一種尿素檢測(cè)試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及臨床體外檢測(cè)試劑技術(shù)領(lǐng)域，特別設(shè)及一種尿素檢測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 尿素是由碳、氮、氧和氨組成的有機(jī)化合物，又稱脈(與尿同音)。其化學(xué)公式為CON2H4、（畑2)2〇)或CN2H4O,分子質(zhì)量60,國(guó)際非專利藥品名稱為Carbamide。夕Μ見(jiàn)是白色 晶體或粉末。它是動(dòng)物蛋白質(zhì)代謝后的產(chǎn)物，通常用作植物的氮肥。尿素在肝合成，是哺乳 類動(dòng)物排出的體內(nèi)含氮代謝物。運(yùn)代謝過(guò)程稱為尿素循環(huán)。
[0003]尿素（UREA)是人體內(nèi)氨基酸代謝的終產(chǎn)物，構(gòu)成了血液中絕大部分的非蛋白氮， 在肝臟內(nèi)合成，經(jīng)腎臟排泄到尿中，因此其含量取決于蛋白質(zhì)的攝入、蛋白質(zhì)分解代謝及腎 功能。尿素可自由地從腎小球?yàn)V出，因此是反映腎功能的敏感指標(biāo)。
[0004] 人血清或血漿中尿素參考范圍為1.7~8.3mmol/L。UREA含量增高可見(jiàn)下列Ξ種 情況：（1)腎性增高見(jiàn)于急性腎炎、慢性腎炎、中毒性腎炎、嚴(yán)重腎孟腎炎、腎結(jié)核、腎血管 硬化癥、先天性多囊腎和腎腫瘤等引起的腎功能障礙。尤其是對(duì)尿毒癥的診斷有特殊價(jià)值， 其增高程度與病情嚴(yán)重性成正比。（2)腎前性增高見(jiàn)于充血性屯、力衰竭、重度燒傷、休克、消 化道大出血、脫水、嚴(yán)重感染、糖尿病酸中毒、腎上腺皮質(zhì)功能減退、肝腎綜合征等。（3)腎后 性增高見(jiàn)于因尿路梗阻增加腎組織壓力，使腎小球?yàn)V過(guò)壓降低時(shí)，如前列腺肥大、腫瘤壓迫 所致的尿道梗阻或兩側(cè)輸尿管結(jié)石等。UREA減少：臨床意義較小，偶見(jiàn)于急性肝萎縮、中毒 性肝炎、類脂質(zhì)腎病等。
[0005]脈酶利用水將尿素轉(zhuǎn)化為碳酸氨根離子，并釋放出錠根離子。錠根離子與α-酬 戊二酸和NADH在谷氨酸脫氨酶的作用下生成心谷氨酸和NAD+W及水。340nm波長(zhǎng)下尿素 的生成速度與NADH的消耗速度成正比。該方法是一種無(wú)需預(yù)處理樣本，技術(shù)和設(shè)備要求不 高，而精密度和特異性更高的分析方法。由于該方法不需要昂貴的設(shè)備，可W實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化， 且可測(cè)定大量標(biāo)本，因此受到臨床廣泛推廣。但是普通的尿素檢測(cè)試劑中由于存在酶，會(huì)使 該試劑的穩(wěn)定性受到影響，不利于試劑的長(zhǎng)期保存，從而造成準(zhǔn)確度差及浪費(fèi)的不良后果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種尿素檢測(cè)試劑盒。該試劑盒與常 規(guī)的試劑盒相比，穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度高，線性范圍好，分析靈敏度高，有利于試劑在臨床上的 推廣應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明是通過(guò)W下措施實(shí)現(xiàn)的： 一種尿素酶檢測(cè)試劑盒，其特征在于，它包含試劑R1、試劑R2和校準(zhǔn)品，其中試劑R1組 成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 曰-酬戊二酸 8mmol/L 谷氨酸脫氨酶 1000U/L 疊氮化鋼 0. 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 脈酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 4-甲酯苯基棚酸 0. 01%(W/V) 葡甘露聚糖 0. 5-1mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通 100 1% (V/V) BSA 0.1-lg/Lo
[000引所述試劑R1和試劑R2在使用時(shí)的體積比例為R1 :R2=3 :1。
[0009] 所述的一種尿素檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述復(fù)合穩(wěn)定劑為4-FPBA、葡甘露聚 糖、化C1、丙二醇、曲拉通100、BSA六種成分。
[0010] 本發(fā)明的試劑盒在具有雙試劑功能的自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行，其具體使用方法如 下：
本發(fā)明所使用的校準(zhǔn)品為英國(guó)朗道公司生產(chǎn)的復(fù)合校準(zhǔn)品。
[0011] 加入生理鹽水、樣本或校準(zhǔn)品4μ1，之后再加入R1試劑300μ1預(yù)解育5min后加 入100μ1的試劑R2, 30秒后開(kāi)始記錄吸光度值A(chǔ)1，反應(yīng)5min后，讀取吸光度A2,并計(jì)算 ΔA/min。
[0012] 本發(fā)明的有益效果： 本發(fā)明提供的尿素脈酶-谷氨酸脫氨酶法檢測(cè)試劑盒，通過(guò)在試劑R2中加入了由 4-甲酯苯基棚酸（4-FPBA)、葡甘露聚糖、化C1、丙二醇、曲拉通100、BSA組成的復(fù)合穩(wěn)定劑， 各組分協(xié)同作用使試劑穩(wěn)定性能優(yōu)異，解決了酶長(zhǎng)期保存不穩(wěn)定運(yùn)一難題，在試驗(yàn)中它能 增加酶的穩(wěn)定時(shí)間，而不會(huì)影響酶的活性，從而有效地增強(qiáng)了試劑盒的穩(wěn)定性，卻不會(huì)對(duì)試 劑的準(zhǔn)確度和分析靈敏度產(chǎn)生影響，有利于該試劑在市場(chǎng)中進(jìn)一步的推廣。
【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1實(shí)施例2準(zhǔn)確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性。
[0014] 圖2實(shí)施例3準(zhǔn)確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性。
[0015] 圖3實(shí)施例4準(zhǔn)確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0017] 實(shí)施例1 市場(chǎng)上獲得認(rèn)可的一種準(zhǔn)確度優(yōu)異的尿素試劑盒，它包括試劑R1、試劑R2、校準(zhǔn)品。 [001引其中試劑R1組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 曰-酬戊二酸 8mmol/L 谷氨酸脫氨酶 1000U/L 疊氮化鋼 0. 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 脈酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 本實(shí)施例描述的試劑盒，在使用時(shí)，其測(cè)定方法是采用具有雙試劑功能的東芝120自 動(dòng)分析儀，操作如下： 加入生理鹽水、樣本或校準(zhǔn)品4μ1，之后再加入R1試劑300μ1預(yù)解育5min后加入 100μ1的試劑R2, 30秒后開(kāi)始記錄吸光度值A(chǔ)1，反應(yīng)5min后，讀取吸光度A2,并計(jì)算ΔA/ min。
[0019] 本實(shí)施例所使用的校準(zhǔn)品為英國(guó)朗道公司生產(chǎn)的復(fù)合校準(zhǔn)品。
[0020] 實(shí)施例2 一種尿素檢測(cè)試劑盒，它包括試劑R1、試劑R2、校準(zhǔn)品。
[0021] 其中試劑R1組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 曰-酬戊二酸 8mmol/L 谷氨酸脫氨酶 1000U/L 疊氮化鋼 0. 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 脈酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 4-FPBA 0. 01% (W/V) 葡甘露聚糖 0. 5mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通 100 1% (V/V) BSA 0.Ig/L 具體測(cè)定方法同實(shí)施例1。
[002引 實(shí)施例3 一種尿素檢測(cè)試劑盒，它包括試劑R1、試劑R2、校準(zhǔn)品。
[0023] 其中試劑R1組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 曰-酬戊二酸 8mmol/L 谷氨酸脫氨酶 1000U/L 疊氮化鋼 0. 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 脈酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 4-FPBA 0. 01% (W/V) 葡甘露聚糖 0. 8mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通 100 1% (V/V) BSA 0.5g/L 具體測(cè)定方法同實(shí)施例1。
[0024] 實(shí)施例4 一種尿素檢測(cè)試劑盒，它包括試劑R1、試劑R2、校準(zhǔn)品。
[0025] 其中試劑R1組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 曰-酬戊二酸 8mmol/L 谷氨酸脫氨酶 1000U/L 疊氮化鋼 0. 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 lOOmmol/L 脈酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 4-FPBA 0. 01% (W/V) 葡甘露聚糖 1mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通 100 1% (V/V) BSA Ig/L 具體測(cè)定方法同實(shí)施例1。
[0026] 對(duì)上述實(shí)施例1-4中制得的試劑盒分析性能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
[0027] 準(zhǔn)確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)： 將實(shí)施例2、3、4的試劑盒作為實(shí)驗(yàn)組，實(shí)施例1中市場(chǎng)上獲得認(rèn)可的準(zhǔn)確度優(yōu)異的尿 素試劑盒作為對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，對(duì)40個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)的結(jié)果如圖1-圖3。
[0028] 通過(guò)圖1-圖3的檢測(cè)數(shù)據(jù)可知，實(shí)施例2、3、4檢測(cè)試劑盒與對(duì)照檢測(cè)試劑盒的檢 測(cè)結(jié)果線性相關(guān)系數(shù)r分別為0. 9994、0. 9992、0. 9995,相關(guān)性比較好，表明本發(fā)明的試劑 盒與市場(chǎng)上獲得認(rèn)可的具有優(yōu)異準(zhǔn)確度的尿素檢測(cè)試劑盒有高度一致性，證明本發(fā)明試劑 盒添加的其他各種成分對(duì)其準(zhǔn)確性不會(huì)造成影響，試劑盒依然保持較好的準(zhǔn)確度。
[0029] 線性相關(guān)性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)： 找到尿素高值樣本為36mmol/l，用生理鹽水進(jìn)行系列稀釋，配制6個(gè)不同濃度的樣 本，依次為 36mmol/X、28. 8mmol/X、21.6mmol/X、14. 4mmol/X、7. 2mmol/X、0mmol/L濃度 的樣本，每個(gè)濃度水平各樣本分別測(cè)定Ξ次，分別取其平均值。分別利用實(shí)施例1、2、3、4的 試劑進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果如表1所示。
[0030] 表1實(shí)施例1-4線性相關(guān)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果
上述檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)施例1-4檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性均大于0. 990,但實(shí)施例2、3、4的檢測(cè) 結(jié)果大于0. 999,與實(shí)施例1相比具有更好的線性相關(guān)性，運(yùn)說(shuō)明本發(fā)明試劑具有更好的線 性相關(guān)性。
[0031] 穩(wěn)定性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)： 在2°C~8°C、無(wú)腐蝕性氣體的避光環(huán)境中膽存試劑，檢測(cè)四種實(shí)施例試劑的穩(wěn)定性。 四種試劑每月選取同一樣本測(cè)定其吸光度Ξ次，取平均值，與新鮮的實(shí)施例1試劑檢測(cè)結(jié) 果進(jìn)行對(duì)比，從而確定試劑的穩(wěn)定時(shí)間。檢測(cè)數(shù)據(jù)如表2。
[0032] 表2穩(wěn)定性驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)施例1試劑在2°C~8°C、無(wú)腐蝕性氣體的避光環(huán)境中膽存15個(gè)月穩(wěn) 定，而實(shí)施例2、3、4試劑在2°C~8°C、無(wú)腐蝕性氣體的避光環(huán)境中膽存24個(gè)月穩(wěn)定，說(shuō)明 在試劑中通過(guò)加入復(fù)合穩(wěn)定劑能夠有效的提高尿素檢測(cè)試劑盒的穩(wěn)定性。
[0033] 綜合W上分析，本發(fā)明提供的尿素檢測(cè)試劑盒，在試劑R2中通過(guò)加入復(fù)合穩(wěn)定劑 能夠有效的提高試劑盒的穩(wěn)定性，線性范圍較好，試劑的準(zhǔn)確度也較好。因此，本發(fā)明提供 的尿素檢測(cè)試劑盒有利于在市場(chǎng)中進(jìn)一步的推廣使用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種尿素檢測(cè)試劑盒，其特征在于，它包含試劑Rl、R2和校準(zhǔn)品，其中試劑R1組成 為： Tris緩沖液 10Ommol/], α-酮戊二酸 8 mmol/L 谷氨酸脫氫酶 1000U/L 疊氮化鈉 0· 5% (W/V) 試劑R2組成為： Tris緩沖液 10Ommol/], 脲酶 2000U/L NADH 0.8mmol/L 4-甲酰苯基硼酸 0. 01%(W/V) 葡甘露聚糖 0. 5-1 mg/mL NaCl 5mmol/L 丙二醇 20mg/mL 曲拉通100 1% (V/V) BSA 0·1-lg/L〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種尿素檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑R1和試劑R2在 使用時(shí)的體積比例為R1 :R2=3 :1。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種尿素檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述復(fù)合穩(wěn)定劑為 4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA六種成分。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種尿素檢測(cè)試劑盒，屬于臨床體外檢測(cè)試劑技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明試劑盒包括試劑R1、試劑R2、校準(zhǔn)品。通過(guò)在試劑R2中加入由4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA組成的復(fù)合穩(wěn)定劑，有效的提高了試劑盒的穩(wěn)定性，其線性范圍也較好，試劑的準(zhǔn)確度高，有利于在市場(chǎng)中進(jìn)一步的推廣使用。
【IPC分類】C12Q1/32, C12Q1/34, C12Q1/58
【公開(kāi)號(hào)】CN105368917
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510981849
【發(fā)明人】董雯, 甘宜梧, 李靜
【申請(qǐng)人】山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2016年3月2日
【申請(qǐng)日】2015年12月24日