專利名稱:食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基的制作方法
食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基，尤其是一種針對宜興 百合有極高脫毒效率和快速繁殖效率的培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
百合病毒病分布廣，危害大，是食用百合生產(chǎn)和鮮切花生產(chǎn)中的 主要病害之一，受到全世界的重視。近年來，隨著我國百合引種數(shù)量 和種植面積的迅速增加，以及不規(guī)范的種球自繁自用，病毒病開始在我國各百合種植區(qū)流行， 一般發(fā)病率在40~50%， 二代種球的帶毒率 在90%以上。百合感染病毒后，終身帶毒，長期受害，破壞植株正常 的生理機能，主要表現(xiàn)為生長勢下降，黃化、花葉等病毒癥狀；通過 蟲牙蟲等昆蟲介體傳播，擴大了病毒的危害范圍；由于病毒危害，使食 用百合產(chǎn)量下降，品質(zhì)變劣，觀賞百合的商品花降級；病毒尚難以用 化學(xué)藥劑或生物制劑進行直接有效防治。因此，防止百合感染病毒病 的應(yīng)對策略是采用脫毒培養(yǎng)技術(shù)獲得脫毒苗，隔離繁殖、生產(chǎn)健康種 球，并在各個生產(chǎn)環(huán)節(jié)進行嚴(yán)格的病毒檢測。百合品種繁多，根據(jù)用途可分為藥用百合、食用百合和觀賞百合。 國內(nèi)外對百合組培脫毒進行的系列研究表明，獲得脫毒苗的方法主要 有莖尖培養(yǎng)、珠芽培養(yǎng)、化學(xué)處理和熱處理等。對觀賞型百合的脫毒 方法，公開號CN1903019為一種百合組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成芽的培養(yǎng)基， 具體為MS + 0.5 mg/L + 0.5 mg/L NAA。但是觀賞百合與食用百合由 于其品種特征差別炯異，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方也會不同。食用百合作為保健藥用特種蔬菜深受消費者的喜愛，隨著人們消 費水平的提高，生產(chǎn)和消費量逐年遞增。宜興百合、蘭州百合、龍牙 百合是為三大食用百合，其中又以宜興百合種植面積最大、產(chǎn)量最高， 其有味苦而甘的特殊風(fēng)味，鱗莖富含淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪、礦質(zhì)等營 養(yǎng)成份，并有補中益氣、理脾健胃、寧心安神等多種藥用功能，被稱 為補品藥百合，歷史上就享有"太湖之參"的美稱。常用于與銀耳、綠 豆、苡米、蓮心等制作清熱甜品等。常規(guī)百合繁殖方法為小鱗莖繁殖， 繁殖系數(shù)低，易感染病毒，影響其經(jīng)濟價值。安徽霍山縣農(nóng)民在宜興 百合種植過程中由于病毒感染產(chǎn)量下降，栽培面積達(dá)幾萬畝的種球需 要更換為脫毒的優(yōu)良種球。江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報，2001， 17 (1): 49~51公開了一種宜興百合脫毒 技術(shù)，其培養(yǎng)方式為在培養(yǎng)基MS + 0.01 mg/L BA + 0.01 mg/L NAA 中誘導(dǎo)，再轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基MS + 0.2 mg/L BA+0.5 mg/L NAA進行 增殖。該實驗結(jié)果表明，莖尖大小決定了脫毒率，小于0.3mm的莖 尖全部不能培養(yǎng)成活，沒有成活率，百合的脫毒便顯得沒有意義。換 句話說，莖尖越小，脫毒率越高，但同時成活率也越低，理論上的高 成活、高脫毒的理想組培可以說是兩者難能兼得。因此常規(guī)的脫毒快 繁選取的莖尖一般定在0.3 mm左右。但脫毒率依然不甚理想，離 100%的理想脫毒率相去甚遠(yuǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種食用百合脫毒快繁培 養(yǎng)基，其是針對不同培養(yǎng)階段，提供能使較小的莖尖獲得較高的成活 率，而且脫毒成功率高的配方組合體系。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案是 一種食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基，包括啟動培養(yǎng)基、繼代壯苗培養(yǎng)基、誘導(dǎo)再生鱗球和 生根培養(yǎng)基、誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基，其中，所述的啟動培養(yǎng)基為MS十6BA0.5 2.5 mg/L+NAA0.卜0.5 mg/L。本發(fā)明經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，莖尖大小決定了脫毒率，莖尖越小，脫毒率 越高，但卻存在成活率很低的弊端，因此，經(jīng)過大量試驗研究確立了 0.1 0.2mm大小的莖尖啟動培養(yǎng)基，通過組培成活率可達(dá)58.9%，而 成活植株的病毒檢測無毒率更是高達(dá)100%,即脫毒成功率達(dá)58.9%， 比報導(dǎo)中的成功率僅為5~10%高出5至10倍。另外該培養(yǎng)基可進行 鱗片誘導(dǎo)不定芽培養(yǎng)，加快了百合的快速繁殖速度，提高了百合的產(chǎn) 量和質(zhì)量。在上述方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明所述的繼代壯苗培養(yǎng)基為MS + 6BA 0 2.5 mg/L+NAA0.1~0.5 mg/L。所述的誘導(dǎo)再生鱗球和生根培養(yǎng)基為l/2MS + 6BA0 1.0mg/L + NAA0~0.5 mg/L。所述的誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基為MS + 6BA 0.5 2.5 mg/L + NAA 0.1 0.5mg/L。本發(fā)明的有益效果是-本發(fā)明開發(fā)了能夠供僅有0.1 0.2 mm大小的百合莖尖成活的啟 動培養(yǎng)基，將成活率提高到58.9%，病毒檢測無病毒率高達(dá)100%， 且通過與繼代壯苗培養(yǎng)基、誘導(dǎo)鱗球和生根培養(yǎng)基、誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng) 基等的配合使用，可進行組培苗的工廠化生產(chǎn)，進行大面積種植，在 無病毒且高成活率的同時實現(xiàn)百合的快繁。
具體實施方式
-種食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基，其啟動培養(yǎng)基為MS + 6BA 1.0mg/L+NAA 0.1 mg/L，使用方法是取食用百合種球經(jīng)過沙培7 10天，剝?nèi)ネ鈱喻[片，消毒后在解 剖鏡下剝生長點，切取0.1 0.2 mm大小的莖尖，接種在啟動培養(yǎng)基 上培養(yǎng)，經(jīng)暗培養(yǎng)3~4天后轉(zhuǎn)光培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24士2'C，光照強 度2000 3000 Lx，光照時間12 14小時/天。微莖尖經(jīng)上述培養(yǎng)獲得 脫毒組培苗，培養(yǎng)成活率達(dá)58.9%，病毒檢測無病毒率達(dá)100%。將脫毒百合組培苗在繼代壯苗培養(yǎng)基MS + 6BA 0.8 mg/L+NAA 0.1 mg/L上繼代、壯苗，培養(yǎng)溫度為24土2。C ，光照強度2000 3000 Lx， 光照時間12 14小時/天，獲得脫毒成苗。成苗在誘導(dǎo)再生鱗球和生根培養(yǎng)基1/2MS + 6BA 0 mg/L+NAA 0.1 mg/L上誘導(dǎo)再生鱗球，培養(yǎng)溫度為24士2。C，光照強度2000 3000 Lx，光照時間12 14小時/天。培養(yǎng)40天左右，可獲得脫毒食用百合 組培種球。將脫毒的食用百合組培種球鱗片植于誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基MS + 6BA 0.8 mg/L+NAA 0.1 mg/L上誘導(dǎo)叢生芽，培養(yǎng)條件為溫度 24±2°C，光照強度2000 3000 Lx，光照時間12-14小時/天。叢生芽經(jīng)繼代成苗后又可誘導(dǎo)再生鱗球，如此交替循環(huán)，可進行 大批量擴繁，其擴繁系數(shù)可達(dá)15倍以上。
權(quán)利要求
1、一種食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基，包括啟動培養(yǎng)基、繼代壯苗培養(yǎng)基、誘導(dǎo)再生鱗球和生根培養(yǎng)基、誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基，其特征在于所述的啟動培養(yǎng)基為MS+6BA 0.5～2.5mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L。
2、 根據(jù)權(quán)利要求
1所述的食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基，其特征在 于所述的繼代壯苗培養(yǎng)基為MS+6BA 0 2.5 mg/L+NAA 0.1~0.5 mg/L。
3、 根據(jù)權(quán)利要求
1所述的食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基，其特征在 于所述的誘導(dǎo)再生鱗球和生根培養(yǎng)基為l/2MS + 6BA0~1.0mg/L + NAA 0~0.5 mg/L。
4、 根據(jù)權(quán)利要求
1所述的食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基，其特征在 于所述的誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基為MS + 6BA 0.5~2.5 mg/L + NAA 0.1 0.5 mg/L。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基，尤其是一種針對宜興百合具有高脫毒效率和快速繁殖效率的培養(yǎng)基。一種食用百合脫毒快繁培養(yǎng)基，包括啟動培養(yǎng)基、繼代壯苗培養(yǎng)基、誘導(dǎo)再生鱗球和生根培養(yǎng)基、誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基，其中，所述的啟動培養(yǎng)基為MS+6BA0.5～2.5mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L。本發(fā)明開發(fā)了能夠供僅有0.1～0.2mm大小的百合莖尖成活的啟動培養(yǎng)基，將成活率提高到58.9％，病毒檢測無病毒率高達(dá)100％，且通過與繼代壯苗培養(yǎng)基、誘導(dǎo)再生鱗球和生根培養(yǎng)基、誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基等的配合使用，可進行組培苗的工廠化生產(chǎn)，進行大面積種植，在無病毒且高成活率的同時實現(xiàn)百合的快繁。
文檔編號C12N5/04GKCN101233825SQ200810034180
公開日2008年8月6日 申請日期2008年3月3日
發(fā)明者宋學(xué)孟, 張承妹, 章振華, 麗 陳, 陳明亮 申請人:上海光兆植物速生技術(shù)有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan