本發(fā)明公開了一種具有抗癌、清脂、保肝作用的高活性低糖基人參次苷群及其苷元的制備方法，尤其是一種利用從人參屬植物中提取的總皂苷和水解酶、不需要分離拆分總皂苷為原二醇類皂苷ppd(rb1、rb2、rb3、rc、rd)和原三醇類皂苷ppt(re、rg1、rf、r1)，而直接酶轉(zhuǎn)化多糖基人參總皂苷制備低糖基人參次苷的方法。

背景技術(shù)：

人參是我國傳統(tǒng)名貴中草藥，具有百草之王之稱，產(chǎn)自東北的長白山人參、產(chǎn)自山東的西洋參和產(chǎn)自云南的三七參是三大主要品種?，F(xiàn)代植物化學(xué)及藥理學(xué)研究表明，其最重要的活性成分是人參皂苷。根據(jù)人參皂苷配糖體的不同和糖基連接在配糖體上位置的區(qū)別，可分為原人參二醇類皂苷、原人參三醇類皂苷和齊墩果酸型皂苷三大類，其中以二醇類和三醇類為主，齊墩果酸型皂苷僅有ro一種。

天然的人參皂苷含有較多的糖基，而含糖基較少的低糖基皂苷在天然人參中微乎其微。人參屬植物各部位的皂苷含量及組成如下：

天然的人參皂苷以rb1、rb2、rc、rd、re、rg1等為主，這些主要皂苷帶有三個以上的糖基，占人參總皂苷的90％以上。如：人參根總皂苷含量4％左右，主要為rb1、rb2、rc、rd、re、rg1；西洋參根總皂苷含量4％左右，主要為rb1、re、rc、rd、rg1，其中re、rb1含量占總皂苷的40～50％；三七參根總皂苷含量10％左右，主要為rg1、rb1、r1、占總皂苷的80％，r1占總量的9～10％；人參須皂苷含量7％，西洋參須皂苷含量10％，三七參須皂苷含量1％，皂苷組成和比例接近根部；人參莖葉含皂苷5-7％，主要為re、rg1、rd；西洋參莖葉含皂苷5-7％，主要為rb3，rd；三七參莖葉含皂苷5-7％，主要為rb3，rc。

而含有二糖基的人參皂苷有20(s)-rg2、20(r)-rg2、20(s)-rg3、20(r)-rg3、rg4、rg6、rk1、rk5，含有單糖基的人參皂苷20(s)-rh1、20(r)-rh1、20(s)-rh2、20(r)-rh2、rh3、rh4、rk2、rk3，不含有糖基的皂苷元等含量極低。如：人參皂苷rh2在天然人參中含量僅為十萬分之一，苷元在天然人參中是不存在的。

中草藥天然成分和化學(xué)藥不同，化學(xué)藥口服后直接吸收起藥效；中草藥天然成分，多為前體藥物，本身無藥效或藥效較低，需要經(jīng)過腸道微生物、唾液酶系、腸道酶、胃液的共同作用，轉(zhuǎn)化為另一種結(jié)構(gòu)再起藥效。

人參屬植物中含量較高的皂苷rb1、rb2、rc、rd等，必須在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化為二糖基的人參皂苷20(s)-rg2、20(r)-rg2、20(s)-rg3、20(r)-rg3、rg4、rg6、rk1、rk5，或單糖基的人參皂苷20(s)-rh1、20(r)-rh1、20(s)-rh2、20(r)-rh2、rh3、rh4、rk2、rk3，或不含有糖基的皂苷元等再起藥效。但是人體的這種轉(zhuǎn)化率極低，個體差異較大。直接口服多糖基皂苷rb1、rb2、rc、rd等，人體平均吸收率不足5％，其中rb1吸收率僅為1.4％，其余部分隨糞便排出體外而白白浪費。

而直接口服低糖基人參次苷群及其苷元或其制品，吸收率高、藥效強(qiáng)、藥效明確，口服后人體吸收率可達(dá)95％以上。

例如人參皂苷rg3具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用[論文，wang，chong-zhi，plantamedica2007，73(7)，669-674.]，也具有抗癌細(xì)胞浸潤的作用[論文，shinkaikiyoko，japanesejournalofcancerresearch1996，87(4)，357-62.]

rh2具有顯著的抗癌功能[論文，wangwei，cancerchemotherapyandpharmacology2007，59(5)，589-601.]。例如，抗乳腺癌[論文，leehyoung-cheol，internationaljournalofmolecularsciences2008，9(8)，1379-1392.]、抗白血病[論文，zhangyou-wei，plantamedica2001，67(5)，417-422.]，抗卵巢癌[論文，kimdongseon，phytochemistry1997，1998，47(3)，397-399.]，抗前列腺癌[論文，song，xiaoming，vaccine2009，27(17)，2306-2311.]，同時具有降血脂功效[論文，trinhhien-trung，journalofmicrobiologyandbiotechnology2007，17(7)，1127-1133.]。

rg2具有抗紫外線引發(fā)的癌癥[論文，jeongsejin，internationaljournaloftoxicology2007，26(2)，151-158.]、保護(hù)神經(jīng)[論文，choiseok，europeanjournalofpharmacology2002，442(1-2)，37-45.]、治療阿茲海默癥[論文，lina，journalofethnopharmacology2007，111(3)，458-463.]等功效。

rh1具有抗癌[論文，dongsijun，foodchemistry2009，113(2)，672-678.]、保肝[論文，park，eun-jeon，plantamedica2006，72(13)，1250-1253.]、保護(hù)紅細(xì)胞[論文，samukawakeiichi，biorheology2008，45(6)，689-700.]、抗敏抗炎、[論文，kimmisoon，foodscienceandbiotechnology2008，17(4)，805-808.，shinyoung-wook，journalofginsengresearch2006，30(3)，95-99.]、治療心腦血管疾病[論文，wangjing，journalofseparationscience2008，31(6-7)，1173-1180.]、抗癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[論文，wakabayashichisato，wakaniyakugakuzasshi1997，14(3)，180-185.]等功效。

但是低糖基人參次苷，如：c-k、c-y、皂苷元等單體皂苷，rg2組(由20(s)-rg2、20(r)-rg2、rg4、rg6組成)、rh1組(由20(s)-rh1、20(r)-rh1、rh4、rk3組成)、rg3組(由20(s)-rg3、20(r)-rg3、rg5、rk1組成)、rh2組(由20(s)-rh2、20(r)-rh2、rh3、rk2組成)等組皂苷，水溶性極低，在水溶液和生理鹽水中幾乎不溶解。由于穩(wěn)定性差、容易析出，很難應(yīng)用到實際產(chǎn)品中，特別是注射劑、口服液、膏滋等產(chǎn)品中。

而由二糖基的人參皂苷20(s)-rg2、20(r)-rg2、20(s)-rg3、20(r)-rg3、rg4、rg6、rk1、rk5，單糖基的人參皂苷20(s)-rh1、20(r)-rh1、20(s)-rh2、20(r)-rh2、rh3、rh4、rk2、rk3，不含糖基的皂苷元和微量其他皂苷組成的次生皂苷群，由于協(xié)同促溶作用，大大提高產(chǎn)物水溶性、藥理活性，藥效更加。同時，由于不改變原有人參中二醇類皂苷和三醇類皂苷的摩爾比例，產(chǎn)品的功效更加平衡、全面，對人體更安全。但是，酶轉(zhuǎn)化制造次生皂苷群難度較大，至今未見報道。

由于人參皂苷的結(jié)構(gòu)很復(fù)雜，采用有機(jī)合成的方法幾乎是不可能的，因此以天然皂苷為原料通過切斷糖苷鍵的方法是目前的主要解決方案。主要有酸堿水解法和酶轉(zhuǎn)化法兩大類：

傳統(tǒng)的制備次生皂苷的方法是酸堿水解法切斷糖苷鍵，例如用硫酸、鹽酸等強(qiáng)酸或氫氧化鈉等強(qiáng)堿在高溫下轉(zhuǎn)化天然皂苷生產(chǎn)次級皂苷(論文，chenyingjie，chemical&pharmaceuticalbulletin1987，35(4)，1653-5)?，F(xiàn)在仍然有相關(guān)制備方法的報道(發(fā)明專利cn105218613a)，但是酸堿法對環(huán)境造成嚴(yán)重污染、副產(chǎn)物較多、耗能也很大，與現(xiàn)代工業(yè)發(fā)展方向相違背，不適于工業(yè)化生產(chǎn)。

微生物酶是人參皂苷糖苷酶的一個重要來源，現(xiàn)已在霉菌、細(xì)菌等微生物中發(fā)現(xiàn)了人參皂苷糖苷酶，但是產(chǎn)酶的微生物培養(yǎng)條件復(fù)雜，產(chǎn)酶量低，后處理復(fù)雜，生產(chǎn)成本極其高昂，因此也很難實現(xiàn)工業(yè)化。另外，底物特異性很強(qiáng)，產(chǎn)物較單一，很難制備同時含有多種低糖基稀有皂苷的產(chǎn)品。

發(fā)明專利《一種稀有人參皂苷rh2的生產(chǎn)方法》(公開號cn201610815471.7)，公開的方法是以原人參二醇ppd為底物，利用糖基轉(zhuǎn)移酶制備人參皂苷單糖基皂苷rh2；

發(fā)明專利《一種酶催化二醇組人參皂苷大規(guī)模生產(chǎn)稀有人參皂苷的方法》(公開號cn106480156a)，是以二醇類皂苷ppd為底物，以離子液體為反應(yīng)媒介、采用酶轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)rg3、rh2、ck及苷元；

發(fā)明專利《一種酶催化三醇組人參皂苷大規(guī)模生產(chǎn)稀有人參皂苷的方法》(公開號cn106480157a)同樣以離子液體為媒介，酶法轉(zhuǎn)化三醇類皂苷ppt生產(chǎn)rh1、f1和苷元。

此類方法，由于微生物培養(yǎng)條件復(fù)雜、產(chǎn)酶量低，酶制劑的獲得成本極其高昂；同時，受到微生物酶專一性的限制，又必須首先拆分總皂苷制備二醇類皂苷ppd(rb1、rb2、rc、rd)和三醇類皂苷ppt(re、rg1、rf、r1)。而這種拆分，由于工藝路徑較長、工藝繁瑣、大量使用乙醇等有機(jī)溶劑，拆分成本也極其高昂；原料拆分二醇類皂苷和三醇類皂苷，導(dǎo)致產(chǎn)物液必須是單一的二醇類皂苷或三醇類皂苷，破壞了原有人參皂苷的摩爾比例，使產(chǎn)品功效失衡。所以，很難應(yīng)用到工業(yè)化生產(chǎn)中。

發(fā)明專利《紅參皂苷rg3組和rh2組混合皂苷的制備方法》(申請公布號cn102352402a)，公開了一種制備rg3組、rh2組皂苷的方法：先從人參根中提取總皂苷，再對總皂苷進(jìn)行分離，得到二醇類皂苷。然后用水對提取過皂苷后的濾渣中的自身酶進(jìn)行提取。用人參根中提取的不含皂苷、含有人參自身皂苷酶和其他水溶性物質(zhì)的提取物，與原人參二醇類皂苷rb1、rb2、rc、rd反應(yīng)，制備20(s)-rg3、20(r)-rg3、rk1和rk5的混合皂苷；或與f2單體反應(yīng)，制備20(s)-rh2、20(r)-rh2、rk2和rh3的混合皂苷。

發(fā)明專利《紅參皂苷rg2組和rh1組、制備方法及在制備抗皮膚老化化妝品中的應(yīng)用》(申請公布號cn102302420a)公開了一種制備rg2組和rh1組的方法，首先要先提取人參總皂苷，再對總皂苷拆分，分離得到三醇類皂苷，主要包含re和rg1。然后對不含有人參皂苷的渣進(jìn)行水提，得到人參自身酶，利用此人參自身酶對re進(jìn)行轉(zhuǎn)化，制備rg2組；還可以對rg1進(jìn)行轉(zhuǎn)化，制備rh1組。

此類方法的優(yōu)點是，避免了繁瑣的微生物培養(yǎng)過程。但是，仍需要對總皂苷進(jìn)行拆分，得到二醇類皂苷和三醇類皂苷。而這種拆分，由于大量使用高濃度的乙醇溶液，在給生產(chǎn)安全帶來巨大隱患的同時，也大幅度的提高了生產(chǎn)成本。特別是單體皂苷f2、rg1等，拆分成本極其高昂，甚至每公斤原料成本既達(dá)到幾十萬元，很難應(yīng)用到實際的生產(chǎn)中。同時，產(chǎn)物中的rg3組、rh2組、rg2組或rh1組，改變了原有人參中的二醇類皂苷、三醇類皂苷的摩爾比例，藥效不平衡，溶解度也極低。

發(fā)明專利《人參稀有皂苷c-k、f1及四種異構(gòu)體人參皂苷元的制備方法》(申請公布號cn105648021a)公開了一種制備c-k、f1及苷元的方法，先分離提取二醇類總皂苷和三醇類總皂苷，通過培養(yǎng)微生物得到微生物酶，再利用微生物酶對兩類皂苷進(jìn)行水解轉(zhuǎn)化，分別制得ck和f1。接下來用水提取人參自身酶，對ck和f1進(jìn)行轉(zhuǎn)化制備苷元。此方法對底物原料要求極高，需要先制備ck或f1，而這兩種皂苷是很難獲得的，市場售價甚至達(dá)到每公斤百萬元人民幣，大大提高了生產(chǎn)成本，很難應(yīng)用于實際生產(chǎn)。

綜上所述，由于酶法對底物的高度選擇性，目前所有的關(guān)于低糖基次生人參皂苷的生產(chǎn)方法都是以二醇或者三醇為底物，單一制備某一種人參次生皂苷、二醇類次生皂苷或者是三醇類次生皂苷，這就要求原料要對二醇、三醇進(jìn)行拆分。而其中的很多報道甚至是需要以單一皂苷為底物，而制備單一皂苷底物，加大了生產(chǎn)成本和周期，期間反復(fù)大量的使用醇類溶劑，也造成了安全隱患；并且，這些方法制備的次生苷種類少，改變了二三醇類的摩爾比例，且水溶性很差，不利于將藥效發(fā)揮到最大。

而同時將多糖基的天然二醇、三醇類人參皂苷降解生產(chǎn)高活性低糖基人參次苷群及其苷元混合物，具有生產(chǎn)成本低、生產(chǎn)周期短、不改變二三醇皂苷摩爾比例、水溶性高、藥效更平衡更突出等優(yōu)點。因此，直接以人參總皂苷為底物，生產(chǎn)同時包含二醇類和三醇類多種低糖基次生皂苷具有重要意義。但是由于生產(chǎn)難度很大，轉(zhuǎn)化途徑復(fù)雜。

有鑒于此特提出本發(fā)明。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種高活性低糖基人參次苷群及其苷元的制備方法，本方法工藝簡單、生產(chǎn)路徑短、生產(chǎn)成本低。另外，在把不易吸收、活性低的多糖基人參皂苷，酶轉(zhuǎn)化為易吸收、高活性的低糖基人參次苷的同時，又不改變原有人參中二醇類皂苷和三醇類皂苷的摩爾比例，產(chǎn)品的功效更加平衡、全面，對人體更安全；二醇類、三醇類低糖基皂苷及其苷元的協(xié)同促溶促效，大大提高產(chǎn)物水溶性、藥理活性，藥效更加突出。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用技術(shù)方案的基本構(gòu)思是：

一種高活性低糖基人參次苷群及其苷元的制備方法：包括以下步驟：

s1：人參總皂苷的制備：以人參屬植物的植株組織為原料，用低級醇提取多糖基原人參總皂苷，提取次數(shù)控制在1-3次，然后將提取液合并，然后將提取液進(jìn)行減壓壓縮，得到不含有低級醇的濃縮液，濃縮液經(jīng)環(huán)己烷或有機(jī)醚脫脂后，即得多糖基原人參總皂苷的提取液，對多糖基原人參總皂苷的提取液進(jìn)行干燥得到易于保存的人參總皂苷干粉；

s2：人參皂苷水解酶的制備：在s1中提取多糖基原人參總皂苷后的濾渣中加入提取自有酶的緩沖液，進(jìn)行提取，提取次數(shù)控制在1-2次，得到含有水解酶且不含皂苷的水溶性成分，然后將水溶性成分減壓濃縮，得到濃縮物，濃縮物即為含有人參水解酶的提取物；

s3：制備人參次苷群及其苷元的混合物：將多糖基原人參總皂苷提取液或?qū)⑷藚⒖傇碥崭煞叟渲瞥扇芤汉秃腥藚⑺饷傅奶崛∥锘旌暇鶆?，得到混合液，然后對混合液進(jìn)行加熱，混合液在加熱條件下進(jìn)行反應(yīng)，在反應(yīng)過程中添加有機(jī)酸調(diào)節(jié)溶液酸度，反應(yīng)結(jié)束后，分離純化酶解產(chǎn)物，即得高活性低糖基人參次苷群及其苷元的混合物。

本發(fā)明中，s1中人參屬植物為三七參、西洋參、人參、珠子參和竹節(jié)參中的一種或者幾種，s1中人參屬植物的植株組織為根、莖、葉、種子、花和果實中的一種或者幾種，s1中低級醇為甲醇或乙醇中的至少一種。

本發(fā)明中，s1中低級醇的添加量為人參屬植物組織的4～12倍體積。

本發(fā)明中，s1中用低級醇提取多糖基原人參總皂苷過程中控制溫度為室溫或50～95℃，s1中用低級醇提取多糖基原人參總皂苷過程中每次提取時間為2～48小時。

本發(fā)明中，s1中減壓濃縮時溫度控制在30～75℃，壓強(qiáng)控制在-0.01mpa～-1mpa。濃縮過程中可加入適量水。

本發(fā)明中，s2中提取自有酶的緩沖液為檸檬酸–檸檬酸鈉、磷酸鹽緩沖液或乙酸-乙酸鈉緩沖液中的一種，s2中提取自有酶的緩沖液的ph為4～8，s2中提取自有酶的緩沖液的濃度為0.005～0.2mol/l，s2中提取自有酶的緩沖液的添加量為濾渣的4～12倍體積，s2中提取溫度控制在65～95℃，s2中減壓壓縮時溫度在45～70℃，壓強(qiáng)控制在-0.01mpa～-1mpa，s2中減壓濃縮后得到濃縮物為固形物為40brix以上的濃縮液。

本發(fā)明中，s3中多糖基原人參總皂苷提取液或?qū)⑷藚⒖傇碥崭煞叟渲瞥傻娜芤汉秃腥藚⑺饷傅奶崛∥锘旌线^程中控制多糖基原人參總皂苷提取液或人參總皂苷溶液和含有人參水解酶的提取物的質(zhì)量比為1：0.01～100，s3中多糖基原人參總皂苷提取液的底物濃度為0.01～50％，s3中加熱條件下進(jìn)行反應(yīng)時溫度控制在70～95℃，s3中加熱條件下進(jìn)行反應(yīng)的時間控制在1～24小時，s3中有機(jī)酸為甲酸、醋酸、檸檬酸、乳酸或蘋果酸中的一種，s3中有機(jī)酸的添加量占反應(yīng)體系總體積的0.5～50％。

本發(fā)明中，s3中生成的高活性低糖基人參次苷群及其苷元的混合物包括不含糖基的二醇和三醇皂苷元(aglycone)；單糖基的人參皂苷20(s)-rh1、20(r)-rh1、20(s)-rh2、20(r)-rh2、rh3、rh4、rk2、rk3；二糖基的人參皂苷rg1、20(s)-rg2、20(r)-rg2、20(s)-rg3、20(r)-rg3、rg4、rg6、rk1、rk5，和微量其他苷類和非苷類雜質(zhì)的混合物，產(chǎn)物中同時含有二醇類和三醇類稀有人參次苷。

本發(fā)明中，s3中生成的高活性低糖基人參次苷群及其苷元的混合物可以利用萃取法、結(jié)晶法、大孔吸附樹脂法、制備型液相色譜法、硅膠柱層析法，對低糖基人參次苷群及其苷元的混合物進(jìn)行分離純化，制備某幾種皂苷的混合物或單體皂苷及苷元，制備的某幾種皂苷的混合物或單體皂苷及苷元，既可直接制成成品也可以作為食品、藥品和化妝品的原料。

采用上述技術(shù)方案后，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下有益效果。

本發(fā)明利用從人參屬植物中提取的總皂苷和水解酶、不需要分離拆分總皂苷為原二醇類皂苷ppd(rb1、rb2、rb3、rc、rd)和原三醇類皂苷ppt(re、rg1、rf、r1)，而直接酶轉(zhuǎn)化多糖基人參總皂苷制備低糖基人參次苷的方法。產(chǎn)物人參次苷中，包含二糖基的人參皂苷20(s)-rg2、20(r)-rg2、20(s)-rg3、20(r)-rg3、rg4、rg6、rk1、rk5，單糖基的人參皂苷20(s)-rh1、20(r)-rh1、20(s)-rh2、20(r)-rh2、rh3、rh4、rk2、rk3，不含糖基的皂苷元和微量其他皂苷。

本方法工藝簡單，產(chǎn)品功效更平衡、水溶性好，屬于人參制品、功能食品、保健品、藥品、化妝品領(lǐng)域。

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。

附圖說明

附圖作為本申請的一部分，用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步的理解，本發(fā)明的示意性實施例及其說明用于解釋本發(fā)明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的不當(dāng)限定。顯然，下面描述中的附圖僅僅是一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他附圖。在附圖中：

圖1是人參根總皂苷hplc色譜圖；

圖2是總皂苷轉(zhuǎn)化后hplc色譜圖；

圖3是總皂苷轉(zhuǎn)化后hplc色譜圖；

圖4是轉(zhuǎn)化后的hplc色譜圖；

圖5是rg3組皂苷和苷元的hplc色譜圖。

需要說明的是，這些附圖和文字描述并不旨在以任何方式限制本發(fā)明的構(gòu)思范圍，而是通過參考特定實施例為本領(lǐng)域技術(shù)人員說明本發(fā)明的概念。

具體實施方式

為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。

在本發(fā)明的描述中，需要說明的是，術(shù)語“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“內(nèi)”、“外”等指示的方位或位置關(guān)系為基于附圖所示的方位或位置關(guān)系，僅是為了便于描述本發(fā)明和簡化描述，而不是指示或暗示所指的裝置或元件必須具有特定的方位、以特定的方位構(gòu)造和操作，因此不能理解為對本發(fā)明的限制。

在本發(fā)明的描述中，需要說明的是，除非另有明確的規(guī)定和限定，術(shù)語“安裝”、“相連”、“連接”應(yīng)做廣義理解，例如，可以是固定連接，也可以是可拆卸連接，或一體地連接；可以是機(jī)械連接，也可以是電連接；可以是直接相連，也可以通過中間媒介間接相連。對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以具體情況理解上述術(shù)語在本發(fā)明中的具體含義。

實施例1

以人參中的白參為原料，制備一種具有抗癌、清脂、保肝作用的高活性低糖基人參次苷群及其苷元的混合物。此混合物含有人參皂苷元、單糖基和二糖基次生人參皂苷混合物。

s1、人參皂苷的提?。喝?kg白參，用10l95％的乙醇于50～60℃提取人參總皂苷3次，每次3小時?；旌先翁崛〉拇既芤?，于45℃、-0.04mpa濃縮至不含有醇，環(huán)己烷脫脂，干燥可得總皂苷45g。hplc色譜圖如圖1所示。

s2、含有自有酶系的提取物的制備：將上步提取的人參渣加入8lph6.00.01m磷酸緩沖液提取2次。每次提取過程中，先在75℃下提取5小時后，然后在2小時以內(nèi)將溫度緩慢升至85℃，保持1小時。將三次的提取液混合過濾，55～60℃，-0.05mpa減壓濃縮至45brix以上。得300ml～600ml含有人參自有酶系等水溶性成分的提取物。

s3、將20g總皂苷溶于440ml水中，加入40g含有人參自有酶系的水提物，混合攪拌均勻。于80℃反應(yīng)12小時，然后95℃反應(yīng)2小時。反應(yīng)液中加入水飽和正丁醇400ml萃取，重復(fù)2～3次，合并正丁醇部分，用700ml去離子水洗滌，重復(fù)2～3次，將正丁醇層減壓濃縮、干燥，即得反應(yīng)產(chǎn)物。反應(yīng)總產(chǎn)物hplc檢測圖譜見圖2。產(chǎn)物中包含二糖基的稀有人參皂苷20(s)-rg2、20(r)-rg2、20(s)-rg3、20(r)-rg3、rg4、rg6、rk1、rk5，單糖基的人參皂苷20(s)-rh1、20(r)-rh1、20(s)-rh2、20(r)-rh2、rh3、rh4、rk2、rk3、ck以及不含糖基的皂苷元，含量約占70％。水溶液部分可回收繼續(xù)用于轉(zhuǎn)化反應(yīng)。

多次實驗證明，以人參、西洋參、三七參、珠子參和竹節(jié)參的干參及鮮參以及莖葉、花、種子、果實等為原料均可取得類似結(jié)果。

實施例2

利用含有人參自有酶系的水提物轉(zhuǎn)化人參總皂苷時，在反應(yīng)體系中加入有機(jī)酸調(diào)節(jié)酸度，可以提高酶活力，提高轉(zhuǎn)化率。

將實施例1中制備的20g人參總皂苷溶于400ml水中，加入實施例1中制備的40g含有人參自有酶系的提取物，混合攪拌均勻，加入冰乙酸40ml。于70℃反應(yīng)3小時，然后75℃反應(yīng)2小時。然后110℃加熱1小時使蛋白質(zhì)變性，加入1.5l水稀釋后，上400mlab-8大孔吸附樹脂，至全部皂苷被吸附后，用1.5～2l水洗滌，除去未被樹脂吸附的雜質(zhì)。然后用90％的乙醇洗脫。hplc色譜圖如圖3所示。產(chǎn)物中含有稀有人參皂苷20(s)-rg2、20(r)-rg2、20(s)-rg3、20(r)-rg3、rg4、rg6、rk1、rk5、20(s)-rh1、20(r)-rh1、20(s)-rh2、20(r)-rh2、rh3、rh4、rk2、rk3、ck及皂苷元，含量約占80％。

實施例3

也可以利用萃取法、結(jié)晶法、離心法、大孔吸附樹脂法、制備型液相色譜法或硅膠柱層析法，對低糖基人參次苷群及其苷元的混合物進(jìn)行分離純化、制備某幾種皂苷組成的的混合物或單體皂苷及苷元。例如：制備高純度rg3組和苷元的混合物。

取500g西洋參根和500g三七莖葉粉碎，按實施例1中的方法提取總皂苷，得總皂苷61g。然后用8l0.01mph5.8的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液對提取過總皂苷后的渣進(jìn)行提取，先在75℃下提取5小時后，然后在2小時以內(nèi)將溫度緩慢升至85℃，保持1小時。將三次的提取液混合過濾，55～60℃，-0.05mpa減壓濃縮至45brix。得305g含有人參自有酶系等水溶性成分的提取物。將a步得到的20g總皂苷溶于400ml水中，加入40gb步得到的含有人參自有酶系的提取物，混合攪拌均勻，并加入檸檬酸40g調(diào)節(jié)酸度。于80℃反應(yīng)2小時，然后85℃反應(yīng)1小時。反應(yīng)結(jié)束后，加入1.5l水稀釋后，上200mlab-8大孔吸附樹脂，至全部皂苷被吸附后，用1.5～2l水洗滌，除去未被樹脂吸附的雜質(zhì)。然后用85％的乙醇洗脫，洗脫出來的乙醇溶液直接上d-296柱子脫色，hplc色譜圖如圖4所示。脫色后的皂苷乙醇溶液，再于45℃、-0.04mpa減壓濃縮。待有渾濁物析出后，在16000～20000轉(zhuǎn)/分鐘，條件下離心，分別收集清夜和離心物。上清液繼續(xù)濃縮，重復(fù)上序操作，直至不再有固體物質(zhì)析出。合并離心物，干燥后，即得高純度rg3組和苷元混合物2.73g。經(jīng)hplc檢測，結(jié)果如圖5所示，產(chǎn)物中只含有20(s)-rg3、20(r)-rg3、rk1、rk5和苷元。

實施例4

可以利用酶解產(chǎn)物，即高活性低糖基人參次苷群及其苷元，制備具有保肝、清脂、抗癌功效的功能食品、保健食品、藥品等。例如：一種養(yǎng)生酒的制備方法。

精確稱取上述實施例中的任意一種酶解產(chǎn)物1000g，緩慢加入到10kg，溫度為50℃、酒精度為53度的白酒中。充分?jǐn)嚢?、溶解后，?6000轉(zhuǎn)/分的條件下離心，收集上清液。上清液，加入到10噸的優(yōu)質(zhì)白酒中，充分混合后，靜置3d。灌裝后，即得具有保肝、清血脂、抗癌功效的養(yǎng)生酒。

以上所述僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，雖然本發(fā)明已以較佳實施例揭露如上，然而并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉本專利的技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案范圍內(nèi)，當(dāng)可利用上述提示的技術(shù)內(nèi)容作出些許更動或修飾為等同變化的等效實施例，但凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案的內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明方案的范圍內(nèi)。