1.一種用于檢測(cè)鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的多重qpcr引物探針組,其特征在于,所述引物探針組包括檢測(cè)鴨腸炎病毒的上游引物dev-f、下游引物dev-r和熒光探針dev-probe;檢測(cè)鵝細(xì)小病毒的上游引物gpv-f、下游引物gpv-r和熒光探針gpv-probe以及檢測(cè)番鴨細(xì)小病毒的上游引物mdpv-f、下游引物mdpv-r和熒光探針mdpv-probe;
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重qpcr引物探針組,其特征在于,所述引物探針組中熒光探針的5’端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán),3’端標(biāo)記有熒光猝滅基團(tuán)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多重qpcr引物探針組,其特征在于,所述熒光報(bào)告基團(tuán)包括hex、cy5或fam中的一種;所述熒光猝滅基團(tuán)包括bhq1或bhq2。
4.一種用于檢測(cè)鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的多重qpcr試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包含權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的多重qpcr引物探針組。
5.一種鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的多重qpcr的檢測(cè)體系,其特征在于,所述多重qpcr的檢測(cè)體系包含權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的多重qpcr引物探針組。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多重qpcr的檢測(cè)體系,其特征在于,所述多重qpcr的檢測(cè)體系以25μl總體積計(jì),包括如下組分:12.5μl?probe?qpcr?mix,混合模板2μl,8~12μm的上游引物dev-f?0.6μl,8~12μm的下游引物dev-r0.6μl,8~12μm的熒光探針dev-probe?0.8μl;8~12μm的上游引物gpv-f?0.8μl,8~12μm的下游引物gpv-r?0.8μl,8~12μm的熒光探針gpv-probe?1μl;8~12μm的上游引物mdpv-f?0.6μl,8~12μm的下游引物mdpv-r?0.6μl,8~12μm的熒光探針mdpv-probe?0.8μl;3.9μl?ddh2o。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的多重qpcr的檢測(cè)體系,其特征在于,所述混合模板中鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒三種病原模板按等體積比混合。
8.一種非診斷目的的鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的多重qpcr檢測(cè)方法,其特征在于,包括如下步驟:
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多重qpcr檢測(cè)方法,其特征在于,所述判斷標(biāo)準(zhǔn)如下:若待測(cè)樣品檢測(cè)出現(xiàn)擴(kuò)增曲線且ct≤35,則判定為陽(yáng)性;若35<ct≤38則判定為可疑,需要重新檢測(cè);若沒有擴(kuò)增曲線或ct值>38,則判定為陰性。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多重qpcr檢測(cè)方法,其特征在于,所述多重qpcr擴(kuò)增的反應(yīng)程序如下:變性95℃、30s;變性95℃、5s,退火48℃、30s,延伸72℃、20s,40個(gè)循環(huán)。