人參皂苷Rh2的生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及人參皂苷Rh2的生產(chǎn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人參皂苷Rh2為人參類皂苷經(jīng)水解產(chǎn)生的次級(jí)皂苷，藥效學(xué)研究表明:人參皂苷Rh2對(duì)肝癌、黑色素瘤B16、宮頸癌及肉瘤S180等癌細(xì)胞的增殖有顯著的特異性的抑制作用。其作用機(jī)理為:在癌細(xì)胞增殖過程中，經(jīng)人參皂苷Rh2作用，使癌細(xì)胞停止在一定的增殖期，并促使其逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞。現(xiàn)有技術(shù)分離人參皂苷Rh2的效果不佳。過去多采用化學(xué)方法如酸或堿水解，化學(xué)法存在產(chǎn)率低、副產(chǎn)物多、污染環(huán)境等缺點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，公開了人參皂苷Rh2的生產(chǎn)方法。
[0004]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過下述技術(shù)方案得以解決。
[0005]人參皂苷Rh2的生產(chǎn)方法，包括以下步驟，
[0006]A.在無菌狀態(tài)下，將保加利亞乳桿菌接種到培養(yǎng)基上，溫度控制在37°C厭氧培養(yǎng)24小時(shí);
[0007]將培養(yǎng)好的保加利亞乳桿菌菌種，接種保加利亞乳桿菌菌種，在厭氧培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)24小時(shí)，再進(jìn)行兩次擴(kuò)培；
[0008]B.選取表面呈灰黃色的人參，將人參粉碎成人參粉末，粉末中雜質(zhì)不超過1% ；
[0009]C.把人參粉末與水加入發(fā)酵罐內(nèi)，5L水中加入0.8-1.5kg人參粉末，開始攪拌;打開蒸汽閥，向罐體夾層通入蒸汽，蒸汽走向?yàn)樯喜窟M(jìn)入，下部排出，當(dāng)料液溫度升至121°C時(shí)，關(guān)閉攪拌，控制夾層壓力為0.1-0.12mpa，保溫滅菌30分鐘；
[0010]滅菌結(jié)束后，關(guān)閉夾層的進(jìn)汽閥，排空夾層內(nèi)的蒸汽，等夾層的壓力降為零時(shí)，打開攪拌，接著往夾層通冷水降溫，水的流向?yàn)橄逻M(jìn)上出，當(dāng)料液溫度降至50-55°C時(shí)，關(guān)閉進(jìn)水開關(guān)，排空夾層內(nèi)的水；
[0011]向發(fā)酵罐內(nèi)加入食用磷酸調(diào)節(jié)料液的PH值至6時(shí)，按照400U/mg加入纖維素酶，酶解3小時(shí)；
[0012]酶解完畢后，調(diào)節(jié)料液的PH為7，降溫至42-45°C之間，將乳酸菌培養(yǎng)液加入發(fā)酵罐進(jìn)行二次發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間24小時(shí)，加入乳酸菌培養(yǎng)液的體積為料液體積的15 % ;
[0013]D.把發(fā)酵好的料液，加入到壓濾機(jī)中壓濾得到物料，物料經(jīng)滅菌、干燥，干燥后物料的水份達(dá)到8 %以下，得到產(chǎn)物；
[0014]步驟A中，培養(yǎng)基配比為蛋白胨8-12g，葡萄糖18-23g，牛肉浸膏9-12g，酵母浸膏3.5-6g，乙酸鈉3.5-6g，檸檬酸氫二銨1.5-2.5g，磷酸氫二鉀1.5_2.5g，四水硫酸錳0.2-
0.3go
[0015]作為優(yōu)選，步驟A中，培養(yǎng)基配比為蛋白胨10g，葡萄糖20g，牛肉浸膏10g，酵母浸膏5g，乙酸鈉5g，檸檬酸氫二銨2g，磷酸氫二鉀2g，四水硫酸錳0.25g。
[0016]作為優(yōu)選，步驟A中，培養(yǎng)基的pH值為5.5-6.0，培養(yǎng)基在121V高溫滅菌30分鐘，滅菌后冷卻至45度。
[O 017 ]作為優(yōu)選，步驟A中，第一次擴(kuò)培使用2 O O m I的培養(yǎng)基;第二次擴(kuò)培使用4 O O m I的培養(yǎng)基。
[0018]作為優(yōu)選，步驟B中，人參表面不得有霉斑。
[0019]作為優(yōu)選，步驟B中，人參中水分的含量<8%。人參氣味濃烈、純正。
[0020]作為優(yōu)選，步驟C中，發(fā)酵罐在使用前，沖洗干凈罐內(nèi)和罐體。
[0021 ]作為優(yōu)選，步驟D中，壓濾的過程具體為，把發(fā)酵好的料液，用輸料栗加入到壓濾機(jī)中，隨著料液的進(jìn)入，壓濾機(jī)的壓力會(huì)漸漸上升;在栗液過程中，壓力要控制平穩(wěn)，壓濾機(jī)的進(jìn)口壓小于0.6MPa;當(dāng)壓濾機(jī)的進(jìn)口壓力升至0.6MPa時(shí)，關(guān)閉壓濾機(jī)的進(jìn)料閥，同時(shí)開循環(huán)閥，然后關(guān)閉輸料栗，等壓濾機(jī)的壓力降為零時(shí)，搖動(dòng)液壓桿，打開壓濾機(jī)，取出物料。采用壓濾機(jī)循環(huán)過濾，使產(chǎn)物能最大化的收集。
[0022]作為優(yōu)選，步驟D中，滅菌、干燥過程，把從壓濾機(jī)中取出的物料鋪平在干燥箱中的托盤中，物料的厚度控制在1-2厘米，箱體內(nèi)通入蒸汽，當(dāng)溫度升至121°C時(shí)，保溫滅菌30分鐘；打開抽濕裝置，進(jìn)行抽真空，將溫度控制在70-80°C，經(jīng)2小時(shí)后得到產(chǎn)物。采用噴霧干燥，能使產(chǎn)物更均勻干燥。
[0023]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:人參皂苷Rh2提取難度大，要轉(zhuǎn)化高含量人參皂苷成為高活性的稀有人參皂苷實(shí)際上就是將人參皂苷中的糖鏈選擇性水解。本發(fā)明使用酶催化的生物轉(zhuǎn)化法，具有選擇性高、副產(chǎn)物少、環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)；解決了現(xiàn)有化學(xué)方法(如酸或堿水解)存在的產(chǎn)率低、副產(chǎn)物多、污染環(huán)境等技術(shù)缺點(diǎn)。
[0024]本發(fā)明制備的人參皂苷Rh2提取物具有療效高，純度高，吸收好，質(zhì)量穩(wěn)定，同時(shí)制備方法分離效果佳，含量高，工藝簡(jiǎn)單，操作方便，成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0025]實(shí)施例1
[0026]人參皂苷Rh2的生產(chǎn)方法，包括以下步驟，
[0027]A.在無菌狀態(tài)下，將保加利亞乳桿菌接種到培養(yǎng)基上，溫度控制在37°C厭氧培養(yǎng)24小時(shí);
[0028]將培養(yǎng)好的保加利亞乳桿菌菌種，接種保加利亞乳桿菌菌種，在厭氧培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)24小時(shí)，再進(jìn)行兩次擴(kuò)培；
[0029]B.選取表面呈灰黃色的人參，將人參粉碎成人參粉末，粉末中雜質(zhì)不超過1% ；
[0030]C.把人參粉末與水加入發(fā)酵罐內(nèi)，5L水中加入0.8kg人參粉末，開始攪拌;打開蒸汽閥，向罐體夾層通入蒸汽，蒸汽走向?yàn)樯喜窟M(jìn)入，下部排出，當(dāng)料液溫度升至121°C時(shí)，關(guān)閉攪拌，控制夾層壓力為0.1mpa，保溫滅菌30分鐘；
[0031]滅菌結(jié)束后，關(guān)閉夾層的進(jìn)汽閥，排空夾層內(nèi)的蒸汽，等夾層的壓力降為零時(shí)，打開攪拌，接著往夾層通冷水降溫，水的流向?yàn)橄逻M(jìn)上出，當(dāng)料液溫度降至50°C時(shí)，關(guān)閉進(jìn)水開關(guān)，排空夾層內(nèi)的水；
[0032]向發(fā)酵罐內(nèi)加入食用磷酸調(diào)節(jié)料液的PH值至6時(shí)，按照400U/mg加入纖維素酶，酶解3小時(shí)；
[0033]酶解完畢后，調(diào)節(jié)料液的PH為7，降溫至42_45°C之間，將乳酸菌培養(yǎng)液加入發(fā)酵罐進(jìn)行二次發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間24小時(shí)，加入乳酸菌培養(yǎng)液的體積為料液體積的15 % ;
[0034]D.把發(fā)酵好的料液，加入到壓濾機(jī)中壓濾得到物料，物料經(jīng)滅菌、干燥，干燥后物料的水份達(dá)到8 %以下，得到產(chǎn)物；
[0035]步驟A中，培養(yǎng)基配比為蛋白胨Sg，葡萄糖18g，牛肉浸膏9g，酵母浸膏3.5g，乙酸鈉
3.5g，檸檬酸氫二銨1.5g，磷酸氫二鉀1.5g，四水硫酸錳0.2g。
[0036]步驟A中，培養(yǎng)基的pH值為5.5，培養(yǎng)基在121°C高溫滅菌30分鐘，滅菌后冷卻至45度。第一次擴(kuò)培使用200ml的培養(yǎng)基;第二次擴(kuò)培使用400ml的培養(yǎng)基。
[0037]步驟B中，人參表面不得有霉斑。人參中水分的含量<8%。
[0038]步驟C中，發(fā)酵罐在使用前，沖洗干凈罐內(nèi)和罐體。
[0039]步驟D中，壓濾的過程具體為，把發(fā)酵好的料液，用輸料栗加入到壓濾機(jī)中，隨著料液的進(jìn)入，壓濾機(jī)的壓力會(huì)漸漸上升;在栗液過程中，壓力要控制平穩(wěn)，壓濾機(jī)的進(jìn)口壓小于0.6MPa;當(dāng)壓濾機(jī)的進(jìn)口壓力升至0.6MPa時(shí)，關(guān)閉壓濾機(jī)的進(jìn)料閥，同時(shí)開循環(huán)閥，然后關(guān)閉輸料栗，等壓濾機(jī)的壓力降為零時(shí)，搖動(dòng)液壓桿，打開壓濾機(jī)，取出物料。
[0040]步驟D中，滅菌、干燥過程，把從壓濾機(jī)中取出的物料鋪平在干燥箱中的托盤中，物料的厚度控制在I厘米，箱體內(nèi)通入蒸汽，當(dāng)溫度升至121°C時(shí)，保溫滅菌30分鐘；打開抽濕裝置，進(jìn)行抽真空，將溫度控制在70°C，經(jīng)2小時(shí)后得到產(chǎn)物。
[0041 ] 實(shí)施例2
[0042]人參皂苷Rh2的生產(chǎn)方法，包括以下步驟，
[0043]A.在無菌狀態(tài)下，將保加利亞乳桿菌接種到培養(yǎng)基上，溫度控制在37°C厭氧培養(yǎng)24小時(shí);
[0044]將培養(yǎng)好的保加利亞乳桿菌菌種，接種保加利亞乳桿菌菌種，在厭氧培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)24小時(shí)，再進(jìn)行兩次擴(kuò)培；
[0045]B.選取表面呈灰黃色的人參，將人參粉碎成人參粉末，粉末中雜質(zhì)不超過1% ；
[0046]C.把人參粉末與水加入發(fā)酵罐內(nèi)，5L水中加入1.5kg人參粉末，開始攪拌;打開蒸汽閥，向罐體夾層通入蒸汽，蒸汽走向?yàn)樯喜窟M(jìn)入，下部排出，當(dāng)料液溫度升至121°C時(shí)，關(guān)閉攪拌，控制夾層壓力為0.12mpa，保溫滅菌30分鐘；
[0047]滅菌結(jié)束后，關(guān)閉夾層的進(jìn)汽閥，排空夾層內(nèi)的蒸汽，等夾層的壓力降為零時(shí)，打開攪拌，接著往夾層通冷水降溫，水的流向?yàn)橄逻M(jìn)上出，當(dāng)料液溫度降至55°C