從三種高山鼠尾草植物中制備迷迭香酸化學(xué)對照品的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種迷迭香酸(Rosmarinic acid)化學(xué)對照品的制備方法，尤其涉及從三種高山鼠尾草植物中制備迷迭香酸化學(xué)對照品的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鼠尾草屬L.)是唇形科最大屬，青臧尚原上主要分布二種鼠尾草種，粘毛鼠尾草roborowskii)、甘西鼠尾草(przewalskii Maxim.)及康定鼠尾草i Salvia prattii)?，F(xiàn)代研宄表明鼠尾草植物中的化學(xué)成分主要包括酚酸類及萜類。目前，三種高山鼠尾草屬植物甘西鼠尾草、粘毛鼠尾草及康定鼠尾草藥材并未有質(zhì)控指標(biāo)成分，迷迭香酸是這三種鼠尾草屬植物中含量較高的酚酸類化合物，由于該化合物極性較大，加之在硅膠薄層色譜上拖尾嚴(yán)重，從這三種鼠尾草藥材中獲取高純度迷迭香酸對照品較為困難。為了加快高山鼠尾草屬植物的質(zhì)量評價、生產(chǎn)銷售及相關(guān)新藥的研發(fā)步伐，發(fā)展高純度迷迭香酸的高效制備方法，尤其規(guī)?；苽浼夹g(shù)顯得尤為重要。
[0003]目前，從高山鼠尾草屬植物制備酚酸類化合物的文獻未見報道，中國專利(CN1995007)報道采用提取、加入抗氧化劑或調(diào)pH至酸性靜置后過濾，濾液過聚酰胺樹脂、離子交換樹脂或大孔樹脂柱層析手段分離、然后再調(diào)PH至酸性、靜置、結(jié)晶、過濾等5~7步生產(chǎn)出純度約為90%的迷迭香酸，過程較繁瑣且損失量較大，而從甘西鼠尾草、粘毛鼠尾草及康定鼠尾草中快速獲取規(guī)?；缘闼岬闹苽溲绣澄匆娢墨I報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種工藝簡單、易規(guī)?；膹娜N高山鼠尾草植物中制備迷迭香酸化學(xué)對照品的方法。
[0005]為解決上述問題，本發(fā)明所述的從三種高山鼠尾草植物中制備迷迭香酸化學(xué)對照品的方法，包括以下步驟:
⑴微孔樹脂除雜:
按常規(guī)方法制得的棕紅色浸膏狀的粘毛鼠尾草、甘西鼠尾草或康定鼠尾草中的一種醇提物用其質(zhì)量5~10倍的體積分?jǐn)?shù)10~30%的乙醇溶液溶解，過濾得到濾液A，該濾液A上微孔樹脂柱分離，先以2~5倍柱體積的水溶液洗脫除去雜質(zhì)，然后用2~5倍柱體積、體積分?jǐn)?shù)30-80%的甲醇溶液進行臺階梯度洗脫，收集30°/『50%甲醇水洗脫物，該甲醇水洗脫物經(jīng)減壓干燥得酚酸類組分粗品；所述粘毛鼠尾草、甘西鼠尾草或康定鼠尾草中的一種醇提物與所述微孔樹脂比例為I g:10 mL ；
⑵硅膠柱富集:
將所述酚酸類組分粗品經(jīng)硅膠柱色譜分離后，用3~5倍柱體積的氯仿-甲醇-水混合溶劑洗脫，按每份500 mL收集餾分，并經(jīng)薄層色譜檢測，其中展開劑為氯仿-甲醇-水混合溶劑，顯色劑為體積濃度10%的濃硫酸乙醇溶液，合并Rf值為0.18-0.22的餾分；所述Rf值為0.18-0.22的餾分經(jīng)減壓干燥即得淡黃色粉末狀的迷迭香酸粗品； ⑶親水液相制備色譜精制:
所述迷迭香酸粗品用其質(zhì)量2~5倍的體積分?jǐn)?shù)為80°/『100%的甲醇溶液溶解，然后配制樣品濃度為100.0-150.0 mg/mL，經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾，得到濾液B，該濾液B經(jīng)親水液相制備色譜分離，經(jīng)檢測波長為330 nm的紫外檢測器檢測，收集制備色譜圖中主要的色譜峰餾分，該色譜峰餾分經(jīng)減壓干燥即得純度大于98%的白色粉末狀的對照品。
[0006]所述步驟⑴和所述步驟⑵及所述步驟⑶中的減壓干燥的條件均是指真空度為
0.06-0.09 MPa,溫度為 50-70 °C。
[0007]所述步驟⑵中娃膠柱的尺寸為30 mm~60謹(jǐn)X60謹(jǐn)~100謹(jǐn)。
[0008]所述步驟⑵中氯仿-甲醇-水混合溶劑是指將氯仿、甲醇、水按8:2:0.2-7:3:0.5體積比混合均勻而得。
[0009]所述步驟⑶中親水液相制備色譜分離的工作參數(shù)是指色譜柱柱長250 mm、直徑20mm,親水制備柱固定相為10 μ m XAmide或X1n，流動相為體積分?jǐn)?shù)80%~90%的乙腈-水溶液，進樣體積為2.0-3.0 mL，流速為15 mL/min。
[0010]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點:
1、本發(fā)明工藝簡單、回收率高。
[0011]第一步采用微孔樹脂除雜，可獲取純度約40%的迷迭香酸酚酸類組分粗品，同時，微孔樹脂具有良好的脫色效果。第二步采用硅膠柱富集，可富集到純度為75%~85%的迷迭香酸粗品；第三步采用親水液相制備色譜制備，可獲取高純度對照品，且收率較高(>90%)。
[0012]2、本發(fā)明采用的技術(shù)手段非常適宜規(guī)?；a(chǎn)。
[0013]原料要求不高，一般野生或種植的甘西鼠尾草、粘毛鼠尾草或康定鼠尾草提取物即可，易于批量備料；第一步采用微孔樹脂柱除雜，該樹脂柱可以再生循環(huán)使用，平均價格低廉，易于規(guī)?；?；第二步硅膠柱富集，填料便宜易得；第三步精制中采用親水液相制備色譜制備，為快速的等度方法，也非常適宜規(guī)模生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0014]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細(xì)的說明。
[0015]圖1為本發(fā)明實施例1迷迭香酸粗品的HPLC分析圖譜(330 nm)。
[0016]圖2為本發(fā)明實施例1迷迭香酸粗品的HPLC制備圖譜(330 nm)。
[0017]圖3為本發(fā)明實施例1迷迭香酸的親水液相制備色譜純度分析(330 nm)。
【具體實施方式】
[0018]實施例1從三種高山鼠尾草植物中制備迷迭香酸化學(xué)對照品的方法，包括以下步驟:
⑴微孔樹脂(MCI)除雜:
200.0 g按常規(guī)方法制得的棕紅色浸膏狀的粘毛鼠尾草醇提物用其質(zhì)量10倍的體積分?jǐn)?shù)10%的乙醇溶液溶解，過濾得到濾液A，該濾液A上微孔樹脂柱分離，先以5倍柱體積的水溶液洗脫除去雜質(zhì)，然后用5倍柱體積、體積分?jǐn)?shù)30%的甲醇溶液、80%甲醇溶液進行臺階梯度洗脫，收集30%甲醇水洗脫物，該甲醇水洗脫物經(jīng)真空度為0.06 MPa、溫度為70 V減壓干燥得酚酸類組分粗品36.4 go
[0019]其中:
粘毛鼠尾草醇提物與微孔樹脂比例為I g:10 mL。
[0020]⑵硅膠柱富集:
將酚酸類組分粗品經(jīng)硅膠柱色譜分離后，用5倍柱體積的氯仿-甲醇-水混合溶劑洗脫，按每份500 mL收集餾分，并經(jīng)薄層色譜檢測，其中展開劑為氯仿-甲醇-水混合溶劑，顯色劑為體積濃度10%的濃硫酸乙醇溶液，合并Rf值為0.18-0.22的餾分；Rf值為0.18-0.22的餾分經(jīng)真空度為0.06 MPa、溫度為70 °0減壓干燥即得淡黃色粉末狀的迷迭香酸粗品(16.9 g，圖 Do
[0021]其中:
娃膠柱的尺寸為30 mmX60 mm。
[0022]氯仿-甲醇-水混合溶劑是指將氯仿、甲醇、水按8:2:0.2體積比(mL / mL)混合均勻而得。
[0023]⑶親水液相制備色譜精制:
迷迭香酸粗品用其質(zhì)量2倍的體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇溶液溶解，然后配制樣品濃度為120.0 mg/mL,經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾，得到濾液B，該濾液B經(jīng)親水液相制備色譜分離，經(jīng)檢測波長為330 nm的紫外檢測器檢測，收集制備色譜圖中主要的色譜峰餾分，該色譜峰餾分經(jīng)真空度為0.06MPa、溫度為70 °0減壓干燥即得純度大于98%的白色粉末狀的對照品(參見圖2、圖3)。
[0024]其中:
親水液相制備色譜分離的工作參數(shù)是指色譜柱柱長250 mm、直徑20 mm，親水制備柱固定相為1ym XAmide,流動相為體積分?jǐn)?shù)80%的乙腈-水溶液，進樣體積為2.0 mL,流速為 15 ml ,/mi η η
[0025]實施例2從三種高山鼠尾草植物中制備迷迭香酸化學(xué)對照品的方法，包括以下步驟:
⑴微孔樹脂(MCI)除雜:
100.0 g按常規(guī)方法制得的棕紅色浸膏狀的甘西鼠尾草醇提物用其質(zhì)量5倍的體積分?jǐn)?shù)30%的乙醇