br>[0129] 1.試驗(yàn)菌種；W本發(fā)明實(shí)施例2制備的液體菌種和市售的"龍海3號(hào)"液體菌種為 試驗(yàn)菌種，分為試驗(yàn)組和對(duì)照組；
[0130] 2.接種方法：試驗(yàn)組和對(duì)照組W相同的接種量和接種密度采用常規(guī)方法接種，分 別接種2000瓶；
[0131] 3.生產(chǎn)管理：試驗(yàn)組和對(duì)照組采用同樣的管理方法
[0132] 3.1發(fā)菌管理
[0133] 接種后將菌瓶放在恒溫培養(yǎng)室內(nèi)，避光培養(yǎng)。溫度控制在23°C，相對(duì)濕度70%~ 75%。此階段用于栽培料中的養(yǎng)分完全分解和積累。發(fā)菌期管理的關(guān)鍵是保溫、保濕，前期 如果溫度過低，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，會(huì)降低菌種活力，菌絲生產(chǎn)速度減慢。所有菌瓶菌絲濃白后 再持續(xù)培養(yǎng)15d，使養(yǎng)分徹底分解，菌絲達(dá)到生理成熟。
[0134] 3. 2開瓶、搔菌
[01巧]菌瓶后熟期過后，按常規(guī)方法進(jìn)行開瓶、搔菌處理。搔菌過程中，液體菌種搔菌時(shí) 去掉表面薄薄一層即可。搔菌完成后將菌瓶移入出茹房，菌瓶倒置，使菌絲恢復(fù)生長(zhǎng)。待 菌絲恢復(fù)后，溫度控制在14°C~16°C，相對(duì)濕度為90~95%，光照500~8(K)Lx，C〇2濃度 600~1500ppm，待現(xiàn)蕾出茹。
[0136] 3. 3子實(shí)體生長(zhǎng)管理
[0137] 溫度控制在15~18?？諝鉂穸缺３衷?5%~90%，0)2濃度在1500~1800口口111 之間，子實(shí)體生長(zhǎng)迅速。當(dāng)茹蓋基本展開，抱子尚未彈射時(shí)采收一潮茹。
[0138] 4.質(zhì)量及產(chǎn)量指標(biāo)測(cè)定
[0139] 觀察記錄試驗(yàn)組和對(duì)照組栽培瓶的菌絲濃度、菌絲顏色、發(fā)菌時(shí)間、雜菌感染狀 況，觀察比較子實(shí)體性狀，測(cè)量子實(shí)體菌柄長(zhǎng)度、菌蓋大小和菌柄直徑、單瓶產(chǎn)量，并統(tǒng)計(jì)計(jì) 算雜菌感染率、一級(jí)茹率和生物轉(zhuǎn)化率，結(jié)果如表1-3 ;
[0140] 生物學(xué)轉(zhuǎn)化率（％ )=子實(shí)體鮮品產(chǎn)量（g)/培養(yǎng)料干重（g)X100%
[0141]表 1
[0142]

[0143] W上結(jié)果表明；本發(fā)明杏鮑茹液體菌種健壯、活力高，生長(zhǎng)速度快，菌絲產(chǎn)量和質(zhì) 量高，抗雜菌能力強(qiáng)，與對(duì)照組相比發(fā)菌時(shí)間縮短22. 22%，雜菌感染率降低96. 67%。
[0144] 表 2
[0145]
[014^_W上結(jié)果表明；本發(fā)明杏鮑茹液體菌種栽培后的子實(shí)體菌蓋與菌柄生長(zhǎng)比例合 適，外觀優(yōu)美，質(zhì)量等級(jí)高，與對(duì)照組相比一級(jí)茹率提高5%。
[0147]表 3 [01481
[0149] ~W上結(jié)果表明；本發(fā)明杏鮑茹液體菌種栽培后的子實(shí)體單憑產(chǎn)量高，生物轉(zhuǎn)化率 高，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益，更加適合工廠化、規(guī)?；耘?。與對(duì)照組相比，生物轉(zhuǎn)化率提高 34. 79%。
[0150] 同時(shí)，本發(fā)明杏鮑茹液體菌種菌絲球密度高為5. 5X105個(gè)/I，市售杏鮑茹液體菌 種菌絲球密度最高為2. 7X105個(gè)/I，與對(duì)照組相比，其生產(chǎn)能力為市售杏鮑茹液體菌種2 倍W上，體現(xiàn)了較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
[0151] 需要說明的是；本發(fā)明實(shí)施例3-7制備的鮑茹液體菌種同樣具有上述實(shí)驗(yàn)效果， 各實(shí)施例之間及與上述實(shí)驗(yàn)效果差異性不大。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種的發(fā)酵方法，其特征在于，包括如下步驟：將 保存的杏鮑菇斜面菌種經(jīng)平板培養(yǎng)基活化后依次經(jīng)液體種子培養(yǎng)基、搖瓶種子培養(yǎng)基和 種子罐培養(yǎng)基逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)得到種子罐種子，首先將種子罐種子以8%接種量接種于30L 發(fā)酵罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝液量15L，于30-32°C、通氣量3-5L/min恒溫發(fā)酵12-24h，然后以 0. 15-0. 25°C /min的速率降溫至18-22°C，向發(fā)酵罐中加入13-15g包被殼聚糖和900mL種 子罐種子，在通氣量6_8L/min條件下恒溫發(fā)酵10_16h，最后以0. 05-0. 15°C /min的速率升 溫至24-26°C，在通氣量5-7L/min條件下恒溫發(fā)酵45-52h即得菌絲球小且多的杏鮑菇液體 菌種； 所述包被殼聚糖的制備方法包括如下步驟：取殼聚糖加入其質(zhì)量30-50%的質(zhì)量百分 比濃度為10-12%的a-環(huán)狀糊精水溶液中，制成軟材，用10-20目篩制粒，得濕顆粒，置微 波干燥機(jī)中于功率2000W、60-80°C干燥4-6min，用10-20目篩快速整粒即得包被殼聚糖。2. 如權(quán)利要求1所述的一種菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種的發(fā)酵方法，其特征在 于，所述液體種子培養(yǎng)基組成為：葡萄糖30g/L，酵母浸出汁5g/L，蛋白胨2g/L，瓊脂2g/ L，中草藥提取物0. 1-0. 3g/L，磷酸二氫鉀0. 5g/L，硫酸鎂0. 5g/L，木肩粉0. 05-0. 15g/L， VB10.0 1g/L，余量為水，pH 值 6. 0。3. 如權(quán)利要求1所述的一種菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種的發(fā)酵方法，其特征在 于，所述搖瓶培養(yǎng)基組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取物 0? 5-1. Og/L，磷酸二氫鉀 0? 5g/L，硫酸鎂 0? 5g/L，木肩粉 0? 2-0. 4g/L，VB10.0 1g/L，余量為 水，pH 值 6.0。4. 如權(quán)利要求1所述的一種菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種的發(fā)酵方法，其特征在 于，所述種子罐培養(yǎng)基組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取物 0? 8-1. 2g/L，磷酸二氫鉀 0? 5g/L，硫酸鎂 0? 5g/L，木肩粉 0? 3-0. 5g/L，VB10.0 1g/L，余量為 水，pH 值 6.0。5. 如權(quán)利要求1所述的一種菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種的發(fā)酵方法，其特征在 于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取物 1. 5-2g/L，木肩粉 0? 6-1. 0g/L，磷酸二氫鉀 0? 5g/L，硫酸鎂 0? 5g/L，VB10.0 1g/L，余量為水， pH 值 6.0。6. 如權(quán)利要求2-5任一所述的一種菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種的發(fā)酵方法，其特 征在于，所述中草藥提取物的制備方法，包括如下步驟：按重量份數(shù)計(jì)，稱取黃芪30份，干 姜30份，陳皮30份，牛黃25份，丹皮25份，甘草20份，知母18份，金銀花18份，魚腥草17 份，赤芍15份，黃芩15份，川芎10份，當(dāng)歸8份；置盛有0. 2%碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗 機(jī)中于200W、30KHz清洗12min，瀝干，將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，置容器中均 勻混合并添加5倍重量的水，得混合物料，控制溫度80°C保持3h，接著降溫至45°C，用乳酸 調(diào)節(jié)pH值為4,在功率200W條件下進(jìn)行微波提取12min，同時(shí)在功率250W，頻率35KHz條 件下進(jìn)行超聲波輔助提?。蝗缓蠹尤牖旌衔锪峡傊亓?. 〇 %的混合酶進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào) 節(jié)pH值為6. 2,酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合 的質(zhì)量比為1:2,控制溫度至70°C保持3. 5h，過濾，得第一濾液；添加濾渣2倍重量的水，控 制溫度90°C保持2h，然后降溫至30°C，過濾，得第二濾液；將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量 比3:2合并，濾液真空濃縮后冷凍干燥、粉碎即得中草藥提取物； 所述混合酶為葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果膠酶按質(zhì)量比3:2:2:1均勻混合。7. 如權(quán)利要求2-5任一所述的一種菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種的發(fā)酵方法，其 特征在于，所述木肩粉的制備方法包括如下步驟：將無發(fā)霉、無病蟲鋸木末或廢木肩除去雜 物，置于裝有質(zhì)量百分比濃度〇. 5%的碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機(jī)中于200W、30KHz清洗 lOmin，沖洗、瀝干，放入蒸汽Il中于0. 3-0. 4MPa蒸煮20-30min,取出，瀝干，與植物油按質(zhì) 量比100:1均勻混合，然后將混合物置微波干燥機(jī)于2000W、120°C微波輻照5min，最后超微 粉碎至粒徑0.3-0. 5_，密封包裝即得木肩粉。8. 如權(quán)利要求7所述的一種菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種的發(fā)酵方法，其特征在 于，微波干燥時(shí)微波福照IOs,停留10s。9. 如權(quán)利要求1-8任一所述的發(fā)酵方法制得的菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種。10. 如權(quán)利要求9所述的菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種在杏鮑菇栽培中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種及其發(fā)酵方法，屬于杏鮑菇栽培技術(shù)領(lǐng)域，在液體種子、搖瓶種子、種子罐種子及發(fā)酵罐液體菌種各階段培養(yǎng)基中科學(xué)復(fù)配可提高菌種抗冷、熱應(yīng)激性、免疫性和抗雜菌能力的中草藥提取物，同時(shí)科學(xué)復(fù)配了既具有原料適應(yīng)性，又具有消泡劑功能的木屑粉，并且采用追加接種和分段變溫發(fā)酵的方式，縮短了菌種菌齡及增殖代數(shù)差距，適時(shí)流加包被后的具有特殊功能的殼聚糖，培養(yǎng)出發(fā)酵菌絲粗壯、活性高、菌絲球直徑小、密度大、分布均勻的杏鮑菇液體菌種，其菌絲球密度為4.5-5.5ⅹ105個(gè)/L，菌絲球直徑為0.5-0.7mm，菌絲球干重為90-100g/L，萌發(fā)時(shí)間為4-5h，胞外多糖為3.0-3.5g/L。
【IPC分類】A01G1/04, C12N1/14
【公開號(hào)】CN104988070
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510316742
【發(fā)明人】李建樹
【申請(qǐng)人】天津中天精科科技有限公司, 李建樹
【公開日】2015年10月21日
【申請(qǐng)日】2015年6月11日