由兩個(gè)彼此獨(dú)立的單環(huán)雜芳基，或一個(gè)苯基與一個(gè)單環(huán)雜芳基稠合而成。
[0102] 根據(jù)本發(fā)明，亞烷基和次烷基中的烷基可以是直鏈的或分支的。
[0103] 根據(jù)本發(fā)明，亞環(huán)烷基和次環(huán)烷基中的環(huán)烷基可以是單環(huán)或雙環(huán)的。
[0104] 根據(jù)本發(fā)明，亞雜環(huán)烷基與次雜環(huán)烷基中的雜環(huán)可以是完全飽和的單環(huán)雜環(huán)或完 全飽和的雙環(huán)雜環(huán)，其環(huán)成員的數(shù)目是3-10個(gè)，其中除碳原子外，還可以含有1-4個(gè)選自0、 N和S的雜原子。
[0105] 根據(jù)本發(fā)明，單環(huán)雜芳基是由單環(huán)雜芳環(huán)中帶有氫原子的環(huán)原子失去一個(gè)氫原子 所形成的基團(tuán)，其中所述單環(huán)雜芳環(huán)是含有1-4個(gè)選自N、0和S的雜原子的5或6元單環(huán) 雜芳環(huán)。
[0106] 根據(jù)本發(fā)明，雙環(huán)雜芳基是由雙環(huán)雜芳環(huán)中帶有氫原子的環(huán)原子失去一個(gè)氫原子 所形成的基團(tuán)，其中所述雙環(huán)雜芳環(huán)是由苯與一個(gè)含有1-4個(gè)選自N、0和S的雜原子的5 或6元單環(huán)雜芳環(huán)稠合形成的，或者是由兩個(gè)彼此獨(dú)立的含有1-4個(gè)選自N、0和S的雜原 子的5或6元單環(huán)雜芳環(huán)稠合形成的。
[0107] 根據(jù)本發(fā)明，焚光團(tuán)（fluorophore)的實(shí)例包括但不限于衍生自二苯乙稀類(lèi)、香 豆素類(lèi)、熒烷類(lèi)（氧雜蒽）、苯并噁唑類(lèi)（如咪唑，噻唑）、萘二甲酰亞胺類(lèi)、噻吩二羧酸酰 胺類(lèi)、稠環(huán)芳烴類(lèi)、茈四甲酰亞胺類(lèi)的基團(tuán)，其實(shí)例包括FAM、TET、JOE、HEX、CY3、TAMRA、 ROX、Texas Red、LC RED640、CY5、LC RED705。有關(guān)熒光團(tuán)的更多的信息可以參看http:// en. wikipedia. org/wiki/Fluorophore〇
[0108] 根據(jù)本發(fā)明，固體表面的例子包括但不限于多糖珠，多糖珠包括但不限于聚氨基 葡糖珠，幾丁質(zhì)珠、瓊脂糖珠、殼聚糖珠。關(guān)于多糖珠的更多信息，可以參考CN102504312A、 CN103739857A、CN101715364A、CN1939582A 和 CN1226900A。
[0109] 實(shí)施例
[0110] 在以下的實(shí)施例中，全部試劑是市售可得的并且在使用時(shí)沒(méi)有進(jìn)一步提純。無(wú)水 DMF是用氫化鈣處理過(guò)的。鹽水是指氯化鈉在蒸餾水中的飽和溶液。
[0111] 通過(guò)TLC監(jiān)控反應(yīng)，所述TLC在0. 25毫米Jiangyou硅膠板（HSGF254)上進(jìn)行，使 用紫外光作為可視化試劑?？焖僦V是使用Puke二氧化硅（ZCX-II)進(jìn)行的。
[0112] i-NMR 和 13C-NMR 譜是在 Bruker Advance400 上記錄的（? :400MHz，13C : 100MHz)其中化學(xué)位移值（單位ppm)是相對(duì)于下述內(nèi)標(biāo)的：TMS(SH0.00和δΟΧΟΟ), 殘余氯仿（δΗ7·26 和 SC77. 16)，二甲亞砜（δΗ2·50 和 SC39.52),丙酮（δΗ2·05 和 δ C29. 92, 206. 68)，或甲醇（δ Η3. 31 和 δ C49. 00)。19F-NMR 譜是在 Bruker Advance400 上 記錄的，以CFC13( δ R). 00)作為內(nèi)標(biāo)。HR-MS是使用Bruker Apex IV RTMS獲得的。
[0113] 化合物的純度是通過(guò)在Agilentl200HPLC上獲得的HPLC色譜確定的。在10分 鐘內(nèi)，通過(guò) Agilent PN959990-902Eclipse Plus C18250mmX4.6mm 柱進(jìn)行分析，其中使用 水-]^0~梯度，包含0.1%三氟乙酸和由30%至98%的]^01在25411111下檢測(cè)，使用平均 峰面積來(lái)確定純度。全部原料化合物的純度高于95%。
[0114] G「H、G「炔、G「生物素的合成方案
[0115] 方案1.合成G「H
[0117] GfH的合成路線(xiàn)由市售可得的化合物1開(kāi)始。用N-Boc-乙醇胺進(jìn)行的Mitsunobu 反應(yīng)得到化合物2。在脫保護(hù)后，所獲得的化合物與4-(氟磺?；┍郊柞Ｂ确磻?yīng)而得到期 望的化合物G^H。
[0118] 方案2.合成G!-炔
[0119]
[0120] 通過(guò)化合物2的保護(hù)基交換可以獲得化合物3,化合物3與3-丁炔醇的Mitsunobu 反應(yīng)可以獲得化合物4。然后，通過(guò)在K2C03/MeCN的催化下，通過(guò)PhSH除去2-硝基苯磺 ?；玫交衔?。所獲得的仲胺化合物5與4-(氟磺?；┍郊柞Ｂ确磻?yīng)而得到化合物 Gf塊。
[0121] 方案3. Gf生物素的合成

[0124] 為得到生物素化探針，通過(guò)化合物3和N-Boc-乙醇胺的Mitsunobu反應(yīng)得到被保 護(hù)的胺6。在Boc基團(tuán)的脫保護(hù)后，通過(guò)酰胺偶聯(lián)試劑HATU引入生物素得到化合物7。然 后，除去2-硝基苯磺?；玫交衔?,再引入氟磺酰基得到最終的化合物匕-生物素。
[0125] 方案4. Gi-珠的合成
[0127] 為獲得固定的Gi，首先將前體化合物6脫保護(hù)，并且制備成在DMF和TEA中的溶液 形式，濃度為l〇〇mM。將該溶液與活化的CH-瓊脂糖凝膠'(Sigma)珠（珠-1)反應(yīng)而得 到珠-2。在PhSH的MeCN溶液中除去4-硝基苯磺?；玫街?3。珠-3與4-(氟磺酰 基）苯甲酰氯在無(wú)水DCM和TEA中反應(yīng)而得到Gi-珠。
[0128] 化合物2的制備
[0129] 將1. 2克化合物1 (1當(dāng)量）、0. 8克N-Boc-乙醇胺（1. 2當(dāng)量）和1. 4克三苯膦 (1. 4當(dāng)量）溶解在40毫升THF中并且用冰浴冷卻至0°C。在0°C將0. 9毫升DEAD (1. 4當(dāng) 量）添加到該溶液中。然后將混合物升溫至室溫并且攪拌過(guò)夜。在完成后，將反應(yīng)物用水急 速冷卻，在真空條件下蒸發(fā)溶劑。通過(guò)快速色譜柱提純得到1. 5克的期望產(chǎn)物（84. 1% )。
[0130] ^-NMR(400MHz, MeOD-d4) δ HI. 30 (9H, s), 3. 54 (2H, t), 4. 46 (2H, t), 7. 06-7. 18 (5 H, m), 7. 39 (2H, t), 8. 22 (1H, s).
[0131] 13C-NMR(100MHz, MeOD-d4) δ C158. 49, 158. 41，156. 65, 156. 50, 155. 30, 154. 33, 14 4. 52, 129. 87, 129. 66, 127. 43, 123. 67, 119. 12, 118. 49, 97. 82, 78. 62, 46. 62, 39. 55, 27. 26, 27. 04.
[0132] C24H27N603[M+H+]的 HRMS-ESI 的計(jì)算值：447. 2145 ;實(shí)測(cè)值：447. 2134。
[0133] GfH的制備
[0134] 將223毫克化合物2溶解在5毫升DCM中，然后添加1. 5毫升TFA。在攪拌兩小 時(shí)后，在真空條件下蒸發(fā)溶劑而得到白色固體。固體被溶解在5毫升無(wú)水DCM和180微升 TEA(2. 6當(dāng)量）中。然后，通過(guò)冰浴將溶液冷卻至0°C并且添加144毫克的4-(氟磺酰基） 苯甲酰氯（1. 3當(dāng)量）。然后，將反應(yīng)升溫至室溫并且保持?jǐn)嚢琛Ｔ谕瓿珊?，將反?yīng)物用水急 速冷卻，用DCM提取，用鹽水洗滌，用Na2S0 4干燥，以及進(jìn)行濃縮。通過(guò)快速色譜柱提純得到 白色固體狀的180毫克的6^11(67. 7% )。
[0135] ^-NMR (400MHz, DMS〇-d6) δ Η3. 73 (2Η, dd), 3. 54 (2Η, t), 4. 54 (2Η, t), 7. 09-7. 19 ( 5Η, m), 7. 17 (2Η, t), 7. 59 (2Η, d), 8. 03 (2Η, d), 8. 23 (2Η, d), 8. 99 (1Η, t).
[0136] 13C-NMR(100MHz, DMS0-d6) δ C165. 20, 158. 58, 157. 55, 156. 66, 156. 15, 155. 09, 14 3. 76, 141. 90, 130. 58, 130. 42, 129. 43, 129. 01, 128. 36, 124. 28, 119. 48, 119. 28, 97. 82, 46. 19, 34. 82, 30. 85.
[0137] 19F_NMR (400MHz, CDC13) δ F67. 22.
[0138] C26H22N604FS[M+H +]的 HRMS-ESI 的計(jì)算值：533. 1407 ;實(shí)測(cè)值：533. 1400.
[0139] 化合物3的制備
[0140] 將4. 4克化合物2溶解在100毫升DCM中，然后添加30毫升TFA。在攪拌兩小時(shí) 后，在真空條件下蒸發(fā)溶劑而得到白色固體。將固體溶解在100毫升無(wú)水DCM中并且添加 4. 2毫升TEA (3當(dāng)量）。然后，通過(guò)冰浴將溶液冷卻至0°C并且添加2. 4克的2-硝基苯磺酰 氯（1.1當(dāng)量）。攪拌該混合物過(guò)夜，用水急速冷卻，在真空條件下濃縮。然后，將混合物溶 解在乙酸乙酯中，用水和鹽水洗滌，用Na 2S04干燥，濃縮而得到黃色油。在通過(guò)快速色譜柱 提純后，獲得3. 4克的期望的產(chǎn)物（64. 0% )。
[0141] ^-NMR (400MHz, DMS〇-d6) δ Η3. 52 (2Η, dd), 4. 41 (2Η, t), 7. 10-7. 19 (5Η, m), 7. 42 ( 2Η, dt), 7. 62 (2Η, dd), 7. 70-7. 76 (2Η, m), 7. 87 (2Η, dt), 8. 2 (1Η, s), 8. 30 (1Η, t).
[0142] 13C-NMR(100MHz, DMS〇-d6) δ C158. 52, 157. 57, 156. 70, 156. 02, 154. 97, 147. 75, 14 3. 88, 137. 82, 134. 30, 133. 31, 133. 05, 130. 58, 130. 46, 129. 65, 128. 26, 125. 35, 124. 84, 12 4. 26, 119. 46, 119. 35, 79. 61, 46. 72, 42. 36, 30. 85.
[0143] C25H22N705S[M+H +]的 HRMS-ESI 的計(jì)算值：532. 1403 ;實(shí)測(cè)值：532. 1401.
[0144] 化合物4的制備
[0145] 將1. 2克化合物3、0· 2克3- 丁炔醇（butynol) (1. 2當(dāng)量）、0· 7克三苯膦（1. 2 當(dāng)量）溶解在無(wú)水THF中。然后，通過(guò)冰浴將溶液冷卻至0°C并且滴加0. 4毫升DEAD。在 完成后，將反應(yīng)物用水急速冷卻并且濃縮。通過(guò)快速色譜柱提純得到850毫克的化合物 4(63. 4% ) 〇
[0146] iH-NMRGOOMHz，CDC13) δ H1. 95 (1H，t)，2. 49 (2H，dt)，3. 63 (2H，t) 3. 99 (2H，t)，4. 63 (2H, t), 7. 06-7. 18 (5H, m), 7. 37 (2H, dt), 7. 50-7. 62 (5H, m), 7. 93 (1H, dd), 8. 28 (1H, s).
[0147] 13C-NMR(100MHz，CDC13)SC158.60，157.70，156.23，155.31，154.61，147.67，144. 43, 133. 56, 133. 07, 131. 71, 130. 90, 129. 98, 129. 88, 127. 33, 124. 14, 124. 10, 119. 58, 119. 06, 98. 31, 80. 43, 70. 79, 46. 38, 46. 17, 45. 01, 18. 62.
[0148] C25H22N705S[M+H+]的 HRMS-ESI 的計(jì)算值：584. 1716 ;實(shí)測(cè)值：584. 1713.
[0149] 化合物5的制備
[0150] 將850毫克化合物4溶解在14毫升MeCN中