本發(fā)明涉及一種從中藥粉黃芩中分離制備其有效成黃芩多糖的生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
黃芩(scutellariabaikalensisgeorgi)是我國(guó)傳統(tǒng)中藥重要組成之一，其根部作為一種傳統(tǒng)中藥材主要用于抗病毒感染細(xì)菌感染、抗腫瘤、清除自由基、調(diào)節(jié)免疫等，同時(shí)還具有降低膽固醇和血壓的功效。其所含有的多種有效成分逐漸被人們所發(fā)現(xiàn)，其中包括黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、黃芩多糖等。其中，黃芩多糖由于其分離純化手段復(fù)雜導(dǎo)致國(guó)內(nèi)外對(duì)其關(guān)注度不夠，其作為生物活性多糖家族的一份子，具有良好的抗氧化和免疫調(diào)節(jié)作用，因此人們逐漸對(duì)黃芩多糖藥效以及分離的研究工作產(chǎn)生興趣，期望發(fā)現(xiàn)更多關(guān)于黃芩等中藥材的生物醫(yī)學(xué)作用。
目前植物多糖的提取方法主要有：熱水浸提法、溶劑提取法、堿浸提法、酸浸提法、酶解提取法、微波提取法、超濾法以及超聲波法等。經(jīng)過(guò)分離沉淀獲得的多糖提取物中，常會(huì)混雜著蛋白質(zhì)、色素、無(wú)機(jī)鹽以及醇不溶的小分子有機(jī)物(如低聚糖)等雜質(zhì)，需要分別除去。除蛋白質(zhì)常用的方法有：sevag法、三氯醋酸法、層析法、酶法、等電點(diǎn)法、三氟三氯乙烷法及硫酸鋅沉淀法等。脫色常用的方法有：金屬絡(luò)合物法、離子交換法、氧化法和吸附法，其中金屬絡(luò)合物法主要是采用一重金屬銅、鐵、鉛等沉淀多糖，使多糖和部分色素相分離；氧化法主要是用過(guò)氧化氫或者濃氨水進(jìn)行脫色；吸附法主要包括deae-纖維素法，活性炭吸附法和硅藻土吸附法等。除去低分子質(zhì)量的雜質(zhì)，如低聚糖、脫蛋白殘留溶劑、無(wú)機(jī)鹽等，常用的方法有透析法、超濾法、凝膠過(guò)濾法和離子交換樹(shù)脂法等。這些方法或多或少的存在：1.分離過(guò)程使用具有明確毒性的溶劑、雜質(zhì)較多：2.工藝不易放大，不適合工業(yè)化生產(chǎn)，生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，操作復(fù)雜，生產(chǎn)成本較高；3.有毒溶劑不但使成品存在被污染的危險(xiǎn)，并且對(duì)生產(chǎn)環(huán)境和操作人員構(gòu)成潛在的危害。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種從黃芩根中提取黃芩多糖的分離純化方法，本發(fā)明所述的黃芩多糖純化方法方便易行、可操作性好、易于工業(yè)化生產(chǎn)，避免了有毒溶劑和復(fù)雜設(shè)備的使用，可實(shí)現(xiàn)黃芩粗多糖的前期快速除雜的目的。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所采用的技術(shù)方案是：一種從黃芩根中提取黃芩多糖的分離純化方法，該方法包括以下步驟：
(1)脫脂：將黃芩材粉碎成50-100目的粗粉，加入索氏提取器內(nèi)進(jìn)行脫脂三次，脫脂完成后自然晾干，得到脫脂后的黃芩粉末；
(2)水提：將脫脂后的黃芩粉末加入索氏提取器內(nèi)，以水為溶劑對(duì)黃芩粉末進(jìn)行抽提，反復(fù)三次，合并抽提液，得到濃度為50-200mg/l的黃芩粗多糖水溶液；
(3)絮凝：向黃芩粗多糖水溶液中緩慢加入20mg/ml的殼聚糖醋酸溶液進(jìn)行絮凝，時(shí)間為10-50分鐘。其中，殼聚糖原料選用生化級(jí)別試劑，粘度范圍在50-800mpa·s，水溶液醋酸體積濃度為2％。將絮凝所得沉淀以10000-15000r/min的速度離心分離，回收上清液。
(4)將回收得到的上清液濃縮至原體積的0.25-0.5倍，加入95％乙醇邊加邊攪拌，使最終乙醇含量達(dá)到80％。靜置10分鐘后過(guò)濾，將沉淀冷凍干燥，得淺黃色黃芩多糖粉末。
本發(fā)明的特點(diǎn)：純化過(guò)程可一步將蛋白與色素同時(shí)除去，多糖損失率小，操作簡(jiǎn)單，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)，且不使用有毒溶劑，過(guò)程安全高效。
具體實(shí)施方式
一種從黃芩根中提取黃芩多糖的分離純化方法，按照常規(guī)索氏提取法對(duì)50-100目的黃芩粉末進(jìn)行多糖提取，包括石油醚脫脂，水提三次。選取粘度范圍在50-800mpa·s的生化級(jí)別殼聚糖，配置濃度為20mg/ml的殼聚糖醋酸水溶液。將上述殼聚糖溶液加入到黃芩粗多糖的水溶液中，使得殼聚糖在抽提液中的最終濃度為0.2-1mg/ml，緩慢加入進(jìn)行絮凝，絮凝時(shí)間為10-50分鐘，以10000-15000r/min的速度離心分離，回收上清液，濃縮至原體積的0.25-0.5倍，按照常規(guī)水溶醇沉的方法得到多糖沉淀，過(guò)濾沉淀，沉淀經(jīng)冷凍干燥后得黃芩多糖純品。
實(shí)施例1
將200g黃芩藥材粉碎成50-100目的粗粉，加入索氏提取器內(nèi)，加入50ml石油醚，脫脂三次。將脫脂后的黃芩粉末烘干后加入索氏提取器內(nèi)，用50ml去離子水于100℃下抽提三次，得200ml抽提液，自然冷卻后備用；向200ml抽提液中緩慢加入2ml濃度為20mg/ml的殼聚糖2％醋酸水溶液后靜置10min，于10000rpm離心棄去沉淀，回收黃芩多糖溶液，減壓蒸餾使溶液體積為50ml；向50ml多糖溶液中加入267ml95％乙醇使得乙醇終濃度為80％，靜置10分鐘后過(guò)濾、將沉淀冷凍干燥，既得黃芩多糖純品，回收率為91.54％，脫色率達(dá)32.35％，蛋白脫除率達(dá)36.21％。
實(shí)施例2
將200g黃芩藥材粉碎成50-100目的粗粉，加入索氏提取器內(nèi)，加入50ml石油醚，脫脂三次。將脫脂后的黃芩粉末烘干后加入索氏提取器內(nèi)，用50ml去離子水于100℃下抽提三次，得200ml抽提液，自然冷卻后備用；向200ml抽提液中緩慢加入10ml濃度為20mg/ml的殼聚糖2％醋酸水溶液后靜置30min，于15000rpm離心棄去沉淀，回收黃芩多糖溶液，減壓蒸餾使溶液體積為40ml；向40ml多糖溶液中加入213ml95％乙醇使得乙醇終濃度為80％，靜置10分鐘后過(guò)濾、將沉淀冷凍干燥，既得黃芩多糖純品，回收率為80.43％，脫色率達(dá)82.35％，蛋白脫除率達(dá)55.39％。
實(shí)施例3
將200g黃芩藥材粉碎成50-100目的粗粉，加入索氏提取器內(nèi)，加入50ml石油醚，脫脂三次。將脫脂后的黃芩粉末烘干后加入索氏提取器內(nèi)，用50ml去離子水于100℃下抽提三次，得200ml抽提液，自然冷卻后備用；向200ml抽提液中緩慢加入6ml濃度為20mg/ml的殼聚糖2％醋酸水溶液后靜置50min，于12000rpm離心棄去沉淀，回收黃芩多糖溶液，減壓蒸餾使溶液體積為100ml；向100ml多糖溶液中加入533ml95％乙醇使得乙醇終濃度為80％，靜置10分鐘后過(guò)濾、將沉淀冷凍干燥，既得黃芩多糖純品，回收率為80.65％，脫色率達(dá)73.53％，蛋白脫除率達(dá)50.33％。