實(shí)施例5:使用BVT化-7處理溫室番茄
[0113] 評(píng)估用粉紅粘靑霉BVT化-7處理的溫室番茄的花和未處理的對(duì)照花上的粉紅粘 靑霉、灰葡萄抱菌和常規(guī)霉。
[0114] 使用蜜蜂媒介、通過在群體箱(大黃蜂蜂房)裝配接種物分配器W將接種物遞送至 番茄的花，從而將粉紅粘靑霉BVT &-7遞送至植物，所述番茄在位于加拿大新斯科舍的測 試位置的相對(duì)小(小于四分之一英畝）的商業(yè)溫室中。
[011引實(shí)驗(yàn)室方法：
[0116] 從測試位置、在良好的條件下獲得番茄花的樣品。每份樣品包括四朵花，放在一個(gè) 小塑料袋中。2014年6月20日，將每份樣品的四朵花放在細(xì)菌培養(yǎng)皿中的百草枯-氯霉素瓊 脂(PCA)培養(yǎng)基上，并在干凈的塑料箱中、在21-25C下、在柔和的光照條件下培養(yǎng)7天。然后 用顯微鏡評(píng)估每朵花的粉紅粘靑霉、灰葡萄抱菌和常規(guī)霉。百草枯加速了植物組織的天然 衰老，從而使得粉紅粘靑霉生產(chǎn)抱子并因此鑒定。當(dāng)運(yùn)些組織衰老并死亡時(shí)，其它真菌同樣 可W在組織上生長并形成抱子。
[0117] 結(jié)果
[0118] 如在表1中所示的，在87.5%的處理花和0%的未處理花上觀察到生物防治劑粉紅 粘靑霉BVT化-7形成抱子。粉紅粘靑霉在處理花的雄蕊加雌蕊串上的抱子形成在幾乎所有 的情況中是密集且廣泛的，使得圓錐體樣的運(yùn)些串顯示出幾乎全白色。在大部分處理花的 花瓣上的抱子形成是中度到重度。
[0119] 在12%的未處理花(在所有的情況下都是輕度)和0%的用粉紅粘靑霉處理的花上 發(fā)現(xiàn)病原體灰葡萄抱菌形成抱子。
[0120] 觀察到樣品上有不同程度的常規(guī)溫室霉。主要地，包括枝抱屬(Cladosporium)(不 是F^ilvia fulvum)、曲霉屬(AspergiIlus)和青霉屬(PeniCiIlium)的種、鏈格抱菌和類似 于支頂抱屬(Acremonium)的真菌。為提供粉紅粘靑霉對(duì)運(yùn)些霉的作用的定量信息，按表1中 的1-5的比例評(píng)估了每朵花上的"霉"（即，非粉紅粘靑霉或葡萄抱屬（Botrytis)的任何真 菌），其中，1表示零痕跡的霉，5表示非常重的霉。在粉紅粘靑霉已經(jīng)定植并形成抱子的花 中，運(yùn)些霉形成抱子的花的范圍非常?。ㄆ骄壤?.80/5.00)，而在沒有粉紅粘靑霉的花 (包括對(duì)照的所有花）中非常高(4.55/5.00)。因此觀察到，除了葡萄抱屬(Botrytis) W外， 生物防治劑BVT Cr-7顯著地抑制運(yùn)些霉。實(shí)質(zhì)上，相對(duì)于未處理的花，粉紅粘靑霉處理的被 覆蓋的花顯得非常"干凈"。
[0121]
[0122] 表1:在溫室中使用蜜蜂媒介傳播BVT化-7的試驗(yàn)結(jié)果。*被一種或多種運(yùn)些霉所 覆蓋的花的面積比例：1二零痕跡;2 =輕度;3 =中等輕度;4=中等重度;5 =非常重。
[0123] 值得注意的，如通過已經(jīng)在PCA上培養(yǎng)所述花一周之后所觀察到的顯著的抱子形 成水平所判斷的，使用蜜蜂媒介遞送BVT Cr-7接種物使得生物防治劑在花中快速并徹底地 內(nèi)生性定植。
[0124] 觀察到粉紅粘靑霉在"雄蕊加雌蕊"串中的出色定植，并且考慮到運(yùn)些是病原體的 主要入口，運(yùn)是特別重要的。
[0125] 觀察到被粉紅粘靑霉定殖的花中灰葡萄抱菌的可見的完全抑制W及多種溫室霉 的大部分抑制，表明BVT化-7針對(duì)其它真菌的廣譜能力和活性(例如，通過競爭性排除）。
[0126] 盡管已經(jīng)參考目前被認(rèn)為是優(yōu)選的實(shí)施例來描述了本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)理解，本申請(qǐng)不 限于公開的實(shí)施例。相反，本發(fā)明計(jì)劃涵蓋包括在所附的權(quán)利要求書的精神和范圍內(nèi)的多 種修飾和等價(jià)設(shè)置。
[0127] 所有文獻(xiàn)、專利、專利申請(qǐng)和生物保藏均通過引用的方式全文結(jié)合于此，達(dá)到如同 每份單獨(dú)的文獻(xiàn)、專利、專利申請(qǐng)或生物保藏具體并單獨(dú)地指明通過引用的方式全文結(jié)合 于此一樣的程度。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種粉紅粘帚霉的分離培養(yǎng)物，其中，所述分離培養(yǎng)物是粉紅粘帚霉株IDAC 040913-01。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離培養(yǎng)物，其中，所述分離培養(yǎng)物定殖植物成為內(nèi)生菌。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離培養(yǎng)物，其中，用所述分離培養(yǎng)物接觸植物抑制或控制侵 襲所述植物的葉子、花、果實(shí)和/或根的疾病或病原體。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的分尚培養(yǎng)物，其中，所述疾病是灰霉病、白霉病、褐腐病、根腐 病和/或擬莖點(diǎn)霉屬病。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的分離培養(yǎng)物，其中，所述疾病是由灰葡萄孢菌、核盤菌引起和/ 或由腐霉屬、絲核菌屬和/或鐮刀菌屬的種引起。6. 從權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的粉紅粘帚霉的分離培養(yǎng)物所獲得的真菌孢子。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的真菌孢子，其中，所述孢子通過在適于孢子形成的條件下、在 基質(zhì)上培養(yǎng)所述分離培養(yǎng)物而獲得。8. -種制劑，包含權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的分離培養(yǎng)物或根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的 真菌孢子。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的制劑，進(jìn)一步包含一種載體或稀釋劑。10. 根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的制劑，其中，所述制劑是液體形式或固體形式。11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的制劑，其中，所述制劑是固體形式且進(jìn)一步包含穩(wěn)定劑、吸 濕劑、引誘劑、稀釋劑和/或抗結(jié)劑中的一種或多種。12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的制劑，其中，所述穩(wěn)定劑是粒狀硅酸鈣。13. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的制劑，其中，所述吸濕劑包括干燥劑、硅膠微?；蚬枘z珠、超 吸收聚合物、聚丙稀酸鈉、木刨花和/或粘土球。14. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的制劑，其中，所述引誘劑包括礦物。15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的制劑，其中，所述礦物包括二氧化硅、氧化鋁、鈣、鐵、鎂、鉀、 鈉、磷、鈦、錳、鍶、鋯、鋰、銣、硼、鋅、釩、鉻、銅、釔、鎳、鈷、鎵、銫、鈧、錫、鉬和/或鈣石灰石中 的一種或多種。16. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的制劑，其中，所述引誘劑包括DYNA-MIN?。17. 根據(jù)權(quán)利要求8-16任一項(xiàng)所述的制劑，其中，每克制劑包含約1 X 108至4X 108個(gè)孢 子，任選地，每克制劑包含約2 X108至4 X108個(gè)孢子。18. -種用生物防治劑處理植物的方法，包括用權(quán)利要求1-16任一項(xiàng)所述的分離培養(yǎng) 物、真菌孢子或制劑接觸所述植物。19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，用于改善植物的健康、生長和/或產(chǎn)量。20. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，用于預(yù)防或治療植物中的疾病和/或病原體。21. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，用于控制植物上的霉的生長。22. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，用于改善植物種子的發(fā)芽。23. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述病原體是灰葡萄孢菌、核盤菌、腐霉屬、鏈 格孢屬、念珠菌屬、鏈核盤菌屬、刺盤孢屬、枝孢屬、絲核菌屬、鏈霉菌屬、亞隔孢殼屬和/或 鐮刀菌屬。24. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述疾病是灰霉病、白霉病、褐腐病、根腐病和/ 或擬莖點(diǎn)霉屬病。25. 根據(jù)權(quán)利要求18-24任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述植物選自向日葵、加拿大油 菜、藍(lán)莓、草莓、葡萄、胡椒、黃瓜、番茄、草坪草、西蘭花、桃子、加拿大油菜幼苗和/或芒草。26. 根據(jù)權(quán)利要求18-25任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述植物生長在溫室中。27. 根據(jù)權(quán)利要求18-26任意一項(xiàng)所述的方法，其中，用分離培養(yǎng)物、真菌孢子或制劑接 觸植物包括將噴霧、薄霧、浸液或營養(yǎng)液施用于植物。28. 根據(jù)權(quán)利要求18-26任意一項(xiàng)所述的方法，其中，用分離培養(yǎng)物、真菌孢子或制劑接 觸植物包括昆蟲媒介。29. 權(quán)利要求1-16任意一項(xiàng)所述的分離培養(yǎng)物、真菌孢子或制劑作為生物防治劑的應(yīng) 用。30. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的應(yīng)用，用于改善植物的健康、生長和/或產(chǎn)量。31. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的應(yīng)用，用于治療或預(yù)防植物中的疾病或病原體。32. 根據(jù)權(quán)利要求31所述的應(yīng)用，其中所述病原體是灰葡萄孢菌、核盤菌、腐霉屬、鏈格 孢屬、念珠菌屬、鏈核盤菌屬、刺盤孢屬、枝孢屬、絲核菌屬、鏈霉菌屬、亞隔孢殼屬和/或鐮 刀菌屬。33. 根據(jù)權(quán)利要求31所述的應(yīng)用，其中，所述疾病是灰霉病、白霉病、褐腐病、根腐病和/ 或擬莖點(diǎn)霉屬病。34. -種減少植物材料損耗的方法，所述方法包括用權(quán)利要求1-16任意一項(xiàng)所述的分 離培養(yǎng)物、真菌孢子或制劑接觸所述植物材料。35. 根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中，所述植物材料是水果、蔬菜或谷物。36. 根據(jù)權(quán)利要求34或35所述的方法，其中，接觸所述植物材料包括使用權(quán)利要求8-10 任意一項(xiàng)所述的液體制劑的噴霧、薄霧或?qū)⑺鲋参锊牧辖n在權(quán)利要求8-10任意一項(xiàng)所 述的液體制劑中。37. 根據(jù)權(quán)利要求34-36任意一項(xiàng)所述的方法，其中，所述植物材料已經(jīng)收獲。38. -種生產(chǎn)生物防治劑的方法，所述方法包括： 用權(quán)利要求1的分離培養(yǎng)物接種基質(zhì)；以及 在適于真菌生長的條件下培養(yǎng)所述基質(zhì)以生產(chǎn)粉紅粘帚霉株BVT Cr-7。39. 根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中，所述適于真菌生長的條件包括大于95%的相對(duì) 濕度和20-24 °C范圍的溫度。40. 根據(jù)權(quán)利要求38或39所述的方法，其中，所述基質(zhì)是滅菌基質(zhì)，任選為滅菌種子，如 大麥種子。41. 根據(jù)權(quán)利要求38-39任意一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括在適于真菌形成孢子的條件 下培養(yǎng)所述基質(zhì)。42. 根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中，所述適于真菌形成孢子的條件包括將相對(duì)濕度 降低至低于大約50%，任選地大約35-45%。43. 根據(jù)權(quán)利要求41或42所述的方法，進(jìn)一步包括從基質(zhì)轉(zhuǎn)移孢子以生產(chǎn)接種物。44. 根據(jù)權(quán)利要求43所述的方法，包括將所述孢子與載體或稀釋劑混合。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株可用作植物處理的生物防治劑的、被稱為BVT Cr-7的真菌粉紅粘帚霉的分離株。所述分離株、包含所述株的制劑和/或來自所述株的孢子可以用于植物或植物材料以增加植物產(chǎn)量、改善植物生長，或者用于植物中的疾病或病原體的治療或預(yù)防。IDAC 040913-0120130904
【IPC分類】A01H17/00, A01N63/04, A01P3/00, A01P21/00, C12N1/14, C12N3/00
【公開號(hào)】CN105705629
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480061566
【發(fā)明人】J·薩頓, T·G·梅森
【申請(qǐng)人】蜂傳播媒介技術(shù)有限公司
【公開日】2016年6月22日
【申請(qǐng)日】2014年9月11日
【公告號(hào)】CA2923773A1, EP3044307A1, WO2015035504A1