一種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，其包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加組分，其中，基礎(chǔ)培養(yǎng)基為F12培養(yǎng)基，添加組分及其濃度如下：胎牛血清，80?120ml/L；人重組胰島素，24?30mg/L；人重組表皮細(xì)胞生長因子，20?25μg/L；人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子，35?45μg/L；人白蛋白，10?15g/L；轉(zhuǎn)鐵蛋白，4?16mg/L；氫化可的松，0.2?1mg/L；睪丸素，0.2?1mg/L；黃體酮，0.2?1mg/L；維生素E，1?5mg/L；L?谷氨酰胺，12?20g/L；HEPES，5?10g/L；嵌段式聚醚F?68，0.5?2g/L；各添加組分的濃度以所述羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基能夠使得羊水細(xì)胞快速、大量的增殖，增殖效果好，培養(yǎng)時間短，特別適合羊水細(xì)胞的高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系。
【專利說明】
-種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，屬于細(xì)胞培養(yǎng)技 術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 產(chǎn)前診斷是優(yōu)生學(xué)的重要組成部分，它是建立在遺傳咨詢基礎(chǔ)上通過在出生前對 胚胎或胎兒的發(fā)育狀態(tài)、是否患有疾病等方面進(jìn)行檢測診斷。產(chǎn)前診斷目前主要有早期絨 毛組織取出、孕中期羊水和廝帶血、孕婦外周血分離胎兒細(xì)胞等診斷方法。其中孕中期羊水 細(xì)胞檢測仍然是最主要的診斷方法。
[0003] 關(guān)于孕中期羊水細(xì)胞檢測，是通過羊水穿刺抽取孕婦的羊水標(biāo)本，對羊水細(xì)胞進(jìn) 行培養(yǎng)，或提取羊水細(xì)胞DNA，再進(jìn)行遺傳學(xué)診斷(例如，診斷胎兒染色體病、單基因病等）。
[0004] 關(guān)于羊水細(xì)胞的體外培養(yǎng)是羊水細(xì)胞檢測最為關(guān)鍵的一個環(huán)節(jié)。
[0005] 關(guān)于體外細(xì)胞培養(yǎng)體系，現(xiàn)有技術(shù)中除了常規(guī)的培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等二維的 細(xì)胞培養(yǎng)體系，現(xiàn)在已研發(fā)出=維培養(yǎng)體系，例如目前市售的高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶，是一種既 可W適用于貼壁細(xì)胞，又可W適用于懸浮細(xì)胞的=維培養(yǎng)體系，可W快速地培養(yǎng)大量細(xì)胞， 且可W進(jìn)行為期半年W上的長期細(xì)胞培養(yǎng)，不需要經(jīng)常更換耗材，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿 和培養(yǎng)瓶相比，更方便、成本更低，因此受到本領(lǐng)域研發(fā)人員的廣泛關(guān)注。
[0006] 然而，現(xiàn)有技術(shù)中的傳統(tǒng)的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基大多適用于中等規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)體 系，一般來說無法適用于大規(guī)模的、高密度的細(xì)胞培養(yǎng);另一方面，現(xiàn)有的無血清培養(yǎng)基僅 適用于培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等二維的細(xì)胞培養(yǎng)體系，無法適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶運(yùn)樣 的=維培養(yǎng)體系。
[0007] 現(xiàn)在亟待開發(fā)專用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引鑒于相關(guān)技術(shù)的上述問題和/或其他問題，本發(fā)明一方面提供了一種適用于高密 度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，其包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加組分，其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基 為F12培養(yǎng)基；所述添加組分及其濃度如下：胎牛血清，80-1201111幾；人重組膜島素，24- 30mg/l;人重組表皮細(xì)胞生長因子，20-25蛇/1;人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子，35-45^/ L人白蛋白，10-15g/l;轉(zhuǎn)鐵蛋白，4-16mg/l;氨化可的松，0.2-lmg/l;睪丸素，0.2-lmg/l; 黃體酬，0.2-lmg/l;維生素 E，l-5mg/l;k谷氨酷胺，12-20g/l;肥陽S，5-lOg/l;嵌段式聚酸 F-68，0.5-2g/l;各添加組分的濃度W所述羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)。
[0009] 優(yōu)選的，W所述羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)，所述F12培養(yǎng)基的干粉量為15- 18g/L〇
[0010] 優(yōu)選的，所述人重組膜島素的濃度為28mg/L，人重組表皮細(xì)胞生長因子的濃度為 2化g/L，人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子的濃度為40yg/L，且人白蛋白的濃度為12g/L。
[0011] 優(yōu)選的，所述k谷氨酷胺的濃度為12-20g/L。
[0012]優(yōu)選的，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度化2mg/L。
[0013] 優(yōu)選的，所述嵌段式聚酸F-68的濃度為Ig/L。
[0014] 優(yōu)選的，所述氨化可的松的濃度為0.7mg/L，所述睪丸素的濃度為0.6mg/L，所述黃 體酬的濃度為〇.6mg/L，且所述維生素 E的濃度為2mg/L。
[0015] 優(yōu)選的，所述添加組分還包括青霉素和鏈霉素;所述青霉素的濃度100-400IU/mL， 所述的鏈霉素濃度為100-400IU/mL。
[0016] 本發(fā)明另一方面提供了上述的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基在高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系中的應(yīng)用。
[0017] 優(yōu)選的，所述高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系為高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶。
[0018] 本發(fā)明的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，采用F12培養(yǎng)基作為基 礎(chǔ)培養(yǎng)基W及特定的添加組分的組合，尤其是人重組膜島素、人重組表皮細(xì)胞生長因子、人 重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子和人白蛋白，四者同時滿足特定的濃度范圍時，能夠使得羊 水細(xì)胞快速、大量的增殖，增殖效果好，培養(yǎng)時間短，特別適合羊水細(xì)胞的高密度細(xì)胞培養(yǎng) 體系。
【具體實(shí)施方式】
[0019] W下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明并不限于運(yùn)些具體實(shí)施方 式。
[0020] 在本發(fā)明的一個具體實(shí)施方案中，一種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培 養(yǎng)基，其包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加組分，其中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為F12培養(yǎng)基;所述添加組分及 其濃度如下:胎牛血清，80-120ml/l;人重組膜島素，24-30mg/l;人重組表皮細(xì)胞生長因子， 20-2扣g/l;人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子，35-45iig/M人白蛋白，10-15g/l;轉(zhuǎn)鐵蛋白， 4-16mg/X;氨化可的松，0.2-lmg/L;睪丸素，0.2-lmg/L;黃體酬，0.2-lmg/X;維生素 E，1- 5mg/l; k谷氨酷胺，12-20g/l;皿陽S，5-10g/l;嵌段式聚酸F-68，0.5-2g/l;各添加組分的 濃度W所述羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)。
[0021] 本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過大量的研究試驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)羊水細(xì)胞培養(yǎng)基采用F12培養(yǎng)基作 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基W及上述特定的添加組分的組合，尤其是人重組膜島素、人重組表皮細(xì)胞生 長因子、人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子和人白蛋白，四者同時滿足上述的濃度范圍時，能 夠使得羊水細(xì)胞快速、大量的增殖，且細(xì)胞存活率更高，特別適合羊水細(xì)胞的高密度細(xì)胞培 養(yǎng)體系。
[0022] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，W所述羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)，所述 F12培養(yǎng)基的干粉量為15-18g/L。更優(yōu)選的，人重組膜島素的濃度為28mg/L，人重組表皮細(xì) 胞生長因子的濃度為24yg/L，人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子的濃度為40yg/L，且人白蛋 白的濃度為12g/L。當(dāng)本發(fā)明的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基中，F(xiàn)12培養(yǎng)基的濃度，W及人重組膜島素、 人重組表皮細(xì)胞生長因子、人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子和人白蛋白同時采用上述特定 的濃度時，特別適合羊水細(xì)胞的高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系，尤其是諸如高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶之類 的=維培養(yǎng)體系，具有較好的增殖效果和細(xì)胞存活率。
[0023] 在本發(fā)明的一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述k谷氨酷胺的濃度為12-20g/L。
[0024] 在本發(fā)明的另一個更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度為12mg/L。
[0025] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述嵌段式聚酸F-68的濃度為Ig/L。嵌段式聚 酸F-68,即Pluronic F-68,其為一種表面活性劑，一般常用作乳化劑和增溶劑;然而，發(fā)明 人意外的發(fā)現(xiàn)，在本發(fā)明的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基中添加特定濃度的Pluronic F-68,對于高密度 細(xì)胞體系中的羊水細(xì)胞的生長有穩(wěn)定作用，能夠提高羊水細(xì)胞的存活率。
[0026] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的激素類物質(zhì)的添加量如下： 氨化可的松的濃度為〇.7mg/L，所述睪丸素的濃度為0.6mg/L，所述黃體酬的濃度為0.6mg/ L，且所述維生素 E的濃度為2111邑/1;可^滿足高密度細(xì)胞體系中的羊水細(xì)胞的生長需求。
[0027] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述添加組分還可W抗生素，例如包括青霉素 和鏈霉素;所述青霉素的濃度為100-400IU/mL，所述的鏈霉素濃度為100-400IU/mL。更優(yōu)選 的，青霉素的濃度為200IU/mL，鏈霉素濃度為200IU/mL。運(yùn)兩種抗生素組合及其特定的濃 度，特別適合羊水細(xì)胞的高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系，抗菌效果優(yōu)異，細(xì)胞存活率高。
[00%]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述胎牛血清的濃度為lOOml/L。
[0029] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述肥PES的濃度為6.4g/L。
[0030] 在本發(fā)明的再一個優(yōu)選實(shí)施方案中，將該無血清培養(yǎng)基的pH值控制在7.3~7.5。
[0031] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基是專用于高密度細(xì)胞 培養(yǎng)桶的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基。
[00扣]實(shí)施例1
[0033] 實(shí)施例1的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的配制過程如下：
[0034] 步驟1):在無菌條件下將合成的F12干粉在電子天平上稱取168g后置于消毒容器 內(nèi)，加8.化重蒸水稀釋后攬拌均勻獲得基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[00巧]步驟2):將添加組分:280mg人重組膜島素、240yg人重組表皮細(xì)胞生長因子、400yg 人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子、120g人白蛋白、120mg轉(zhuǎn)鐵蛋白、7mg氨化可的松、6mg睪丸 素、6mg黃體酬、2mg維生素 E、1.2g青霉素(相當(dāng)于2X105IU/L)、2g鏈霉素(相當(dāng)于2X105IU/ L)、64g肥陽S、10g Pluronic F-68，W及1000ml胎牛血清依次加入步驟1)獲得的基礎(chǔ)培養(yǎng) 基中，充分混勻；
[0036] 步驟3):過濾滅菌，再調(diào)節(jié)pH值至7.4±0.1，最后加入重蒸水將體積調(diào)節(jié)至lOL
[0037] 步驟4):培養(yǎng)基配制完成后，過濾滅菌，分裝、封口，最后冷藏(-20°C環(huán)境)備用。 [00；3引 實(shí)施例2
[0039] 實(shí)施例2的適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的配制過程如下:
[0040] 步驟1):在無菌條件下將合成的F12干粉在電子天平上稱取160g后置于消毒容器 內(nèi)，加8.化重蒸水稀釋后攬拌均勻獲得基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
[0041 ] 步驟2):將添加組分:240mg人重組膜島素、220iig人重組表皮細(xì)胞生長因子、360iig 人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子、llOg人白蛋白、lOOmg轉(zhuǎn)鐵蛋白、6mg氨化可的松、5mg睪丸 素、5mg黃體酬、3mg維生素 E、lg青霉素(相當(dāng)于1.67 X 105IU/L)、Ig鏈霉素(相當(dāng)于1 X 105IU/ L)、60g肥陽S、12g Pluronic F-68，W及8000ml胎牛血清依次加入步驟1)獲得的基礎(chǔ)培養(yǎng) 基中，充分混勻；
[0042] 步驟3):過濾滅菌，再調(diào)節(jié)pH值至7.4±0.1，最后加入重蒸水將體積調(diào)節(jié)至lOL
[0043] 步驟4):培養(yǎng)基配制完成后，過濾滅菌，分裝、封口，最后冷藏(-20°C環(huán)境)備用。
[0044] 應(yīng)用例1和應(yīng)用例2
[0045] 按照常規(guī)方法獲得羊水細(xì)胞:一般來說，取羊水，在無菌條件下離屯、獲得羊水細(xì)胞 聚團(tuán)。
[0046] 應(yīng)用例1
[0047] 采用上述實(shí)施例1獲得的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基重新懸浮羊水細(xì)胞聚團(tuán)，并將羊水細(xì)胞 濃度稀釋至IX 106個/ml。
[004引采用市售的FiberCell品牌C2025型號的高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶（參見FiberCell細(xì)胞 培養(yǎng)系統(tǒng)產(chǎn)品銷售網(wǎng)頁），W及本發(fā)明實(shí)施例1獲得的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
[0049]將2ml羊水細(xì)胞濃度為1 X 106個/ml的培養(yǎng)基用注射器載入上述的高密度細(xì)胞培 養(yǎng)桶中，再將18ml實(shí)施例1的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基加入到50ml高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶儲液瓶中（羊水 細(xì)胞的接種密度為1 X 105個/ml);具體地，儲液瓶中的培養(yǎng)基通過硅膠管與細(xì)胞培養(yǎng)桶連 接，在蠕動累的作用下，持續(xù)循環(huán)流動，培養(yǎng)基通過細(xì)胞培養(yǎng)桶的中空纖維進(jìn)行交換，給細(xì) 胞培養(yǎng)桶內(nèi)的細(xì)胞不斷的提供營養(yǎng)物質(zhì)；將整個高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶放入5%C02,37°C的培 養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[00加]應(yīng)用例2
[0051] 具體過程與應(yīng)用例1相同，不同在于采用實(shí)施例2獲得的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行羊水 細(xì)胞的培養(yǎng)。
[0052] 效果數(shù)據(jù)
[0053] 對比例1:采用市售的FiberCell品牌C2025型號的高密度細(xì)胞培養(yǎng)桶（參見 門berCell細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)產(chǎn)品銷售網(wǎng)頁），W及市售的常規(guī)羊水細(xì)胞培養(yǎng)基(廣州白云山生 產(chǎn)的"一生驗"F12培養(yǎng)基），培養(yǎng)過程與應(yīng)用例1相同，具體不再寶述。
[0054] 對比例A:采用市售的Corning品牌T25型號的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，W及市售的常規(guī)羊水細(xì) 胞培養(yǎng)基(廣州白云山生產(chǎn)的"一生驗"F12培養(yǎng)基）；具體來說，將4.5ml常規(guī)羊水細(xì)胞培養(yǎng) 基用移液管轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中，加入0.5ml羊水細(xì)胞濃度為IX 106個/ml的常規(guī)培養(yǎng)基進(jìn) 行懸浮培養(yǎng)(羊水細(xì)胞的接種密度為1X105個/ml),將培養(yǎng)瓶放入5%C02,37°C的培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)72小時。
[0055] 分別檢測應(yīng)用例1、應(yīng)用例2、對比例1和對比例A的羊水細(xì)胞培養(yǎng)效果。
[0056] 應(yīng)用例1和應(yīng)用例2, W及對比例1和對比例A，均在培養(yǎng)7天后，分別取樣細(xì)胞培養(yǎng) 液，對每組細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行分裂象克隆數(shù)與總克隆數(shù)檢測。
[0化7] 檢測過程大致如下：
[0058]培養(yǎng)7天后，分別取樣5m 1;向每一個樣品中加0.1 m 1秋水仙胺溶液，3 7 °C解育 30min，W1000巧m離屯、5分鐘，棄去上清液;再向每個樣品中加入10ml 0.075M KC1溶液，37 °C解化10分鐘。WlOOOrpm離屯、5分鐘，棄去上清液;再向每個離屯、管中逐滴加入新鮮配制 的、預(yù)冷的固定液（固定液為醋酸：甲醇=1:3) 5ml，邊加邊搖晃;再次W1 OOOrpm離屯、5分鐘， 棄去上清液;加入1ml冰的固定液制成懸液。取35mm培養(yǎng)皿，滴加0.5ml細(xì)胞懸液至培養(yǎng)皿的 蓋玻片中央。放于干燥室或化學(xué)通風(fēng)楓。染色，按要求進(jìn)行染色體分析，計算分裂象的克隆 數(shù)與總克隆數(shù)(每組檢測3次，取平均值)檢測結(jié)果參見下表1。
[0化9] 表1 「noAnl

[0061] 從上述表1的結(jié)果可W看出，一方面，對比例1的有分裂象克隆數(shù)和總克隆數(shù)(羊水 細(xì)胞培養(yǎng)效果）的結(jié)果稍劣于對比例A的結(jié)果，運(yùn)說明：常規(guī)的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基更適合于諸 如細(xì)胞瓶之類的傳統(tǒng)小規(guī)模培養(yǎng)體系，不太適合高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系；另一方面，本發(fā)明應(yīng) 用例1的有分裂象克隆數(shù)和總克隆數(shù)(羊水細(xì)胞培養(yǎng)效果)遠(yuǎn)高于對比例1的，運(yùn)說明：本發(fā) 明實(shí)施例的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基相比常規(guī)的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基更適合于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系。
[0062] 應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加 W描述，但并非每個實(shí)施方式僅包含一 個獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的運(yùn)種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說 明書作為一個整體，各實(shí)施方式中的技術(shù)方案也可W經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可 W理解的其他實(shí)施方式。
[0063] 上文所列出的一系列的詳細(xì)說明僅僅是針對本發(fā)明的可行性實(shí)施方式的具體說 明，它們并非用W限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡未脫離本發(fā)明技藝精神所作的等效實(shí)施方式 或變更均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種適用于高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，其包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加組 分，其中， 所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為F12培養(yǎng)基； 所述添加組分及其濃度如下： 胎牛血清，8〇-120ml/L; 人重組膜島素，24_30mg/L; 人重組表皮細(xì)胞生長因子，20-25yg/L; 人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子，35-45yg/L; 人白蛋白，l〇-15g/L; 轉(zhuǎn)鐵蛋白，4-16mg/L; 氫化可的松，0 · 2-lmg/L; 睪丸素，0.2-lmg/L; 黃體酮，〇· 2-lmg/L; 維生素 E，l_5mg/L; L-谷氨酰胺，12_20g/L; HEPES,5-10g/L； 嵌段式聚醚F-68,0.5-2g/L; 各添加組分的濃度以所述羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)。2. 如權(quán)利要求1所述的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于： 以所述羊水細(xì)胞培養(yǎng)基的總體積為基準(zhǔn)，所述F12培養(yǎng)基的干粉量為15-18g/L。3. 如權(quán)利要求2所述的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于： 所述人重組胰島素的濃度為28mg/L，所述人重組表皮細(xì)胞生長因子的濃度為24yg/L， 所述人重組堿性成纖維細(xì)胞生長因子的濃度為40yg/L，且所述人白蛋白的濃度為12g/L。4. 如權(quán)利要求3所述的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于： 所述L-谷氨酰胺的濃度為12-20g/L。5. 如權(quán)利要求3所述的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于： 所述轉(zhuǎn)鐵蛋白的濃度為12mg/L。6. 如權(quán)利要求2所述的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于： 所述嵌段式聚醚F-68的濃度為lg/L。7. 如權(quán)利要求2所述的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于： 所述氫化可的松的濃度為〇. 7mg/L，所述睪丸素的濃度為0.6mg/L，所述黃體酮的濃度 為0.6mg/L，且所述維生素 E的濃度為2mg/L。8. 如權(quán)利要求1至7中任意一項所述的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于： 所述添加組分還包括青霉素和鏈霉素;所述青霉素的濃度為1 X 1〇5_4 X 105IU/L，所述 的鏈霉素濃度為1 X 1〇5_4 X 105IU/L。9. 如權(quán)利要求1至8中任意一項所述的羊水細(xì)胞培養(yǎng)基在高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系中的應(yīng) 用。10. 如權(quán)利要求9所述應(yīng)用，其特征在于:所述高密度細(xì)胞培養(yǎng)體系為高密度細(xì)胞培養(yǎng) 桶。
【文檔編號】C12N5/071GK106047798SQ201610696788
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年8月19日
【發(fā)明人】顏學(xué)恒, 周艷
【申請人】上海逍鵬生物科技有限公司