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用于檢測(cè)鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的多重qPCR引物探針組、檢測(cè)體系及試劑盒和應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):40591734發(fā)布日期:2025-01-07 20:32閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種用于檢測(cè)鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的多重qpcr引物探針組,其特征在于,所述引物探針組包括檢測(cè)鴨腸炎病毒的上游引物dev-f、下游引物dev-r和熒光探針dev-probe;檢測(cè)鵝細(xì)小病毒的上游引物gpv-f、下游引物gpv-r和熒光探針gpv-probe以及檢測(cè)番鴨細(xì)小病毒的上游引物mdpv-f、下游引物mdpv-r和熒光探針mdpv-probe;

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多重qpcr引物探針組,其特征在于,所述引物探針組中熒光探針的5’端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán),3’端標(biāo)記有熒光猝滅基團(tuán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多重qpcr引物探針組,其特征在于,所述熒光報(bào)告基團(tuán)包括hex、cy5或fam中的一種;所述熒光猝滅基團(tuán)包括bhq1或bhq2。

4.一種用于檢測(cè)鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的多重qpcr試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包含權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的多重qpcr引物探針組。

5.一種鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的多重qpcr的檢測(cè)體系,其特征在于,所述多重qpcr的檢測(cè)體系包含權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的多重qpcr引物探針組。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多重qpcr的檢測(cè)體系,其特征在于,所述多重qpcr的檢測(cè)體系以25μl總體積計(jì),包括如下組分:12.5μl?probe?qpcr?mix,混合模板2μl,8~12μm的上游引物dev-f?0.6μl,8~12μm的下游引物dev-r0.6μl,8~12μm的熒光探針dev-probe?0.8μl;8~12μm的上游引物gpv-f?0.8μl,8~12μm的下游引物gpv-r?0.8μl,8~12μm的熒光探針gpv-probe?1μl;8~12μm的上游引物mdpv-f?0.6μl,8~12μm的下游引物mdpv-r?0.6μl,8~12μm的熒光探針mdpv-probe?0.8μl;3.9μl?ddh2o。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的多重qpcr的檢測(cè)體系,其特征在于,所述混合模板中鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒三種病原模板按等體積比混合。

8.一種非診斷目的的鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的多重qpcr檢測(cè)方法,其特征在于,包括如下步驟:

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多重qpcr檢測(cè)方法,其特征在于,所述判斷標(biāo)準(zhǔn)如下:若待測(cè)樣品檢測(cè)出現(xiàn)擴(kuò)增曲線且ct≤35,則判定為陽(yáng)性;若35<ct≤38則判定為可疑,需要重新檢測(cè);若沒有擴(kuò)增曲線或ct值>38,則判定為陰性。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的多重qpcr檢測(cè)方法,其特征在于,所述多重qpcr擴(kuò)增的反應(yīng)程序如下:變性95℃、30s;變性95℃、5s,退火48℃、30s,延伸72℃、20s,40個(gè)循環(huán)。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)鴨腸炎病毒、鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒的多重qPCR引物探針組、檢測(cè)體系及試劑盒和應(yīng)用,屬于病毒檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述多重qPCR檢測(cè)引物探針組包括檢測(cè)鴨腸炎病毒的上游引物DEV?F、下游引物DEV?R和熒光探針DEV?Probe;檢測(cè)鵝細(xì)小病毒的上游引物GPV?F、下游引物GPV?R和熒光探針GPV?Probe以及檢測(cè)番鴨細(xì)小病毒的上游引物MDPV?F、下游引物MDPV?R和熒光探針MDPV?Probe。本發(fā)明所述的引物探針組具有良好的特異性與靈敏度,可同時(shí)檢測(cè)3種水禽傳染病病原,3種病原間無交叉反應(yīng),且穩(wěn)定性高,其變異系數(shù)均在10%以下。

技術(shù)研發(fā)人員:毛婭卿,王嘉,翟天舒,孔冬妮,鄧永,薛麒,侯力丹,黃小潔,吳宏舉,汪溪,嚴(yán)琳杰
受保護(hù)的技術(shù)使用者:中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/6
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