本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域的分離方法，特別涉及一種同時精制丹酚酸a和原兒茶醛的方法。

背景技術(shù)：

丹酚酸a是丹參中一種具有顯著藥理活性的成分，具有保護心肌缺血，防治動脈粥樣硬化及栓塞形成，保護腦缺血損傷，保護學(xué)習(xí)記憶損傷，防治帕金森疾病，防治腫瘤，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，促進骨形成，和保護胃黏膜損傷等作用。原兒茶醛(3,4-二羥基苯甲醛)是丹參中另一種重要的活性成分，在多種丹參制劑中都作為定量檢測成分，本身具有擴張冠狀動脈，增加冠脈血流量，抗心肌缺血，抑制血小板聚集，修復(fù)受損靜脈瓣膜，治療靜脈曲張，和廣譜的抗菌消炎作用。目前，丹參相關(guān)注射劑在心腦血管疾病的臨床應(yīng)用較多，仍可見一定比例的不良反應(yīng)發(fā)生，同時，丹酚酸a具有較強的抗氧化活性，在丹參相關(guān)注射液中穩(wěn)定性較差，如制成丹酚酸的單體藥物的凍干粉針劑，將大大提高藥物的穩(wěn)定性和安全性。液液萃取法是一種操作方便的分離純化方法，常常通過一次或多次萃取從溶液中將所需的溶質(zhì)萃取出來，易于放大和實現(xiàn)工業(yè)化。

目前，丹酚酸a的提取分離經(jīng)常采用柱層析法，在cn1830947a、cn1887849a、cn101121658a和cn100420665a等中國專利文獻中有涉及到該法。柱層析法可以得到高純度的丹酚酸a，但柱層析法存在處理量小、生產(chǎn)耗時長并且很難連續(xù)化生產(chǎn)等問題。

另一種分離丹酚酸a的方法是液液萃取法，在cn101353306a和cn101121658a等中國專利文獻中有涉及到該法。萃取法的優(yōu)勢在于容易放大實現(xiàn)工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)。這些專利中涉及到的萃取劑均為乙酸酯類，在萃取中存在一定的技術(shù)缺陷。第一，萃取劑選擇性不足，原兒茶醛和部分色素會和丹酚酸a同時被萃取。第二，為了除去有機相中的其它雜質(zhì)，需要進行水洗。由于乙酸酯類萃取劑在水中溶解度較大，水洗滌除去雜質(zhì)時乙酸酯類萃取劑流失嚴(yán)重。第三，原兒茶醛作為一種活性成分，在水洗工藝中大量損失。第四，乙酸酯類萃取劑和水的密度差較小，一般在0.1g/ml左右，導(dǎo)致萃取中容易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，降低了分離效率。產(chǎn)生這些問題的根本原因在于現(xiàn)有萃取劑分離選擇性不足，物理性質(zhì)也不夠優(yōu)越。醇類是文獻中經(jīng)常用于萃取丹參酚酸的另一種萃取劑，比如正丁醇等。但醇類在水中的溶解度經(jīng)常超過乙酸酯類，所以在萃取和水洗滌過程中的溶解損失也往往更大。其他常見溶劑，比如烷烴，雖然在水中溶解度小，也不容易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，但由于極性太低，很難從水中萃取丹參酚酸。在這種情況下，利用混合溶劑則有可能形成不同溶劑性質(zhì)之間的優(yōu)勢互補，從而實現(xiàn)同時具有高選擇性和優(yōu)良操作性的萃取過程。

現(xiàn)有技術(shù)中，提取分離丹酚酸a時一般是只純化丹酚酸a一種物質(zhì)，如果能在一次純化中同時獲得高純度的丹酚酸a和原兒茶醛，將能降低生產(chǎn)成本，減少排污。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對已報道的丹酚酸a萃取劑選擇性低，水中溶解度大并且容易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象等問題，提出的一種同時精制丹酚酸a和原兒茶醛的方法，采用特定的萃取劑，只通過液液萃取同時精制丹酚酸a和原兒茶醛。

一種同時精制丹酚酸a和原兒茶醛的方法，包括下列步驟：

(1)用萃取劑s1萃取丹參水提濃縮液中的原兒茶醛，得到含原兒茶醛的萃取液e1和萃余液r1；

(2)萃取液e1經(jīng)水洗、真空干燥后得原兒茶醛；

(3)用萃取劑s2萃取萃余液r1中的丹酚酸a，得到含丹酚酸a的萃取液e2和萃余液r2；

(4)萃取液e2經(jīng)水洗、真空干燥后得丹酚酸a。

本發(fā)明選用的萃取劑s1和s2均為含烷烴的混合溶劑，通過改變混合溶劑中烷烴的比例，利用原兒茶醛和丹酚酸a的極性差異，首先從丹參水提濃縮液中萃取分離原兒茶醛，再萃取分離丹酚酸a，實現(xiàn)同時精制丹酚酸a和原兒茶醛的目的。

本發(fā)明中，所述丹參水提濃縮液采用常規(guī)回流方式或溫浸的提取方式從丹參藥材中提取并濃縮后得到，所述丹參水提濃縮液中固形物含量在30～70％之間。

所述萃取劑s1由以質(zhì)量百分比計的以下組分組成：20～80％溶劑a；20～80％溶劑b。

所述萃取劑s2由以質(zhì)量百分比計的以下組分組成：0.1～50％溶劑a；50～99.9％溶劑b。

其中，溶劑a為非極性溶劑，以異戊烷的極性值為0，則溶劑a的極性值小于1；作為優(yōu)選，溶劑a為正庚烷、正戊烷、異辛烷和石油醚中的一種或任意比例的混合物；

溶劑b為中等極性溶劑，以異戊烷的極性值為0，則溶劑b的極性值介于3到5.5之間；作為優(yōu)選，溶劑b為乙酸乙酯、乙酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯、乙酸異丁酯、甲基異丁基甲酮、正丁醇和異丁醇中的一種或任意比例的混合物。采用含烷烴的混合溶劑作為萃取劑，對丹酚酸a和原兒茶醛的萃取選擇性高，且更易分相，減少乳化現(xiàn)象產(chǎn)生的可能性，有利于提高生產(chǎn)效率。

步驟(1)中，所述用萃取劑s1萃取的次數(shù)為1～3次，每次加入質(zhì)量為丹參水提濃縮液0.1～10倍的萃取劑s1進行萃取。

步驟(2)中，所得到的原兒茶醛占總固體質(zhì)量分數(shù)85％以上。

步驟(3)中，所述用萃取劑s2萃取的次數(shù)為1～3次，每次加入質(zhì)量為萃余液r10.1～10倍的萃取劑s2進行萃取。

步驟(4)中，采用ph為3.0～6.7的酸水洗滌萃取液e2。

步驟(2)和步驟(4)中，在20～50℃下進行真空干燥。

步驟(4)中，所得到的丹酚酸a占總固體質(zhì)量分數(shù)85％以上。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：

(1)萃取劑s1和s2中由于含有烷烴，對丹酚酸a和原兒茶醛的萃取選擇性很高，幾乎不萃取其他丹參水提濃縮液中的酚酸，所以只用少量水洗滌即可得到高純度丹酚酸a和原兒茶醛；

(2)由于烷烴在水中溶解度很小，在對混合溶劑進行水洗滌時其中的溶劑b的溶解損失比單獨使用溶劑b作為萃取劑小很多；

(3)由于烷烴和水密度差大，界面張力大，所以混合溶劑在萃取中比單獨使用溶劑b更容易分相，減少乳化現(xiàn)象產(chǎn)生的可能性，有利于提高生產(chǎn)效率。本發(fā)明選用的溶劑a和溶劑b沸點均不高，所以可以比較容易地通過蒸發(fā)的方法實現(xiàn)溶劑回收和再生。

附圖說明

圖1為本發(fā)明同時精制丹酚酸a和原兒茶醛的方法流程圖；

圖2為實施例1中有機相o1的液相色譜圖；

圖3為實施例1中有機相o2的液相色譜圖。

具體實施方式

下面結(jié)合試驗例及具體實施方式對本發(fā)明作進一步的詳細描述。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本發(fā)明內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

本發(fā)明同時精制丹酚酸a和原兒茶醛的方法流程圖如圖1所示。

本發(fā)明色譜分析方法參考文獻：閆安憶.冠心寧注射液醇沉工藝的質(zhì)量控制技術(shù)研究[d].杭州：浙江大學(xué)，2012。

實施例1

取丹參1kg，加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。再加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。合并兩次濾液之后減壓濃縮，濃縮至濃縮液為1.10g/ml待用。取乙酸乙酯800g，正庚烷200g，混合制成萃取劑s1待用。取乙酸乙酯999g，正庚烷1g，混合制成萃取劑s2待用。

取200g萃取劑s1，在分液漏斗中萃取100g丹參水提濃縮液，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e1和萃余液r1。在分液漏斗中用700ml水洗滌萃取液e1兩遍，洗滌后得到有機相o1。將有機相o1低溫真空干燥后得到原兒茶醛，其純度為90.2％，回收率73％。有機相o1的液相色譜圖如圖2所示。

取200g萃取劑s2，在分液漏斗中萃取萃余液r1，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e2和萃余液r2。在分液漏斗中用700mlph值為3.5的水洗滌萃取液e2兩遍，洗滌后得到有機相o2。將有機相o2低溫真空干燥后得到丹酚酸a，其純度為91.3％，回收率92％。有機相o2的液相色譜圖如圖3所示。

實施例2

取丹參1kg，加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。再加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。合并兩次濾液之后減壓濃縮，濃縮至濃縮液為1.08g/ml待用。取正丁醇200g，正戊烷800g，混合制成萃取劑s1待用。取正丁醇500g，正戊烷500g，混合制成萃取劑s2待用。

取200g萃取劑s1，在分液漏斗中萃取100g丹參水提濃縮液，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e1和萃余液r1。在分液漏斗中用600ml水洗滌萃取液e1兩遍，洗滌后得到有機相o1。將有機相o1低溫真空干燥后得到原兒茶醛，其純度為93.6％，回收率70％。

取200g萃取劑s2，在分液漏斗中萃取萃余液r1，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e2和萃余液r2。在分液漏斗中用600mlph值為4.0的酸性水洗滌萃取液e2兩遍，洗滌后得到有機相o2。將有機相o2低溫真空干燥后得到丹酚酸a，其純度為90.8％，回收率92.6％。

實施例3

取丹參1kg，加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。再加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。合并兩次濾液之后減壓濃縮，濃縮至濃縮液為1.15g/ml待用。取甲基異丁基甲酮300g，異辛烷700g，混合制成萃取劑s1待用。取甲基異丁基甲酮600g，異辛烷400g，混合制成萃取劑s2待用。

取200g萃取劑s1，在分液漏斗中萃取100g丹參水提濃縮液，充分振搖后靜置分相，重復(fù)萃取三次，合并萃取液得到萃取液e1和萃余液r1。在分液漏斗中用1500ml水洗滌萃取液e1兩遍，洗滌后得到有機相o1。將有機相o1低溫真空干燥后得到原兒茶醛，其純度為88.2％，回收率75％。

取200g萃取劑s2，在分液漏斗中萃取萃余液r1，充分振搖后靜置分相，重復(fù)萃取三次，合并萃取液得到萃取液e2和萃余液r2。在分液漏斗中用1500mlph值為5.0的酸性水洗滌萃取液e2兩遍，洗滌后得到有機相o2。將有機相o2低溫真空干燥后得到丹酚酸a，其純度為85.0％，回收率94％。

實施例4

取丹參1kg，加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。再加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。合并兩次濾液之后減壓濃縮，濃縮至濃縮液為1.18g/ml待用。取異丁醇250g，石油醚750g，混合制成萃取劑s1待用。取異丁醇550g，石油醚450g，混合制成萃取劑s2待用。

取200g萃取劑s1，在分液漏斗中萃取100g丹參水提濃縮液，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e1和萃余液r1。在分液漏斗中用600ml水洗滌萃取液e1兩遍，洗滌后得到有機相o1。將有機相o1低溫真空干燥后得到原兒茶醛，其純度為85.0％，回收率77％。

取200g萃取劑s2，在分液漏斗中萃取萃余液r1，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e2和萃余液r2。在分液漏斗中用600mlph值為5.0的酸性水洗滌萃取液e2兩遍，洗滌后得到有機相o2。將有機相o2低溫真空干燥后得到丹酚酸a，其純度為86.1％，回收率93.1％。

實施例5

取丹參1kg，加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。再加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。合并兩次濾液之后減壓濃縮，濃縮至濃縮液為1.10g/ml待用。取乙酸正丙酯800g，正庚烷200g，混合制成萃取劑s1待用。取乙酸正丙酯950g，正庚烷50g，混合制成萃取劑s2待用。

取200g萃取劑s1，在分液漏斗中萃取100g丹參水提濃縮液，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e1和萃余液r1。在分液漏斗中用700ml水洗滌萃取液e1兩遍，洗滌后得到有機相o1。將有機相o1低溫真空干燥后得到原兒茶醛，其純度為88.7％，回收率75％。

取200g萃取劑s2，在分液漏斗中萃取萃余液r1，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e2和萃余液r2。在分液漏斗中用700mlph值為4.5的水洗滌萃取液e2兩遍，洗滌后得到有機相o2。將有機相o2低溫真空干燥后得到丹酚酸a，其純度為90.8％，回收率92％。

實施例6

取丹參1kg，加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。再加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。合并兩次濾液之后減壓濃縮，濃縮至濃縮液為1.10g/ml待用。取乙酸異丙酯700g，正戊烷300g，混合制成萃取劑s1待用。取乙酸異丙酯900g，正戊烷100g，混合制成萃取劑s2待用。

取200g萃取劑s1，在分液漏斗中萃取100g丹參水提濃縮液，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e1和萃余液r1。在分液漏斗中用700ml水洗滌萃取液e1兩遍，洗滌后得到有機相o1。將有機相o1低溫真空干燥后得到原兒茶醛，其純度為86.5％，回收率76％。

取200g萃取劑s2，在分液漏斗中萃取萃余液r1，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e2和萃余液r2。在分液漏斗中用700mlph值為5.5的水洗滌萃取液e2兩遍，洗滌后得到有機相o2。將有機相o2低溫真空干燥后得到丹酚酸a，其純度為89.7％，回收率93％。

實施例7

取丹參1kg，加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。再加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。合并兩次濾液之后減壓濃縮，濃縮至濃縮液為1.15g/ml待用。取乙酸正丁酯650g，異辛烷350g，混合制成萃取劑s1待用。取乙酸正丁酯850g，異辛烷150g，混合制成萃取劑s2待用。

取200g萃取劑s1，在分液漏斗中萃取100g丹參水提濃縮液，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e1和萃余液r1。在分液漏斗中用700ml水洗滌萃取液e1兩遍，洗滌后得到有機相o1。將有機相o1低溫真空干燥后得到原兒茶醛，其純度為87.3％，回收率73％。

取200g萃取劑s2，在分液漏斗中萃取萃余液r1，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e2和萃余液r2。在分液漏斗中用700mlph值為6.7的水洗滌萃取液e2兩遍，洗滌后得到有機相o2。將有機相o2低溫真空干燥后得到丹酚酸a，其純度為88.2％，回收率93.2％。

實施例8

取丹參1kg，加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。再加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。合并兩次濾液之后減壓濃縮，濃縮至濃縮液為1.20g/ml待用。取甲酸乙酯700g，石油醚300g，混合制成萃取劑s1待用。取甲酸乙酯950g，石油醚50g，混合制成萃取劑s2待用。

取200g萃取劑s1，在分液漏斗中萃取100g丹參水提濃縮液，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e1和萃余液r1。在分液漏斗中用700ml水洗滌萃取液e1兩遍，洗滌后得到有機相o1。將有機相o1低溫真空干燥后得到原兒茶醛，其純度為92.3％，回收率71％。

取200g萃取劑s2，在分液漏斗中萃取萃余液r1，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e2和萃余液r2。在分液漏斗中用700mlph值為3.0的水洗滌萃取液e2兩遍，洗滌后得到有機相o2。將有機相o2低溫真空干燥后得到丹酚酸a，其純度為87.6％，回收率93.5％。

實施例9

取丹參1kg，加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。再加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。合并兩次濾液之后減壓濃縮，濃縮至濃縮液為1.20g/ml待用。取乙酸甲酯700g，正庚烷300g，混合制成萃取劑s1待用。取乙酸甲酯900g，正庚烷100g，混合制成萃取劑s2待用。

取200g萃取劑s1，在分液漏斗中萃取100g丹參水提濃縮液，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e1和萃余液r1。在分液漏斗中用700ml水洗滌萃取液e1兩遍，洗滌后得到有機相o1。將有機相o1低溫真空干燥后得到原兒茶醛，其純度為93.0％，回收率70.2％。

取200g萃取劑s2，在分液漏斗中萃取萃余液r1，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e2和萃余液r2。在分液漏斗中用700mlph值為3.5的水洗滌萃取液e2兩遍，洗滌后得到有機相o2。將有機相o2低溫真空干燥后得到丹酚酸a，其純度為86.8％，回收率94％。

實施例10

取丹參1kg，加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。再加水6kg，煎煮120min后過濾取濾液。合并兩次濾液之后減壓濃縮，濃縮至濃縮液為1.15g/ml待用。取乙酸異丁酯800g，正庚烷200g，混合制成萃取劑s1待用。取乙酸異丁酯999g，正庚烷1g，混合制成萃取劑s2待用。

取200g萃取劑s1，在分液漏斗中萃取100g丹參水提濃縮液，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e1和萃余液r1。在分液漏斗中用700ml水洗滌萃取液e1兩遍，洗滌后得到有機相o1。將有機相o1低溫真空干燥后得到原兒茶醛，其純度為93.6％，回收率70.2％。

取200g萃取劑s2，在分液漏斗中萃取萃余液r1，充分振搖后靜置分相。分相后得到萃取液e2和萃余液r2。在分液漏斗中用700mlph值為4.0的水洗滌萃取液e2兩遍，洗滌后得到有機相o2。將有機相o2低溫真空干燥后得到丹酚酸a，其純度為92.9％，回收率91％。