1.一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法,其特征在于,包括以下步驟:
(1)使用醇溶液對(duì)灰樹花子實(shí)體原料進(jìn)行浸泡脫脂,脫脂完畢后,通過離心設(shè)備,進(jìn)行固液分離,得到一次固相物和一次提取液;
(2)使用去離子水對(duì)步驟 (1)中所得的一次固相物,進(jìn)行沸水冷凝回流浸提,浸提完畢后,再次通過離心設(shè)備,進(jìn)行固液分離,得到二次固相物和二次提取液;
(3)將步驟(2)中所得的二次提取液,經(jīng)濃縮、去蛋白、堿中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后,噴霧干燥,得灰樹花水提多糖;
(4)使用堿性水溶液對(duì)步驟 (2)中所得的二次固相物進(jìn)行浸提,浸提完畢后固液分離,得到三次提取液;
(5)將步驟(4)中所得的三次提取液,經(jīng)酸中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后,噴霧干燥,即得灰樹花堿提多糖;
其中,步驟(1) 中,所述醇溶液與灰樹花子實(shí)體原料的重量比為 8-10 :1,醇溶液為85-95%乙醇(w/v)溶液;
其中,步驟 (2) 中,進(jìn)行沸水冷凝回流浸提時(shí),水體溫度控制在90-100℃之間,煎煮時(shí)間控制在2-4小時(shí);
其中,步驟 (2) 中,所述離子水與灰樹花原料的重量比為 8-10 :1,提取次數(shù)共計(jì)2次;
其中,步驟 (3)中,對(duì)二次提取液進(jìn)行濃縮時(shí),通過框架式薄膜濃縮器或真空濃縮機(jī),進(jìn)行濃縮,直至二次提取液的波美度達(dá)到25°~30°;
其中,步驟 (3)中,去蛋白的具體條件為,向經(jīng)過濃縮的二次提取液中,滴加5-30%三氯乙酸(w/v),直至溶液不再混濁,并于3-6℃下靜置12-24小時(shí),離心去蛋白。
2.如權(quán)利要求1所述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法,其特征在于,步驟 (3)中,向經(jīng)過去蛋白的二次提取液中,滴加10%氫氧化鈉水溶液,進(jìn)行中和,直至PH為6.8-7.2之間。
3.如權(quán)利要求1所述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法,其特征在于,步驟 (3)和(5)中,進(jìn)行透析脫鹽時(shí),透析袋埋在吸水力強(qiáng)的聚乙二醇或甘油中,分別對(duì)步驟(3)中經(jīng)過堿中和的二次提取液和步驟(5)中經(jīng)過酸中和的三次提取液,進(jìn)行透析36-48小時(shí)。
4.如權(quán)利要求1所述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法,其特征在于,步驟 (3)和(5)中,醇沉的具體步驟為:
A、冷卻步驟 (3)中的二次提取液和步驟 (5)中的三次提取液至10℃;
B、隨后采用三慢二快的攪拌節(jié)奏,緩慢向二次提取液和三次提取液中加入乙醇,并控制二次提取液和三次提取液內(nèi)的含醇量達(dá)54%~65%;
C、最后,將加入了乙醇的二次提取液和三次提取液密封,并保存于低溫環(huán)境下,環(huán)境溫度控制在5℃~10℃。
5.如權(quán)利要求1所述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法,其特征在于,步驟 (3)和(5)中,進(jìn)行洗滌時(shí),通過無水乙醇和丙酮依次洗滌兩次。
6.如權(quán)利要求1所述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法,其特征在于,步驟(3)和步驟(5)中,進(jìn)行噴霧干燥時(shí),采用超聲波噴霧干燥工藝,設(shè)定進(jìn)風(fēng)溫度為85~95℃,進(jìn)氣壓力設(shè)定為0.1~0.25MPa,進(jìn)料量控制在30~50mL/min,同時(shí)設(shè)定出風(fēng)溫度為70~90℃。
7.如權(quán)利要求1所述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法,其特征在于,步驟 (4) 中,所述堿性水溶液與二次固相物的重量比為 8-10 :1,堿性水溶液為5%氫氧化鈉水溶液;步驟 (4) 中,進(jìn)行浸提時(shí),水體溫度控制在90-100℃之間,煎煮時(shí)間控制在2-4 小時(shí)。
8.如權(quán)利要求1所述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法,其特征在于,步驟(5) 中,進(jìn)行酸中和時(shí),通過向三次提取液中,滴加2mol/L HCL溶液進(jìn)行中和,直至PH值為7.0。