本發(fā)明涉及化學合成技術領域，具體地說，是一種立達霉代謝產(chǎn)物12：n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸的合成方法。

背景技術：

立達霉(ridomil)為f.scwinn于1977年首先報導的新型高效內(nèi)吸殺菌劑，又名甲霜靈，其性能較穩(wěn)定，對ph的適應范圍廣泛(1.0～9.0)，對高溫度和強光耐受性好。作為一種新型高效內(nèi)吸殺菌劑，其作用機理是通過作用于菌絲體、孢子的細胞壁，以使其選擇通透性，影響水霉菌對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，使菌絲體細胞死亡、孢子失去萌發(fā)力，阻斷其生活史，現(xiàn)有研究證明它對魚體和魚卵的水霉病具有良好的防治效果，如復方立達霉粉——“美婷”的潑灑濃度為5～10g/m³、浸浴濃度為20g/m³時，可有效地防治魚卵、魚苗和成魚的水霉病。

目前，國內(nèi)主要使用的含立達霉的劑型有35％拌種劑、25％可濕性粉劑、5％顆粒劑和25％乳油，常見混劑有58％甲霜靈·錳鋅可濕性粉劑(立達霉+代森錳鋅)、60％甲霜靈·錳鋅可濕性粉劑、72％甲霜靈·錳鋅可濕性粉劑等。

2002年農(nóng)藥殘留聯(lián)席會議(jmpr)建立了立達霉的毒理學，并確立了立達霉的每日容許攝入量(adi)。同時，經(jīng)研究表明，立達霉在動物體內(nèi)代謝主要有16種代謝產(chǎn)物，其中，根據(jù)在不同動物中檢測出的含量，較多的(>0.1mg/kg)的代謝產(chǎn)物為代謝物6、8、12、16。而其中，代謝產(chǎn)物12為n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸，目前國內(nèi)外尚未有合成獲得該種立達霉主要代謝產(chǎn)物的相關研究。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術中的不足，提供一種立達霉代謝產(chǎn)物12：n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸的合成方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案是：一種合成n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸的方法，所述的方法包括以下步驟：

1)取甲霜靈溶解于有機溶劑中，升溫后滴加催化劑，再升溫后，用有機溶劑提取反應所得物，到化合物(ⅱ)，所述的化合物(ⅱ)為n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸甲酯；

2)將化合物(ⅱ)再溶解到堿性物質(zhì)中，室溫反應，得到n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸。

所述方法的反應路線為：

所述的催化劑為高錳酸鉀，所述的有機溶劑為吡啶水溶液，堿性物質(zhì)為氫氧化鈉。

所述的方法包括以下步驟：

1)甲霜靈溶解到55％吡啶水溶液中，加熱到70℃，之后加入高錳酸鉀，保持70℃過夜反應，將所得液過濾，將濾液收回，然后用hcl調(diào)節(jié)ph到2，乙酸乙酯提取兩次，合并乙酸乙酯層，用無水硫酸鈉干燥，再進行真空抽濾，濾液回收溶劑，得到固體，柱層析分離得到n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙酰基)丙氨酸甲酯；

2)將n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙酰基)丙氨酸甲酯溶解在甲醇中，加入氫氧化鈉，室溫攪拌反應過夜，原料反應完全后，用hcl調(diào)節(jié)ph到1，乙酸乙酯提取兩次，合并有機相，用無水可硫酸鈉干燥，中性活性炭脫色過夜，回收溶劑，得到n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸。

所述的方法包括以下步驟：

1)稱取27.9g甲霜靈，放入200ml55％吡啶水溶液中，充分溶解，并加熱到70℃，之后分批加入24g高錳酸鉀，保持70℃過夜反應，將所得液過濾，將濾液收回，然后用6nhcl調(diào)節(jié)ph到2，乙酸乙酯150ml提取兩次，合并乙酸乙酯層，用2.5g無水硫酸鈉干燥，再進行真空抽濾，濾液回收溶劑，得到固體，柱層析分離，洗脫液pe:ea5:1---3:1，得到n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸甲酯；

2)n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸甲酯溶解在10ml甲醇中，溶液中加入5n氫氧化鈉2ml，室溫攪拌反應過夜，原料反應完全后，用6nhcl調(diào)節(jié)ph到1，乙酸乙酯15ml提取兩次，合并有機相，用2.5g無水可硫酸鈉干燥，1g中性活性炭脫色過夜，回收溶劑，得到n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸。

本發(fā)明優(yōu)點在于：

本發(fā)明提供的立達霉中代謝產(chǎn)物12的合成方法，能夠獲得高純度的n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸，且該方法獲得的代謝產(chǎn)物具有較好的回收率，具有非?？捎^的應用前景。

附圖說明

附圖1是n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸的核磁共振氫譜。

附圖2是n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙酰基)丙氨酸的hplc圖譜。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的具體實施方式作詳細說明。

一種立達霉中代謝產(chǎn)物12的合成方法，包括以下步驟：

1)取立達霉(ⅰ)為原料藥，溶解于有機溶劑中，升溫后滴加催化劑，再升溫后，用有機溶劑提取反應所得物，到化合物(ⅱ)；

2)將化合物(ⅱ)再溶解到堿性物質(zhì)中，室溫反應，得到代謝產(chǎn)物12(ⅲ)。

以下為反應步驟：

下列實施例中未具體注明的工藝設備或裝置均采用本領域內(nèi)的常規(guī)設備或裝置；所有壓力值和范圍都是指相對壓力。以下實施例中使用的試劑如吡啶水溶液、高錳酸鉀、乙酸乙酯、乙腈、鹽酸、洗脫液pe、ea、氫氧化鈉、甲醇、無水硫酸鈉、中性活性炭等均為本領域常規(guī)使用的試劑。以下實施例中使用的立達霉為甲霜靈分析標準品，由國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)。薄層色譜板(tlc)、高效液相色譜分析儀(hplc)、核磁共振氫譜儀(hnmr)均為本領域常規(guī)使用的儀器。

此外應理解，本發(fā)明中提到的一個或多個方法步驟并不排斥在所述組合步驟前后還可以存在其他方法步驟或在這些明確提到的步驟之間還可以插入其他方法步驟，除非另有說明；還應理解，本發(fā)明中提到的一個或多個設備/裝置之間的組合連接關系并不排斥在所述組合設備/裝置前后還可以存在其他設備/裝置或在這些明確提到的兩個設備/裝置之間還可以插入其他設備/裝置，除非另有說明。而且，除非另有說明，各方法步驟的編號僅為鑒別各方法步驟的便利工具，而非為限制各方法步驟的排列次序或限定本發(fā)明可實施的范圍，其相對關系的改變或調(diào)整，在無實質(zhì)變更技術內(nèi)容的情況下，當亦視為本發(fā)明可實施的范疇。

實施例1

稱取27.9g(100mmol)甲霜靈，放入含有200ml55％吡啶水溶液三口瓶中，使其充分溶解，并加熱到70度，之后分批加入24g(150mmol)的高錳酸鉀，使其過程保持70度過夜反應，將所得液過濾，將濾液收回，然后用6nhcl調(diào)節(jié)ph到2，乙酸乙酯150ml提取兩次，合并乙酸乙酯層，用2.5g無水硫酸鈉干燥，再進行真空抽濾，濾液回收溶劑，得到15g固體，柱層析分離，洗脫液pe:ea5:1---3:1，得到1.2g化合物(ⅱ)即n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸甲酯，其收回率5％。

化合物(ⅱ)溶解在10ml甲醇中，溶液中加入5n氫氧化鈉2ml，室溫攪拌反應過夜，原料反應完全后，用6nhcl調(diào)節(jié)ph到1，乙酸乙酯15ml提取兩次，合并有機相，用2.5g無水硫酸鈉干燥，1g中性活性炭脫色過夜，回收溶劑，得到0.6g固體即為立達霉代謝產(chǎn)物12：n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸，獲得的代謝產(chǎn)物12的收回率：60％。

所述摩爾收率的計算公式(i)如下。

收率＝(目的產(chǎn)物生成量/關鍵組分起始量)×100％(i)

計算公式(i)中，根據(jù)原料的分子量算出摩爾量，然后在根據(jù)摩爾量和產(chǎn)物的分子量算出產(chǎn)物的理論量，實際量除以理論量就是收率。

實施例2

通過高效液相色譜法和核磁分析的方法對代謝物的純度進行鑒定。

高效液相色譜法：取5mg樣品加乙腈溶解，并滴加少量含有0.1％三氟乙酸的乙腈，進樣10μl。色譜條件：watersxbridgec18柱(4.6*250*5μm)，流動相：乙腈/水＝40/60(v/v)，流速：1ml/min，檢測波長：220nm，溫度：35℃。

核磁分析方法：取樣品5mg加入合適的氘代試劑0.5ml，超聲5分鐘，溶解均勻澄清后進入核磁共振儀器，氫譜掃譜次數(shù)64次。

將實施例1中獲得的代謝產(chǎn)物8分別進行hnmr和hplc檢測。

其中，如附圖1所示，通過hnmr檢測可知，1.12-1.14ppm(d,3h，ch3脂肪甲基氫)2.16ppm和2.41ppm分別為和苯環(huán)相連的兩個甲基，這個與模擬中的不一樣。3.5-3.7ppm(dd，2h)為與氧和羰基相連的亞甲基的化學位移值。4.57-4.59ppm(t，1h)為與甲基相連的次甲基的化學位移，芳香區(qū)主要有7.14-7.19ppm(1h，d)為苯環(huán)上甲基氫的化學位移。7.22-7.24(dd，1h)為芳環(huán)上甲基間位氫化學位移，7.92ppm(d，1h)為芳環(huán)羧基鄰位氫化學位移。根據(jù)一般的核磁純度判斷經(jīng)驗，核磁譜上無明顯雜峰或者雜峰氫積分面積小于0.05以下，可以判斷產(chǎn)品純度大于95％。

如附圖2所示，通過hplc檢測，采用hplc面積歸一法測定獲得代謝產(chǎn)物12：n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?-丙氨酸的純度在最大吸收峰220nm處的保留時間約為3.48min，回收率為98.3％。

實施例3

稱取27.9g(100mmol)甲霜靈，放入含有200ml55％吡啶水溶液三口瓶中，使其充分溶解，并加熱到70度，之后分批加入24g(150mmol)的高錳酸鉀，使其過程保持70度過夜反應，將所得液過濾，將濾液收回，然后用6nhcl調(diào)節(jié)ph到2，乙酸乙酯150ml提取兩次，合并乙酸乙酯層，用2.5g無水硫酸鈉干燥，再進行真空抽濾，濾液回收溶劑，得到15g固體，柱層析分離，洗脫液pe:ea5:1---3:1，得到1.2g化合物(ⅱ)即n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙酰基)丙氨酸甲酯，其收回率5％。

上述化合物(ⅱ)溶解在50ml甲醇中，溶液中加入5n氫氧化鈉8ml，室溫攪拌反應過夜，原料反應完全后，用6nhcl調(diào)節(jié)ph到1.8，乙腈15ml提取兩次，合并有機相，2g無水硫酸鈉干燥，2g中性活性炭脫色24h，回收溶劑，得到0.52g固體即為立達霉代謝產(chǎn)物12：n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙?；?丙氨酸，獲得的代謝產(chǎn)物12的收回率：52％。

所述摩爾收率的計算公式同上(i)。

實施例4

通過高效液相色譜法和核磁分析的方法對代謝物的純度進行鑒定。

高效液相色譜法：取5mg樣品加乙腈溶解，并滴加少量含有0.1％三氟乙酸的乙腈，進樣10μl。色譜條件：watersxbridgec18柱(4.6*250*5μm)，流動相：乙腈/水＝40/60(v/v)，流速：1ml/min，檢測波長：220nm，溫度：35℃。

核磁分析方法：取樣品5mg加入合適的氘代試劑0.5ml，超聲5分鐘，溶解均勻澄清后進入核磁共振儀器，氫譜掃譜次數(shù)64次。

將實施例3中獲得的代謝產(chǎn)物8分別進行hnmr和hplc檢測。

通過hnmr檢測可知，1.12-1.14ppm(d,3h，ch3脂肪甲基氫)2.16ppm和2.41ppm分別為和苯環(huán)相連的兩個甲基，這個與模擬中的不一樣。3.5-3.7ppm(dd，2h)為與氧和羰基相連的亞甲基的化學位移值。4.57-4.59ppm(t，1h)為與甲基相連的次甲基的化學位移，芳香區(qū)主要有7.14-7.19ppm(1h，d)為苯環(huán)上甲基氫的化學位移。7.22-7.24(dd，1h)為芳環(huán)上甲基間位氫化學位移，7.92ppm(d，1h)為芳環(huán)羧基鄰位氫化學位移。根據(jù)一般的核磁純度判斷經(jīng)驗，核磁譜上無明顯雜峰或者雜峰氫積分面積小于0.05以下，可以判斷產(chǎn)品純度大于95％。

通過hplc檢測，采用hplc面積歸一法測定獲得代謝產(chǎn)物12：n-(2-羧基-6-甲基苯基)-n-(甲氧乙酰基)-丙氨酸的純度在最大吸收峰220nm處的保留時間約為3.48min，回收率為88.92％。

所以，本發(fā)明有效克服了現(xiàn)有技術中的種種缺點而具高度產(chǎn)業(yè)利用價值。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應視為本發(fā)明的保護范圍。