用作生物防治劑的粉紅粘帚霉的分離株的制作方法
【專利說(shuō)明】用作生物防治劑的粉紅粘吾霉的分離株
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)
[0002] 本申請(qǐng)要求于2013年9月11日提交的、序列號(hào)為61/876,469的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng) 的優(yōu)先權(quán)。該申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容W引用的方式整體結(jié)合至本文。
技術(shù)領(lǐng)域
[0003] 本申請(qǐng)?jiān)O(shè)及真菌粉紅粘靑霉的分離株，更具體地，設(shè)及可用作植物處理的生物防 治劑的粉紅粘靑霉的分離株。
【背景技術(shù)】
[0004] 粉紅粘靑霉(Clonostachys rosea f.rosea)是一種有益微真菌，在野外的多種植 物的組織和幾乎所有種類的農(nóng)作物中均有發(fā)現(xiàn)。該真菌常見(jiàn)于在世界各地的農(nóng)場(chǎng)W及苗 圃、果園、葡萄園、牧場(chǎng)和花園中收集的植物的健康根、葉片、莖、花和果實(shí)。它已經(jīng)在來(lái)自于 包括亞北極區(qū)、寒溫帶和暖溫帶、沙漠和濕熱帶的區(qū)域的植物和±壤中有報(bào)道。定殖有粉紅 粘靑霉的植物不顯示出任何呈現(xiàn)該真菌存在的可視標(biāo)記，直到該組織自然衰老并死亡。在 那個(gè)時(shí)候，該真菌能形成抱子，并且可能在植物表面看到發(fā)白的生長(zhǎng)，尤其是在手持透鏡的 幫助下。不同于與疾病相關(guān)的致病生物，Clonostachys在植物中不引起損害、病斑、萎黨或 其它癥狀。粉紅粘靑霉同樣已知是一種有益生物防治劑，用于植物的處理，并幫助保護(hù)植物 抵抗疾病和環(huán)境脅迫W及促進(jìn)植物生長(zhǎng)和產(chǎn)率。
[0005] 8*郎日的等(美國(guó)專利號(hào)8,101,551)描述了粉紅粘靑霉株88-710,并提及了該菌株 具有促進(jìn)植物活力、健康、生長(zhǎng)和產(chǎn)量的益處。
[0006] 本領(lǐng)域仍然需要可用作植物處理的生物防治劑的粉紅粘靑霉的新菌株。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本申請(qǐng)發(fā)明人分離并表征了真菌粉紅粘靑霉的新菌株。如在本文中所描述的，被 指定為"BVT化-7"的粉紅粘靑霉的該新菌株具體用作為植物處理的生物防治劑。在本發(fā)明 的一個(gè)方面，粉紅粘靑霉株BVT Cr-7的分離培養(yǎng)物已經(jīng)于2013年9月4日保藏在位于加拿大 R3E 3R2曼尼托己省溫尼伯市阿林頓街1015號(hào)的加拿大公眾健康機(jī)構(gòu)國(guó)家微生物實(shí)驗(yàn)室的 加拿大國(guó)際微生物保藏單位，編號(hào)為040913-01。
[000引如在實(shí)施例1中所展示的，分離并表征了粉紅粘靑霉的一系列不同株，W鑒定具有 用作生物防治劑的特別有益性質(zhì)的菌株。相對(duì)于粉紅粘靑霉的其它株，BVT Cr-7展示了用 作生物防治劑的許多改進(jìn)性質(zhì)和/或期望的性質(zhì)的組合。例如，BVT化-7展示了與生長(zhǎng)和抱 子生產(chǎn)豐度相關(guān)的改進(jìn)的或期望的性質(zhì)、它在不同植物的內(nèi)部(包括在農(nóng)作物的根部中和 試驗(yàn)植物的花和葉子中）內(nèi)生性定植的能力W及它抑制或控制廣譜范圍的植物疾病和/或 病原體的能力。在一種實(shí)施方式中，與粉紅粘靑霉的對(duì)照株(如88-710和/或EVla)相比，BVT 化-7顯示出一種或多種改進(jìn)的性質(zhì)。
[0009]另外，如在實(shí)施例2-5中所展示的，在控制條件下將BVT Cr-7應(yīng)用于田野實(shí)驗(yàn)中的 植物W及溫室中的植物證明，在不同條件下和對(duì)于多種植物而言，BVT Cr-7是一種廣譜范 圍的生物防治劑，具有針對(duì)多種不同疾病的高性能。如在實(shí)施例4中所示的，BVT Cr-7還用 于減少植物材料的腐敗，例如通過(guò)降低收獲的農(nóng)作物中的腐爛或稱色的水平。
[0010] 因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種如在本文中所描述的粉紅粘靑霉株BVT Cr-7的分離培養(yǎng)物。在一種實(shí)施方式中，所述株于2013年9月4日保藏在位于加拿大R3E 3R2曼 尼托己省溫尼伯市阿林頓街1015號(hào)的加拿大公眾健康機(jī)構(gòu)國(guó)家微生物實(shí)驗(yàn)室的加拿大國(guó) 際微生物保藏單位，編號(hào)為040913-01。
[0011] 本發(fā)明還提供了產(chǎn)生自粉紅粘靑霉株BVT Cr-7的抱子，W及粉紅粘靑霉株BVT Cr-7的后代，和包含BVT Cr-7的分離培養(yǎng)物、抱子和/或后代的制劑。本發(fā)明還提供了一種 能夠無(wú)性繁殖的、粉紅粘靑霉株BVT化-7的分離的細(xì)胞。在一種實(shí)施方式中，提供了一種抱 子，所述抱子通過(guò)在適于形成抱子的條件下、將BVT Cr-7的分離培養(yǎng)物在基質(zhì)上培養(yǎng)而獲 得。在一種實(shí)施方式中，提供了一種制劑，所述制劑包含與穩(wěn)定劑（如，娃酸巧）結(jié)合的BVT 化-7的抱子。
[0012] 在一種實(shí)施方式中，本文描述的BVT Cr-7的分離培養(yǎng)物在植物中定殖成為內(nèi)生 菌。在一種實(shí)施方式中，用BVT Cr-7接觸植物來(lái)抑制或控制侵襲植物的葉子、花、果實(shí)和/或 根的疾病或病原體。在一種實(shí)施方式中，所述疾病是灰霉病、白霉病、褐腐病、根腐病和/或 擬莖點(diǎn)霉屬?。╬homopsis)。在一種實(shí)施方式中，所述疾病由灰葡萄抱菌（Botrytis cinerea)、核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum)引起和/或由腐霉屬(P}fthium spp.)、絲核 菌屬(化izoctonia)和/或鑲刀菌屬(化sari皿)的種引起。
[0013] 在一種實(shí)施方式中，還提供了已經(jīng)被BVT化-7的接種物定殖的植物或植物材料。
[0014] 在一種實(shí)施方式中，粉紅粘靑霉株BVT化-7可用作植物處理的生物防治劑。在一 種實(shí)施方式中，提供了一種處理植物的方法，包括用本文描述的粉紅粘靑霉株BVT Cr-7接 觸植物。例如，在一種實(shí)施方式中，與沒(méi)有用BVT化-7處理的對(duì)照植物相比，BVT化-7用于 改善植物的健康、生長(zhǎng)和/或產(chǎn)量。在一種實(shí)施方式中，BVT Cr-7用于預(yù)防或治療植物中的 疾病和/或病原體。在一種實(shí)施方式中，BVT Cr-7用于促進(jìn)排除其它真菌(包括病原真菌)定 殖植物。在一種實(shí)施方式中，BVT化-7用于在植物中引發(fā)對(duì)疾病和脅迫的自然抵抗，如對(duì)病 原體的感染做出反應(yīng)。還提供了一種降低植物材料損耗的方法，包括用BVT Cr-7接觸植物 材料。
[0015] 在一種實(shí)施方式中，BVT化-7用于處理植物，W預(yù)防或治療可能影響植物的健康、 生長(zhǎng)和/或產(chǎn)量的疾病和/或病原體。在一種實(shí)施方式中，所述病原體是微生物，如真菌或細(xì) 菌?？蒞被BVT &-7控制的、能影響植物健康、生長(zhǎng)和/或產(chǎn)量的病原體的例子包括但不限 于灰葡萄抱菌（Bot;rytis cinerea)、核盤菌（Sclerotinia sclerotiorum)、腐霉屬 (Pythium spp.)、鏈格抱屬(Alternaria)、念珠菌屬(Monilia)、鏈核盤菌屬(Monilinia)、 刺盤抱屬（Colletohichum)、枝抱屬（Cladosporium)、絲核菌屬(I^iizoctonia)、鏈霉菌屬 (Streptomyces)、亞隔抱殼屬（Didymella)和/或鑲刀菌屬（Fusarium)?？蒞通過(guò)使用BVT Cr-7控制的、能影響植物健康、生長(zhǎng)和/或產(chǎn)量的疾病的例子包括但不限于灰霉病、白霉病、 褐腐病和/或根腐病。其它例子包括在例如藍(lán)替或葡萄中的擬莖點(diǎn)霉屬病W及馬鈴馨瘡挪 病。
[0016] 在一種實(shí)施方式中，所述植物是被粉紅粘靑霉株BVT化-7內(nèi)生性定殖的任何植物 或其部分。在一種實(shí)施方式中，所述植物是開(kāi)花植物、谷類植物、豆類植物或蔬菜作物。例 如，在一種實(shí)施方式中，本文描述的方法和應(yīng)用用于處理植物，如開(kāi)花植物或農(nóng)作物，如蔬 菜、水果、谷物W及它們的種子或幼苗。在一種實(shí)施方式中，本文描述的方法和應(yīng)用用于處 理針葉樹的幼苗/移植物。在一種實(shí)施方式中，所述植物是樹，如松樹、黑云杉或松樹移植 物。在一種實(shí)施方式中，所述植物是小麥、大麥、向日葵、加拿大油菜(canola)、藍(lán)替、草替、 木替、葡萄、馬鈴馨、胡椒、黃瓜、番茄、草坪草、西蘭花、菜花、桃、蘋果、加拿大油菜、觀賞花， 如玫瑰、天竺葵、仙客來(lái)、金魚草、藻百年屬、秋海棠或百合。在一種實(shí)施方式中，所述植物在 室外種植。在一種實(shí)施方式中，所述植物在溫室中種植。
[0017] 在一種實(shí)施方式中，本文描述的方法和應(yīng)用包括用BVT化-7,如BVT Cr-7培養(yǎng)物、 抱子或其制劑接觸植物。在一種實(shí)施方式中，所述BVT Cr-7培養(yǎng)物、抱子或其制劑用作接種 物。在一些實(shí)施方式中，BVT Cr-7W噴霧、薄霧、浸液、粉末或營(yíng)養(yǎng)液形式和/或通過(guò)昆蟲媒 介(如，通過(guò)使用在申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/CA2013/050179的PCT申請(qǐng)中所描述的蜂媒介，該申請(qǐng)的全 部?jī)?nèi)容通過(guò)引用的方式結(jié)合至本文)而施用于植物或植物的部分。
[0018] 本文還提供了生物防治劑的生產(chǎn)方法，所述方法包括用分離的BVT Cr-7培養(yǎng)物接 種基質(zhì)并在適于真菌生長(zhǎng)的條件下培養(yǎng)所述基質(zhì)，W生產(chǎn)粉紅粘靑霉株BVT化-7?？蛇x地， 所述方法進(jìn)一步包括在適于真菌抱子形成的條件下培養(yǎng)所述基質(zhì)并從基質(zhì)中移除抱子W 生產(chǎn)接種體。
[0019] 本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容的其它特征和有益之處將從W下的具體描述中變得顯而易見(jiàn)。但 是，應(yīng)當(dāng)理解，運(yùn)些詳細(xì)描述和表示本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式的具體實(shí)施例僅W描述的方式 給出，因?yàn)橥ㄟ^(guò)該詳細(xì)描述，在本公開(kāi)內(nèi)容的精神和范圍內(nèi)的多種變化和修飾對(duì)于本領(lǐng)域 技術(shù)人員而旨是顯而易見(jiàn)的。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 定義
[0021] 如在本文中所使用的，"粉紅粘靑霉株BVT吐-7"或"BVT Cr-r指的是于2013年9 月4日保藏在位于加拿大R3E 3R2曼尼托己省溫尼伯市阿林頓街1015號(hào)的加拿大公眾健康 機(jī)構(gòu)國(guó)家微生物實(shí)驗(yàn)室的加拿大國(guó)際微生物保藏單位、編號(hào)為040913-01的真菌菌株。術(shù)語(yǔ) "粉紅粘靑霉株BVT Cr-r、"BVT Cr-r或"粉紅粘靑霉株IDAC 040913-〇r同樣包括所述株 的分離物或從所述株產(chǎn)生的任何細(xì)胞、培養(yǎng)物、抱子和后代(如，通過(guò)無(wú)性繁殖產(chǎn)生）。
[0022] 本領(lǐng)域已知的不同方法可W用于培養(yǎng)BVT化-7或制備真菌抱子，運(yùn)些方法包括但 不限于本文描述的方法^及在^下文獻(xiàn)中描述的方法:5111：1：〇]1等％1；[0(31曰(1；[111]11'036111]1:曰 versatile adversary of Botrytis cinerea in crops .''Plant Dis 1997 ； 81: 316-28 ； Sutton等"Ability of Clonostachys rose曰 to establish and suppress sporul曰tion potential of Botrytis cinerea indeleafed stems of hydroponic greenh