1.一種金黃色葡萄球菌的檢測(cè)試劑盒,其特征在于,包括雜交緩沖液、核酸內(nèi)切酶、猝滅熒光的納米顆粒和下列核酸序列:
核酸序列H1:依次具有A、B、C區(qū)域,其中A區(qū)域?yàn)榻瘘S色葡萄球菌的核酸適體,C與A部分互補(bǔ)形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)的莖部分,A與C不互補(bǔ)的序列凸起于莖環(huán)結(jié)構(gòu)外側(cè),B構(gòu)成莖環(huán)結(jié)構(gòu)的環(huán)部分,B中包含一段與H2的核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)互補(bǔ)配對(duì)的核酸序列;
核酸序列H2:具有莖環(huán)結(jié)構(gòu),H2的一端修飾基團(tuán),固定在能猝滅熒光的納米顆粒上,另一端修飾相應(yīng)的熒光基團(tuán);H2的環(huán)結(jié)構(gòu)上包含有一段核酸內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)序列,與H1的B區(qū)域的相應(yīng)序列互補(bǔ)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒,其特征在于:H1的A區(qū)域的核酸序列為5'-GCGCCCTCTCACGTGGCACTCAGAGTGCCGGAAGTTCTGCGTTAT-3'。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒,其特征在于:核酸內(nèi)切酶包括Nt.BbvCI、Bmtl、BseYI 、BstUI 。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒,其特征在于:當(dāng)核酸內(nèi)切酶為Nt.BbvCI時(shí),H2的環(huán)結(jié)構(gòu)上包含有一段5'-CCTCAGC-3'的核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)序列,H1的B區(qū)域中包含一段與之互補(bǔ)的5'-GCTGAGG-3'序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒,其特征在于:當(dāng)核酸內(nèi)切酶為Bmtl時(shí),H2的環(huán)結(jié)構(gòu)上包含有一段5'-GCTAGC-3'核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)序列,H1的B區(qū)域中包含一段與之互補(bǔ)的5'-GCTAGC-3'序列。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒,其特征在于:能猝滅熒光的納米顆粒包括金納米顆粒、石墨烯納米顆粒、碳納米管、銀納米顆粒,所述作為固定材料的納米顆粒直接與H2的修飾基團(tuán)結(jié)合,或是通過納米顆粒上修飾對(duì)應(yīng)的基團(tuán)與H2的修飾基團(tuán)結(jié)合。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)試劑盒,其特征在于:H2的一端修飾巰基,固定在金納米顆粒上;或H2的一端修飾羥基,固定在修飾了羧基的納米顆粒上;或H2的一端修飾了生物素,固定在修飾了SA的納米顆粒上。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒,其特征在于:熒光基團(tuán)為FAM、Cy3、Cy5。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒,其特征在于:所述檢測(cè)試劑盒包括核酸內(nèi)切酶Nt.BbvCI和下列核酸序列:
核酸序列H1:
5'-GCGCCCTCTCACGTGGCACTCAGAGTGCCGGAAGTTCTGCGTTAT-GTGCTGAGGAT-ATAACGCA-3';
核酸序列H2: 5'-GCTACGTGATCCTCAGCACACCGTAGC-3'。
10.一種金黃色葡萄球菌的檢測(cè)方法,其特征在于,包括下列步驟:
(1)先用雜交緩沖液分別溶解核酸H1和H2,1μM的H2固定在納米顆粒表面;
(2)在500 nM的H1中加入待測(cè)溶液,充分混勻,室溫反應(yīng)30分鐘;然后加入到步驟(1)中的H2溶液中,充分混勻,室溫反應(yīng)30分鐘;
(3)加入25 U的核酸內(nèi)切酶,充分混勻,室溫反應(yīng)90分鐘;12000 rpm離心后保留上清,用于熒光檢測(cè),激發(fā)峰為495 nm,發(fā)射峰為525 nm;根據(jù)熒光發(fā)射光強(qiáng)度與金黃色葡萄球菌濃度呈正相關(guān)來判斷結(jié)果;
其中,雜交緩沖液、核酸內(nèi)切酶和核酸序列H1和H2如權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述。