本發(fā)明涉及灰樹花生產(chǎn)領(lǐng)域，特別是一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法。

背景技術(shù)：

灰樹花(舞茸)多糖是灰樹花中的一種提取物，由葡聚糖、葡萄糖、木糖、巖藻糖、木糖、甘露糖、豐乳糖及少量蛋白質(zhì)的異聚糖復(fù)合物組成?；覙浠ǘ嗵侵泻幸环N蛋白多糖，中文名叫舞茸地復(fù)仙（舞茸D-fraction）它的蛋白和多糖的比例是7：3平均分子量是100萬。多糖部分由具有β-(1-3)側(cè)鏈的β-(1-6)葡聚糖和具有β-(1-6)側(cè)鏈的β-(1-3)葡聚糖組成。多糖成分中只有這種舞茸地復(fù)仙最有抗癌防癌的作用。

灰樹花（Grifolafrondosa）是一種藥食兩用菌，其多糖是主要的一類活性成分，作為一種生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，灰樹花多糖具有增強免疫功能、抑制腫瘤、抗HIV病毒、穩(wěn)定血壓、降低血糖、改善脂肪代謝等生理活性，且無毒副作用。熱水浸提法是多糖提取最普遍應(yīng)用的方法之一，但該方法存在耗時長，提取率不高等缺點，并存在很大程度的原料浪費。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明對現(xiàn)有的灰樹花多糖提取方法，進行了綜合性研究，結(jié)合現(xiàn)有技術(shù)，針對熱水浸提法存在的提取率不高、原料浪費嚴(yán)重的問題，公開了一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，本發(fā)明的灰樹花多糖分離純化方法，具有提取率高，原料利用率高的特點。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是:

一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）使用醇溶液對灰樹花子實體原料進行浸泡脫脂，脫脂完畢后，通過離心設(shè)備，進行固液分離，得到一次固相物和一次提取液；

（2）使用去離子水對步驟 （1）中所得的一次固相物，進行沸水冷凝回流浸提，浸提完畢后，再次通過離心設(shè)備，進行固液分離，得到二次固相物和二次提取液；

（3）將步驟（2）中所得的二次提取液，經(jīng)濃縮、去蛋白、堿中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，得灰樹花水提多糖；

（4）使用堿性水溶液對步驟 （2）中所得的二次固相物進行浸提，浸提完畢后固液分離，得到三次提取液；

（5）將步驟（4）中所得的三次提取液，經(jīng)酸中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，即得灰樹花堿提多糖。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟（1） 中，所述醇溶液與灰樹花子實體原料的重量比為 8-10 ：1，醇溶液為85－95%乙醇（w/v）溶液。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （2） 中，進行沸水冷凝回流浸提時，水體溫度控制在90－100℃之間，煎煮時間控制在2－4小時。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （2） 中，所述離子水與灰樹花原料的重量比為 8－10 ：1，提取次數(shù)共計2次。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）中，對二次提取液進行濃縮時，通過框架式薄膜濃縮器或真空濃縮機，進行濃縮，直至二次提取液的波美度達到25°～30°。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）中，去蛋白的具體條件為，向經(jīng)過濃縮的二次提取液中，滴加5－30%三氯乙酸（w/v），直至溶液不再混濁，并于3－6℃下靜置12－24小時，離心去蛋白。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）中，向經(jīng)過去蛋白的二次提取液中，滴加10%氫氧化鈉水溶液，進行中和，直至PH為6.8-7.2之間。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）和（5）中，進行透析脫鹽時，透析袋埋在吸水力強的聚乙二醇或甘油中，分別對步驟（3）中經(jīng)過堿中和的二次提取液和步驟（5）中經(jīng)過酸中和的三次提取液，進行透析36－48小時。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）和（5）中，醇沉的具體步驟為：

A、冷卻的步驟 （3）中的二次提取液和步驟 （5）中的三次提取液至10℃；

B、隨后采用三慢二快的攪拌節(jié)奏，緩慢向二次提取液和三次提取液中加入乙醇，并控制二次提取液和三次提取液內(nèi)的含醇量達54％～65％；

C、最后，將加入了乙醇的二次提取液和三次提取液密封，并保存于低溫環(huán)境下，環(huán)境溫度控制在5℃~10℃。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）和（5）中，進行洗滌時，通過無水乙醇和丙酮依次洗滌兩次。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟（3）和步驟（5）中，進行噴霧干燥時，采用超聲波噴霧干燥工藝，設(shè)定進風(fēng)溫度為85~95℃，進氣壓力設(shè)定為0.1~0.25MPa，進料量控制在30~50mL/min，同時設(shè)定出風(fēng)溫度為70~90℃。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （4） 中，所述堿性水溶液與二次固相物的重量比為 8-10 ：1，堿性水溶液為5%氫氧化鈉水溶液。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （4） 中，進行浸提時，水體溫度控制在90－100℃之間，煎煮時間控制在2－4 小時。

上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟（5） 中，進行酸中和時，通過向三次提取液中，滴加2mol/L HCL溶液進行中和，直至PH值為7.0。

本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明公開的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其具體步驟包括：1）灰樹花子實體原料浸泡脫脂，離心得到一次固相物和一次提取液；2）一次固相物進行沸水冷凝回流浸提，離心得到二次固相物和二次提取液；3）二次提取液水提得灰樹花水提多糖；4）二次固相物進行浸提后固液分離，得到三次提取液；5）三次提取液堿提得灰樹花堿提多糖；采用本發(fā)明對灰樹花子實體進行多糖提取，結(jié)合了水提和堿提兩種提取方式，綜合提取灰樹花多糖，可以綜合提高灰樹花多糖的提取率，提取率達到現(xiàn)有提取率的122%，同時大幅度降低了原料的浪費，是一種高利用率、高提取率的灰樹花多糖分離純化的方法，適合大范圍推廣。

附圖說明

圖1本發(fā)明流程圖。

具體實施方式

實施例一

一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）使用醇溶液對灰樹花子實體原料進行浸泡脫脂，脫脂完畢后，通過離心設(shè)備，進行固液分離，得到一次固相物和一次提取液；

（2）使用去離子水對步驟 （1）中所得的一次固相物，進行沸水冷凝回流浸提，浸提完畢后，再次通過離心設(shè)備，進行固液分離，得到二次固相物和二次提取液；

（3）將步驟（2）中所得的二次提取液，經(jīng)濃縮、去蛋白、堿中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，得灰樹花水提多糖；

（4）使用堿性水溶液對步驟 （2）中所得的二次固相物進行浸提，浸提完畢后固液分離，得到三次提取液；

（5）將步驟（4）中所得的三次提取液，經(jīng)酸中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，即得灰樹花堿提多糖。

其中，步驟（1） 中，所述醇溶液與灰樹花子實體原料的重量比為 9.5 ：1，醇溶液為85－95%乙醇（w/v）溶液。

其中，步驟 （2） 中，進行沸水冷凝回流浸提時，水體溫度控制在95℃，煎煮時間控制在3.3小時。

其中，步驟 （2） 中，所述離子水與灰樹花原料的重量比為 8.5 ：1，提取次數(shù)共計2次。

其中，步驟 （3）中，對二次提取液進行濃縮時，通過框架式薄膜濃縮器或真空濃縮機，進行濃縮，直至二次提取液的波美度達到28°。

其中，步驟 （3）中，去蛋白的具體條件為，向經(jīng)過濃縮的二次提取液中，滴加5－30%三氯乙酸（w/v），直至溶液不再混濁，并于3－6℃下靜置24小時，離心去蛋白。

其中，步驟 （3）中，向經(jīng)過去蛋白的二次提取液中，滴加10%氫氧化鈉水溶液，進行中和，直至PH為6.8-7.2之間。

其中，步驟 （3）和（5）中，進行透析脫鹽時，透析袋埋在吸水力強的聚乙二醇或甘油中，分別對步驟（3）中經(jīng)過堿中和的二次提取液和步驟（5）中經(jīng)過酸中和的三次提取液，進行透析36－48小時。

其中，步驟 （3）和（5）中，進行洗滌時，通過無水乙醇和丙酮依次洗滌兩次。

其中，步驟（3）和步驟（5）中，進行噴霧干燥時，采用超聲波噴霧干燥工藝，設(shè)定進風(fēng)溫度為90℃，進氣壓力設(shè)定為0.2MPa，進料量控制在40mL/min，同時設(shè)定出風(fēng)溫度為82℃。

其中，步驟 （4） 中，所述堿性水溶液與二次固相物的重量比為 8-10 ：1，堿性水溶液為5%氫氧化鈉水溶液。

其中，步驟 （4） 中，進行浸提時，水體溫度控制在90℃之間，煎煮時間控制在3小時。

其中，步驟（5） 中，進行酸中和時，通過向三次提取液中，滴加2mol/L HCL溶液進行中和，直至PH值為7.0。

實施例二

一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）使用醇溶液對灰樹花子實體原料進行浸泡脫脂，脫脂完畢后，通過離心設(shè)備，進行固液分離，得到一次固相物和一次提取液；

（2）使用去離子水對步驟 （1）中所得的一次固相物，進行沸水冷凝回流浸提，浸提完畢后，再次通過離心設(shè)備，進行固液分離，得到二次固相物和二次提取液；

（3）將步驟（2）中所得的二次提取液，經(jīng)濃縮、去蛋白、堿中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，得灰樹花水提多糖；

（4）使用堿性水溶液對步驟 （2）中所得的二次固相物進行浸提，浸提完畢后固液分離，得到三次提取液；

（5）將步驟（4）中所得的三次提取液，經(jīng)酸中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，即得灰樹花堿提多糖。

其中，步驟（1） 中，所述醇溶液與灰樹花子實體原料的重量比為 8.2 ：1，醇溶液為85－95%乙醇（w/v）溶液。

其中，步驟 （2） 中，進行沸水冷凝回流浸提時，水體溫度控制在97℃之間，煎煮時間控制在3.8小時。

其中，步驟 （2） 中，所述離子水與灰樹花原料的重量比為 8－10 ：1，提取次數(shù)共計2次。

其中，步驟 （3）中，對二次提取液進行濃縮時，通過框架式薄膜濃縮器或真空濃縮機，進行濃縮，直至二次提取液的波美度達到28°。

其中，步驟 （3）中，去蛋白的具體條件為，向經(jīng)過濃縮的二次提取液中，滴加5－30%三氯乙酸（w/v），直至溶液不再混濁，并于3－6℃下靜置24小時，離心去蛋白。

其中，步驟 （3）中，向經(jīng)過去蛋白的二次提取液中，滴加10%氫氧化鈉水溶液，進行中和，直至PH為6.8-7.2之間。

其中，步驟 （3）和（5）中，進行透析脫鹽時，透析袋埋在吸水力強的聚乙二醇或甘油中，分別對步驟（3）中經(jīng)過堿中和的二次提取液和步驟（5）中經(jīng)過酸中和的三次提取液，進行透析36－48小時。

其中，步驟 （3）和（5）中，進行洗滌時，通過無水乙醇和丙酮依次洗滌兩次。

其中，步驟（3）和步驟（5）中，進行噴霧干燥時，采用超聲波噴霧干燥工藝，設(shè)定進風(fēng)溫度為92℃，進氣壓力設(shè)定為0.25MPa，進料量控制在43mL/min，同時設(shè)定出風(fēng)溫度為87℃。

其中，步驟 （4） 中，所述堿性水溶液與二次固相物的重量比為 8.9：1，堿性水溶液為5%氫氧化鈉水溶液。

其中，步驟 （4） 中，進行浸提時，水體溫度控制在92℃之間，煎煮時間控制在3.6小時。

其中，步驟（5） 中，進行酸中和時，通過向三次提取液中，滴加2mol/L HCL溶液進行中和，直至PH值為7.0。

實施例三

如實施例一、實施例二中所述，步驟 （3）和（5）中，醇沉的具體步驟為：

A、冷卻的步驟 （3）中的二次提取液和步驟 （5）中的三次提取液至10℃；

B、隨后采用三慢二快的攪拌節(jié)奏，緩慢向二次提取液和三次提取液中加入乙醇，并控制二次提取液和三次提取液內(nèi)的含醇量達54％～65％；

C、最后，將加入了乙醇的二次提取液和三次提取液密封，并保存于低溫環(huán)境下，環(huán)境溫度控制在5℃~10℃。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書的保護范圍為準(zhǔn)。