(zhì)已經(jīng)成為巖石邊坡客土噴播技術(shù)的核心內(nèi)容，這種基質(zhì)不僅要求提供適宜護(hù)坡植被生長的土壤性質(zhì)，還要求具有粘著在巖石坡面上的粘結(jié)功能，與坡面實(shí)現(xiàn)完全長久的融合。巖石侵蝕微生物菌群能加速巖石的土壤化進(jìn)程，快速形成適應(yīng)植物生存所需的土壤，模擬自然生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)巖石侵蝕成土的演替，為植物生長源源不斷地提供營養(yǎng)成分。在巖石侵蝕微生物菌群的作用下，在巖體和噴播基質(zhì)間形成了一個界面一生育基盤。這種生育基盤，既解決了巖面上植物賴以持續(xù)生長的種植基質(zhì)問題(包括提供營養(yǎng)元素)，也解決了種植基質(zhì)能永久固定在巖面，實(shí)現(xiàn)巖面和種植基質(zhì)的融合，促進(jìn)了種植基質(zhì)和巖石的物質(zhì)循環(huán)。顯然，篩選高效巖石侵蝕微生物菌株是客土噴播覆綠技術(shù)長期維持和廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵。目前，國內(nèi)針對不同巖石，篩選適宜的高效巖石侵蝕微生物菌株還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的:針對上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種石灰?guī)r高效侵蝕真菌卵形孢球托霉NL-15，為巖石高效侵蝕微生物菌庫的建立提供菌種支持。本發(fā)明的另一目的是提供上述石灰?guī)r高效侵蝕真菌卵形孢球托霉NL-15的應(yīng)用。技術(shù)方案:為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種石灰?guī)r高效侵蝕真菌，其分類命名為卵形孢球托霉(Xkmgronella but Ieri )NL-15,已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC NO:M2012454，保藏日期:2012年11月12日；保藏地址:中國武漢武漢大學(xué)。所述的石灰?guī)r高效侵蝕真菌在侵蝕巖石中的應(yīng)用。所述的巖石為石灰?guī)r石。

卵形孢球托霉NL-15,是從南京市幕府山裸露巖壁(其為石灰?guī)r,主要由CaCOdl成，富含Ca)表面篩選獲得的，能加速石灰?guī)r石中Ca、Mg等元素釋放。卵形孢球托霉NL-15菌株主要生物學(xué)特征:在孟加拉紅培養(yǎng)基28°C條件下培養(yǎng)，棉絨狀質(zhì)地，白色，菌絲很少分隔，厚壁，光滑；孢囊梗從基質(zhì)伸出，直立，作2 4次合軸式分枝；孢囊球形，壁易消融或破裂。卵形孢球托霉NL-15菌株28S rDNA基因序列，見SEQ ID No I所示。將所測28SrDNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進(jìn)行BLAST比對。結(jié)果表明，卵形孢球托霉NL-15菌取與Gongronella butIeri的相似度為98%。結(jié)合形態(tài)及28S rDNA序列分析,鑒定為卵形抱球托霉 iGongronella butIeri ) NL-15 有益效果:與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明篩選出的高效侵蝕巖石真菌卵形孢球托霉NL-15，對石灰?guī)r均有很強(qiáng)的侵蝕能力，能促進(jìn)巖石中Ca、Mg等主要離子的釋放，加速石灰?guī)r侵蝕成土 ；能降低噴播基質(zhì)容重，增強(qiáng)噴播基質(zhì)的抗沖性和抗剪性，具有很好的應(yīng)用開發(fā)前景。


圖1是幕府山裸露巖壁上的米樣菌落 圖2是孟加拉紅固體培養(yǎng)基上的卵形孢球托霉NL-15菌落 圖3是卵形孢球托霉NL-15發(fā)酵培養(yǎng)15d，加菌發(fā)酵液與不加菌對照的可溶性Ca、Mg的比較結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。實(shí)施例1囷株的犾得和鑒定:
采集石灰?guī)r(江蘇省南京市幕府山)裸巖表面的菌落(如圖1)，采用稀釋平板法，在28°c培養(yǎng)箱中，以孟加拉紅培養(yǎng)基(5g蛋白胨,IOg葡萄糖，Ig磷酸二氫鉀,0.5g硫酸鎂,0.1g氯霉素，0.033g孟加拉紅，18g瓊脂粉，IOOOmL蒸餾水)培養(yǎng)2 5d左右，挑取單菌落，反復(fù)劃線純化，并將所得菌株分別接種于孟加拉紅培養(yǎng)基斜面上，4°C冰箱保存，獲得純菌株。該菌株主要生物學(xué)特征:在孟加拉紅培養(yǎng)基上28°C條件下培養(yǎng)(見圖2)，棉絨狀質(zhì)地，白色，菌絲很少分隔，厚壁，光滑；孢囊梗從基質(zhì)伸出，直立，作2 4次合軸式分枝；孢囊球形，壁易消融或破裂。取少量純菌株接種于裝有50mL PDA液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，28°C，180r/min震蕩培養(yǎng)72h。按照常規(guī)方法，提取菌株DNA測序。得28S rDNA基因序列，見SEQ IDN0.1所示。將所測28S rDNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進(jìn)行BLAST比對。結(jié)果表明，該菌株與的相似度為98%。結(jié)合形態(tài)特征及28S rDNA序列分析,鑒定為卵形抱球托霉(Gongronella butleri ) NL-15。實(shí)施例2菌株的石灰?guī)r侵蝕能力:
用接種針取少量純菌株接種于裝有50mL PDA液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，28°C，180r/min震蕩培養(yǎng)72h，得到活化菌種。取上述菌液2mL，接種于裝有50mL發(fā)酵培養(yǎng)基(加入IOg石灰?guī)r石粉(清洗過的幕府山巖石，過200目篩，主要相關(guān)化學(xué)成分見表I)的IOOOmL PDA液體培養(yǎng)基)的250mL三角瓶中，250C，180r/min震蕩培養(yǎng)。表I幕府山石灰?guī)r的主要相關(guān)化學(xué)成分
權(quán)利要求
1.種石灰?guī)r高效侵蝕真菌,其分類命名為卵形孢球托霉butIeri)NL-15，已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC NO:M 2012454，保藏日期:2012年11月12日；保藏地址:中國武漢武漢大學(xué)。
2.利要求1所述的石灰?guī)r高效侵蝕真菌在侵蝕巖石中的應(yīng)用。
3.據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用， 其特征在于:所述的巖石為石灰?guī)r石。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種石灰?guī)r高效侵蝕真菌卵形孢球托霉NL-15及其應(yīng)用，該石灰?guī)r高效侵蝕真菌的分類命名為卵形孢球托霉(Gongronellabutleri)NL-15，已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCCNOM2012454，保藏日期2012年11月12日。保藏地址中國武漢武漢大學(xué)。本發(fā)明的高效侵蝕巖石真菌卵形孢球托霉NL-15，對石灰?guī)r均有很強(qiáng)的侵蝕能力，能促進(jìn)巖石中Ca、Mg等主要離子的釋放，加速石灰?guī)r侵蝕成土；能降低噴播基質(zhì)容重，增強(qiáng)噴播基質(zhì)的抗沖性和抗剪性，具有很好的應(yīng)用開發(fā)前景。
文檔編號C09K17/14GK103087926SQ20131001856
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月18日
發(fā)明者王廣林, 張金池, 林杰, 曹容 申請人:南京林業(yè)大學(xué)