本發(fā)明屬于有機合成技術領域，特別涉及一種天然產(chǎn)物(+)-負霉素的全合成方法。

背景技術：

(+)-負霉素(或稱耐格霉素，英文名(+)-negamycin，化學結構見下式)是從絳紅褐鏈霉菌(streptomycespurpeofuscus)的培養(yǎng)基中分離得到的一種含氮的抗生素，其對耐藥性較強的革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌都有較好的抗性且毒性較低(j.antibiotics1970,23,170)。同時，負霉素也是一種特異性蛋白質合成抑制劑，在原核細胞中顯示出提前終止密碼子(ptcs)的通讀作用，使蛋白質編碼出錯(j.antibiotics1970,23,581；j.antibiotics1970,23,589)。此外，負霉素在杜氏肌營養(yǎng)不良癥(dmd)小鼠模型顯示出抑制抗肌營養(yǎng)不良蛋白無意義突變的作用(j.biochem.2003,134,751；molecularcell2014,56,541；acsmed.chem.lett.2015,6,930)。

目前，自負霉素的結構和生理活性報道以來，已有20多條負霉素全合成路線的報道，其中涉及不對稱全合成主要包括以下幾個課題組的研究工作：

shibahara于1972年首次報道(+)-負霉素及其對映異構體的全合成，從半乳糖醛酸出發(fā)共15步，初步研究了(+)-負霉素及對映異構體的生理活性(j.am.chem.soc.1972,94,4353)。1982年，ohno從已知手性半酯化合物出發(fā)，經(jīng)過wittig反應以及碘代環(huán)化反應構建c5位手性中心，以11步合成(+)-負霉素(16％,am.chem.soc.1982,104,6465)。1986年，kibayashi從古洛糖酸內(nèi)酯出發(fā)，利用關鍵的一步不對稱1,3-偶極環(huán)加成反應引進兩個手性中心，以13步合成(+)-負霉素(17％,j.am.chem.soc.1986,108,4647)。1988年，weigele從葡萄糖出發(fā)，采用先引入甲基肼片段，再通過葡萄糖片段的還原衍生化策略，以9步合成(+)-負霉素(6.8％,tetrahedronlett.1988,29,4077)。同年tanner從(r)-(+)-蘋果酸出發(fā)，通過已知文獻合成丙酮叉保護的trans-α,β-不飽和酯基化合物，利用sharpless不對稱環(huán)氧化引入c3位手性中心，以14步合成(+)-負霉素(20％,tetrahedronlett.1988,29,2373)。1992年，maycock從金雞納酸出發(fā)，利用氧化開環(huán)衍生化以23步合成(+)-負霉素(13％,tetrahedronlett.1992,33,4633)。同年schmidt從(r)-(+)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環(huán)-4-甲醛出發(fā)，利用不對稱氫化反應引入c3位手性氨基，隨后通過wolff重排反應將α-氨基酸轉化為β-氨基酸，以21步合成(+)-負霉素(2.8％,synthesis1992,482)。1993年，hegedus從已知手性氨基甲酸鹽出發(fā)，經(jīng)過pd(ii)催化的烷基化/羰基插入偶聯(lián)串聯(lián)反應引入c3位手性中心，底物控制立體選擇性還原建立c5位手性中心，以15步合成(+)-負霉素(16％,j.org.chem.1993,58,4547)。davies小組曾多次開展負霉素的全合成工作，其中1996年davies從4-氯乙酰乙酸乙酯出發(fā)，首先經(jīng)過不對稱氫化還原建立c5位手性中心，之后通過試劑控制的不對稱michael加成反應引入c3位手性中心，以13步合成(+)-負霉素(27％,tetrahedronasymmetry1996,7,1919；tetrahedron2011,67,216)。2002年williams從商業(yè)易得的(2s,3r)-(+)-n-z-6-氧代-2,3-二苯基嗎啉出發(fā)，首先經(jīng)過wittig反應與氫化反應構建所需熱力學穩(wěn)定的c5位手性中心，隨后利用金屬螯合下底物控制的不對稱烯丙基化反應引入c3位手性中心，以11步合成(+)-負霉素(27％,j.org.chem.2002,67,6361)。2003年，raju從商業(yè)易得的叔丁氧羰基保護烯丙基甘氨酸出發(fā)，經(jīng)過碘代內(nèi)酯化并開環(huán)引入c5位羥基(1:1)，利用柱層析分離所需異構體，以9步合成(+)-負霉素(13％,bioorg.med.chem.lett.2003,13,2413)。2007年，kumar從消旋的環(huán)氧氯丙烷出發(fā)，利用jacobsen發(fā)展的手性動力學拆分得到手性環(huán)氧化合物，接受烯基格氏試劑進攻環(huán)氧開環(huán)構建c5位手性中心，繼而再次利用jacobsen的手性動力學拆分得到手性環(huán)氧，并再次接受烯基格氏試劑進攻引入c3位手性中心，以13步合成(+)-負霉素(4.6％,tetrahedronlett.2007,48,3793)。2008年，hayashi等人以n-叔丁氧羰基-2-氨基乙醛為原料，通過不對稱烯丙基化反應建立c5位手性中心，進而利用不對稱michael加成反應引入氨基并同時建立c3位手性中心，以9步反應實現(xiàn)了(+)-負霉素的全合成(46.5％,chem.commun.2008,2379)；2010年，hayashi小組使用市售可得的(r)-(+)-3-羥基4-氯-丁酸乙酯為原料，同樣以不對稱michael加成反應構建關鍵c3位手性中心，通過13步反應實現(xiàn)了(+)-負霉素的全合成(31％，tetrahedron2010,66,314)；2014年，bates從手性環(huán)氧氯丙烷出發(fā)，經(jīng)過烯基格氏試劑環(huán)氧開環(huán)建立c5位手性中心，隨后利用sakurai反應引入c3手性中心，以10步合成(+)-負霉素(23％,org.biomol.chem.2014,12,4879)。同年，olivier等人以(r)-(+)-3-羥基-4-氯丁酸乙酯為原料，經(jīng)過tbs保護羥基、疊氮化反應以及選擇性還原反應得到相應的醛，隨后與ellman試劑(r)-(+)-叔丁亞磺酰胺縮合構建亞胺，進而通過mannich反應制備β-氨基酸骨架并構建c3位手性中心，通過9步反應實現(xiàn)了(+)-負霉素的全合成(9％，proc.natl.acad.sci.usa.2014,111,16274)?？偨Y已有的合成路線，仍存在著大部分合成路線冗長、手性中心構建時受限與部分化學反應立體選擇性不高而需多次的柱層析分離純化，使用昂貴的過渡金屬催化劑以及合成初期就使用易爆劇毒品如疊氮化鈉等問題，因此已有合成路線一般均無法大量合成所需目標化合物和結構衍生物，影響后續(xù)的構效關系研究所需的大量樣品提供，極大地限制了(+)-負霉素的藥物化學研究。另外已有合成路線對所獲得的目標結構進一步衍生化也會受制于分子中原有官能團的影響。因此，發(fā)展新穎高效的合成路線仍然十分迫切與必要。

技術實現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡便的天然產(chǎn)物(+)-負霉素的全合成方法。

本發(fā)明采用曼尼奇(mannich)反應構建c3位手性中心，將疊氮官能團的引入放在合成路線后期來實現(xiàn)，以避免易爆劇毒品疊氮化鈉的大量使用；以(r)-(+)-3-羥基-4-氯丁酸乙酯為原料，以ellman試劑(r)-(+)-叔丁基亞磺酰胺和mannich反應構建c4位手性中心，通過簡單、易操作的8步反應，總產(chǎn)率30％實現(xiàn)該全合成。本發(fā)明的技術方案具體介紹如下。

一種天然產(chǎn)物(+)-負霉素的全合成方法，具體步驟如下：

a)(r)-(+)-3-羥基-4-氯丁酸乙酯和氯化硅試劑在堿a作用下發(fā)生羥基保護反應得到(r)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁酸乙酯；

b)將(r)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁酸乙酯和二異丁基氫化鋁在-78℃的溫度下發(fā)生還原反應，得到(r)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁醛；

c)冰浴條件下，將(r)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁醛、(r)-(+)-叔丁基亞磺酰胺和鈦試劑混合，混合后自然恢復到室溫，攪拌反應得到(r)-n-[(r,e)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁基亞基]叔丁基亞磺酰胺；

d)將堿性試劑b的四氫呋喃溶液冷至-78℃后，依次加入乙酸酯的四氫呋喃溶液、三異丙氧基氯化鈦以及(r)-n-[(r,e)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁基亞基]叔丁基亞磺酰胺的四氫呋喃溶液攪拌反應，反應結束后后處理得到(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酸甲酯；

e)冰浴條件下，將(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酸甲酯溶解在甲醇中，用堿性試劑c水溶液水解，得到(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酸；

f)將(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酸、n-甲基-n-氨基甘氨酸叔丁酯和溶劑在冰浴下冷卻，之后加入堿d和縮合試劑，加完后自然恢復至室溫反應，得到n-甲基-n-(3r，5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酰胺氨基乙酸叔丁酯；

g)取n-甲基-n-(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酰胺氨基乙酸叔丁酯、無機碘試劑和疊氮化物在溶劑中反應，得到n-甲基-n-(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-6-疊氮基-5-叔丁基二甲基硅氧基己酰胺氨基乙酸叔丁酯；

h)首先，室溫下，將n-甲基-n-(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-6-疊氮基-5-叔丁基二甲基硅氧基己酰胺氨基乙酸叔丁酯溶于甲醇或乙醇，在pd/c催化劑作用下，在氫氣氣氛中進行還原反應得到疊氮還原產(chǎn)物；然后，將疊氮還原產(chǎn)物溶于稀鹽酸中室溫攪拌反應，反應結束后加水，用有機溶劑萃取水相，濃縮水相得到(+)-負霉素。

優(yōu)選的，步驟a)中，氯化硅試劑是叔丁基二甲基氯化硅、叔丁基二苯基氯化硅或三乙基氯化硅；堿a是咪唑、三乙胺與4-二甲氨基吡啶或1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯；(r)-(+)-3-羥基-4-氯丁酸乙酯、氯化硅試劑和堿a的摩爾比為1：(0.95～1.05):(1.5～3.50)。

優(yōu)選的，步驟b)中，所述(r)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁酸乙酯和二異丁基氫化鋁的摩爾比為1：1～1：1.1。

優(yōu)選的，步驟c)中，鈦試劑是四氯化鈦、四乙氧基鈦、四異丙氧基鈦、二異丙氧基二氯化鈦或三異丙氧基氯化鈦。

優(yōu)選的，(r)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁醛、(r)-(+)-叔丁基亞磺酰胺和鈦試劑的摩爾比為1：(0.95～1.05)：(1.1～3.3)。

優(yōu)選的，步驟d)中，堿性試劑b是二異丙基氨基鋰或二(三甲基硅基)氨基鈉；乙酸酯是乙酸甲酯、乙酸乙酯或乙酸叔丁酯；(r)-n-[(r,e)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁基亞基]叔丁基亞磺酰胺、乙酸酯、堿性試劑b和三異丙氧基氯化鈦的摩爾比為1：(0.95～4.05)：(1.05～4.1)：(2.1～5.3)。

優(yōu)選的，步驟e)中，堿c是氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀；(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酸甲酯和堿c的摩爾比為1:1.4～1：3.6。

優(yōu)選的，步驟f)中，縮合試劑是二環(huán)己基碳二亞胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、2-(7-氧化苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯或o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯；堿d是三乙胺、二異丙基乙基胺、4-二甲氨基吡啶或碳酸鉀；(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酸、n-甲基-n-氨基甘氨酸叔丁酯、縮合試劑和堿d的摩爾比為1:(0.95～1.5):(1.2～2.5):(1.2～4.4)。

優(yōu)選的，步驟g)中，無機碘試劑是碘化鈉或碘化鉀；疊氮化物是疊氮化鈉、疊氮基三甲基硅烷或四丁基疊氮化銨；n-甲基-n-(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酰胺氨基乙酸叔丁酯、無機碘試劑和疊氮化物的摩爾比為1:(0.15～1.05):(0.95～2.05)。

步驟h)中，pd/c催化為10wt％催化劑，n-甲基-n-(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-6-疊氮基-5-叔丁基二甲基硅氧基己酰胺氨基乙酸叔丁酯和10％pd/c的質量比為3.1：1～3.2：1。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點：

(1)以常見化工原料(r)-(+)-3-羥基-4-氯丁酸乙酯為原料，通過8個步驟的化學全合成，總收率在30％左右，得到目標產(chǎn)物(+)-負霉素。

(2)該全合成制備方法有效解決基于天然產(chǎn)物(+)-負霉素來源的藥物開發(fā)資源，不破壞生態(tài)環(huán)境，化合物來源充分，不受自然資源短缺的限制。

(3)化學合成(+)-負霉素，生產(chǎn)周期較短，二到三周即可，經(jīng)濟有效，環(huán)?？煽?。

附圖說明

圖1為本發(fā)明目標產(chǎn)物(+)-負霉素的核磁氫譜(400mhz，d2o)。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例對本發(fā)明的技術方案進行詳細闡述。

本發(fā)明的合成路線如下所示。

實施例1

步驟a中(r)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁酸乙酯(2)的合成

將2.72g咪唑溶于20mldmf中，冰水浴中冷卻至0℃后，依次加入3.3g化合物1和3.0g叔丁基二甲基氯化硅，攪拌反應24h后，tlc監(jiān)測反應(展開劑，石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v),加入5ml飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅反應，加入20ml水充分攪拌，分離有機相，用乙醚(3×30ml)萃取水相，合并有機相，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，柱層析純化,洗脫劑(石油醚：乙酸乙酯＝100：1)，得到黃色油狀物5.0g，產(chǎn)率90％。

比旋光值[α]d²⁵18.0(c1.03,chcl3)；化合物的核磁共振氫譜譜圖數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,cdcl3):δppm4.34-4.28(m,1h),4.20-4.08(m,2h),3.55-3.47(m,2h),2.68(dd,j1＝15.2,j2＝4.8hz,1h),2.52(dd,j1＝15.2,j2＝7.2hz,1h),1.27(t,j＝7.2hz,3h),0.87(s,9h),0.09(d,j＝15.6hz,6h)。

步驟b中(r)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁醛(3)的合成

取3.28g化合物2溶于100ml甲苯中，并將反應溫度降至-78℃，滴加8.5ml二異丁基氫化鋁的甲苯溶液，反應1h后，tlc監(jiān)測反應(展開劑，乙酸乙酯)，加入3ml甲醇淬滅反應?；謴椭潦覝兀蝮w系中加入50ml飽和酒石酸鈉鉀溶液充分攪拌2h。分離有機相，水相用乙醚(3×30ml)萃取，合并有機相，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，柱層析純化，洗脫劑(石油醚：乙酸乙酯＝40：1)，得到黃色油狀化合物2.73g，產(chǎn)率99％。

比旋光值[α]d²³17.1(c1.01,chcl3)；化合物的核磁共振氫譜譜圖數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,cdcl3):δppm9.80(t,j＝1.6hz,1h),4.41-4.37(m,1h),3.54(dd,j1＝11.2,j2＝4.8hz,1h),3.47(dd,j1＝10.8,j2＝6.4hz,1h),2.81-2.65(m,2h),0.87(s,9h),0.10(d,j＝14.4hz,6h)。

步驟c中(r)-n-[(r,e)-3-叔丁基二甲基硅氧基-4-氯丁基亞基]叔丁基亞磺酰胺(4)的合成

將1.42g(r)-(+)叔丁基亞磺酰胺溶于40ml四氫呋喃中，于冰水浴中冷卻至0℃，依次加入2.8g化合物3的thf(12ml)溶液和3ml四乙氧基鈦，加料完成后恢復至室溫，攪拌至反應完全，tlc監(jiān)測反應(展開劑，石油醚：乙酸乙酯＝10：1，v/v)，加入5ml飽和氯化鈉水溶液淬滅反應，過濾，濃縮，殘余物用乙醚稀釋，水相用乙醚(3×20ml)萃取，合并有機相后用無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，柱層析純化，洗脫劑(石油醚：乙酸乙酯＝20：1)，得到黃色油狀化合物3.58g，產(chǎn)率89％。

ir(thinfilm,kbr):νcm^-12956,2929,2898,2858,1737,1622,1089,838；esi-lr:[m+h]⁺340.2；hrms(esi)m/zcalculatedforc14h31o2nclssi[m+h]⁺340.1528,found340.1527；[α]d²⁵-117.0(c1.19,ch2cl2)；化合物的核磁共振氫譜、碳譜譜圖數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,cdcl3):δppm8.12(t,j＝4.8hz,1h),4.30-4.24(m,1h),3.55(dd,j1＝10.8,j2＝4.8hz,1h),3.50(dd,j1＝11.2,j2＝6.4hz,1h),2.90-2.77(m,2h),1.20(s,9h),0.89(s,9h),0.10(d,j＝8.0hz,6h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3):δppm166.7,70.1,56.9,48.0,41.2,25.8,22.5,18.1,-4.5,-4.6。

步驟d中(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酸甲酯(5)的合成

將0.54ml二異丙胺溶于10ml四氫呋喃，并冷卻至-78℃，依次滴加1.7ml正丁基鋰(2.4minhexanes)，260mg乙酸甲酯的thf(10ml)溶液，7.7ml三異丙氧基氯化鈦(1minhexanes)后滴入1.2g化合物4的thf(7ml)溶液，tlc監(jiān)測反應(展開劑，石油醚：乙酸乙酯＝5：1，v/v)，低溫下加入3ml甲醇淬滅反應，恢復至室溫，加10ml水充分攪拌后過濾，濃縮，殘余物用乙醚稀釋，水相用乙醚(3×20ml)萃取，合并有機相后用無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析純化，洗脫劑(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，得到黃色油狀化合物1.3g，產(chǎn)率89％。

ir(thinfilm,kbr):νcm^-13206,2955,2929,2857,1740,1092,1044,837；esi-lr:[m+h]⁺414.1；hrms(esi)m/zcalculatedforc17h37o4nclssi[m+h]⁺414.1896,found414.1893；[α]d²⁵-48.3(c0.33,ch2cl2)；化合物的核磁共振氫譜、碳譜譜圖數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,cdcl3):δppm4.34(d,j＝10.0hz,1h),4.02-4.00(m,1h),3.68(s,3h),3.46(dd,j1＝10.8hz,j2＝3.6hz,1h),3.39(dd,j1＝10.8hz,j2＝6.4hz,1h),2.96(dd,j1＝16.4hz,j2＝5.6hz,1h),2.62(dd,j1＝16.8hz,j2＝4.4hz,1h),1.99-1.92(m,1h),1.61-1.54(m,1h),1.23(s,9h),0.89(s,9h),0.09(s,6h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3):δppm172.6,69.4,56.3,51.7,51.0,48.9,41.7,41.0,25.9,22.9,18.1,-4.0,-4.2。

步驟e中(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酸(6)的合成

取2.5g化合物5溶于20ml甲醇中，于冰水浴中冷卻至0℃后，滴加9ml氫氧化鋰水溶液，滴加完成后恢復至室溫反應，tlc監(jiān)測反應(展開劑，石油醚：乙酸乙酯＝1：1，v/v)，滴加鹽酸將反應液ph調(diào)至2，用乙醚(4×40ml)萃取，合并有機相用飽和氯化鈉水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析純化，洗脫劑(二氯甲烷：甲醇＝50：1)，得到白色固體2.13g，產(chǎn)率88％。

ir(thinfilm,kbr):νcm^-13212,2956,2929,2857,1718,1255,1197,1094,837；esi-lr:[m-h]^-398.2；hrms(esi)m/zcalculatedforc16h33o4nclssi[m-h]^-398.1594,found398.1591；[α]d²⁵7.5(c1.91,ch2cl2)；化合物的核磁共振氫譜、碳譜譜圖數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,cdcl3):δppm4.80(d,j＝9.2hz,1h),3.96(s,1h),3.69-3.63(m,1h),3.48-3.37(m,2h),3.06-3.01(m,1h),2.52(d,j＝16.4hz,1h),2.16-2.09(m,1h),1.64-1.57(m,1h),1.28(s,9h),0.89(s,9h),0.09(s,6h)；¹³cnmr(100mhz,cdcl3):δppm173.8,69.8,57.1,51.7,48.9,41.8,40.5,25.9,23.1,18.1,-3.9,-4.2。

步驟f中n-甲基-n-(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-5-叔丁基二甲基硅氧基-6-氯己酰胺氨基乙酸叔丁酯(7)的合成

取563mg化合物6，224mgn-氨基-n-甲基甘氨酸叔丁酯對甲磺酸鹽和246mg1-羥基苯并三唑溶于15ml二氯甲烷中，置于冰水浴中冷卻至0℃后，滴加0.26ml三乙胺并加入349mg1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，后恢復至室溫反應，tlc監(jiān)測反應(展開劑，二氯甲烷：甲醇＝15：1，v/v)，加入30ml10％檸檬酸水溶液充分攪拌，分離有機相，水相用乙酸乙酯(3×30ml)萃取，合并有機相，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，濃縮后柱層析純化，洗脫劑(石油醚：丙酮＝5：1)，得到黃色油狀化合物762mg，產(chǎn)率100％。

ir(thinfilm,kbr):νcm^-13236,2956,2929,2857,1744,1667,1253,1225,1072,837；esi-lr:[m+h]⁺542.2；hrms(esi)m/zcalculatedforc23h48o5n3clnassi[m+na]⁺564.2665,found564.2668；比旋光值[α]d²⁵-4.7(c0.85,ch2cl2)；化合物的核磁共振氫譜譜圖數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,cdcl3):δppm5.28-4.96(m,1h),4.02-3.96(m,1h),3.67-3.32(m,5h),3.03-2.84(m,1h),2.71(s,1.8h,majorisomer),2.70(s,1.2h,minorisomer),2.23-1.90(m,2h),1.67-1.52(m,1h),1.45(s,9h),1.24(s,5.7h,majorisomer),1.21(s,3.8h,minorisomer),0.89(s,3.6h,minorisomer),0.87(s,5.4h,majorisomer),0.09(s,1.2h,minorisomer)0.084(s,1.2h,minorisomer),0.076(s,1.8h,majorisomer),0.07(s,1.8h,majorisomer)；ratioofisomers≈1.5:1。

步驟g中n-甲基-n-(3r,5r)-3-(r)-叔丁基亞磺酰氨基-6-疊氮基-5-叔丁基二甲基硅氧基己酰胺氨基乙酸叔丁酯(8)的合成

取279mg化合物7溶于3mldmf中，加入83mg碘化鉀和33mg疊氮化鈉，攪拌，核磁(¹hnmr)跟蹤至原料反應完全，加入5ml水充分攪拌，用乙醚(5×10ml)萃取水相，合并有機相，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析純化，洗脫劑(二氯甲烷：甲醇＝50：1)，得到黃色油狀化合物200mg，產(chǎn)率71％。

esi-lr:[m+h]⁺549.2；比旋光值[α]d²⁵-10.9(c1.51,chcl3)；化合物的核磁共振氫譜譜圖數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,cdcl3):δppm5.08-4.97(m,1h),4.05-3.91(m,1h),3.65-3.28(m,4h),3.17-2.86(m,2h),2.72(s,1.7h,majorisomer),2.71(s,1.3h,minorisomer),2.24-1.94(m,1h),1.85-1.56(m,1h),1.47(s,3.8h,minorisomer),1.46(s,5.3h,majorisomer),1.24(s,5.3h,majorisomer),1.22(s,3.8h,minorisomer),0.90(s,3.8h,minorisomer),0.89(s,5.3h,majorisomer),0.10(s,3.4h,majorisomer),0.08(s,2.5h,minorisomer)；ratioofisomers≈1.3:1。

步驟h中(+)-負霉素(9)的合成

將62mg化合物8溶于4ml甲醇中，加入20mg10％pd/c，氫氣氣氛下，室溫下攪拌反應4h，反應結束后過濾，濃縮后柱層析純化，洗脫劑(二氯甲烷：甲醇＝10：1)，得到疊氮還原產(chǎn)物40mg。然后取該還原產(chǎn)物溶于1.5ml稀鹽酸溶液中，室溫下繼續(xù)攪拌2h，反應結束后加入5ml水充分攪拌，分離有機相，用乙酸乙酯(3×10ml)萃取水相，后旋干水相得到天然產(chǎn)物(+)-負霉素19mg，白色固體，收率68％。

esi-lr:[m-h]^-247.2；化合物的核磁共振氫譜譜圖數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,d2o):δppm4.14-4.08(m,1h),3.93-3.82(m,1h),3.67(s,2h),3.18-3.11(m,1h),3.00-2.94(m,1h),2.70(s,3h),2.67-2.59(m,2h),2.00-1.79(m,2h)。

上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所做的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。