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一種菌絲球小且多的杏鮑菇液體菌種及其發(fā)酵方法_3

文檔序號:9270924閱讀:來源:國知局
著降溫至45°C,用乳酸 調(diào)節(jié)抑值為4,在功率200W條件下進行微波提取12min,同時在功率250W,頻率35KHZ條 件下進行超聲波輔助提?。蝗缓蠹尤牖旌衔锪峡傊亓?. 0 %的混合酶進行酶解,用乳酸調(diào) 節(jié)抑值為6. 2,酶解化,最后添加混合物料2倍重量己醇和丙醇的混合物,己醇和丙醇混合 的質(zhì)量比為1:2,控制溫度至70°C保持3.化,過濾,得第一濾液;添加濾渣2倍重量的水,控 制溫度90°C保持化,然后降溫至30°C,過濾,得第二濾液;將第一濾液和第二濾液按照質(zhì)量 比3:2合并,濾液真空濃縮后冷凍干燥、粉碎即得中草藥提取物;
[0化4] 所述混合酶為葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果膠酶按質(zhì)量比3:2:2:1均勻混 合。
[0化5] 2.木屑粉的制備;
[0化6] 所述木屑粉的制備方法,包括如下步驟:將無發(fā)霉、無病蟲銀木末或廢木屑除去雜 物,置于裝有質(zhì)量百分比濃度0. 5%的碳酸氨鋼溶液的超聲波清洗機中于200W、30KHz清 洗lOmin,沖洗、漸干,放入蒸汽蓋中于0. 35MPa蒸煮25min,取出,漸干,與植物油按質(zhì)量比 100:1均勻混合,然后將混合物置微波干燥機于2000W、120°C微波福照5min,其中微波福照 10s,停留10s,最后超微粉碎至粒徑0.4mm,密封包裝即得木屑粉。
[0化7] 3.包被殼聚糖的制備;
[0化引所述包被殼聚糖的制備方法,包括如下步驟;取殼聚糖加入其質(zhì)量40%的質(zhì)量百 分比濃度為11%的a-環(huán)狀糊精水溶液中,制成軟材,用20目篩制粒,得濕顆粒,置微波干 燥機中于功率2000W、70°C干燥5min,用20目篩快速整粒即得包被殼聚糖。
[0059] 下述實施例2-7中所使用的中草藥提取物、木屑粉及包被殼聚糖均為實施例1制 備,杏鮑茹菌種為福建省潭州市龍海食用菌研究所提供的"龍海3號",其它原料均為市購。
[0060] 實施例2
[0061] 一種菌絲球小且多的杏鮑茹液體菌種的發(fā)酵方法,包括如下步驟:
[0062] 1)取保存好的杏鮑茹斜面菌種0.2cm2的菌種塊2塊接種于平板培養(yǎng)基進行活化, 25°C恒溫培養(yǎng)10天,如此活化2次,得平板種子;
[0063] 2)將平板種子用直徑為0.5cm的打孔器截取0.2cm2的菌種塊3塊接入250mLS角 瓶中,液體種子培養(yǎng)基裝液量為lOOmU于25°C恒溫培養(yǎng)2天,然后放入恒溫搖床中,25°C、 10化/min振蕩培養(yǎng)3天得液體種子;
[0064] 如將液體種子W10 %的接種量接種于500血搖瓶中,搖瓶培養(yǎng)基裝液量250mL,于 25°C、150r/min振蕩恒溫培養(yǎng)4天得搖瓶種子;
[0065] 4)將搖瓶種子W10%的接種量接種于化種子罐中,種子罐培養(yǎng)基裝液量化,于 25°C、通氣量化/min條件下恒溫培養(yǎng)4天得種子罐種子;
[0066] 5)首先將種子罐種子W8%接種量接種于3化發(fā)酵罐,發(fā)酵培養(yǎng)基裝液量15L于 3rC、通氣量化/min恒溫發(fā)酵1她,然后W0. 2°C/min速率降溫至20°C,向發(fā)酵罐中加入 14g包被殼聚糖和900血種子罐種子,在通氣量化/min條件下恒溫發(fā)酵13h,最后W0.rC/ min速率升溫至25°C,在通氣量化/min條件下恒溫發(fā)酵4她即得菌絲球小且多的杏鮑茹液 體菌種;
[0067] 所述平板培養(yǎng)基組成為;馬鈴馨200g/l,葡萄糖20g/l,蛋白腺5g/l,磯酸二氨鐘 3g/L,硫酸儀 1. 5g/l,瓊脂 20g/L,VBi〇. 02g/L,余量為水,抑值 6. 0 ;
[0068] 所述液體種子培養(yǎng)基組成為;葡萄糖30g/l,酵母浸出汁5g/l,蛋白腺2g/l,瓊脂 2g/l,中草藥提取物0. 2g/l,磯酸二氨鐘0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0.Ig/L,VBi〇.Olg/ L,余量為水,抑值6.0 ;
[0069] 所述搖瓶培養(yǎng)基組成為:黃豆餅粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草藥提取 物0. 8g/l,磯酸二氨鐘0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 3g/L,VBi〇.Olg/l,余量為水,抑值 6. 0 ;
[0070] 所述種子罐培養(yǎng)基組成為;黃豆餅粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草藥提 取物1.Og/l,磯酸二氨鐘0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 4g/L,VBi〇.Olg/l,余量為水,pH 值 6. 0 ;
[0071] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為;黃豆餅粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草藥提 取物1. 8g/l,木屑粉0. 8g/l,磯酸二氨鐘0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/L,VBi〇.Olg/l,余量為水,pH 值 6. 0 ;
[0072] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法為;按照培養(yǎng)基配方準確稱量各原料,首先取黃豆餅 粉質(zhì)量5倍的水,用乳酸調(diào)節(jié)抑值為5. 5,加入加/g黃豆餅粉的耐高溫a-淀粉酶,邊攬 拌邊加入黃豆餅粉,升溫至93°C,保溫,液化12min,然后降溫至55°C,保溫,邊攬拌邊加入 40u/g黃豆餅粉的糖化酶和30u/g黃豆餅粉的蛋白酶水解25min,邊攬拌邊加入剩余水和其 它原料,均勻混合,調(diào)整抑值為6. 0,121°C滅菌40min即得發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0073] 經(jīng)上述方法制備的菌絲球小且多的杏鮑茹液體菌種菌絲球密度為5. 5X105個/ L菌絲球直徑為0. 5mm,菌絲球干重為lOOg/l,胞外多糖為3. 5g/L。
[0074] 實施例3
[0075] 一種菌絲球小且多的杏鮑茹液體菌種的發(fā)酵方法,包括如下步驟:
[0076] 步驟1)至4)同實施例2 ;
[0077] 5)首先將種子罐種子W8%接種量接種于3化發(fā)酵罐,發(fā)酵培養(yǎng)基裝液量15L于 30°C、通氣量化/min恒溫發(fā)酵12h,然后W0. 15°C/min的速率降溫至18°C,向發(fā)酵罐中 加入13g包被殼聚糖和900mL種子罐種子,在通氣量化/min條件下恒溫發(fā)酵lOh,最后W 0. 05°C/min的速率升溫至24°C,在通氣量化/min條件下恒溫發(fā)酵45h即得菌絲球小且多 的杏鮑茹液體菌種;
[007引所述平板培養(yǎng)基組成同實施例2 ;
[0079] 所述液體種子培養(yǎng)基組成為;葡萄糖30g/l,酵母浸出汁5g/l,蛋白腺2g/L, 瓊脂2g/l,中草藥提取物0.Ig/l,磯酸二氨鐘0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 05g/l,VBi〇.Olg/L,余量為水,抑值6. 0 ;
[0080] 所述搖瓶培養(yǎng)基組成為:黃豆餅粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草藥提取 物0. 5g/l,磯酸二氨鐘0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 2g/L,VBi〇.Olg/L,余量為水,抑值 6. 0 ;
[0081] 所述種子罐培養(yǎng)基組成為;黃豆餅粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草藥提 取物0. 8g/l,磯酸二氨鐘0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 3g/L,VBi〇.Olg/l,余量為水,pH 值 6. 0 ;
[0082] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為;黃豆餅粉60g/l,葡萄糖lOg/l,蛋白腺5g/l,中草藥提 取物1. 5g/l,木屑粉0. 6g/l,磯酸二氨鐘0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/L,VBi〇.Olg/l,余量為水,pH 值 6. 0 ;
[0083] 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法為;按照培養(yǎng)基配方準確稱量各原料,首先取黃豆餅 粉質(zhì)量4倍的水,用乳酸調(diào)節(jié)抑值為5,加入加/g黃豆餅粉的耐高溫a-淀粉酶,邊攬拌邊 加入黃豆餅粉,升溫至90°C,保溫,液化lOmin,然后降溫至50°C,保溫,邊攬拌邊加入40u/ g黃豆餅粉的糖化酶和30u/g黃豆餅粉的蛋白酶水解20min,邊攬拌邊加入剩余水和其它原 料,均勻混合,調(diào)整抑值為6. 0,123°C滅菌30min即得發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0084] 經(jīng)上述方法制備的菌絲球小且多的杏鮑茹液體菌種菌絲球密度為5.0X105個/ L菌絲球直徑為0. 6mm,菌絲球干重為96g/l,胞外多糖為3. 2g/L。
[0085] 實施例4
[0086] 一種菌絲球小且多的杏鮑茹液體菌種的發(fā)酵方法,包括如下步驟:
[0087] 步驟1)至4)同實施例2 ;
[00能]5)首先將種子罐種子W8%接種量接種于3化發(fā)酵罐,發(fā)酵培養(yǎng)基裝液量15L于 32°C、通氣量化/min恒溫發(fā)酵2化,然后W0. 25°C/min的速率降溫至22 °C,向發(fā)酵罐中 加入15g包被殼聚糖和900mL種子罐種子,在通氣量化/min條件下恒溫發(fā)酵16h,最后W 0. 15°C/min的速率升溫至26°C,在通氣量化/min條件下恒溫發(fā)酵52h即得菌絲球小且多 的杏鮑茹液體菌種;
[0089] 所述平板培養(yǎng)基組成同實施例2 ;
[0090] 所述液體種子培養(yǎng)基組成為;葡萄糖30g/l,酵母浸出汁5g/l,蛋白腺2g/L, 瓊脂2g/l,中草藥提取物0. 3g/l,磯酸二氨鐘0. 5g/l,硫酸儀0. 5g/l,木屑粉0. 15g/l, VBi〇.Olg/L,余量為水,抑值6. 0 ;
[0091] 所述搖
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