一種褐紅木霉及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，更具體地，設(shè)及一種褐紅木霉及其在植物病害生物防治 領(lǐng)域的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 病原物是影響植物生長發(fā)育導(dǎo)致作物減產(chǎn)的一大"殺手"，自波爾多液發(fā)明至今， 化學(xué)防控一直是控制植物病害發(fā)生、流行、為害、成災(zāi)的最主要的措施；然而多次大量地施 藥增加了化學(xué)農(nóng)藥造成環(huán)境污染的風(fēng)險，因此，利用生物物種之間的相互作用進(jìn)行病害的 生物防治已經(jīng)成為植物病害防治的發(fā)展方向。
[0003] 自1932年Weindling首次發(fā)現(xiàn)木素木霉（Trichodermalignorum)能夠寄生某些 植物植病菌并降低其危害程度W來，相關(guān)研究進(jìn)展加速。據(jù)不完全資料統(tǒng)計，木霉屬至少對 18個屬29種植病菌具有不同程度的括抗作用。由于木霉的廣泛適應(yīng)性、廣譜性及多機(jī)制 性，長期W來，一直是植病生物防治學(xué)家研究的重點(diǎn)對象，已經(jīng)有不少成功應(yīng)用的案例。近 年來，隨著生物化學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，多種商品化的木霉制劑相繼研發(fā)并推廣應(yīng) 用，使得木霉在植物病害生物防治領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用，因此，深入發(fā)掘可利用的木霉 屬新種具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種褐紅木霉，可重寄生植物病原菌（W下簡稱植病菌）灰葡萄抱、 核盤菌、瓜果腐霉和立枯絲核菌，還可產(chǎn)生非揮發(fā)性物質(zhì)抑制灰葡萄抱、核盤菌、瓜果腐霉、 辣椒疫霉和立枯絲核菌，具有植物病害防控的用途。
[0005] 本發(fā)明提供的褐紅木霉（Trichodermarufobrunneum)P-T8155是木霉屬的一個 新種，該種已于2015年4月1日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、 (專利菌種），保藏編號為CGMCCNo. 10646。保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院 3號。
[0006] 所述的褐紅木霉P-T8155分離自吉林蛟河前進(jìn)林場（海拔450m)的腐木上，該 菌的分類學(xué)地位；真菌界（I^ungi)，子囊菌口（Ascomycota)，糞殼綱（Sordariomycetes)，肉 座菌目（Hypocreales)，肉座菌科（Hypocreaceae)，木霉屬（Trichoderma)。
[0007] 本發(fā)明所述的褐紅木霉P-T 8155的分生抱子或菌絲體。
[000引本發(fā)明所述的褐紅木霉P-T8155在抑制灰葡萄抱、核盤菌、瓜果腐霉、辣椒疫霉 和立枯絲核菌上的用途。
[0009] 本發(fā)明所述的褐紅木霉P-T 8155在重寄生灰葡萄抱、核盤菌、瓜果腐霉和立枯絲 核菌上的用途。
[0010] 本發(fā)明還提供一種產(chǎn)品，其活性成分為本發(fā)明所述的褐紅木霉P-T8155,所述產(chǎn) 品具有如下至少一種用途：
[0011] 1)抑制灰葡萄抱、核盤菌、瓜果腐霉、辣椒疫霉和立枯絲核菌上的用途；
[0012] 2)在重寄生灰葡萄抱、核盤菌、瓜果腐霉和立枯絲核菌上的用途。
[0013] 本發(fā)明提供了一種褐紅木霉P-T8155,該菌能明顯抑制灰葡萄抱、核盤菌、瓜果 腐霉、辣椒疫霉和立枯絲核菌的生長，在與該些植病菌對時培養(yǎng)的過程中，生長迅速，能有 效地競爭有限的空間和營養(yǎng)，覆蓋植病菌的菌落，產(chǎn)生大量分生抱子，同時，該菌株能明顯 重寄生于灰葡萄抱、核盤菌、瓜果腐霉和立枯絲核菌的菌絲上，迅速將其菌絲體完全降解， 另外，該菌株在生長過程中產(chǎn)生的非揮發(fā)性物質(zhì)對該幾種植病菌也具有不同程度的抑制作 用，是一個具有良好生物防治潛力的微生物資源。
【附圖說明】
[0014] 圖1褐紅木霉P-T8155的成熟子座；
[0015] 圖2褐紅木霉P-T8155的子座縱切面；
[0016] 圖3褐紅木霉P-T8155的子囊殼孔口；
[0017] 圖4褐紅木霉P-T 8155的子囊殼下層組織；
[0018] 圖5褐紅木霉P-T8155的子囊和子囊抱子；
[0019] 圖6褐紅木霉P-T8155在CMD培養(yǎng)基上25°C條件培養(yǎng)7天的菌落形態(tài)；
[0020] 圖7褐紅木霉P-T8155在PDA培養(yǎng)基上25°C條件培養(yǎng)7天的菌落形態(tài)；
[0021] 圖8褐紅木霉P-T8155在SNA培養(yǎng)基上25°C條件培養(yǎng)7天的菌落形態(tài)；
[002引圖9褐紅木霉P-T 8155的產(chǎn)抱簇；
[002引圖10褐紅木霉P-T8155的分生抱子梗；
[0024] 圖11褐紅木霉P-T 8155的分生抱子；
[0025] 圖12褐紅木霉P-T8155對五種植病菌的抑菌率圖；
[0026] 圖13褐紅木霉P-T8155在25°C條件下與灰葡萄抱對時培養(yǎng)3天菌落形態(tài)；a為 灰葡萄抱單獨(dú)培養(yǎng)的菌落形態(tài)，A為灰葡萄抱與褐紅木霉P-T8155對時培養(yǎng)形態(tài)（左側(cè)為 褐紅木霉P-T8155、右側(cè)為灰葡萄抱）；
[0027] 圖14褐紅木霉P-T8155在25°C條件下與灰葡萄抱對時培養(yǎng)30天菌落形態(tài)；a為 灰葡萄抱單獨(dú)培養(yǎng)的菌落形態(tài)，A為灰葡萄抱與褐紅木霉P-T8155對時培養(yǎng)形態(tài)（左側(cè)為 褐紅木霉P-T8155、右側(cè)為灰葡萄抱）；
[002引圖15褐紅木霉P-T8155在25°C條件下與核盤菌對時培養(yǎng)3天菌落形態(tài)；b為核 盤菌單獨(dú)培養(yǎng)的菌落形態(tài)，B為核盤菌與褐紅木霉P-T8155對時培養(yǎng)形態(tài)（左側(cè)為褐紅木 霉口-了8155、右側(cè)為核盤菌）；
[0029] 圖16褐紅木霉P-T8155在25°C條件下與核盤菌對時培養(yǎng)30天菌落形態(tài)；b為核 盤菌單獨(dú)培養(yǎng)的菌落形態(tài)，B為核盤菌與褐紅木霉P-T8155對時培養(yǎng)形態(tài)（左側(cè)為褐紅木 霉口-了8155、右側(cè)為核盤菌）；
[0030] 圖17褐紅木霉P-T8155在25°C條件下與瓜果腐霉對時培養(yǎng)3天菌落形態(tài)；C為 瓜果腐霉單獨(dú)的菌落培養(yǎng)形態(tài)，C為瓜果腐霉與褐紅木霉P-T8155對時培養(yǎng)形態(tài)（左側(cè)為 褐紅木霉P-T8155、右側(cè)為瓜果腐霉）；
[0031] 圖18褐紅木霉P-T8155在25°C條件下與瓜果腐霉對時培養(yǎng)30天菌落形態(tài)；C為 瓜果腐霉單獨(dú)的菌落培養(yǎng)形態(tài)，C為瓜果腐霉與褐紅木霉P-T8155對時培養(yǎng)形態(tài)（左側(cè)為 褐紅木霉P-T8155、右側(cè)為瓜果腐霉）；
[0032] 圖19褐紅木霉P-T8155在25°C條件下與辣椒疫霉對時培養(yǎng)3天菌落形態(tài)；d為 辣椒疫霉單獨(dú)培養(yǎng)的菌落形態(tài)，D為辣椒疫霉與褐紅木霉P-T8155對時培養(yǎng)形態(tài)（左側(cè)為 褐紅木霉P-T8155、右側(cè)為辣椒疫霉）；
[0033] 圖20褐紅木霉P-T8155在25°C條件下與辣椒疫霉對時培養(yǎng)30天菌落形態(tài)；d為 辣椒疫霉單獨(dú)培養(yǎng)的菌落形態(tài)，D為辣椒疫霉與褐紅木霉P-T8155對時培養(yǎng)形態(tài)（左側(cè)為 褐紅木霉P-T8155、右側(cè)為辣椒疫霉）；
[0034] 圖21褐紅木霉P-T8155在25°C條件下與立枯絲核菌對時培養(yǎng)3天菌落形態(tài)；e為 立枯絲核菌單獨(dú)培養(yǎng)的菌落形態(tài)，E為立枯絲核菌與褐紅木霉P-T8155對時培養(yǎng)形態(tài)（左 側(cè)為褐紅木霉P-T8155、右側(cè)為立枯絲核菌）；
[0035] 圖22褐紅木霉P-T8155在25°C條件下與立枯絲核菌對時培養(yǎng)30天菌落形態(tài)； e為立枯絲核菌單獨(dú)培養(yǎng)的菌落形態(tài)，E為立枯絲核菌與褐紅木霉P-T8155對時培養(yǎng)形態(tài) (左側(cè)為褐紅木霉P-T8155、右側(cè)為立枯絲核菌）；
[0036] 圖23褐紅木霉P-T8155對灰葡萄抱的重寄生作用圖；
[0037] 圖24褐紅木霉P-T 8155對立枯絲核菌的重寄生作用圖；
[003引圖25褐紅木霉P-T 8155對核盤菌的重寄生作用圖；
[0039] 圖26褐紅木霉P-T 8155對瓜果腐霉的重寄生作用圖；
[0040] 圖27褐紅木霉P-T8155產(chǎn)生的非揮發(fā)性物質(zhì)對灰葡萄抱的抑菌效果圖；a.為灰 葡萄抱在PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)，A為灰葡萄抱在含有褐紅木霉P-T8155產(chǎn)生的非揮發(fā)性物 質(zhì)的PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)；
[0041] 圖28褐紅木霉P-T8155產(chǎn)生的非揮發(fā)性物質(zhì)對核盤菌的抑菌效果圖；b.為核盤 菌在PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)，B為核盤菌在含有褐紅木霉P-T8155產(chǎn)生的非揮發(fā)性物質(zhì)的 PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)；
[0042] 圖29褐紅木霉P-T8155產(chǎn)生的非揮發(fā)性物質(zhì)對瓜果腐霉的抑菌效果圖；C.為瓜 果腐霉在PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)，C為瓜果腐霉在含有褐紅木霉P-T8155產(chǎn)生的非揮發(fā)性物 質(zhì)的PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)；
[0043] 圖30褐紅木霉P-T8155產(chǎn)生的非揮發(fā)性物質(zhì)對辣椒疫霉的抑菌效果圖；d.為辣 椒疫霉在PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)，D為辣椒疫霉在含有褐紅木霉P-T8155產(chǎn)生的非揮發(fā)性物 質(zhì)的PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)；
[0044] 圖31褐紅木霉P-T8155產(chǎn)生的非揮發(fā)性物質(zhì)對立枯絲核菌的抑菌效果圖；e.為 立枯絲核菌在PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)，E為立枯絲核菌在含有褐紅木霉P-T8155產(chǎn)生的非揮 發(fā)性物質(zhì)的PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)。
【具體實(shí)施方式】
[0045]W下結(jié)合附圖和實(shí)施例，對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行更加詳細(xì)地說明，W便能 夠更好地理解本發(fā)明的方案W及其各個方面的優(yōu)點(diǎn)。然而，W下描述的【具體實(shí)施方式】和實(shí) 施例僅是說明的目的，而不是對本發(fā)明的限制。
[0046] 實(shí)施例1菌株的分離與純化
[0047] 在無菌的比色皿凹槽內(nèi)滴入75 %己醇和無菌水，挑取1個成熟子座置于比色皿 中的酒精內(nèi)進(jìn)行表面消毒，經(jīng)無菌水漂洗后，用無菌綴子將子座礙碎，將含有子囊的子囊殼 挑入另一無菌比色皿中，進(jìn)一步將子囊攬碎，充分?jǐn)埌?，將懸浮液均勻涂布于水瓊脂培養(yǎng)基 上，室溫培養(yǎng)。隔一天置于解剖鏡下觀察，用無菌解剖針挑取萌發(fā)的單個抱子，轉(zhuǎn)接至含有 氨節(jié)青霉素（2mg/L)的PDA培養(yǎng)基上，置于25°C下黑暗培養(yǎng)，待木霉的子囊抱子萌發(fā)后，菌 落生成時，將培養(yǎng)物活躍生長的部分轉(zhuǎn)接至PDA試管，當(dāng)斜面長滿菌落并產(chǎn)生抱子時，置于 4°C冰箱短期保存。
[0048]實(shí)施例2菌株的物種鑒定
[0049](一）形態(tài)學(xué)鑒定：
[0050]在解剖鏡下觀察并記錄子座的形態(tài)、子座在3%KOH水溶液中的顏色變化，然后選 取成熟的子座置于冷凍切片機(jī)（金華益迪YD-1508A)上制作厚度為5 - 15ym的切片，在光 學(xué)顯微鏡下觀察并記錄子座的內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)及其在3%KOH水溶液中的顏色反應(yīng)。挑取單 個子囊殼制作壓片，觀察并記錄子囊和子囊抱子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)及其在3%KOH水溶液中的顏 色變化。
[0化^ 在25°C生長3天的菌落活躍生長部分取直徑為5mm的菌塊，將菌塊轉(zhuǎn)接到PDA、CMD和SNA3種培養(yǎng)基上，分別在15°C、25°C和30°C培養(yǎng)3天，測量菌落半徑，逐日觀察并及 時記錄菌落的形態(tài)、產(chǎn)抱結(jié)構(gòu)和分生抱子的形態(tài)及產(chǎn)生情況。
[0化引W上宏觀特征的觀察采用Zeiss化-200解剖鏡，顯微結(jié)構(gòu)的觀察采用Zeiss Axioskop2plus光學(xué)顯微鏡，并用配備的CanonG5攝像系統(tǒng)進(jìn)行拍照。
[0化3]形態(tài)學(xué)特性；子座單生或聚生，平墊狀，外觀圓形或多角形，表面平滑，中部凹陷， 孔口不可見，深紅棟色，回水后遇K0H不變色，直徑2 - 5 ( - 7)mm，高1 - 3mm。子座皮層為角 胞組織，在K0H中不