本發(fā)明屬于分子生物學領域，涉及一種采用分子生物學手段檢測轉基因植物，具體為一種用于檢測抗草甘膦轉基因大豆的分子標記及其應用。
背景技術：
：抗草甘膦轉基因大豆是通過基因工程技術將抗除草劑外源基因導入到大豆基因組中的新型轉基因品種，因獲得對除草劑草甘膦的抗性，目前已經(jīng)成為全球種植面積最為廣泛的轉基因作物，其加工產(chǎn)品轉基因豆粕主要應用于飼料工業(yè)。我國還未商業(yè)化種植轉基因大豆，抗草甘膦轉基因大豆作為動物飼料在動物生產(chǎn)上應用價值的研究也非常有限。與此同時，轉基因產(chǎn)品的農(nóng)藝學特性、營養(yǎng)學特性是否發(fā)生了改變，進行導入外源基因的轉基因操作過程是否影響受體遺傳學特性，轉基因產(chǎn)品在動物機體組織器官中無殘留、以及對動物和人類健康是否造成潛在危害等一系列安全問題備受世人關注。雖然對轉基因大豆的營養(yǎng)學等價性和急性毒性展開了一系列研究，但是仍需要亞長期和長期的安全性評價試驗數(shù)據(jù)。此外，隨著各國對生物技術產(chǎn)品管理措施的加強以及歐盟、中國等諸多國家有關轉基因標識條例的頒布，建立飼料等各種產(chǎn)品中轉基因成分的檢測方法尤為迫切。建立轉基因大豆飼料原料的進口與生產(chǎn)，建立貿(mào)易壁壘，確保轉基因標識制度的實施，并為指導今后轉基因飼料在動物生產(chǎn)中的應用和完善安全性評價體系都具有重要的理論和現(xiàn)實意義。隨著轉基因產(chǎn)品的不斷涌現(xiàn)，許多國家紛紛對轉基因產(chǎn)品進行標識管理。歐盟(ec)49/2000號條例規(guī)定食品中含有超過1％的轉基因成分時必須標簽，這就要求有相適應的檢測方法能夠定性和定量檢測轉基因產(chǎn)品。基于核酸的多聚酶鏈式反應檢測、基于蛋白質的免疫學和酶學檢測是已被普遍接納和廣泛應用的兩大主要技術。最近，質譜技術、色譜技術、近紅外光譜技術、生物傳感器、生物芯片技術有望發(fā)展為檢測轉基因成分的新途徑。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是：為了克服現(xiàn)有技術中的缺陷，獲得一種快速、準確檢測抗草甘膦轉基因大豆的方法，本發(fā)明提供了一種用于檢測抗草甘膦轉基因大豆的分子標記及其應用。技術方案：一種用于檢測抗草甘膦轉基因大豆的分子標記，所述分子標記及其序列為：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。優(yōu)選的，所述分子標記p1、p2和p3的上游引物5，端進行氨基化修飾。表1分子標記序列名稱序列(5，-3，)seqidno.p1-fnh2-ggagcaaccacacatgatcctc1p1-rggatctgatagacctgacgtta2p2-fnh2-gctcctacaaatgccatca3p2-rgatagtgggattgtgcgtca4p3-fnh2-ggatcctgttgccggtcttg5p3-rggctcctagtttgcaacgcta6所述的分子標記在制備檢測抗草甘膦轉基因大豆試劑盒中的應用。優(yōu)選的，所述試劑盒的組分包括：分子標記、dntp、lataq、pcr反應緩沖液、mgcl2、雙蒸水。優(yōu)選的，所述試劑盒檢測抗草甘膦轉基因大豆的步驟包括：(1)取樣：提取大豆樣品的基因組dna；(2)以步驟(1)提取的dna作為pcr模板，以p1為特異性引物，進行第一輪pcr擴增；(3)取步驟(2)的擴增產(chǎn)物，稀釋100～500倍后作為第二輪pcr的模板，以p2作為特異性引物，進行第二輪pcr擴增；(4)取第二輪pcr擴增的產(chǎn)物，稀釋20～100倍后作為第三輪pcr的模板，以p3作為特異性引物，進行第三輪pcr擴增；(5)收集第三輪pcr擴增的產(chǎn)物，并采用瓊脂糖凝膠電泳檢測。優(yōu)選的，所述甘蔗葉片樣品的基因組dna的提取方法是試劑盒法或改良ctab法。優(yōu)選的，所述pcr擴增的體系為25μl：模板2μl、pcr反應緩沖液2.5μl、dntp2μl、lataq2μl、分子標記1μl、雙蒸水15.5μl。優(yōu)選的，所述第一輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35個循環(huán)；72℃，7min。優(yōu)選的，所述第二輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，45s，35個循環(huán)；72℃，5min。優(yōu)選的，所述第三輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，35s，35個循環(huán)；72℃，4min。有益效果：(1)本發(fā)明所述分子標記適用于定性檢測抗草甘膦轉基因大豆中轉基因成分；(2)本發(fā)明所述分子標記具有快速、準確、穩(wěn)定性好的優(yōu)點。附圖說明圖1是實施例1～3檢測結果圖；其中，m為分子量為2000bp的maker；1為實施例1pcr產(chǎn)物電泳結果；2為實施例2pcr產(chǎn)物電泳結果；3為實施例3pcr產(chǎn)物電泳結果。具體實施方式實施例1一種用于檢測抗草甘膦轉基因大豆的分子標記，所述分子標記及其序列為：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。所述分子標記p1、p2和p3的上游引物5，端進行氨基化修飾。所述的分子標記在制備檢測抗草甘膦轉基因大豆試劑盒中的應用。所述試劑盒的組分包括：分子標記、dntp、lataq、pcr反應緩沖液、mgcl2、雙蒸水。所述試劑盒檢測抗草甘膦轉基因大豆的步驟包括：(1)取樣：提取大豆樣品的基因組dna；(2)以步驟(1)提取的dna作為pcr模板，以p1為特異性引物，進行第一輪pcr擴增；(3)取步驟(2)的擴增產(chǎn)物，稀釋100倍后作為第二輪pcr的模板，以p2作為特異性引物，進行第二輪pcr擴增；(4)取第二輪pcr擴增的產(chǎn)物，稀釋100倍后作為第三輪pcr的模板，以p3作為特異性引物，進行第三輪pcr擴增；(5)收集第三輪pcr擴增的產(chǎn)物，并采用瓊脂糖凝膠電泳檢測。所述甘蔗葉片樣品的基因組dna的提取方法是試劑盒法或改良ctab法。所述pcr擴增的體系為25μl：模板2μl、pcr反應緩沖液2.5μl、dntp2μl、lataq2μl、分子標記1μl、雙蒸水15.5μl。所述第一輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35個循環(huán)；72℃，7min。所述第二輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，45s，35個循環(huán)；72℃，5min。所述第三輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，35s，35個循環(huán)；72℃，4min。實施例2一種用于檢測抗草甘膦轉基因大豆的分子標記，所述分子標記及其序列為：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。所述分子標記p1、p2和p3的上游引物5，端進行氨基化修飾。所述的分子標記在制備檢測抗草甘膦轉基因大豆試劑盒中的應用。所述試劑盒的組分包括：分子標記、dntp、lataq、pcr反應緩沖液、mgcl2、雙蒸水。所述試劑盒檢測抗草甘膦轉基因大豆的步驟包括：(1)取樣：提取大豆樣品的基因組dna；(2)以步驟(1)提取的dna作為pcr模板，以p1為特異性引物，進行第一輪pcr擴增；(3)取步驟(2)的擴增產(chǎn)物，稀釋300倍后作為第二輪pcr的模板，以p2作為特異性引物，進行第二輪pcr擴增；(4)取第二輪pcr擴增的產(chǎn)物，稀釋50倍后作為第三輪pcr的模板，以p3作為特異性引物，進行第三輪pcr擴增；(5)收集第三輪pcr擴增的產(chǎn)物，并采用瓊脂糖凝膠電泳檢測。所述甘蔗葉片樣品的基因組dna的提取方法是試劑盒法或改良ctab法。所述pcr擴增的體系為25μl：模板2μl、pcr反應緩沖液2.5μl、dntp2μl、lataq2μl、分子標記1μl、雙蒸水15.5μl。所述第一輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35個循環(huán)；72℃，7min。所述第二輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，45s，35個循環(huán)；72℃，5min。所述第三輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，35s，35個循環(huán)；72℃，4min。實施例3一種用于檢測抗草甘膦轉基因大豆的分子標記，所述分子標記及其序列為：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。所述分子標記p1、p2和p3的上游引物5，端進行氨基化修飾。所述的分子標記在制備檢測抗草甘膦轉基因大豆試劑盒中的應用。所述試劑盒的組分包括：分子標記、dntp、lataq、pcr反應緩沖液、mgcl2、雙蒸水。所述試劑盒檢測抗草甘膦轉基因大豆的步驟包括：(1)取樣：提取大豆樣品的基因組dna；(2)以步驟(1)提取的dna作為pcr模板，以p1為特異性引物，進行第一輪pcr擴增；(3)取步驟(2)的擴增產(chǎn)物，稀釋500倍后作為第二輪pcr的模板，以p2作為特異性引物，進行第二輪pcr擴增；(4)取第二輪pcr擴增的產(chǎn)物，稀釋20倍后作為第三輪pcr的模板，以p3作為特異性引物，進行第三輪pcr擴增；(5)收集第三輪pcr擴增的產(chǎn)物，并采用瓊脂糖凝膠電泳檢測。所述甘蔗葉片樣品的基因組dna的提取方法是試劑盒法或改良ctab法。所述pcr擴增的體系為25μl：模板2μl、pcr反應緩沖液2.5μl、dntp2μl、lataq2μl、分子標記1μl、雙蒸水15.5μl。所述第一輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35個循環(huán)；72℃，7min。所述第二輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，45s，35個循環(huán)；72℃，5min。所述第三輪pcr擴增的程序為：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，35s，35個循環(huán)；72℃，4min。sequencelisting<110>蘇州蔻美新材料有限公司<120>一種用于檢測抗草甘膦轉基因大豆的分子標記及其應用<130><160>6<170>patentinversion3.3<210>1<211>22<212>dna<213>人工序列<400>1ggagcaaccacacatgatcctc22<210>2<211>22<212>dna<213>人工序列<400>2ggatctgatagacctgacgtta22<210>3<211>19<212>dna<213>人工序列<400>3gctcctacaaatgccatca19<210>4<211>20<212>dna<213>人工序列<400>4gatagtgggattgtgcgtca20<210>5<211>20<212>dna<213>人工序列<400>5ggatcctgttgccggtcttg20<210>6<211>21<212>dna<213>人工序列<400>6ggctcctagtttgcaacgcta21當前第1頁12