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一種檢測旋毛蟲、弓形蟲和血吸蟲的多重DPO?PCR引物組合及方法與流程

文檔序號:12056632閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.用于檢測旋毛蟲、弓形蟲和血吸蟲的多重DPO-PCR引物組合,其特征在于,所述引物組合如下:

Trichina-F:5’-TCTCCCTACTCAGATACAACTGAATIIIIIACAGCCAA-3’;

Trichina-R:5’-GGATTTATGTGTTTTTGTGTGTGTTIIIIITTCTGGTC-3’;

Toxo-F:5’-CGGCGCAACGAAGACTGTTGIIIIICCCTCCAGT-3’;

Toxo-R:5’-ACCTGCTTCGGCAACGCACTTIIIIIAGAGAACC-3’;

Schistosome-F:5’-TGAGATACCACAAAAGGTGTTGGIIIIICCAGACAGC-3’;

Schistosome-R:5’-GGGCTGCGATCTACAACTTTGIIIIITGATGCAG-3’;

其中,I為次黃嘌呤。

2.含有權(quán)利要求1所述引物組合的用于多重DPO-PCR檢測旋毛蟲、弓形蟲和血吸蟲的試劑盒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+、PCR反應(yīng)緩沖液中的至少一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括陽性對照。

5.一種檢測旋毛蟲、弓形蟲和血吸蟲的多重DPO-PCR方法,其特征在于,利用權(quán)利要求1所述的引物組合進行多重DPO-PCR檢測旋毛蟲、弓形蟲和血吸蟲這三種動物源性人獸共患寄生蟲病。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,包括以下步驟:1)提取待測患病動物肌肉組織或臟器樣品中的DNA;2)以步驟1)中提取的DNA為模板,進行多重DPO-PCR擴增反應(yīng);和3)分析擴增產(chǎn)物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,多重DPO-PCR反應(yīng)體系以50μL計為:10×PCR Buffer(Mg2+free)5μL,Taq DNA聚合酶(5U)0.5μL,Mg2+(25mM)7.5μL,dNTP(2.5mM)5.5μL,每對DPO引物(10μM)各1μL,DNA模板各1μL,ddH2O補至50μL。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,多重DPO-PCR反應(yīng)條件為:95℃5分鐘;94℃45s,48℃~68℃45s,72℃45s,共35個循環(huán);72℃終延伸10分鐘。

9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項所述的方法,其特征在于,步驟3)中采用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物,旋毛蟲的擴增產(chǎn)物大小為419bp,弓形蟲的擴增產(chǎn)物大小為271bp,血吸蟲的擴增大小為494bp。

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