一種用于生產(chǎn)共軛亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種乳酸菌培養(yǎng)基，具體涉及一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng) 基。
【背景技術(shù)】
[0002] 亞油酸，是人體必須脂肪酸一亞油酸（LinoleicAcid，簡稱LA)的一組具有共輒 雙鍵的所有幾何和位置異構(gòu)體的統(tǒng)稱。近年來，共輒亞油酸作為一種功能性油脂，愈發(fā)受到 人們的關(guān)注，已經(jīng)成為藥學(xué)、化學(xué)和食品等領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。共輒亞油酸具有抗癌、抗氧化、 抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低膽固醇、促進(jìn)生長等作用。已被廣泛應(yīng)用于功能性食品、藥品、保健 品、化妝品等領(lǐng)域。共輒亞油酸應(yīng)用于臨床藥品的報(bào)道還比較少，但它具有減肥、抗癌、抗動(dòng) 脈粥樣硬化等功能已被證實(shí)，相信不久之后它一定會(huì)成為治療這類疾病的良藥。共輒亞油 酸對人類健康意義重大，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003] 共輒亞油酸的天然來源非常廣泛，包括多種動(dòng)物、植物和微生物。許多乳酸菌都 能產(chǎn)生共輒亞油酸，但目前常見的乳酸菌產(chǎn)共輒亞油酸培養(yǎng)基為乳糖MRS培養(yǎng)基，其配方 為酪蛋白胨10. 〇g/L、牛肉浸取物10g/L、酵母提取液5.Og/L、葡萄糖5g/L、乙酸鈉5.Og/L、 檸檬酸二胺2. 0g/L、吐溫801. 0g/L、磷酸氫二鉀2. 0g/L、七水硫酸鎂0. 2g/L、七水硫酸錳 0.05g/L、碳酸鈣20. 0g/L，pH6. 8,115°C滅菌20min后備用。該培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)不僅成分復(fù) 雜，價(jià)格昂貴，而且制作繁瑣，不具備工業(yè)化生產(chǎn)的能力，且菌株產(chǎn)生的亞油酸產(chǎn)量不高。
[0004] 菊芋別名洋姜地生姜，生態(tài)適應(yīng)性強(qiáng)并且種植簡單，繁殖力強(qiáng)，一次播種可以多次 收獲，是發(fā)展較快的新型農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)型作物。菊芋是一種營養(yǎng)豐富的農(nóng)作物，具備開發(fā)成微生 物培養(yǎng)基的良好潛力。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基，在現(xiàn)有技術(shù)中乳 糖MRS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，用菊芋浸汁代替培養(yǎng)基中的牛肉膏、蛋白胨、檸檬酸銨等營養(yǎng)物 質(zhì)，選用經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的無機(jī)氮源，不僅滿足了乳酸菌生長的基本營養(yǎng)需求，并且顯著提高了亞 油酸活力，降低了生產(chǎn)成本。
[0006] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明可以通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：
[0007] -種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基包括：菊芋浸汁6-14%、葡萄糖 0. 5-4%、酵母浸出物1-6 %、乙酸鈉2-6 %、磷酸氫二鉀2 %、硫酸鎂0. 05 %、硫酸錳0. 05 %， 上述各組分為質(zhì)量百分含量，Tween-801ml/L，溶劑為水。
[0008] 優(yōu)選，一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基包括：菊芋浸汁9-12%、葡萄糖 1-4 %、酵母浸出物1-4 %、乙酸鈉2-5 %、磷酸氫二鉀2 %、硫酸鎂0. 05 %、硫酸錳0. 05 %，上 述各組分為質(zhì)量百分含量，溶劑為水，Tween-801ml/L。
[0009] 優(yōu)選，一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基包括：菊芋汁11%、葡萄糖3%、 酵母浸出物1%、乙酸鈉3%、磷酸氫二鉀2%、硫酸鎂0.05% ;硫酸錳0.05%，上述各組分 為質(zhì)量百分含量，Tween-801ml/L，溶劑為水。
[0010] 優(yōu)選，一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基，其特征在于包括：菊芋浸汁 10 %、葡萄糖0. 5-4 %、酵母浸出物1-6 %、乙酸鈉2-6 %、磷酸氫二鉀2 %、硫酸鎂0. 05 %、硫 酸錳0. 05%，上述各組分為質(zhì)量百分含量，Tween-801ml/L，溶劑為水。
[0011] 優(yōu)選，一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基，其特征在于包括：菊芋浸汁 10 %、葡萄糖2 %、酵母浸出物1-6 %、乙酸鈉2-6 %、磷酸氫二鉀2 %、硫酸鎂0. 05 %、硫酸錳 0. 05%，上述各組分為質(zhì)量百分含量，Tween-801ml/L，溶劑為水。
[0012] 優(yōu)選，一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基，其特征在于包括：菊芋浸汁 10%、葡萄糖2 %、酵母浸出物3%、乙酸鈉2-6%、磷酸氫二鉀2 %、硫酸鎂0. 05 %、硫酸錳 0. 05%，上述各組分為質(zhì)量百分含量，Tween-801ml/L，溶劑為水。
[0013] 優(yōu)選，一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基，其特征在于包括：菊芋浸汁 10 %、葡萄糖2 %、酵母浸出物3 %、乙酸鈉4 %、磷酸氫二鉀2 %、硫酸鎂0. 05 %、硫酸錳 0. 05%，上述各組分為質(zhì)量百分含量，Tween-801ml/L，溶劑為水。
[0014] 進(jìn)一步地，一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基的PH值為6. 8。
[0015] 進(jìn)一步地，一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基，所用乳酸菌為植物乳酸桿 菌。
[0016] 用上述所描述的乳酸菌培養(yǎng)基來培養(yǎng)乳酸菌生產(chǎn)共輒亞油酸的方法，依次包括如 下步驟：
[0017] (1)菊芋浸汁的制備：準(zhǔn)確稱量l〇〇〇g菊芋，預(yù)煮，然后加水進(jìn)行榨汁，再加水定容 至1000ml，在115°C下滅菌10分鐘，冷卻備用。
[0018] (2)培養(yǎng)基配制：按照上述所述的培養(yǎng)基成分的含量，準(zhǔn)確稱取菊芋浸汁、葡萄 糖、酵母浸出物、乙酸鈉、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硫酸錳，Tween-80,加入1L蒸餾水，充分?jǐn)?拌，至各組分完全溶解，然后調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值為6. 8,在115°C滅菌20min后待用。
[0019] (3)發(fā)酵培養(yǎng)：取步驟⑵配置好的培養(yǎng)基100ml倒入容量為250ml的三角瓶中， 然后將培養(yǎng)好的種子液以1% (v/v)的接種量接種到三角瓶中的培養(yǎng)基中，39°C靜置培養(yǎng) 36h，測定共輒亞油酸的含量。
[0020] 本發(fā)明的有益效果是：
[0021] (1)本發(fā)明利用菊芋作為乳酸菌發(fā)酵生產(chǎn)亞油酸培養(yǎng)基的主要營養(yǎng)物質(zhì)，在葡 萄糖、酵母浸出物和乙酸鈉的協(xié)同作用下，不僅可以滿足乳酸菌生長的基本營養(yǎng)需求，而 且提高了亞油酸的活力，使得植物乳酸桿菌中共輒亞油酸的產(chǎn)量相對于現(xiàn)有技術(shù)提高了 39. 6%。
[0022] (2)本發(fā)明在MRS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，用菊芋代替MRS培養(yǎng)基中的牛肉膏、蛋白胨、梓 檬酸銨等營養(yǎng)物質(zhì)，選用經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的無機(jī)氮源，降低了生產(chǎn)成本。
【附圖說明】：
[0023] 圖1 :菊芋浸汁的質(zhì)量百分含量對共輒亞油酸含量的影響；
[0024] 圖2:葡萄糖的質(zhì)量百分含量對共輒亞油酸含量的影響；
[0025] 圖3 :酵母浸出物的質(zhì)量百分含量對共輒亞油酸含量的影響；
[0026] 圖4:乙酸鈉的質(zhì)量百分含量對共輒亞油酸含量的影響。
【具體實(shí)施方式】：
[0027] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)一步說明。
[0028] 實(shí)施例1
[0029] 本實(shí)施例的一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基包括：菊芋浸汁6-14%，葡 糖糖3 %，酵母浸出物3 %，乙酸鈉4%，磷酸二氫鉀2 %，硫酸鎂0. 05 %，硫酸錳0. 05 %，上 述各組分為質(zhì)量百分含量，Tween-801ml/L，培養(yǎng)基的PH值為6. 8。
[0030] 用上述培養(yǎng)基來培養(yǎng)乳酸菌生產(chǎn)共輒亞油酸的方法，依次包括如下步驟：
[0031] (1)菊芋浸汁的制備：準(zhǔn)確稱量l〇〇〇g菊芋，預(yù)煮，然后加水進(jìn)行榨汁，再加水定容 至1000ml，在115°C下滅菌10分鐘，冷卻備用。
[0032] (2)培養(yǎng)基配制：按質(zhì)量百分含量，準(zhǔn)確稱取菊芋浸汁6-14%、葡萄糖3%、酵母浸 出物3 %、乙酸鈉4%、磷酸氫二鉀2 %、硫酸鎂0. 05 %、硫酸錳0. 05 %，Tween-80lml/L，加入 1L蒸餾水，充分?jǐn)嚢?，至各組分完全溶解，然后調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值為6. 8,在115°C滅菌20min 后待用。
[0033] (3)發(fā)酵培養(yǎng)：取步驟⑵配置好的培養(yǎng)基100ml倒入容量為250ml的三角瓶中， 然后將培養(yǎng)好的種子液以1% (v/v)的接種量接種到三角瓶中的培養(yǎng)基中，39°C靜置培養(yǎng) 36h，測定共輒亞油酸的含量。
[0034] 本實(shí)施例以菊芋浸汁為單因素變量，研究菊芋浸汁的加入量對共輒亞油酸含量的 影響，菊芋浸汁單因素變量實(shí)驗(yàn)因素如表1所示，菊芋浸汁對共輒亞油酸含量的影響如圖1 所示，隨著培養(yǎng)基菊芋浸汁質(zhì)量百分含量的不斷增大，共輒亞油酸的含量先增加后減少，培 養(yǎng)基中菊芋浸汁質(zhì)量百分含量為10 %時(shí)共輒亞油酸的含量較高。
[0035] 表1 :以菊芋浸汁為單因素變量的實(shí)驗(yàn)因素
[0036]
[0037] 實(shí)施例2
[0038] 本實(shí)施例的一種用于生產(chǎn)共輒亞油酸的乳酸菌培養(yǎng)基包括：菊芋浸汁10%，葡糖 0. 5-3. 5%，酵母浸出物3%，乙酸鈉4%，磷酸二氫鉀2%，硫酸鎂0. 05%，硫酸錳0. 05%，以 上各組分含量均為百分含量，Tween-801ml/L，培養(yǎng)基的PH值為6. 8。
[0039] 用上述培養(yǎng)基來培養(yǎng)乳酸菌生產(chǎn)共輒亞油酸的方法，依次包括如下步驟：
[0040] (1)菊芋浸汁的制備：準(zhǔn)確稱量l〇〇〇g菊芋，預(yù)煮，然后加水進(jìn)行榨汁，再加水定容 至1000ml，在115°C下滅菌10分鐘，冷卻備用。
[0041] (2)培養(yǎng)基配制：按照質(zhì)量百分含量，準(zhǔn)確稱取菊芋浸汁10%、葡萄糖0.5-3. 5%、 酵母浸出物3 %、乙酸鈉4%、磷酸氫二鉀2 %、硫酸鎂0. 05 %、硫酸錳0. 05 %，以上各組分含 量均為百分含量，Tween-801ml/L，加入1L蒸餾水，充分?jǐn)嚢?，至各組分完全溶解，然后調(diào)節(jié) 培養(yǎng)基pH值為6. 8,在115°C滅菌20min后待用。
[0042] (3)發(fā)酵培養(yǎng)：取步驟⑵配置好的培養(yǎng)基100ml倒入容量為250ml的三角瓶中， 然后將培養(yǎng)好的種子液以1% (v/v)的接種量接種到三角瓶中的培養(yǎng)基中，39°C靜置培養(yǎng) 36h，測定共輒亞油酸的含量。
[0043] 本實(shí)施例與實(shí)施例1不同的是，在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上，菊芋浸汁質(zhì)量百分含量為 10 %時(shí)，以葡萄糖為單一因素變量，研究葡萄糖的加入量對共輒亞油酸，葡萄糖單因素變量 實(shí)驗(yàn)因素如表2所示，葡萄糖對共輒亞油酸含量的影響如圖2所示。隨著培養(yǎng)基中葡萄糖質(zhì) 量百分含量的增加，共輒亞油酸的含量先增高后降低，培養(yǎng)基中葡萄糖質(zhì)量百分含量為2% 時(shí)，共輒亞油酸的含量較高。
[0044] 表2:以葡萄糖為單