專利名稱：麥拓萊霉素的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說，是涉及一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素在制備抗病毒藥物中的用途。
背景技術(shù)：
大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是臨床中常使用的一類抗生素，它們被普遍地應(yīng)用于制備抗細菌的的藥物，并以其抗菌譜廣，抗菌效果明顯，療效確定而廣為使用，中國專利公開號1488633公開了“一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素及其制備方法”，在該項專利申請中，公開了被命名為麥拓萊霉素的一種大環(huán)內(nèi)酯化合物的結(jié)構(gòu)及制備方法，以及通過實驗證明對多種細菌有較強的抑制作用，對紅霉素耐藥的金葡菌亦有作用。
病毒是引起人體多種疾病的微生物，由于形態(tài)結(jié)構(gòu)不同于細菌，因此，用抗生素作為制備抗病毒的藥物，很少有報道。
柯薩奇病毒Coxsackievirus屬腸道病毒，人是柯薩奇病毒唯一的天然宿主，通過呼吸道和消化道傳染，接觸是其主要的感染方式。病毒進入人的口腔后，首先在口咽部或胃腸道細胞內(nèi)繁殖，然后進入局部淋巴結(jié)或血循環(huán)，再進入其他組織引起相應(yīng)的疾病。該病毒進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)后，在腦膜和/或腦組織造成炎癥性損害、血管病變。該病毒還可抑制體液免疫及細胞免疫，以后者明顯。柯薩奇病毒致病后臨床表現(xiàn)輕重不一，這與病毒的致病力及不同的機體的免疫功能有關(guān)。輕者癥狀輕微，類似感冒，如發(fā)熱、上呼吸道感染等，重者表現(xiàn)為腦膜炎、流行性肌痛、疲勞綜合征、頭暈、呼吸道感染、肺炎及腹瀉等多臟器損害，病死率高。凡急性發(fā)熱患者伴有多臟器損害時，均應(yīng)疑似柯薩奇病毒感染。有些病人第一次感染痊愈后又會有第二次感染，說明本病毒并非終生免疫，可交叉其它類型感染，治療的手段則以抗病毒為主。
關(guān)于病毒感染可導(dǎo)致心肌炎這一觀點.已經(jīng)動物實驗得到證實，特別是柯薩奇病毒B組病毒是引起病毒性心肌炎的重要病原體，有文獻報道我國長春地區(qū)病毒性心肌炎有半數(shù)以上是由柯薩奇B組病毒引起，大量資料已證實這點。
由于認識不足，柯薩奇B組病毒引起病毒腦炎或脊髓炎、腦膜腦炎報道較少，往往將頭痛、頭暈、乏力、視力下降當(dāng)作其它病因引起的癥狀而誤診或忽略，更沒有意識到柯薩奇病毒感染是一種全身性疾病，其癥狀復(fù)雜，可表現(xiàn)為多系統(tǒng)損害，并非單純心肌損害，如不及時確診出并給予治療，有些病人可能會雙目失明或致殘。
艾滋病全名為獲得性免疫缺陷綜合癥(Acquired Immune Deficiency Syndrome，簡稱AIDS)，是由人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency Virus，簡稱HIV)侵入人體后自身復(fù)制而繁殖，主要侵襲輔助T淋巴細胞，破壞免疫系統(tǒng)，最終使患者免疫功能衰竭而死亡。因此在過去20多年中，受到世界各國科學(xué)家們比其它任何感染介質(zhì)更密切的關(guān)注，對其研究已取得了突破性進展。人們對HIV復(fù)制循環(huán)過程也基本搞清，同時，還了解到HIV如何感染正常細胞并復(fù)制本身產(chǎn)生新的感染性病毒粒子的詳細過程。研究發(fā)現(xiàn)HIV的復(fù)制過程是一個由細胞和病毒編碼蛋白質(zhì)之間相互作用和高度調(diào)節(jié)的過程。這些蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)的許多過程對HIV來講可能是獨特的。由于全球HIV感染人數(shù)已近6000萬之多，故世界抗病毒藥物需求呈現(xiàn)前所未有的堅挺。近年來世界抗病毒藥物市場的年增長率超過1％，其中絕大部分為抗HIV/AIDS藥物。
以病毒繁殖過程所需的特異性酶作為靶點，通過改變底物的結(jié)構(gòu)，選擇性抑制這些特異性酶或作為特異性酶的底物摻入病毒復(fù)制的基因組，使病毒RNA鏈終止延伸，可以達到抗病毒的目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供麥拓萊霉素的用途。
本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下麥拓萊霉素 的用途，所述用途是在制備抗病毒藥物中的用途。
所述病毒是柯薩奇B6病毒。
所述病毒是人類免疫缺陷病毒。
臨床中由于對病毒類疾病缺乏有針對性的藥物，為了能夠抑制病毒的復(fù)制，常常加大廣譜抗病毒類藥物的劑量，這又導(dǎo)致病毒的變種，更加難以有效控制。另外。隨著對艾滋病病毒傳播途徑和治療的深入研究，發(fā)現(xiàn)HIV蛋白酶是艾滋病病毒傳播中的一個關(guān)鍵的步驟，因此具有抗HIV蛋白酶的化合物，就能夠有效的抑制艾滋病病毒復(fù)制，從而達到治療的作用。本發(fā)明的實驗結(jié)果顯示，麥拓萊霉素對柯薩奇B6病毒具有很好的抑制作用，其抑制效果優(yōu)于現(xiàn)代臨床中常用的病毒唑，安全指數(shù)亦高于病毒唑，因此，抗柯薩奇病毒是麥拓萊霉素具有的重要用途之一。其抗HIV蛋白酶的作用亦具有一定的活性，有希望成為抗HIV病毒類藥物之一。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
實施例1化合物(I)的制備 (1)菌種培養(yǎng)發(fā)酵①培養(yǎng)基(g/l)的制備取葡萄糖5.0g、可溶性淀粉40.0g、蛋白胨4.0g、玉米漿2.0ml g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、加水至1000ml在pH6.0，121℃滅菌15min；②發(fā)酵把天津市英捷科技發(fā)展有限公司出售的藤黃灰鏈霉菌菌株(streptomyces luteogriseus via.099)加入滅菌后的培養(yǎng)基中，加菌種重量為發(fā)酵培養(yǎng)基重量的10％，搖瓶發(fā)酵，160轉(zhuǎn)/分，28℃，發(fā)酵4天；(2)發(fā)酵液處理①發(fā)酵液經(jīng)4800轉(zhuǎn)/分，離心，20分；②以等體積乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯部分經(jīng)2∶1體積的水反萃，去除色素雜質(zhì)；③回收乙酸乙酯，得到具有活性部位的褐色油狀物；④進行硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇1∶0到0∶1梯度洗脫，收集二氯甲烷∶甲醇為11∶1的活性組分，回收溶劑，得到粗品一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素；⑤將粗品一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素經(jīng)過制備高效液相純化，收集活性峰段，冷凍干燥，得到一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素純品。
每2升的發(fā)酵液可得到0.05g的目的產(chǎn)物。
如上所得的本發(fā)明化合物，具有下述理化及生物性質(zhì)1.性狀淡黃色結(jié)晶或類白色粉末。
2.熔點123±1℃(乙睛水體系為干燥前溶劑)。
3.分子量分子量為600.3047。
4.分子式分子式為C32H44N2O9。
5.元素分析C 63.98％、H 7.38％、N 4.66％、O 23.97％。
6.紫外吸收光譜UVλmax252,337(乙醇溶劑)證明分子結(jié)構(gòu)中有α，β不飽和共軛，二烯體系。
7.紅外吸收光譜(KBr)IR(3590，3421，2990，2932，1704，1622，1568，1444，1398，1297，1239，1206，982，933，750cm-1wavelength)證明分子結(jié)構(gòu)中有羥基，羰基，酰胺基，順式雙鍵，反式雙鍵，氧雜三元環(huán)，及氧雜六元環(huán)等。
1H譜、13C譜、HSQC(異核單量子相關(guān))、HMBC(異核多鍵相關(guān))、NOESY差譜、H-H COSY(同核位移相關(guān)譜)、快原子轟擊高分辨質(zhì)譜分析(HRFAB-MS)M+Na＝623.2930。證實分子量為600.3047；分子式為C32H44N2O9鑒定該化合物為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，該抗生素可與多種酸成鹽，如鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等。
實施例2麥拓萊霉素(maituolaimycin)抗柯薩奇病毒(Coxsackievirus)B6病毒(COXB6)活性測試以Vero(非洲綠猴腎)細胞為病毒宿主，測定樣品抗柯薩奇B6病毒引起Vero細胞病變程度。病毒唑(PBV，浙江康裕藥業(yè)有限公司，批號(960501)陽性對照藥，樣品臨用前溶于二甲基亞砜，配成適當(dāng)濃度，用培養(yǎng)液作3倍稀釋，共8個稀釋度。COXB6細胞種96孔培養(yǎng)板，24小時后分別感染柯薩奇B6病毒由ATCC提供，1/210-4(233TCID50)的感染量，吸附2小時，棄病毒液，按以上稀釋度加入樣品麥拓萊霉素，同時設(shè)細胞對照孔和病毒對照孔，36小時觀察細胞病變程度(CPE)，用Reed-Muench法分別計算麥拓萊霉素對柯薩奇B6病毒的半數(shù)抑制濃度(IC50)。結(jié)果顯示麥拓萊霉素(maituolaimycin)具有很強的抗病毒作用，IC50為231.1μg/ml，抗病毒活性明顯高于陽性對照藥病毒唑，IC50為569.3。而且其安全指數(shù)SI為2.88，也高于對照藥物病毒唑，病毒唑的SI為1.75(見表1)。(上海國家新藥篩選中心測試)表1麥拓萊霉素抗Coxsackievirus B6病毒(COXB6)活性篩選樣品編號 TC50(μg/ml) 實驗初始濃度(μg/ml)IC50(μg/ml)SImaituolaimycin 666.7 1000231.1 2.88RBV ＞1000 1000569.3 ＞1.75TC50半數(shù)有毒濃度；IC50對病毒半數(shù)抑制濃度；SI＝TC50/IC50。
實施例3
抗HIV-1蛋白酶作用測試結(jié)果HIV-1蛋白酶在最佳反應(yīng)條件和反應(yīng)體系中可將熒光標(biāo)記底物切開，檢測酶反應(yīng)產(chǎn)物中熒光強度來反映酶的活性。在反應(yīng)體系中加入麥拓萊霉素樣品可用于篩選該酶的抑制劑。選取印地那韋(indinavir)為陽性對照藥(葛蘭素史克公司提供)。麥拓萊霉素樣品臨用前溶于DMSO，配成適當(dāng)濃度，2倍稀釋，各5個稀釋度。樣品稀釋后加入含有熒光標(biāo)記底物的反應(yīng)緩沖液中，并加入基因工程靶酶(-85℃保存的HIV-1 PR)，在最佳反應(yīng)條件下孵育，用FLUO star Galaxy熒光儀測定熒光值。(見表2)(上海國家新藥篩選中心測試)表2 麥拓萊霉素的體外抗HIV-1 PR活性篩選對照 250μg/ml 50μg/ml10μg/ml 0.4μg/mlIC50maituolaimycin75.8-1.70.1 12.4 39.8μg/mla陽性對照Indinavir(印地那韋)95.1(nM)選自GSK(葛蘭素史克公司)
權(quán)利要求
1.麥拓萊霉素 的用途，其特征是所述用途是在制備抗病毒藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麥拓萊霉素的用途，其特征是所述病毒是柯薩奇B6病毒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的麥拓萊霉素的用途，其特征是所述病毒是人類免疫缺陷病毒。
全文摘要
本發(fā)明公開一種麥拓萊霉素的用途，所述用途是在制備抗病毒藥物中的用途，所述病毒是柯薩奇B6病毒或人類免疫缺陷病毒，本發(fā)明的實驗結(jié)果顯示，麥拓萊霉素對柯薩奇B6病毒具有很好的抑制作用，其抑制效果優(yōu)于現(xiàn)代臨床中常用的病毒唑，安全指數(shù)亦高于病毒唑，因此，抗柯薩奇病毒是麥拓萊霉素具有的重要用途之一，麥拓萊霉素抗人類免疫缺陷病毒蛋白酶的作用亦具有一定的活性，有希望成為抗人類免疫缺陷病毒類藥物之一。
文檔編號A61P31/00GK1583758SQ20041001954
公開日2005年2月23日 申請日期2004年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月11日
發(fā)明者元英進, 王志平, 李霞, 葛志強 申請人:天津大學(xué)