解淀粉芽孢桿菌Lh-1及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物防治領(lǐng)域，具體為一種解淀粉芽孢桿菌Lh-1及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 公知，解淀粉芽孢桿菌在其自身的生長過程中可以產(chǎn)生一系列的代謝產(chǎn)物，這些 代謝產(chǎn)物使其能夠廣泛地抑制作物病源真菌和細(xì)菌的活性，利用解淀粉芽孢桿菌進(jìn)行有效 的生物防治，安全高效無污染，開發(fā)潛力巨大。目前已報(bào)道的解淀粉芽孢桿菌合成菌劑活菌 數(shù)低，抗菌物質(zhì)提取不便，如：CN100999667公開了一種設(shè)施菜地土壤改良劑及其制備方法 與應(yīng)用，強(qiáng)調(diào)作為土壤改良劑，菌劑中菌種的配比和固體菌劑載體的配比，但菌劑單獨(dú)發(fā)酵 活菌數(shù)僅為10億/ml。其發(fā)酵液菌數(shù)明顯偏低，在實(shí)際應(yīng)用中用量太大，綜合成本偏高。CN 102485880A公開了一株解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用，但菌株所產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)只存在于細(xì)胞 內(nèi)，提取工藝繁瑣，生產(chǎn)成本增大，且沒有在田間實(shí)際生產(chǎn)的應(yīng)用。 此外，殼寡糖是水溶性好、功能作用大、生物活性高的低分子量產(chǎn)品，可以提高植物本 身的免疫能力，有效提高作物產(chǎn)量，防治病蟲害，增殖土壤和生物肥中的有益菌，被譽(yù)為不 是農(nóng)藥的農(nóng)藥、不是化肥的化肥，殼寡糖的這種藥肥雙效的特殊作用決定了它在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域 的廣泛應(yīng)用。
[0003] 棉花黃萎病是危害棉花生產(chǎn)的主要病害之一，被稱為"棉花癌癥"，是棉花生長發(fā) 育過程中發(fā)生最普遍、損失嚴(yán)重的重要病害。在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，由于化學(xué)農(nóng)藥的過量使 用，造成病原菌耐藥性增強(qiáng)，耕層結(jié)構(gòu)失衡土地污染，棉花質(zhì)量產(chǎn)量下降等問題日益嚴(yán)重。 隨著人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，微生物制劑因其高效安全，綠色環(huán)保等優(yōu)勢，應(yīng)用越來越廣。但 是到目前為止，未見有將解淀粉芽孢桿菌與殼寡糖組合應(yīng)用于棉花黃萎病以及其他大白菜 軟腐病菌、桃樹腐爛病菌、蘋果腐爛病菌等的防治。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種解淀粉芽孢桿菌Lh-1及其應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明是采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種解淀粉芽孢桿菌 (匕已(3；[111183111710119116€3(^6118 8油8。）111-1，保藏編號(hào)為06]\0^1^0.8548，主要生物學(xué)特性 為，革蘭氏染色陽性，菌體呈桿狀，有鞭毛，具有運(yùn)動(dòng)性，好氧生長，可形成內(nèi)生芽孢，在PDA 培養(yǎng)基上呈橙紅色不透明菌落，表面褶皺，邊緣不規(guī)則。保藏單位為中國微生物菌種保藏管 理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，保藏日期是2013年 12月6日。
[0006]-種解淀粉芽孢桿菌Lh-1在防治棉花黃萎病、大白菜軟腐病、青枯病、桃樹腐爛 病、蘋果腐爛病、辣椒疫霉病、番茄灰霉病方面的應(yīng)用。
[0007] 利用所述的解淀粉芽孢桿菌Lh-1制成的微生態(tài)菌劑。
[0008] 利用解淀粉芽孢桿菌Lh-1制成的微生態(tài)菌劑，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌含量 為 8X109cfu/g。
[0009] 利用解淀粉芽孢桿菌Lh-1制成的微生態(tài)菌劑的制備方法，包括以下步驟：（1)將 冰箱保藏的解淀粉芽孢桿菌Lh-1劃線接種到PDA固體斜面培養(yǎng)基上，31°C培養(yǎng)48小時(shí)活 化；將活化后的菌種接種于PDA液體培養(yǎng)基中，31°C震蕩培養(yǎng)24小時(shí)，菌液作為種子液備 用；（2)擴(kuò)大發(fā)酵生產(chǎn)的原料以及重量百分比如下：玉米粉2%，豆餅0. 5%，魚粉0. 5%，紅糖 1%，氯化鈉0. 1%，其余為水，將原料按配比溶于水加入發(fā)酵罐中，高壓蒸汽滅菌，將步驟（1) 得到的種子液接種到發(fā)酵罐中，接種量占原料總體積的2-5%，攪拌速度180r/min，3rC， pH6. 8,溶氧相對值20%-40%，發(fā)酵36-48小時(shí)；（3)當(dāng)發(fā)酵罐內(nèi)活菌數(shù)達(dá)到8X109cfu/g時(shí)， 將殼寡糖粉加入步驟（2)得到的發(fā)酵液中混合均勻，殼寡糖粉的加入量占步驟（2)所得發(fā) 酵液總重量的1%_2%，裝瓶制得解淀粉芽孢桿菌Lh-1微生態(tài)菌劑。
[0010]上述微生態(tài)菌劑中，解淀粉芽抱桿菌57/6577)Lh_l 具有廣譜抑菌活性，對棉花黃萎病菌（大白菜軟腐病菌carotorara)、青枯病菌（Tfe/stofliaso/aaacear應(yīng))、桃樹腐爛病菌（Ka/sa 細(xì))、 蘋果腐爛病菌（設(shè)ha 辣椒疫霉菌capsici)、番 爺灰霉菌都能產(chǎn)生較強(qiáng)的抑制作用，尤其對棉花黃萎病菌具有 非常強(qiáng)烈的抑制作用，因此表明此拮抗菌的生物活性具有廣譜、高效的特點(diǎn)；殼寡糖為現(xiàn)有 公知產(chǎn)品，可改變土壤菌群，促進(jìn)有益微生物的生長，殼寡糖還可誘導(dǎo)植物的抗病性，對 多種真菌、細(xì)菌和病毒產(chǎn)生免疫和殺滅作用，本發(fā)明利用殼寡糖兼具防病促生的功效。
[0011] 本發(fā)明利用解淀粉芽孢桿菌Lh-1與藥肥雙效的殼寡糖組合制成Lh-1微生態(tài)菌 齊U，活菌數(shù)高，用量小，生產(chǎn)工藝簡單，成本低，具有防病促生的雙重作用，經(jīng)過苗圃試驗(yàn)驗(yàn) 證，大大降低了農(nóng)作物的發(fā)病率，尤其是對于棉花黃萎病的防治，發(fā)病率降至6%，防治效果 顯著；此外，由于是生物菌株制劑，完全沒有因化學(xué)農(nóng)藥的使用所帶來的一系列問題，因而 有利于農(nóng)作物的無公害生產(chǎn)，農(nóng)民可以不用或減少化學(xué)農(nóng)藥的用量，大大節(jié)省了開支，而且 有利于農(nóng)產(chǎn)品的出口。
【附圖說明】
[0012] 圖1為基于16SrDNA部分序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹圖譜； 圖2為Lh-1的生長曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步闡述，但并不用來限定本發(fā)明。
[0014] 實(shí)施例1: 本發(fā)明解淀粉芽孢桿菌sy/w/?)LH-1的分離與鑒定 1、樣品米集 從山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院試驗(yàn)田土壤表層到15cm處取樣100g，60°C條件下烘干24小時(shí)，取lg做分離用。
[0015] 2、菌株的分離和抗性篩選 (1)菌種稀釋：稱取lg溶解到裝有l(wèi)〇〇ml滅菌蒸餾水的三角瓶中，制成土壤懸浮液， 然后梯度稀釋至1(T9 土壤懸浮液。
[0016] (2)菌種分離與篩選：吸取土壤懸浮液50ul與液體培養(yǎng)3天的棉花黃萎病菌 50ul加入至冷卻好的PDA培養(yǎng)基中，均勻涂布，放置30°C培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24h，觀察并挑 選拮抗菌落（抑制圈大的菌落）； (3)拮抗菌株純化：將所挑選菌落在PAD培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線純化，再將得到的純菌株與 棉花黃萎病菌進(jìn)行拮抗驗(yàn)證，得到一株對棉花黃萎病菌拮抗能力的較強(qiáng)的細(xì)菌菌株，命名 為Lh-1。
[0017] 3、菌株的鑒定 對菌株LH-1進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析。