本發(fā)明屬于生物醫(yī)學制品，具體涉及一種高純的人源sod及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

1、超氧化物歧化酶(superoxide?dismutase，sod)是動物、植物和微生物中普遍存在的一類酶，是生物抗氧化系統(tǒng)的第一道防線，也是體內(nèi)唯一能夠特異性清除氧自由基的抗氧化酶。人體內(nèi)外源化合物在各種酶的作用下會產(chǎn)生氧自由基，氧自由基在sod的催化作用下轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫，體內(nèi)的過氧化氫酶(cat)和過氧化物酶(pod)會立即將其分解為完全無害的水。當生物體沒有足夠多的sod時，活性氧將會大量累積，如不能及時清除就會引發(fā)氧化損傷，導致機體損害，比如堿基突變、dna鏈斷裂、膜脂過氧化和蛋白質(zhì)損傷等，從而加速衰老或?qū)е录膊　?/p>

2、超氧化物歧化酶(sod)有重要的抗氧化作用，是醫(yī)療器械、化妝品、食品、醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)重要的生產(chǎn)原料。醫(yī)療器械、化妝品、食品、醫(yī)藥等行業(yè)對高效、高活性、易吸收的超氧化物歧化酶有極高的需求，動物源或植物源sod對人體來說存在免疫原性問題，且吸收困難。

3、重組表達制備的人源sod具有分子量單一、純度高、無病毒傳播隱患等優(yōu)點，因此開始被用來替代動物源和植物源sod用于醫(yī)療器械、化妝品、食品、生物醫(yī)用材料等領(lǐng)域，故重組人源sod在未來的市場應(yīng)用中有很大的發(fā)展空間。

4、重組人源sod是利用基因工程技術(shù)構(gòu)建含有人源sod基因的表達工程菌，再通過工程菌來合成sod，最后采用特定的純化工藝得到高純度的重組sod。人源sod無病毒隱患、免疫排斥反應(yīng)低，不僅保留了sod原有功效，更賦予了其新的功能，如：可加工性、水溶性、質(zhì)量可控性等。

5、在人類生物學研究領(lǐng)域中，大腸桿菌是首個被實現(xiàn)外源基因原核細胞體外表達的微生物。由于大腸桿菌基因操作的簡易性，使此表達系統(tǒng)向蛋白質(zhì)表達菌株的方向不斷發(fā)展。大腸桿菌表達異源蛋白的過程是有序的，步驟分為序列分析、表達策略和克隆方法，并最終形成大腸桿菌表達克隆。為了獲得高效表達的重組菌株，表達載體的構(gòu)建是成功的關(guān)鍵。大腸桿菌bl21(de3)和含有被廣泛用于大腸桿菌的異源蛋白表達的t7啟動子的pet表達載體是最具代表性的重組蛋白表達系統(tǒng)。pet表達載體的優(yōu)勢在于誘導表達蛋白時，營養(yǎng)成分及誘導劑利用完全且產(chǎn)量高。大腸桿菌bl21(de3)去除了lon蛋白酶和ompt外模蛋白酶，可有效避免表達產(chǎn)物被宿主自身降解，能保持較高的目的蛋白的表達水平，還能抑制宿主蛋白的表達。t7啟動子的pet表達載體可使克隆化基因獨立、高效地表達，選擇的pet-s1是常用的t7啟動子質(zhì)粒載體。此重組蛋白表達系統(tǒng)的優(yōu)點在于生產(chǎn)成本低、生產(chǎn)速率高、操作簡便、遺傳背景清晰等。因此，利用基因工程技術(shù)手段構(gòu)建基因工程菌株對制備高質(zhì)量的人源sod具有重要意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種高純的人源sod及其制備方法和用途，是通過基因工程技術(shù)將sod重組為人源sod，無病毒隱患且免疫排斥反應(yīng)低，能有效穩(wěn)定大量表達。

2、本發(fā)明首先提供一種人源超氧化物歧化酶sod，其氨基酸序列如下：matkavcvlkgdgpvqgiinfeqkesngpvkvwgsikglteglhgfhvhefgdntagctsagphfnplsrkhggpkdeerhvgdlgnvtadkdgvadvsiedsvislsgdhciigrtlvvhekaddlgkggneestktgnagsrlacgvigiaq(seq?idno：1)。

3、本發(fā)明還提供編碼上述人源sod的核酸片段，其具體的核酸片段的序列如下(seqid?no：2)：

4、atggcaaccaaagcagtgtgcgtgctgaaaggtgacggcccggttcagggcattattaattttgaacagaaagaaagcaacggtccggtgaaagtgtggggcagtattaagggcctgaccgaaggtctgcatggctttcatgttcatgaatttggtgacaataccgcaggttgcaccagcgccggcccgcattttaatccgctgagccgtaaacatggtggtccgaaagatgaagaacgtcatgtgggcgatctgggtaatgttaccgcagataaagatggtgttgcagatgttagcattgaagatagtgttattagtctgagcggcgatcattgtattattggccgtaccctggttgttcatgaaaaagcagatgatctgggcaaaggcggtaatgaagaaagcaccaaaaccggtaatgccggtagccgtctggcctgtggcgtgattggcattgcacagtaa。

5、本發(fā)明還提供一種重組表達載體，所述的重組表達載體中插入有用于重組表達上述人源sod的核酸片段。

6、所述的載體，作為實施例的具體記載，為pet-s1表達載體；

7、本發(fā)明再一個方面還提高一種重組工程菌株，所述的重組工程菌株攜帶有所述的重組表達載體。

8、所述的重組工程菌株，作為實施例的具體記載，為escherichia?coli?bl21(de3)菌株。

9、本發(fā)明所提供的重組人源sod用于制備氧化損傷修復的制品。

10、本發(fā)明還提供一種氧化損傷修復的制品，其中包含有藥理有效濃度的所述的人源sod。

11、本發(fā)明所提供的人源sod具有良好的穩(wěn)定性，生物安全性好，且分子量均一、純度高、無病毒傳播隱患和排異反應(yīng)低等優(yōu)點，是安全有效的生物醫(yī)學材料，生物活性高，能夠有效穩(wěn)定和大量地表達，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)療器械、化妝品、食品、生物醫(yī)用材料等領(lǐng)域。

技術(shù)特征：

1.一種人源超氧化物歧化酶sod，其特征在于，所述的人源超氧化物歧化酶sod的氨基酸序列為seq?id?no：1。

2.一種基因，其特征在于，所述的基因編碼權(quán)利要求1所述的人源超氧化物歧化酶sod。

3.如權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于，所述的基因的核苷酸序列為seq?id?no：2。

4.一種重組表達載體，其特征在于，所述的重組表達載體中插入有用于重組表達權(quán)利要求1所述的人源超氧化物歧化酶sod的核酸片段。

5.如權(quán)利要求4所述的重組表達載體，其特征在于，所述的重組表達載體為pet-s1表達載體。

6.一種重組工程菌株，其特征在于，所述的重組工程菌株攜帶有權(quán)利要求3所述的重組表達載體。

7.如權(quán)利要求6所述的重組工程菌株，其特征在于，所述的重組工程菌株為escherichia?colibl21(de3)菌株。

8.權(quán)利要求1所述的人源超氧化物歧化酶sod在制備氧化損傷修復的制品中的應(yīng)用。

9.一種氧化損傷修復的制品，其特征在于，所述的氧化損傷修復的制品中包含有藥理有效濃度的權(quán)利要求1所述的人源超氧化物歧化酶sod。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種高純的人源SOD及其制備方法和用途，所述的人源超氧化物歧化酶SOD，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO：1。本發(fā)明所提供的人源SOD具有良好的穩(wěn)定性，生物安全性好，且分子量均一、純度高、無病毒傳播隱患和排異反應(yīng)低等優(yōu)點，是安全有效的生物醫(yī)學材料，生物活性高，能夠有效穩(wěn)定和大量地表達，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)療器械、化妝品、食品、生物醫(yī)用材料等領(lǐng)域。

技術(shù)研發(fā)人員：李巍
受保護的技術(shù)使用者：四平華科生物技術(shù)有限責任公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/2