本發(fā)明涉及兩種新藥物，疊氮化氨魯米特和疊氮化普魯卡因，具體涉及這兩種疊氮化藥物的制備以及在抗腫瘤方面應用。

背景技術：

腫瘤是機體在各種致瘤因素作用下，局部組織的細胞在基因水平上失去對其生長的正常調(diào)控導致異常增生與分化而形成的新生物。腫瘤具有生長快、易轉移、不易根治、高致死等特點，是嚴重威脅人類生命安全的重大疾病。目前抗腫瘤的藥物有很多，氨魯米特是其中一種。氨魯米特能通過阻斷芳香化酶而抑制雌激素的生成，從而減少雌激素對乳腺癌的促進作用，起到抑制腫瘤生長的效果。普魯卡因是常用的局麻藥，該藥能使細胞膜穩(wěn)定，降低其對離子的通透性，使神經(jīng)沖動達到時，鈉、鉀離子不能進出細胞膜產(chǎn)生去極化和動作電位，從而產(chǎn)生局麻作用。普魯卡因在兒科、皮膚科、婦產(chǎn)科、消化科和呼吸科均有良好的臨床應用。

疊氮化合物含有疊氮基高能活性官能團，是一類重要的有機合成中間體，已廣泛應用于臨床醫(yī)藥領域。但是傳統(tǒng)對于藥物修飾的方法一般需要通過很長的步驟、嚴格的條件以及低的產(chǎn)率，因此對于新的抗腫瘤藥物探索，特別是對已有的芳胺類抗腫瘤藥物的簡便重新修飾已然成為藥物專家研究的新的方向。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是對氨魯米特和普魯卡因進行疊氮化修飾及其應用，只需一步便可高產(chǎn)率制得疊氮類衍生物，結構式新穎，具有簡單、高效、便捷等特點。

本發(fā)明采用的技術方案是：

本發(fā)明得到兩種新藥物，結構式如式(I)所示的疊氮化氨魯米特和式(Ⅱ)所示的疊氮化普魯卡因：

本發(fā)明中所述式(I)或式(Ⅱ)所示化合物的制備方法為：

將氨魯米特或普魯卡因溶于溶劑中，加入催化劑、疊氮源、氧化劑反應，待反應完全后經(jīng)后處理得到式(I)或式(Ⅱ)所示化合物；所述疊氮源、氧化劑、催化劑與氨魯米特或普魯卡因的物質(zhì)的量之比為1～5:0.5～5：0.1～0.5：1；所述催化劑為醋酸銅、碘化銅、碘化亞銅；所述氧化劑為過氧化氫、二氧化錳、叔丁基過氧化氫；所述疊氮源為疊氮化鈉。

氨魯米特制備式(I)所示的疊氮化氨魯米特的反應方程式如下：

普魯卡因制備式(Ⅱ)所示的疊氮化普魯卡因的反應方程式如下：

本發(fā)明所述疊氮源、氧化劑、催化劑與氨魯米特或普魯卡因的物質(zhì)的量之比優(yōu)選為2:2：0.25：1。

本發(fā)明所述溶劑為PBS緩沖液，pH＝7.4。

進一步，本發(fā)明所述催化劑優(yōu)選為醋酸銅。

再進一步，本發(fā)明所述氧化劑優(yōu)為過氧化氫。

更進一步，本發(fā)明所述疊氮源優(yōu)選為疊氮化鈉。

本發(fā)明所述后處理為：反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，然后用飽和食鹽水洗，合并有機層經(jīng)過干燥、過濾、蒸干，再進行柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，得到式(I)或式(Ⅱ)所示的化合物純品。

此外，本發(fā)明所述的式(I)或式(Ⅱ)所示化合物還可在制備抗腫瘤藥物中的應用。

進一步，本發(fā)明所述抗腫瘤藥物主要作用于腫瘤細胞MCF-7或腫瘤細胞H295R。

本發(fā)明的有益效果：疊氮基作為一種活性基團可以應用于藥物修飾，是一種良好的藥物中間體。本發(fā)明形成的兩種藥物化合物與原來的藥物相比IC50值更小，表明抗腫瘤活性更高。可以更好的應用于治療。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此。

實施例1

制備疊氮化氨魯米特

將0.5mmol氨魯米特(1a)加入4mL的PBS緩沖液中，向其中加入0.125mmol醋酸銅，1.0mmol疊氮化鈉，1.0mmol過氧化氫，室溫下反應2小時，反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，取有機層經(jīng)過無水硫酸鎂干燥、過濾、60℃減壓蒸干，即得所述式(2a)所示化合物粗品，將所得化合物粗品進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，干燥，得到式(2a)所示的化合物純品61mg產(chǎn)率45％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),6.90(d,J＝1.9Hz,1H),6.83(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),6.66(d,J＝8.3Hz,1H),3.86(s,2H),2.59(dd,J＝10.6,7.2Hz,1H),2.49–2.41(m,1H),2.34–2.28(m,1H),2.19(td,J＝13.9,4.5Hz,1H),2.05–1.98(m,1H),1.88(dq,J＝14.6,7.4Hz,1H),0.86(t,J＝7.4Hz,3H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ175.52,172.44,145.72,128.17,127.15,115.42,50.33,49.32,32.96,29.35,27.04,25.51,9.00.

實施例2

制備疊氮化氨魯米特

將0.5mmol氨魯米特(1a)加入4mL的PBS緩沖液中，向其中加入0.125mmol碘化銅，1.0mmol疊氮化鈉，1.0mmol過氧化氫，室溫下反應2小時，反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，取有機層經(jīng)過無水硫酸鎂干燥、過濾、60℃減壓蒸干，即得所述式(2a)所示化合物粗品，將所得化合物粗品進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，干燥，得到式(2a)所示的化合物純品41mg，產(chǎn)率30％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),6.90(d,J＝1.9Hz,1H),6.83(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),6.66(d,J＝8.3Hz,1H),3.86(s,2H),2.59(dd,J＝10.6,7.2Hz,1H),2.49–2.41(m,1H),2.34–2.28(m,1H),2.19(td,J＝13.9,4.5Hz,1H),2.05–1.98(m,1H),1.88(dq,J＝14.6,7.4Hz,1H),0.86(t,J＝7.4Hz,3H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ175.52,172.44,145.72,128.17,127.15,115.42,50.33,49.32,32.96,29.35,27.04,25.51,9.00.

實施例3

制備疊氮化氨魯米特

將0.5mmol氨魯米特(1a)加入4mL的PBS緩沖液中，向其中加入0.125mmol碘化亞銅，1.0mmol疊氮化鈉，1.0mmol過氧化氫，室溫下反應2小時，反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，取有機層經(jīng)過無水硫酸鎂干燥、過濾、60℃減壓蒸干，即得所述式(2a)所示化合物粗品，將所得化合物粗品進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，干燥，得到式(2a)所示的化合物純品45mg，產(chǎn)率33％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),6.90(d,J＝1.9Hz,1H),6.83(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),6.66(d,J＝8.3Hz,1H),3.86(s,2H),2.59(dd,J＝10.6,7.2Hz,1H),2.49–2.41(m,1H),2.34–2.28(m,1H),2.19(td,J＝13.9,4.5Hz,1H),2.05–1.98(m,1H),1.88(dq,J＝14.6,7.4Hz,1H),0.86(t,J＝7.4Hz,3H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ175.52,172.44,145.72,128.17,127.15,115.42,50.33,49.32,32.96,29.35,27.04,25.51,9.00.

實施例4

制備疊氮化氨魯米特

將0.5mmol氨魯米特(1a)加入4mL的PBS緩沖液中，向其中加入0.125mmol醋酸銅，1.0mmol疊氮化鈉，1.0mmol叔丁基過氧化氫，室溫下反應2小時，反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，取有機層經(jīng)過無水硫酸鎂干燥、過濾、60℃減壓蒸干，即得所述式(2a)所示化合物粗品，將所得化合物粗品進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，干燥，得到式(2a)所示的化合物純品40mg，產(chǎn)率29％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),6.90(d,J＝1.9Hz,1H),6.83(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),6.66(d,J＝8.3Hz,1H),3.86(s,2H),2.59(dd,J＝10.6,7.2Hz,1H),2.49–2.41(m,1H),2.34–2.28(m,1H),2.19(td,J＝13.9,4.5Hz,1H),2.05–1.98(m,1H),1.88(dq,J＝14.6,7.4Hz,1H),0.86(t,J＝7.4Hz,3H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ175.52,172.44,145.72,128.17,127.15,115.42,50.33,49.32,32.96,29.35,27.04,25.51,9.00.

實施例5

制備疊氮化氨魯米特

將0.5mmol氨魯米特(1a)加入4mL的PBS緩沖液中，向其中加入0.125mmol醋酸銅，1.0mmol疊氮化鈉，1.0mmol二氧化錳，室溫下反應2小時，反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，取有機層經(jīng)過無水硫酸鎂干燥、過濾、60℃減壓蒸干，即得所述式(2a)所示化合物粗品，將所得化合物粗品進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，干燥，得到式(2a)所示的化合物純品48mg，產(chǎn)率35％。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.09(s,1H),6.90(d,J＝1.9Hz,1H),6.83(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H),6.66(d,J＝8.3Hz,1H),3.86(s,2H),2.59(dd,J＝10.6,7.2Hz,1H),2.49–2.41(m,1H),2.34–2.28(m,1H),2.19(td,J＝13.9,4.5Hz,1H),2.05–1.98(m,1H),1.88(dq,J＝14.6,7.4Hz,1H),0.86(t,J＝7.4Hz,3H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ175.52,172.44,145.72,128.17,127.15,115.42,50.33,49.32,32.96,29.35,27.04,25.51,9.00.

實施例6

制備疊氮化普魯卡因

將0.5mmol普魯卡因(1b)加入4mL的PBS緩沖液中，向其中加入0.125mmol醋酸銅，1.0mmol疊氮化鈉，1.0mmol過氧化氫，室溫下反應2小時，反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，取有機層經(jīng)過無水硫酸鎂干燥、過濾、60℃減壓蒸干，即得化合物粗品(2b)。將所得化合物粗品進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，干燥，得到式(2b)所示的化合物純品65mg，產(chǎn)率47％。

¹H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝1.7Hz,1H),7.64(d,J＝1.8Hz,1H),6.66(d,J＝8.4Hz,1H),4.52(t,J＝5.7Hz,2H),4.29(s,2H),3.06(s,2H),2.86(d,J＝6.9Hz,4H),1.21(t,J＝7.2Hz,6H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ165.73,142.79,127.97,124.73,119.92,119.75,114.29,50.54,47.67,29.70,28.61,10.86,10.83.

實施例7

制備疊氮化普魯卡因

將0.5mmol普魯卡因(1b)加入4mL的PBS緩沖液中，向其中加入0.125mmol碘化銅，1.0mmol疊氮化鈉，1.0mmol過氧化氫，室溫下反應2小時，反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，取有機層經(jīng)過無水硫酸鎂干燥、過濾、60℃減壓蒸干，即得化合物粗品(2b)。將所得化合物粗品進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，干燥，得到式(2b)所示的化合物純品29mg，產(chǎn)率21％。

1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝1.7Hz,1H),7.64(d,J＝1.8Hz,1H),6.66(d,J＝8.4Hz,1H),4.52(t,J＝5.7Hz,2H),4.29(s,2H),3.06(s,2H),2.86(d,J＝6.9Hz,4H),1.21(t,J＝7.2Hz,6H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ165.73,142.79,127.97,124.73,119.92,119.75,114.29,50.54,47.67,29.70,28.61,10.86,10.83.

實施例8

制備疊氮化普魯卡因

將0.5mmol普魯卡因(1b)加入4mL的PBS緩沖液中，向其中加入0.125mmol醋酸銅，1.0mmol疊氮化鈉，1.0mmol過氧化氫，室溫下反應2小時，反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，取有機層經(jīng)過無水硫酸鎂干燥、過濾、60℃減壓蒸干，即得化合物粗品(2b)。將所得化合物粗品進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，干燥，得到式(2b)所示的化合物純品32mg，產(chǎn)率23％。

1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝1.7Hz,1H),7.64(d,J＝1.8Hz,1H),6.66(d,J＝8.4Hz,1H),4.52(t,J＝5.7Hz,2H),4.29(s,2H),3.06(s,2H),2.86(d,J＝6.9Hz,4H),1.21(t,J＝7.2Hz,6H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ165.73,142.79,127.97,124.73,119.92,119.75,114.29,50.54,47.67,29.70,28.61,10.86,10.83.

實施例9

制備疊氮化普魯卡因

將0.5mmol普魯卡因(1b)加入4mL的PBS緩沖液中，向其中加入0.125mmol醋酸銅，1.0mmol疊氮化鈉，1.0mmol過氧化氫，室溫下反應2小時，反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，取有機層經(jīng)過無水硫酸鎂干燥、過濾、60℃減壓蒸干，即得化合物粗品(2b)。將所得化合物粗品進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，干燥，得到式(2b)所示的化合物純品44mg，產(chǎn)率32％。

1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝1.7Hz,1H),7.64(d,J＝1.8Hz,1H),6.66(d,J＝8.4Hz,1H),4.52(t,J＝5.7Hz,2H),4.29(s,2H),3.06(s,2H),2.86(d,J＝6.9Hz,4H),1.21(t,J＝7.2Hz,6H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ165.73,142.79,127.97,124.73,119.92,119.75,114.29,50.54,47.67,29.70,28.61,10.86,10.83.

實施例10

制備疊氮化普魯卡因

將0.5mmol普魯卡因(1b)加入4mL的PBS緩沖液中，向其中加入0.125mmol醋酸銅，1.0mmol疊氮化鈉，1.0mmol過氧化氫，室溫下反應2小時，反應結束后，反應液中加入飽和NaCl水溶液，用乙酸乙酯萃取，取有機層經(jīng)過無水硫酸鎂干燥、過濾、60℃減壓蒸干，即得化合物粗品(2b)。將所得化合物粗品進行硅膠柱層析，以乙酸乙酯和石油醚的體積比為1：3的溶液為流動相，TLC跟蹤收集Rf值為0.3-0.5的洗脫液，收集得到的洗脫液經(jīng)減壓蒸餾除去溶劑，干燥，得到式(2b)所示的化合物純品47mg，產(chǎn)率34％。

1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝1.7Hz,1H),7.64(d,J＝1.8Hz,1H),6.66(d,J＝8.4Hz,1H),4.52(t,J＝5.7Hz,2H),4.29(s,2H),3.06(s,2H),2.86(d,J＝6.9Hz,4H),1.21(t,J＝7.2Hz,6H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ165.73,142.79,127.97,124.73,119.92,119.75,114.29,50.54,47.67,29.70,28.61,10.86,10.83.

實施例11

抗腫瘤檢測

將腫瘤細胞MCF-7、H295R分別接種4000個細胞/瓶至含有10％胎牛血清的DMEM高湯培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中，置于5％CO₂、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天、取出細胞培養(yǎng)瓶在無菌操作臺中收集細胞。將細胞以4000個/孔的濃度接種至含有10％胎牛血清的DMEM高湯培養(yǎng)液的96孔板中，并在板蓋上加上注釋，于5％CO₂、37℃培養(yǎng)12小時，待細胞在96孔板上貼壁，在無菌操作臺中用移液槍加待測藥物(實施例1制備的化合物2a)使每孔藥物濃度分別為0.01、0.1、1、10.0、100.0μM五個濃度梯度，每個濃度設置有五個平行組，以氨魯米特1a作為對照)，并再次將96孔板置于5％CO₂、37℃培養(yǎng)24小時。取出96孔板，向每個孔中加入20μL的MTS試劑盒試劑(購自Promega公司)，避光孵化40分鐘，利用酶標儀測其吸光度。從而計算出細胞抑制率和細胞毒性，用ICEstimator software軟件處理，計算IC50以及IC50 95％可信區(qū)間，結果見表1所示。

表1.化合物體外抗腫瘤活性

實施例12

抗腫瘤檢測

將腫瘤細胞MCF-7、H295R分別接種4000個細胞/瓶至含有10％胎牛血清的DMEM高湯培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中，置于5％CO₂、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天、取出細胞培養(yǎng)瓶在無菌操作臺中收集細胞。將細胞以4000個/孔的濃度接種至含有10％胎牛血清的DMEM高湯培養(yǎng)液的96孔板中，并在板蓋上加上注釋，于5％CO₂、37℃培養(yǎng)12小時，待細胞在96孔板上貼壁，在無菌操作臺中用移液槍加待測藥物(實施例2制備的化合物1b)使每孔藥物濃度分別為0.01、0.1、1、10.0、100.0μM五個濃度梯度，每個濃度設置有五個平行組，以普魯卡因2b作為對照)，并再次將96孔板置于5％CO₂、37℃培養(yǎng)24小時。取出96孔板，向每個孔中加入20μL的MTS試劑盒試劑(購自Promega公司)，避光孵化40分鐘，利用酶標儀測其吸光度。從而計算出細胞抑制率和細胞毒性，用ICEstimator software軟件處理，計算IC50以及IC50 95％可信區(qū)間，結果見表2所示。

表2.化合物體外抗腫瘤活性