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促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)制備及分化方法與流程

文檔序號(hào):12411363閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)制備方法,其特征在于包括如下步驟:

(1)制備水溶性絲蛋白溶液,再超聲處理10min;

(2)將CaCl2加入到100mL的水溶性絲蛋白溶液中進(jìn)行預(yù)礦化,CaCl2的加入濃度為20mM,持續(xù)攪拌使CaCl2完全溶解;

(3)將100mL的濃度為12mM的Na2HPO4溶液通過恒流泵裝置緩慢滴入到步驟(2)獲得的溶液中進(jìn)行礦化;

(4)礦化后繼續(xù)使用磁力攪拌器攪拌,使得磷灰石晶體在水溶性絲蛋白溶液上層積一段時(shí)間,獲得層積后的溶液;

(5)將獲得的溶液在6000rpm轉(zhuǎn)速下離心10min,傾去上清液,收集沉淀的礦化物,加入去離子水混合均勻;

(6)重復(fù)上述步驟(5)至少一次,將獲得的溶液滴加到塑料板或者具有微納米結(jié)構(gòu)特征的模具中,固化成型使得絲蛋白和磷灰石復(fù)合成膜。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)制備方法,其特征在于:所述步驟3)礦化過程中,礦化反應(yīng)溫度控制在4℃-80℃之間,滴加速率控制為0.2-20mL/min,滴加時(shí)通過滴入0.1M的NaOH溶液使得反應(yīng)體系的pH恒定為9.5并使用磁力攪拌器攪拌。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)制備方法,其特征在于:所述步驟(1)中絲蛋白采用但不限于家蠶絲素、絲膠蛋白、絲腺蛋白、野蠶絲素、絲膠蛋白、蜘蛛絲蛋白或者重組絲蛋白。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)制備方法,其特征在于:所述步驟(3)加入的Na2HPO4溶液與所述步驟(2)加入的CaCl2溶液的量使Ca和P元素的摩爾質(zhì)量比為1.67。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)制備方法,其特征在于:所述步驟(4)中,通過改變層積時(shí)間的礦化條件改變微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)表面的形貌。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)制備方法,其特征在于:在制備獲得的所述微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)表面繼續(xù)覆蓋一層膠原蛋白、纖連蛋白、層粘連蛋白、整合素和多聚賴氨酸中的一種或者進(jìn)行親水性處理。

7.一種促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),其特征在于:由權(quán)利要求1-6任一所述方法制備而成。

8.權(quán)利要求7所述的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的應(yīng)用,其特征在于:在促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化中的應(yīng)用。

9.一種微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞分化方法,其特征在于:通過間充質(zhì)干細(xì)胞粘附到權(quán)利要求1-6任一所述的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)上,對(duì)磷灰石和絲蛋白復(fù)合的所述微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)進(jìn)行篩選,得到具有誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨分化的微納米拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。

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