Cyp4v2基因突變體及其應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及CYP4V2基因突變體及其應用。具體地，本發(fā)明涉及分離的編碼CYP4V2 突變體的核酸，分離的多肽，篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的生物樣品的方法，篩選易 感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的生物樣品的系統(tǒng)，用于篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的 生物樣品的試劑盒，構建體以及重組細胞。
【背景技術】
[0002] Bietti，s結晶樣視網膜變性（Bietti，scrystallineCorneoretinal dystrophy，簡稱B⑶）是罕見的遺傳性致盲疾病，在全世界的發(fā)病率約為1/24000,其高發(fā) 人群是中國人，在我國的發(fā)病率約為1/4000。B⑶患者通常20- 30歲發(fā)病，40- 50歲致 盲，目前已經成為威脅全球青年和中年人群視覺功能、視覺質量的主要眼部疾病，最終嚴重 影響患者的生活質量，給家庭和社會帶來了巨大的負擔。BCD是由于視網膜感光細胞(包括 視錐細胞和視桿細胞）和視網膜色素上皮細胞變性，伴隨進行性脈絡膜血管萎縮、硬化而導 致的致盲性遺傳性眼病。B⑶的遺傳方式主要是常染色體隱性遺傳（autosomarecessive BCD，簡稱為ARBCD)。
[0003]目前原發(fā)性BCD的基因學方面的研究較少，其致病相關機制仍不明確。因而，目前 對原發(fā)性BCD尤其是其致病基因的研究仍有待深入。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術中存在的技術問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的 在于提出一種能夠有效篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性（BCD)的生物樣品的方法。
[0005] 本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列工作完成的：發(fā)明人通過外顯子組測序、Sanger測 序驗證、蛋白結構分析的方法確定了原發(fā)性結晶樣視網膜變性的一個新的致病突變-- CYP4V2基因的c. 31C>T突變。
[0006] 進而，根據本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種分離的編碼CYP4V2突變體的核 酸。根據本發(fā)明的實施例，所述核酸與SEQIDN0 :1相比，具有c. 31C>T突變，即相對于野 生型CYP4V2基因，本發(fā)明的CYP4V2基因突變體的cDNA第31位堿基C突變?yōu)門。根據本發(fā) 明的實施例，發(fā)明人確定了CYP4V2基因的突變體，該突變體與原發(fā)性結晶樣視網膜變性的 發(fā)病密切相關，從而通過檢測該突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測生物樣品 是否易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性。
[0007] 根據本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了一種分離的多肽。根據本發(fā)明的實施例，與 SEQIDN0:2相比，所述分離的多肽具有p.QllX突變，即該突變是由于c. 31C>T突變而引 起的，具體地，相對于野生型CYP4V2,本發(fā)明的分離的多肽(即CYP4V2突變體)第11位氨基 酸由Gin突變?yōu)榻K止碼。通過檢測生物樣品中是否表達該多肽，可以有效地檢測生物樣品 是否易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性。
[0008] 根據本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提出了一種篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的 生物樣品的方法。根據本發(fā)明的實施例，該方法包括以下步驟：從所述生物樣品提取核酸 樣本；確定所述核酸樣本的核酸序列；所述核酸樣本的核酸序列與SEQIDNO:1相比，具有 c. 31C>T突變是所述生物樣品易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的指示。通過根據本發(fā)明實施 例的篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的生物樣品的方法，可以有效地篩選易感原發(fā)性結 晶樣視網膜變性的生物樣品。
[0009] 根據本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提出了一種篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的 生物樣品的系統(tǒng)。根據本發(fā)明的實施例，該系統(tǒng)包括：核酸提取裝置，所述核酸提取裝置用 于從所述生物樣品提取核酸樣本；核酸序列確定裝置，所述核酸序列確定裝置與所述核酸 提取裝置相連，用于對所述核酸樣本進行分析，以便確定所述核酸樣本的核酸序列；判斷裝 置，所述判斷裝置與所述核酸序列確定裝置相連，以便基于所述核酸樣本的核酸序列與SEQ IDN0 :1相比，是否具有c. 31C>T突變，判斷所述生物樣品是否易感原發(fā)性結晶樣視網膜變 性。利用該系統(tǒng)，能夠有效地實施前述篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的生物樣品的方 法，從而可以有效地篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的生物樣品。
[0010] 根據本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提出了一種用于篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變 性的生物樣品的試劑盒。根據本發(fā)明的實施例，該試劑盒含有：適于檢測CYP4V2基因突變 體的試劑，其中與SEQIDN0:1相比，該CYP4V2基因突變體具有c. 31C>T突變。利用根據 本發(fā)明的實施例的試劑盒，能夠有效地篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的生物樣品。
[0011] 根據本發(fā)明的第六方面，本發(fā)明還提出了一種構建體。根據本發(fā)明的實施例，該構 建體包含前面所述的分離的編碼CYP4V2突變體的核酸。由此，利用本發(fā)明的構建體轉化受 體細胞獲得的重組細胞，能夠有效地用于篩選治療原發(fā)性結晶樣視網膜變性的藥物。
[0012] 根據本發(fā)明的第七方面，本發(fā)明還提出了一種重組細胞。根據本發(fā)明的實施例，該 重組細胞是通過前面所述的構建體轉化受體細胞而獲得的。根據本發(fā)明的一些實施例，利 用本發(fā)明的重組細胞，能夠有效地篩選治療原發(fā)性結晶樣視網膜變性的藥物。
[0013] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。
【附圖說明】
[0014] 本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點從結合下面附圖對實施例的描述中將變 得明顯和容易理解，其中：
[0015] 圖1顯示了根據本發(fā)明實施例的篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的生物樣品 的系統(tǒng)及其組成部分的示意圖，其中，
[0016] 圖II為根據本發(fā)明實施例的篩選易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性的生物樣品的系 統(tǒng)的示意圖，
[0017] 圖III為根據本發(fā)明實施例的核酸提取裝置的示意圖，
[0018] 圖1III為根據本發(fā)明實施例的核酸序列確定裝置的示意圖；
[0019] 圖2顯示了根據本發(fā)明一個實施例的B⑶患者家系的家系圖；
[0020] 圖3顯示了根據本發(fā)明一個實施例，圖2所示B⑶患者家系中先證者的眼底像；
[0021] 圖4顯示了根據本發(fā)明的一個實施例，圖2所示B⑶患者家系中先證者、家系內正 常人和家系外正常對照的CYP4V2基因c. 31C>T突變位點的代表性Sanger測序驗證峰圖， 其中，
[0022] 圖4I為根據本發(fā)明實施例的先證者的CYP4V2基因c. 31C>T突變位點的代表性 Sanger測序驗證峰圖，
[0023] 圖4II為根據本發(fā)明實施例的家系內正常人的CYP4V2基因c. 31C>T突變位點的 代表性Sanger測序驗證峰圖，
[0024] 圖4III為根據本發(fā)明實施例的家系外正常對照的CYP4V2基因c. 31C>T突變位點 的代表性Sanger測序驗證峰圖；
[0025] 圖5顯示了根據本發(fā)明的一個實施例，多個物種CYP4V2蛋白的序列對比結果。
【具體實施方式】
[0026] 下面參考具體實施例，對本發(fā)明進行說明，需要說明的是，這些實施例僅是說明性 的，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0027]CYP4V2基因突變體
[0028] 根據本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種分離的編碼CYP4V2突變體的核酸。根 據本發(fā)明的實施例，所述核酸與SEQIDN0:1相比，具有c. 31C>T突變。在本文中所使用的 表達方式"編碼CYP4V2突變體的核酸"，是指與編碼CYP4V2突變體的基因相對應的核酸物 質，即核酸的類型不受特別限制，可以是任何包含與CYP4V2突變體的編碼基因相對應的脫 氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根據本發(fā)明的 一個具體示例，前面所述的編碼CYP4V2突變體的核酸為DNA。根據本發(fā)明的實施例，發(fā)明人 確定了CYP4V2基因的突變體，該突變體與原發(fā)性結晶樣視網膜變性的發(fā)病密切相關，從而 通過檢測該突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測生物樣品是否易感原發(fā)性結晶 樣視網膜變性，也可以通過檢測該突變體在生物體中是否存在，可以有效地預測生物體是 否易感原發(fā)性結晶樣視網膜變性。
[0029] 對于本發(fā)明說明書和權利要求書中，提及核酸，本領域技術人員應當理解，實際包 括互補雙鏈的任意一條，或者兩條。為了方便，在本說明書和權利要求書中，雖然多數(shù)情況 下只給出了一條鏈，但實際上也公開了與之互補的另一條鏈。例如，提及SEQIDN0 :1，實際 包括其互補序列。本領域技術人員還可以理解，利用一條鏈可以檢測另一條鏈，反之亦然。
[0030] 該編碼CYP4V2突變體的核酸，是本申請的發(fā)明人通過外顯子組測序、Sanger測序 驗證以及蛋白結構分析的方法確定的原發(fā)性結晶樣視網膜變性的致病基因CYP4V2的新的 致病突變。該致病突變位點在現(xiàn)有技術中并未被提到。
[0031] 其中，野生型CYP4V2基因的CDNA具有如下所示的核苷酸序列：
[0032]ATGGCGGGGCTCTGGCTGGGGCTCGTGTGGCAGAAGCTGCTGCTGTGGGGCGCGGCGAGTGCCCTTTCC CTGGCCGGCGCCAGTCTGGTCCTGAGCCTGCTGCAGAGGGTGGCGAGCTACGCGCGGAAATGGCAGCAGATGCGGCC CATCCCCACGGTGGCCCGCGCCTACCCACTGGTGGGCCACGCGCTGCTGATGAAGCCGGACGGGCGAGAATTTTTTC AGCAGATCATTGAGTACACAGAGGAATACCGCCACATGCCGCTGCTGAAGCTCTGGGTCGGGCCAGTGCCCATGGTG GCCCTTTATAATGCAGAAAATGTGGAGGTAATTTTAACTAGTTCAAAGC