一種動物胎盤提取物的制備工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種動物胎盤提取物的制備工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 動物胎盤是畜牧養(yǎng)殖，尤其是母畜繁殖過程中的副產(chǎn)物。近年來動物胎盤的研宄 不斷增多，許多動物胎盤如羊、鹿、牦牛、奶牛等的生理活性被不斷發(fā)現(xiàn)。
[0003] 胎盤提取物是來源于動物胚胎、胎盤的一類復(fù)合活性成分，含有豐富的氨基酸、蛋 白質(zhì)、荷爾蒙、卵磷脂、多糖體、維生素、礦物元素等，其精華所在為核酸，是一種較為理想的 免疫調(diào)節(jié)劑和營養(yǎng)美容保健品，具有增強記憶、抗應(yīng)激、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、增強免疫力、防治老年 癡呆、延緩衰老、補血美容等功效，是一種安全、無毒副作用的營養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織 公布的統(tǒng)計數(shù)字，人類96%以上的疾病都是因為年老力衰或免疫問題導(dǎo)致的。胎盤提取物 雖然無法對抗老化，卻可以延緩老化的發(fā)生。
[0004] 根據(jù)目前相關(guān)研宄進展可知，胎盤提取物主要有以下幾大主要作用：①促進末梢 血液循環(huán)使皮膚的毛細血管，血液循環(huán)暢通；②促進細胞及組織呼吸，幫助構(gòu)成真皮的膠 原纖維、彈性纖維活性化；③去除自由基，增進細胞分裂；④保濕作用，豐富的透明質(zhì)酸能 保持皮膚的弱酸性，幫助保持皮膚水分，使肌膚充滿彈性和張力；⑤調(diào)整自律神經(jīng)的狀況， 輔助治療更年期障礙等自律神經(jīng)系列的疾??；⑥免疫賦活作用，改善過敏性皮膚炎等；⑦ 美顏作用，阻礙黑色素合成，祛除雀斑、老年性斑點、黃褐斑、疤痕等，治療肌膚暗淡、肌膚干 燥、肌膚光澤不良，防輻射、防曬。
[0005]目前，已有多種利用胎盤提取有效活性物質(zhì)的專利。這些專利獲取胎盤提取物的 方法主要以下3種：（1)直接提取法胎盤組織經(jīng)勻漿后加提取液提取，或胎盤勻漿后反復(fù)凍 融法提取，提取液離心、凍干即可。（2)超臨界C02萃取法胎盤組織凍干、粉碎、超臨界萃取 后，萃取物勻漿、離心，凍干離心液。（3)酶輔助提取法胎盤經(jīng)1-2種蛋白酶適度酶解后，離 心、凍干離心液。除了上述提到的方法，還有以上兩種或兩種以上方法混合使用的提取技 術(shù)。
[0006] 如上述方法及其制備的產(chǎn)品存在以下缺點：（1)獲得的胎盤提取物以大分子蛋白 為主，人體吸收效率低；（2)缺乏提取液精制工藝，產(chǎn)品成分復(fù)雜，品質(zhì)低；（3)產(chǎn)品脂肪含 量較高，易發(fā)生脂肪氧化，縮短保質(zhì)期；(4)提取方法簡單粗放，提取效率低，原料利用率 低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供了一種同時提高胎盤提取物的提取率、純度和活性的提取與制備技 術(shù)，極大提高了提取效率。
[0008] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一套復(fù)合酶法提取、制備胎盤提取物的工藝，包 括以下步驟：
[0009] 步驟1 :取動物胎盤預(yù)處理、碾磨后與水混合，調(diào)節(jié)pH值至1. 8,制得待提取物；
[0010]步驟2 :取所述待提取物與胃蛋白酶混合，于pH1.8、40°C酶解6h，于100°C變性 15min終止酶解反應(yīng)，過濾，收集濾液；所述胃蛋白酶與所述動物胎盤的質(zhì)量比為0. 4~ 1. 2:100 ；
[0011] 步驟3 :將步驟2制得的濾液調(diào)節(jié)pH值至7. 0，與胰酶混合后，于pH7. 0、40 °C酶 解4h，于100°C變性15min終止酶解反應(yīng)；
[0012] 所述胰酶與所述動物胎盤的質(zhì)量比為0. 04~0. 12:100。
[0013] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，動物胎盤提取物的制備工藝中所述胃蛋白酶的 酶活不小于10000IU/g。
[0014] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，動物胎盤提取物的制備工藝中所述胰酶的酶活 不小于3800IU/g。
[0015] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，動物胎盤提取物的制備工藝中步驟3所述終止 酶解反應(yīng)后還包括冷卻、超濾的步驟。
[0016] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，動物胎盤提取物的制備工藝中所述超濾采用 10kD超濾膜。
[0017] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，動物胎盤提取物的制備工藝中所述超濾之后還 包括純化和冷凍干燥的步驟。
[0018] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，動物胎盤提取物的制備工藝中所述純化包括瓊 脂糖凝膠氫鍵吸附層析、活性檢測。
[0019] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，動物胎盤提取物的制備工藝中所述純化具體為 超濾之后收集超濾液進行瓊脂糖凝膠氫鍵吸附層析，收集洗脫液于35°C~39°C進行旋蒸， 得到濃縮液，冷凍干燥。
[0020] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，動物胎盤提取物的制備工藝中所述瓊脂糖凝膠 氫鍵吸附層析具體為將凝膠在水中浸泡至少24小時，水洗濾干后，將溶脹的凝膠與水按體 積比3 :1混合，經(jīng)超聲波脫氣后濕態(tài)裝柱；所述柱的徑高比為1~5 :20,用3~5個柱體 積純水平衡層析柱；將所述層析柱下端出液口與紫外檢測器進口連接，所述層析柱上端進 液口與泵系統(tǒng)連接；取所述超濾液小心加于所述層析柱的上表面，上樣體積為柱床體積的 2%~25% ;打開所述層析柱下端出口，使所述超濾液進入凝膠內(nèi)；在所述層析柱的上表面 上加入水，保持液位高度為3~4cm，調(diào)節(jié)洗脫速度為30ml/min;在214nm紫外檢測器下在 線監(jiān)測，分段收集活力大于10%峰的洗脫液。
[0021] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，動物胎盤提取物的制備工藝中所述冷凍干燥具 體為真空冷凍干燥機可以實現(xiàn)壓縮機、冷阱和真空泵一體化設(shè)計，可實現(xiàn)手動、自動兩種程 序凍干。冷阱溫度可達到_55°C，最大容量為8L，凍干量多5L/24h。真空泵配有油霧過濾 器，抽氣率彡l〇〇L/min，真空度可達到彡IMPa。
[0022] 優(yōu)選的，碾磨后產(chǎn)物與水的質(zhì)量比為1:1。
[0023] 本發(fā)明提供了一種動物胎盤提取物的制備工藝，取動物胎盤預(yù)處理、碾磨后與水 混合，調(diào)節(jié)pH值至1. 8,制得待提取物；取所述待提取物與胃蛋白酶混合，于pH1. 8、40°C 酶解6h，于100°C變性15min終止酶解反應(yīng)，過濾，收集濾液；所述胃蛋白酶與所述動物胎 盤的質(zhì)量比為〇. 4~1. 2:100 ;將步驟2制得的濾液調(diào)節(jié)pH值至7. 0,與胰酶混合后，于pH 7. 0、40°C酶解4h，于100°C變性15min終止酶解反應(yīng)；所述胰酶與所述動物胎盤的質(zhì)量比為 0?04 ~0? 12:100。
[0024]目前一般都是進行鹽析、反復(fù)凍融或細胞破碎來制備胎盤提取物。除雜過程一般 只進行簡單的過濾。這就導(dǎo)致產(chǎn)品的純度比較低，高分子雜質(zhì)含量偏高。本發(fā)明的目的旨 在提高產(chǎn)品的純度和品質(zhì)，進一步除去高分子雜質(zhì)，得到分子量小于10000道爾頓的小分 子活性物質(zhì)。
[0025] 本發(fā)明采用酶解方法提取，大大提高了產(chǎn)品的純度及品質(zhì)。與其他直接水解的方 法相比，本發(fā)明得到的胎盤粉多肽以及游離氨基酸含量比較高，脂肪含量非常低。超濾除 雜，并且采用瓊脂糖凝膠