從發(fā)酵液中沉淀分離提取洛伐他汀的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及提取洛伐他汀的新方法，具體涉及一種從發(fā)酵液中沉淀分離提取洛伐他汀的方法。本發(fā)明利用不同條件下洛伐他汀在水相中的溶解性差異，創(chuàng)新了一種沉淀分離洛伐他汀的方法。先利用堿性條件下將洛伐他汀溶解于濾液中，去除菌渣等固體雜質(zhì)，再通過酸性條件下將洛伐他汀從濾液中沉淀出來，去除洛伐他汀水溶性雜質(zhì)，得到洛伐他汀粗提取物；粗提取物再用有機(jī)溶劑去除不溶雜質(zhì)，最后進(jìn)行提取結(jié)晶，去除脂溶性雜質(zhì)，得到洛伐他汀。與現(xiàn)有直接對濾液或菌體進(jìn)行提取的生產(chǎn)工藝相比，本發(fā)明操作簡單，有機(jī)溶劑使用量、消耗量小，產(chǎn)品收率高質(zhì)量好，產(chǎn)品含量達(dá)99.32％以上，避免了現(xiàn)有生產(chǎn)工藝存在的不足之處。
【專利說明】
從發(fā)酵液中沉淀分離提取洛伐他汀的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及提取洛伐他汀的新方法，具體設(shè)及一種從發(fā)酵液中沉淀分離提取洛伐 他汀的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 洛伐他汀化ovastatin)屬徑甲基戊二酷輔酶A還原酶抑制劑化MG-CoA-RI)，通過 競爭性抑制HMG-CoA還原酶活性，阻斷內(nèi)源膽固醇合成，從而起到調(diào)脂降脂作用。洛伐他汀 由日本遠(yuǎn)藤及AAod等人于1979年及1980年首次從±曲霉的發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)，由美國默克公 司(Merck Co)開發(fā)，并于1987年通過FDA批準(zhǔn)上市，是推向市場的第一個(gè)HMG-CoA-RI。從上 市W來，洛伐他汀便成為臨床治療和預(yù)防高血脂癥的首選藥物，而且近年又發(fā)現(xiàn)了它的很 多新藥理活性，如抗癌、抗氧化、改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能等，其臨床應(yīng)用還可能擴(kuò)大。另外， 洛伐他汀還是生產(chǎn)降血脂藥物辛伐他汀的主要原料。洛伐他汀分子式、化學(xué)名稱及結(jié)構(gòu)式 如下：
[0003] 分子式：〔24也6〇5
[0004] 化學(xué)名稱：（5)-2-甲基下酸-(15,35,75,85,8曰1〇-1，2,3,7,8,8曰-六氨-3,7-二甲 基-8-[2-[(2R，4R)-4-^基-6氧代-2-四氨化喃基]-乙基]-1-糞醋
[0005] 結(jié)構(gòu)式：
[0006]
[0007]中國專利CN1583736A公開一種洛伐他汀的提取精制方法，將發(fā)酵液堿化固液分 離，用樹脂吸附濾液，用乙醇洗脫后加入下醋萃取，經(jīng)濃縮環(huán)化結(jié)晶后得到產(chǎn)品。該工藝有 機(jī)溶劑使用及消耗量較大、產(chǎn)品收率偏低，生產(chǎn)成本較高。
[000引中國專利CN102344426A公開一種提取并純化洛伐他汀的方法，首先將生產(chǎn)洛伐他 汀的發(fā)酵液酸化至pH值為1~3，然后過濾或離屯、分離，收集菌渣，用有機(jī)溶劑萃取菌渣，對 萃取液依次用堿性水溶液、酸性水溶液和去離子水洗涂，洗涂后的萃取液濃縮、結(jié)晶，分離 并干燥晶體得到粗品，對粗品重結(jié)晶，獲得純化的洛伐他汀。該方法解決了洛伐他汀萃取中 的乳化難題，提高了洛伐他汀產(chǎn)品在丙酬、氯仿、甲醇中的溶解性。中國專利CN102993145A 公開一種提取純化洛伐他汀的方法，將生產(chǎn)洛伐他汀的發(fā)酵液用酸調(diào)至pH值為1~6,過濾， 濾渣用有機(jī)溶劑萃取，有機(jī)相濃縮，冷卻結(jié)晶，離屯、，干燥得粗品，然后對粗品進(jìn)行微波處 理，再溶解在有機(jī)溶劑中利用活性炭脫色，重結(jié)晶，離屯、，洗涂，干燥，得到洛伐他汀產(chǎn)品。微 波處理使粗品中的雜質(zhì)變性、固化，達(dá)到易于分離的目的，從而提高了產(chǎn)品純度和質(zhì)量。上 述兩個(gè)專利均是將發(fā)酵液酸化，固液分離后收集菌渣，用有機(jī)溶劑萃取菌渣，萃取液經(jīng)濃 縮、結(jié)晶分離后得到洛伐他汀粗品。由于菌渣量比較大，直接提取需要使用大量的有機(jī)溶 劑，并且同時(shí)從菌渣中萃取出的脂溶性雜質(zhì)也比較多，對后期處理造成不利影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的是提供一種利用不同條件下洛伐他汀在水相中的溶解性差異，從發(fā) 酵液中沉淀分離提取洛伐他汀的方法，具有有機(jī)溶劑使用量、消耗量小，產(chǎn)品收率高、質(zhì)量 好的特點(diǎn)。
[0010] 本發(fā)明所述的從發(fā)酵液中沉淀分離提取洛伐他汀的方法，包括W下步驟：
[0011] (1)用堿性物質(zhì)將洛伐他汀發(fā)酵液堿化至pH值10~12,固液分離，棄菌渣收集濾 液；
[0012] (2)用酸性物質(zhì)將濾液調(diào)節(jié)至抑值2~4,靜置分層或固液分離后，收集沉淀，沉淀 為洛伐他汀沉淀物和不溶雜質(zhì)；
[0013] (3)用有機(jī)溶劑對沉淀進(jìn)行溶解，過濾去除不溶雜質(zhì)得到提取液；
[0014] (4)提取液環(huán)化、濃縮、結(jié)晶、分離、干燥得到洛伐他汀粗品。
[0015] 其中；
[0016] 步驟（1)中的堿性物質(zhì)為氨氧化鋼、氨氧化鐘或氨水。優(yōu)先選擇lOwt. %的氨氧化 鋼，將發(fā)酵液調(diào)節(jié)pH值至10~12,攬拌比，攬拌的過程中每lOmin檢測，并補(bǔ)加堿性物質(zhì)調(diào)節(jié) pH值;采用板框壓濾機(jī)進(jìn)行固液分離，收集濾液。
[0017] 步驟(2)中的酸性物質(zhì)為鹽酸、硫酸或草酸。優(yōu)先選擇lOwt. %的鹽酸，將濾液調(diào)節(jié) pH值至2~4,靜置分層或固液分離后收集沉淀。
[0018] 步驟(3)中的有機(jī)溶劑為乙酸乙醋、乙酸下醋、乙酸丙醋、甲苯或正下醇，優(yōu)選乙酸 下醋。
[0019] 步驟(3)中的有機(jī)溶劑體積是發(fā)酵液體積的5~10%。
[0020] 步驟(3)中對沉淀的溶解是在溫度40~50°C下，攬拌1~化。
[0021] 步驟(4)中的提取液在常壓110~130°C條件下進(jìn)行環(huán)化2~化，同時(shí)分流收集冷凝 的有機(jī)溶劑。
[0022] 步驟(4)中的提取液先環(huán)化后再濃縮至有晶體析出時(shí)，后降溫至5~15°C進(jìn)行結(jié) 晶。
[0023] 根據(jù)不同的質(zhì)量要求，對步驟(4)得到的洛伐他汀粗品進(jìn)行精制純化得到高純度 洛伐他汀。
[0024] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0025] 本發(fā)明利用不同條件下洛伐他汀在水相中的溶解性差異，創(chuàng)新了一種沉淀分離洛 伐他汀的方法。先利用堿性條件下將洛伐他汀溶解于濾液中，去除菌渣等固體雜質(zhì)，再通過 酸性條件下將洛伐他汀從濾液中沉淀出來，去除洛伐他汀水溶性雜質(zhì)，得到洛伐他汀粗提 取物;粗提取物再用有機(jī)溶劑去除不溶雜質(zhì)，最后進(jìn)行提取結(jié)晶，去除脂溶性雜質(zhì)，得到洛 伐他汀。與現(xiàn)有直接對濾液或菌體進(jìn)行提取的生產(chǎn)工藝相比，本發(fā)明操作簡單，有機(jī)溶劑使 用量、消耗量小，產(chǎn)品收率高質(zhì)量好，產(chǎn)品含量達(dá)99.32% W上，避免了現(xiàn)有生產(chǎn)工藝存在的 不足之處。
【具體實(shí)施方式】
[0026] W下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步描述。
[0027] 實(shí)施例1
[0028] 取洛伐他汀發(fā)酵液化，單位8018u/ml，用10%氨氧化鐘調(diào)節(jié)抑值至10.5，攬拌化， 攬拌過程中每間隔lOmin檢測，并補(bǔ)加氨氧化鐘保持pH值10.5,板框壓濾機(jī)進(jìn)行固液分離， 棄菌渣收集濾液;濾液用10%硫酸調(diào)節(jié)抑值至3.2,靜置6小時(shí)，分離收集固相沉淀；向沉淀 中加入280ml甲苯，50°C攬拌溶解化，過濾后得提取液;提取液常壓115°C進(jìn)行環(huán)化3小時(shí)，并 濃縮至有晶體析出時(shí)，緩慢降溫至15°C結(jié)晶，分離后得洛伐他汀30.2g，精制后得產(chǎn)品 26.7g，產(chǎn)品含量99.32%。
[0029] 實(shí)施例2
[0030] 取洛伐他汀發(fā)酵液化，單位7963u/ml，用10 %氨水調(diào)節(jié)抑值至11.0，攬拌化，攬拌 過程中每間隔lOmin檢測，并補(bǔ)加氨水保持抑值11.0,板框壓濾機(jī)進(jìn)行固液分離，棄菌渣收 集濾液;濾液用10%草酸調(diào)節(jié)pH值至3.5,靜置6小時(shí)，分離收集固相沉淀；向沉淀中加入 260ml正下醇，50°C攬拌溶解比，過濾后得提取液;提取液常壓120°C進(jìn)行環(huán)化3小時(shí)，并濃縮 至有晶體析出時(shí)，緩慢降溫至l〇°C結(jié)晶，分離后得洛伐他汀33.2g，精制后得產(chǎn)品27.8g，產(chǎn) 品含量99.45 %。
[0031] 實(shí)施例3
[0032] 取洛伐他汀發(fā)酵液化，單位8106u/ml，用10%氨氧化鋼調(diào)節(jié)抑值至11.5，攬拌化， 攬拌過程中每間隔lOmin檢測，并補(bǔ)加氨氧化鋼保持pH值11.5,板框壓濾機(jī)進(jìn)行固液分離， 棄菌渣收集濾液;濾液用10%鹽酸調(diào)節(jié)抑值至2.8,靜置6小時(shí)，分離收集固相沉淀；向沉淀 中加入250ml乙酸下醋，50°C攬拌溶解化，過濾后得提取液;提取液常壓125°C進(jìn)行環(huán)化3小 時(shí)，并濃縮至有晶體析出時(shí)，緩慢降溫至fTC結(jié)晶，分離后得洛伐他汀34.2g，精制后得產(chǎn)品 28.7g，產(chǎn)品含量99.50%。
[0033] 實(shí)施例4
[0034] 取洛伐他汀發(fā)酵液50化，單位8359u/ml，用10%氨氧化鋼調(diào)節(jié)pH值至11.5,攬拌 化，攬拌過程中每間隔lOmin檢測，并補(bǔ)加氨氧化鋼保持pH值11.5,板框壓濾機(jī)進(jìn)行固液分 離，棄菌渣收集濾液;濾液用10%鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2.7,靜置6小時(shí)，分離收集固相沉淀；向沉 淀中加入2化乙酸下醋，50°C攬拌溶解化，過濾后得提取液;提取液常壓120°C進(jìn)行環(huán)化3小 時(shí)，并濃縮至有晶體析出時(shí)，緩慢降溫至l〇°C結(jié)晶，分離后得洛伐他汀3.62kg，精制后得產(chǎn) 品2.93kg，產(chǎn)品含量99.58 %。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從發(fā)酵液中沉淀分離提取洛伐他汀的方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 用堿性物質(zhì)將洛伐他汀發(fā)酵液堿化至pH值10~12，固液分離，棄菌渣收集濾液； (2) 用酸性物質(zhì)將濾液調(diào)節(jié)至pH值2~4,靜置分層或固液分離后，收集沉淀，沉淀為洛 伐他汀沉淀物和不溶雜質(zhì)； (3) 用有機(jī)溶劑對沉淀進(jìn)行溶解，過濾去除不溶雜質(zhì)得到提取液； (4) 提取液環(huán)化、濃縮、結(jié)晶、分離、干燥得到洛伐他汀粗品。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟（1)中的堿性物質(zhì)為氫氧化鈉、氫氧化 鉀或氨水。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（1)中的堿性物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 10wt. %，步驟（1)先將洛伐他汀發(fā)酵液堿化至pH值10~12,攪拌lh，攪拌過程中每間隔 lOmin檢測，并補(bǔ)加堿性物質(zhì)保持pH值10~12;采用板框壓濾機(jī)進(jìn)行固液分離，收集濾液。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2)中的酸性物質(zhì)為鹽酸、硫酸或草 酸。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：步驟（2)中的酸性物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 10wt.%〇6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(3)中的有機(jī)溶劑為乙酸乙酯、乙酸丁 酯、乙酸丙酯、甲苯或正丁醇;步驟(3)中的有機(jī)溶劑體積是發(fā)酵液體積的5~10%。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(3)中對沉淀的溶解是在溫度40~50 °(：下，攪拌1~2h。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(4)中的提取液在常壓110~130°C條 件下進(jìn)行環(huán)化2~3h，同時(shí)分流收集冷凝的有機(jī)溶劑。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(4)中的提取液先環(huán)化后再濃縮至有 晶體析出時(shí)，后降溫至5~15 °C進(jìn)行結(jié)晶。10. 根據(jù)權(quán)利要求1~9任一所述的方法，其特征在于:對步驟(4)得到的洛伐他汀粗品 進(jìn)行精制純化得到高純度洛伐他汀。
【文檔編號】C07D309/30GK106083789SQ201610407674
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月7日
【發(fā)明人】朱維忠, 王宏, 張興燦, 白芳靜
【申請人】山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司