本申請是國際申請日2012年7月13日、國際申請?zhí)杙ct/us2012/046672于2014年3月7日進(jìn)入中國國家階段、申請?zhí)?01280043606.2、發(fā)明名稱“抗葉酸受體α抗體及其應(yīng)用”的申請的分案申請。與相關(guān)申請的交叉引用本申請要求2011年7月15日提交的美國臨時申請?zhí)?1/508,444、2012年2月28日提交的美國臨時申請?zhí)?1/604,412和2012年2月29日提交的美國臨時申請?zhí)?1/604,954的權(quán)益，每個臨時申請的全部內(nèi)容通過參考并入本文。本文提供的主題涉及葉酸受體α(frα)特異性抗體以及生產(chǎn)和使用所述抗體的方法。
背景技術(shù)：
：在人類中，葉酸的高親和性受體存在4種同工型：α、β、γ和δ。α、β和δ形式通常通過糖基磷脂酰肌醇(gpi)錨結(jié)合于細(xì)胞膜。它們在細(xì)胞外區(qū)室和細(xì)胞內(nèi)吞區(qū)室之間重復(fù)循環(huán)，并且能夠?qū)⑷~酸運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)。葉酸受體的可溶形式可以由蛋白酶或磷脂酶對膜錨定型葉酸受體的作用而產(chǎn)生。葉酸受體α(也稱為frα、fr-α、folr-1或folr1)表達(dá)于多種上皮組織，包括脈絡(luò)叢、肺、甲狀腺、腎、子宮、乳腺、輸卵管、附睪和唾液腺的上皮組織。weitman，sd等，cancerres52：3396-3401(1992)；weitmansd等，cancerres52：6708-6711(1992)。已在多種癌癥中觀察到frα的過表達(dá)，包括肺癌(例如類癌瘤和非小細(xì)胞肺癌如腺癌)、間皮瘤、卵巢癌、腎癌、腦癌(例如間變性室管膜瘤、小腦幼年型毛細(xì)胞性星形細(xì)胞瘤和腦轉(zhuǎn)移)、宮頸癌、鼻咽癌、中胚層來源的腫瘤、頭頸的鱗狀細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢的乳頭狀漿液性和子宮內(nèi)膜樣腺癌、卵巢的漿液性囊腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌(例如高等級骨肉瘤)、垂體癌(例如垂體腺瘤)、結(jié)腸直腸癌和甲狀腺髓樣癌。參見例如美國專利號7,754,698；美國專利申請?zhí)?005/0232919；國際公布號wo2009/132081；buenor等，jofthoracicandcardiovascularsurgery，121(2)：225-233(2001)；elkanath&ratnamm.frontiersinbioscience，11，506-519(2006)；basal等，plosone，4(7)：6292(2009)；fisherrejnuclmed，49：899-906(2008)；franklin，wa等，intjcancer，suppl8：89-95(1994)；hartmannlc等，intjcancer121：938-942(2007)；iwakiris等，annalsofsurgicaloncology，15(3)：889-899(2008)；歐洲專利公布ep2199796；parkern.等，analyticalbiochemistry，338：284-293(2005)；weitman，sd等，cancerres52：3396-3401(1992)；sabanf等，headneck，31(4)：475-481(2009)；yangr等，clincancerres13：2557-2567(2007)。在某些類型的癌癥(例如頭頸的鱗狀細(xì)胞癌)中，高水平的frα表達(dá)與不良預(yù)后相關(guān)，而在其他類型的癌癥(例如非小細(xì)胞肺癌)中，較高水平的frα表達(dá)與更有利的預(yù)后相關(guān)。參見例如iwakiris等，annalsofsurgicaloncology，15(3)：889-899；sabanf等，headneck，31(4)：475-481(2009)。癌癥的較早檢測提高存活率和生命質(zhì)量。為了提高早期檢測和治療的可能性，對用于診斷表達(dá)frα的癌癥和用于監(jiān)測已有的表達(dá)frα的癌癥的非侵入性方法，存在迫切需求。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本文提供了特異性結(jié)合于frα的抗體。本文還描述了能夠編碼所提供的抗體的相關(guān)多核苷酸、表達(dá)所提供的抗體的細(xì)胞以及相關(guān)的載體和可檢測的抗體標(biāo)記物。此外，本文描述了使用所提供的抗體的方法。例如，所提供的抗體可用于診斷癌癥，監(jiān)測癌癥的進(jìn)展、消退或病情穩(wěn)定，為對象中的癌癥產(chǎn)生預(yù)后，確定患者是否應(yīng)該進(jìn)行癌癥治療，或確定對象是否患有表達(dá)frα的癌癥并因此可能適合于使用frα特異性抗癌療法進(jìn)行治療。葉酸受體α(frα)特異性抗體本文描述了特異性結(jié)合于frα的分離的抗體和抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類igg或其衍生物。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：2基本上相同或一致的輕鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：3基本上相同或一致的輕鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：4基本上相同或一致的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：6基本上相同或一致的重鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：7基本上相同或一致的重鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：8基本上相同或一致的重鏈cdr3氨基酸序列。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：2基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：3基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：4基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：6基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：7基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：8基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：2基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：3基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：4基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈，并且還包括具有與seqidno：6基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：7基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：8基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：5基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：37基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：9基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：41基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：5基本上相同或一致的氨基酸序列，并且所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：9基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中提供了能夠結(jié)合frα的天然或非還原形式的9f3.h9.h3.h3.b5.g2(9f3)抗體或其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，9f3抗體由2011年5月19日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(10801universityblvd.，manassas，virginia20110-2209)并被分配有登記號pta-11887的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體對frα的結(jié)合親和性。在某些實(shí)施方式中，所公開的抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈cdr和重鏈cdr。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)。還公開了編碼特異性結(jié)合于frα的天然或非還原形式的抗體或抗原結(jié)合片段的分離的多核苷酸。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：2基本上相同或一致的輕鏈cdr1序列，例如seqidno：34。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：3基本上相同或一致的輕鏈cdr2，例如seqidno：35。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：4基本上相同或一致的輕鏈cdr3，例如seqidno：36。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：6基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：38。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：7基本上相同或一致的重鏈cdr2，例如seqidno：39。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：8基本上相同或一致的重鏈cdr3，例如seqidno：40。所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含具有與seqidno：2基本上相同或一致的cdr1例如seqidno：34、與seqidno：3基本上相同或一致的cdr2例如seqidno：35以及與seqidno：4基本上相同或一致的cdr3例如seqidno：36的輕鏈。所述分離的多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：6基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：38，與seqidno：7基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：39，以及與seqidno：8基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：40。所述分離的多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：2基本上相同或一致的輕鏈cdr1，例如seqidno：34，由與seqidno：3基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr2，例如seqidno：35，和由與seqidno：4基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr3，例如seqidno：36；以及與seqidno：6基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：38，與seqidno：7基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：39，和與seqidno：8基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：40。也可以使用抗體樣蛋白作為cdr支架，對cdr的抗原結(jié)合排列方式進(jìn)行工程化改造。這樣的工程化改造的抗原結(jié)合蛋白也在本公開的范圍之內(nèi)。本文描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：5基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：37的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的分離的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：9基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：41的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的分離的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：5基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：37的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段，以及包括與seqidno：9基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：41的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。本文提供的能夠編碼可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的分離的多核苷酸可以被包含在相同或不同的載體上，以產(chǎn)生抗體或抗原結(jié)合片段。本文描述的多核苷酸可以編碼能夠結(jié)合frα的天然或非還原形式的9f3抗體或其抗原結(jié)合片段。本文描述了特異性結(jié)合于frα的天然或非還原形式的分離的抗體和抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類igg或其衍生物。盡管所述抗體或抗原結(jié)合片段可以是人類、人源化或嵌合的，但本文中示例的抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類的。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：10基本上相同或一致的輕鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：11基本上相同或一致的輕鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：12基本上相同或一致的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：14基本上相同或一致的重鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：15基本上相同或一致的重鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：16基本上相同或一致的重鏈cdr3氨基酸序列。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：10基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：11基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：12基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：14基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：15基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：16基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：10基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：11基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：12基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈，并且還包括具有與seqidno：14基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：15基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：16基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：13基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：45基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：17基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：49基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：13基本上相同或一致的氨基酸序列，并且所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：17基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中提供了能夠結(jié)合frα的天然或非還原形式的19d4.b7(19d4)抗體或其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，19d4抗體由2011年5月19日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(10801universityblvd.，manassas，virginia20110-2209)并被分配有登記號pta-11884的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體對frα的結(jié)合親和性。在某些實(shí)施方式中，所公開的抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈cdr和重鏈cdr。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)。還公開了編碼特異性結(jié)合于frα的天然或非還原形式的抗體或抗原結(jié)合片段的分離的多核苷酸。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：10基本上相同或一致的輕鏈cdr1序列，例如seqidno：42。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：11基本上相同或一致的輕鏈cdr2，例如seqidno：43。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：12基本上相同或一致的輕鏈cdr3，例如seqidno：44。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：14基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：46。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：15基本上相同或一致的重鏈cdr2，例如seqidno：47。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：16基本上相同或一致的重鏈cdr3，例如seqidno：48。所述多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含具有與seqidno：10基本上相同或一致的cdr1例如seqidno：42、與seqidno：11基本上相同或一致的cdr2例如seqidno：43以及與seqidno：12基本上相同或一致的cdr3例如seqidno：44的輕鏈。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：14基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seoidno：46，與seqidno：15基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：47，以及與seqidno：16基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：48。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：10基本上相同或一致的輕鏈cdr1，例如seqidno：42，由與seqidno：11基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr2，例如seqidno：43，和由與seqidno：12基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr3，例如seqidno：44；以及與seqidno：14基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：46，與seqidno：15基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：47，和與seqidno：16基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：48。也可以使用抗體樣蛋白作為cdr支架，對cdr的抗原結(jié)合排列方式進(jìn)行工程化改造。這樣的工程化改造的抗原結(jié)合蛋白也在本公開的范圍之內(nèi)。本文描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：13基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：45的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：17基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：49的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：13基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：45的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段，以及包括與seqidno：17基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：49的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。本文提供的能夠編碼可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的多核苷酸可以被包含在相同或不同的載體上，以產(chǎn)生抗體或抗原結(jié)合片段。本文描述的多核苷酸可以編碼能夠結(jié)合frα的天然或非還原形式的19d4抗體或其抗原結(jié)合片段。本文描述了特異性結(jié)合于frα，能夠結(jié)合frα的天然或非還原形式的分離的抗體和抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類igg或其衍生物。盡管所述抗體或抗原結(jié)合片段可以是人類、人源化或嵌合的，但本文中示例的抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類的。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：18基本上相同或一致的輕鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：19基本上相同或一致的輕鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：20基本上相同或一致的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：22基本上相同或一致的重鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：23基本上相同或一致的重鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：24基本上相同或一致的重鏈cdr3氨基酸序列。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：18基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：19基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：20基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：22基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：23基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：24基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：18基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：19基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：20基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈，并且還包括具有與seqidno：22基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：23基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：24基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：21基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：53基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：25基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：57基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：21基本上相同或一致的氨基酸序列，并且所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：25基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中提供了能夠結(jié)合frα的天然或非還原形式的24f12.b1(24f12)抗體或其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，24f12抗體由2011年5月19日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(10801universityblvd.，manassas，virginia20110-2209)并被分配有登記號pta-11886的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體對frα的結(jié)合親和性。在某些實(shí)施方式中，所公開的抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈cdr和重鏈cdr。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)。還公開了編碼特異性結(jié)合于frα的抗體或抗原結(jié)合片段的多核苷酸。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：18基本上相同或一致的輕鏈cdr1序列，例如seqidno：50。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：19基本上相同或一致的輕鏈cdr2，例如seqidno：51。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：20基本上相同或一致的輕鏈cdr3，例如seqidno：52。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：22基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：54。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：23基本上相同或一致的重鏈cdr2，例如seqidno：55。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：24基本上相同或一致的重鏈cdr3，例如seqidno：56。所述多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含具有與seqidno：18基本上相同或一致的cdr1例如seqidno：50、與seqidno：19基本上相同或一致的cdr2例如seqidno：51以及與seqidno：20基本上相同或一致的cdr3例如seqidno：52的輕鏈。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：22基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：54，與seqidno：23基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：55，以及與seqidno：24基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：56。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：18基本上相同或一致的輕鏈cdr1，例如seqidno：50，由與seqidno：19基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr2，例如seqidno：51，和由與seqidno：20基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr3，例如seqidno：52；以及與seqidno：22基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：54，與seqidno：23基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：55，和與seqidno：24基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：56。也可以使用抗體樣蛋白作為cdr支架，對cdr的抗原結(jié)合排列方式進(jìn)行工程化改造。這樣的工程化改造的抗原結(jié)合蛋白也在本公開的范圍之內(nèi)。本文描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：21基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：53的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：25基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：57的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：21基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：53的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段，以及包括與seqidno：25基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：57的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。本文提供的能夠編碼可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的多核苷酸可以被包含在相同或不同的載體上，以產(chǎn)生抗體或抗原結(jié)合片段。本文描述的多核苷酸可以編碼能夠結(jié)合frα的天然或非還原形式的24f12抗體或其抗原結(jié)合片段。本文描述了特異性結(jié)合于天然、非還原或化學(xué)保護(hù)形式的frα的分離的抗體和抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類igg或其衍生物。盡管所述抗體或抗原結(jié)合片段可以是人類、人源化或嵌合的，但本文中示例的抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類的。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：26基本上相同或一致的輕鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：27基本上相同或一致的輕鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：28基本上相同或一致的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：30基本上相同或一致的重鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：31基本上相同或一致的重鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：32基本上相同或一致的重鏈cdr3氨基酸序列。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：26基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：27基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：28基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：30基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：31基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：32基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：26基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：27基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：28基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈，并且還包括具有與seqidno：30基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：31基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：32基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：29基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：61基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：33基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：65基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：29基本上相同或一致的氨基酸序列，并且所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：33基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中提供了能夠結(jié)合frα的天然、非還原或化學(xué)保護(hù)形式的26b3.f2(26b3)抗體或其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，26b3抗體由2011年5月19日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(10801universityblvd.，manassas，virginia20110-2209)并被分配有登記號pta-11885的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體對frα的結(jié)合親和性。在某些實(shí)施方式中，所公開的抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈cdr和重鏈cdr。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)。還公開了編碼特異性結(jié)合于frα的天然、非還原或化學(xué)保護(hù)形式的抗體或抗原結(jié)合片段的多核苷酸。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：26基本上相同或一致的輕鏈cdr1序列，例如seqidno：58。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：27基本上相同或一致的輕鏈cdr2，例如seqidno：59。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：28基本上相同或一致的輕鏈cdr3，例如seqidno：60。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：30基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：62。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：31基本上相同或一致的重鏈cdr2，例如seqidno：63。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：32基本上相同或一致的重鏈cdr3，例如seqidno：64。所述多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含具有與seqidno：26基本上相同或一致的cdr1例如seqidno：58、與seqidno：27基本上相同或一致的cdr2例如seqidno：59以及與seqidno：28基本上相同或一致的cdr3例如seqidno：60的輕鏈。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：30基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：62，與seqidno：31基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：63，以及與seqidno：32基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：64。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：26基本上相同或一致的輕鏈cdr1，例如seqidno：58，由與seqidno：27基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr2，例如seqidno：59，和由與seqidno：28基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr3，例如seqidno：60；以及與seqidno：30基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：62，與seqidno：31基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：63，和與seqidno：32基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：64。也可以使用抗體樣蛋白作為cdr支架，對cdr的抗原結(jié)合排列方式進(jìn)行工程化改造。這樣的工程化改造的抗原結(jié)合蛋白也在本公開的范圍之內(nèi)。本文描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：29基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：61的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：33基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：65的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：29基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：61的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段，以及包括與seqidno：33基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：65的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。本文提供的能夠編碼可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的多核苷酸可以被包含在相同或不同的載體上，以產(chǎn)生抗體或抗原結(jié)合片段。本文描述的多核苷酸可以編碼能夠結(jié)合frα的天然、非還原或化學(xué)保護(hù)形式的26b3抗體或其抗原結(jié)合片段。本文提供了包含編碼所述抗體和抗原結(jié)合片段的多核苷酸的載體，以及表達(dá)特異性結(jié)合于frα的抗體或抗原結(jié)合片段的細(xì)胞。本文還提供了能夠表達(dá)所描述的載體的細(xì)胞。這些細(xì)胞可以是哺乳動物細(xì)胞(例如cho-k1細(xì)胞)、昆蟲細(xì)胞(例如sf7細(xì)胞)、酵母細(xì)胞、植物細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞(例如大腸桿菌(e.coli))。所描述的抗體也可以由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生，如本文中所描述的。用于診斷癌癥的方法本文中提供了用于診斷對象中上皮起源的乳腺癌、甲狀腺癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、輸卵管癌、卵巢癌或肺癌的方法。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的樣品中存在的frα水平，并將觀察到的frα水平與對照樣品中的frα水平進(jìn)行比較，來評估對象是否患有表達(dá)frα的癌癥，其中源自于對象的樣品中的frα水平與對照樣品中的frα水平之間的差異是對象患有或未患表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，對照樣品可以源自于未患表達(dá)frα的癌癥的對象。在某些實(shí)施方式中，對照樣品可以源自于患有表達(dá)frα的癌癥的對象。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對照樣品源自于未患表達(dá)frα的癌癥的對象時，觀察到樣品中存在的frα的量相對于對照樣品中所觀察到的量的增加是被評估對象患有表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對照樣品源自于未患表達(dá)frα的癌癥的對象時，觀察到測試樣品中存在的frα的量相對于對照樣品中所觀察到的量的降低或相似性是被評估對象未患表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對照樣品源自于患有表達(dá)frα的癌癥的對象時，觀察到測試樣品中存在的frα的量相對于對照樣品中所觀察到的量的相似性是被評估對象患有表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對照樣品源自于患有表達(dá)frα的癌癥的對象時，觀察到測試樣品中存在的frα的量相對于對照樣品中所觀察到的量的降低是被評估對象未患表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα水平，通過將樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。類似的方法可用于確定對象是否患有與frα產(chǎn)生增加不相關(guān)的癌癥。用于評估frα的存在的樣品可以源自于尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、與組織不關(guān)聯(lián)的細(xì)胞(即游離細(xì)胞)、組織(例如手術(shù)切除的腫瘤組織、活檢組織，包括細(xì)針抽吸物)、組織學(xué)制備物等。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的樣品中存在的與細(xì)胞或組織相關(guān)的frα水平，并將觀察到的frα水平與對照樣品中的frα水平進(jìn)行比較，來評估對象是否患有表達(dá)frα的癌癥，其中源自于對象的樣品中的frα水平與對照樣品中的frα水平之間的差異是對象患有表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα水平，通過將樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。用于評估frα的存在的樣品可以是循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、與組織不關(guān)聯(lián)的細(xì)胞(即游離細(xì)胞)、組織(例如手術(shù)切除的腫瘤組織、活檢組織，包括細(xì)針抽吸物)、組織學(xué)制備物等。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的樣品中存在的與細(xì)胞或組織不相關(guān)的frα水平，并將觀察到的frα水平與對照樣品中的frα水平進(jìn)行比較，來評估對象是否患有表達(dá)frα的癌癥，其中源自于對象的樣品中的frα水平與對照樣品中的frα水平之間的差異是對象患有表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα水平，通過將樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。用于評估frα的存在的樣品可以是尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、組織學(xué)制備物等。在所描述的方法的各種實(shí)施方式中，癌癥可以是表達(dá)frα的癌癥。在特定實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是卵巢癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是子宮內(nèi)膜癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是結(jié)腸直腸癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是乳腺癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是甲狀腺癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是輸卵管癌。在另一種實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是非小細(xì)胞肺癌例如腺癌?；蛘撸枋龅姆椒捎糜阼b定不表達(dá)frα的癌癥，例如鱗狀細(xì)胞癌。例如，所描述的方法可用于將表達(dá)frα的肺癌例如腺癌與不表達(dá)frα的肺癌例如鱗狀細(xì)胞癌區(qū)分開。所描述的方法可用于將表達(dá)frα的乳腺癌例如纖維腺瘤與不表達(dá)frα的乳腺癌例如囊性肉瘤區(qū)分開。此外，所描述的方法可用于將表達(dá)frα的甲狀腺癌例如乳頭狀癌與不表達(dá)frα的甲狀腺癌例如髓樣癌區(qū)分開。在本文描述的某些實(shí)施方式中，在對象中檢測到表達(dá)frα的癌細(xì)胞，可用于確定對象可以用針對frα的治療劑進(jìn)行治療。在某些實(shí)施方式中，針對frα的治療劑可以是抗體例如farletuzumab。在各種不同情況下，通過將樣品與結(jié)合frα的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸來測定frα水平。在某些實(shí)施方式中，可以將樣品與一種以上類型的結(jié)合frα的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在某些實(shí)施方式中，可以將樣品與結(jié)合frα的第一種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后與結(jié)合frα的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。諸如本文中描述的抗體可用于這種情況。例如，抗體選自：(a)與抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段；(b)抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種或其抗原結(jié)合片段；(c)包含抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈cdr和輕鏈cdr的抗體或其抗原結(jié)合片段；(d)包含如表1中所描述的抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的抗體或其抗原結(jié)合片段；或(e)具有由保藏于atcc并且登記號為pta-11887、pta-11884、pta-11886或pta-11885的任一種細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體的氨基酸序列的抗體，或其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，frα水平通過蛋白印跡分析、放射免疫測定法、免疫熒光測定法、免疫沉淀、平衡透析、免疫擴(kuò)散、電化學(xué)發(fā)光(ecl)免疫測定法、免疫組織化學(xué)、熒光激活細(xì)胞分選(facs)或elisa測定法來測定。在本發(fā)明的上述情況的各種實(shí)施方式中，對照樣品是健康對象中的標(biāo)準(zhǔn)化的對照frα水平。在其他實(shí)施方式中，對照樣品可以是已知濃度的frα蛋白(例如重組或純化的frα蛋白樣品)。在某些實(shí)施方式中，可以將觀察到的受試對象的frα水平與在來自于已知患有表達(dá)frα的癌癥的患者的樣品中觀察到的frα水平或已知的frα濃度進(jìn)行比較。用于監(jiān)測癌癥的方法本文中提供了用于監(jiān)測對象中表達(dá)frα的癌癥的方法?？梢栽诎┌Y治療之前、癌癥治療之后或癌癥治療之前與之后兩個時間使用所描述的方法。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的測試樣品中存在的frα水平，并將觀察到的frα水平與在較早時間點(diǎn)從所述對象獲得的樣品中的frα水平進(jìn)行比較，來評估表達(dá)frα的癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定，其中測試樣品和較早樣品中的frα水平之間的差異提供了所述癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定的指示。就此而言，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的水平具有提高的frα水平，可以指示表達(dá)frα的癌癥的進(jìn)展。相反，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的水平具有降低的frα水平，可以指示表達(dá)frα的癌癥的消退。因此，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的水平具有無顯著差異的frα水平，可以指示表達(dá)frα的癌癥的病情穩(wěn)定狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα水平，通過將所述樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。用于評估frα的存在的樣品可以源自于尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、與組織不關(guān)聯(lián)的細(xì)胞(即游離細(xì)胞)、組織(例如手術(shù)切除的腫瘤組織、活檢組織，包括細(xì)針抽吸物)、組織學(xué)制備物等。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的測試樣品中存在的與細(xì)胞或組織相關(guān)的frα水平，并將觀察到的frα水平與在較早時間點(diǎn)以類似方式從對象獲得的樣品中的frα水平進(jìn)行比較，來評估表達(dá)frα的癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定，其中測試樣品和較早樣品中的frα水平之間的差異提供了所述癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定的指示。就此而言，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的水平具有提高的frα水平，可以指示表達(dá)frα的癌癥的進(jìn)展。相反，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的水平具有降低的frα水平，可以指示表達(dá)frα的癌癥的消退。因此，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的水平具有無顯著差異的frα水平，可以指示表達(dá)frα的癌癥的病情穩(wěn)定狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα水平，通過將所述樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。用于評估frα的存在的樣品可以是循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、與組織不關(guān)聯(lián)的細(xì)胞(即游離細(xì)胞)、組織(例如手術(shù)切除的腫瘤組織、活檢組織，包括細(xì)針抽吸物)、組織學(xué)制備物等。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的測試樣品中存在的與細(xì)胞或組織不相關(guān)的frα水平，并將觀察到的frα水平與在較早時間點(diǎn)以類似方式從對象獲得的樣品中的frα水平進(jìn)行比較，來評估表達(dá)frα的癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定，其中測試樣品和較早樣品中的frα水平之間的差異提供了所述癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定的指示。就此而言，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的水平具有提高的frα水平，可以指示表達(dá)frα的癌癥的進(jìn)展。相反，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的水平具有降低的frα水平，可以指示表達(dá)frα的癌癥的消退。因此，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的水平具有無顯著差異的frα水平，可以指示表達(dá)frα的癌癥的病情穩(wěn)定狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα水平，通過將所述樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。用于評估frα的存在的樣品可以是尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、組織學(xué)制備物等。在所描述的方法的各種實(shí)施方式中，癌癥可以是表達(dá)frα的癌癥。在特定實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是卵巢癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是子宮內(nèi)膜癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是結(jié)腸直腸癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是乳腺癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是甲狀腺癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是輸卵管癌。在另一種實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是非小細(xì)胞肺癌例如腺癌。在各種不同情況下，通過將樣品與結(jié)合frα的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸來測定frα水平。在某些實(shí)施方式中，可以將樣品與一種以上類型的結(jié)合frα的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在某些實(shí)施方式中，可以將樣品與結(jié)合frα的第一種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后與結(jié)合frα的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。諸如本文中描述的抗體可用于這種情況。例如，抗體選自：(a)與抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段；(b)抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種或其抗原結(jié)合片段；(c)包含抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈cdr和輕鏈cdr的抗體或其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，frα水平通過蛋白印跡分析、放射免疫測定法、免疫熒光測定法、免疫沉淀、平衡透析、免疫擴(kuò)散、電化學(xué)發(fā)光(ecl)免疫測定法、免疫組織化學(xué)、熒光激活細(xì)胞分選(facs)或elisa測定法來測定。在詳細(xì)描述和所提供的實(shí)施例和相關(guān)附圖中，更詳細(xì)地提供了所概述的主題的其他方面。附圖說明圖1顯示了在非還原條件下通過sds-page獲得的frα的遷移圖案。frα以天然(第2泳道)或還原和烷基化(第3泳道)形式進(jìn)行評估。圖2示出了包含單克隆抗體抗體9f3、24f12和26b3的表位(陰影區(qū)域)的frα的氨基酸殘基(seqidno：1)，所述表位通過氫/氘交換質(zhì)譜術(shù)和對接方法來預(yù)測。圖3示出了在sds-page凝膠上運(yùn)行的來自于表達(dá)frα或fr同源物frβ、frγ或frδ的cho細(xì)胞的純化重組體(a)和全細(xì)胞裂解物(b)的4種蛋白印跡。蛋白被制備在含有或不含還原劑的樣品緩沖液中。圖a，第1泳道，分子量標(biāo)志物；第2-5泳道分別為0.5μg還原的frα、frβ、frγ和frδ；第6泳道，空白；第7-10泳道分別為0.5μg未還原的frα、frβ、frγ和frδ。陽性條帶表示每一泳道中僅有的反應(yīng)性物質(zhì)，并對應(yīng)于～38kda的分子量。圖b，第1泳道分子量標(biāo)志物，第2泳道cho-frα，第3泳道cho-frβ，第4泳道cho-frδ全細(xì)胞裂解物，它們被制備在不含還原劑的樣品緩沖液中并在sds-page凝膠上分離。每張圖用右側(cè)標(biāo)出的指定的抗frαmab進(jìn)行探測。fr的分子量為：frα～38kda；frβ～30kda；frγ～28kda；frδ～26kda。分別在變性和非還原或還原條件下識別frα的lk26和bn3.2抗體被用作陽性對照。圖4示出了福爾馬林固定、石蠟包埋的乳頭狀漿液性卵巢癌組織樣品，其用單克隆抗體26b3探測frα的存在。圖5示出了正常組織中的frα表達(dá)。用抗體26b3染色的正常肺(a)和腎(b)樣品證實(shí)了frα的表達(dá)高度局限于上皮細(xì)胞，并具有主要在頂端的分布(圖像被放大20x)。圖6提供了使用抗體26b3或抗體bn3.2產(chǎn)生的肺腺癌的m-分值的比較的圖示。圖7示出了非小細(xì)胞肺癌的組織學(xué)亞型的frα染色：(a)放大20x的肺腺癌，(b)放大40x的肺腺癌，(c)放大20x的肺腺鱗癌，以及(d)放大40x的肺鱗狀細(xì)胞癌。圖8提供了用抗體26b3染色的肺腺癌的兩份平行樣品(核心)的m-分值的比較的圖示。圖9示出了肺腺癌和鱗狀細(xì)胞癌的frα分布的m-分值。平均m-分值分別為19.84(±18.64)和1.39(±5.54)(p＜0.0001)。圖10示出了三種肺腺癌細(xì)針抽吸(fna)樣品(a)、(b)和(c)中的frα表達(dá)。用抗體26b3對來自于淋巴結(jié)fna的細(xì)胞塊材料進(jìn)行染色，證實(shí)了frα的成功染色，其表達(dá)局限于上皮細(xì)胞并具有頂端分布。圖11示出了通過使用抗體26b3對組織樣品進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析而被認(rèn)定為患有frα陽性和frα陰性的肺腺癌的對象的存活函數(shù)(死亡或檢查)。圖12示出了用抗體26b3染色的代表性組織微陣列(tma)的放大20x或40x的圖像，(a)原位導(dǎo)管癌，(b)-(d)侵入性導(dǎo)管癌。圖13提供了由26b3染色確定的相對于乳腺癌樣品的分子亞型(her-2(+)和her-2(-))的m-分值分布的圖示。圖14(a-d)以20x或40x放大倍數(shù)顯示了用抗體26b3染色的來自于iv期her2陰性乳腺癌的代表性組織學(xué)樣品。圖15顯示了用抗體26b3染色的通過細(xì)針抽吸獲得的轉(zhuǎn)移性乳腺癌樣品的代表性圖像。圖16顯示了卵巢漿液性癌中的frα表達(dá)。(a)在10x放大倍數(shù)下可以看見3+強(qiáng)(右視野)和2+中等膜染色(左上視野)。(b)以20x放大倍數(shù)示出了與(a)相同的區(qū)域，證實(shí)了3+強(qiáng)且濃密的圓周形膜染色(右視野)。2+中等膜染色(左上視野)具有與3+相比更弱、更稀的染色，并且它是圓周形或定位于腔緣。(c)顯示出1+弱的膜染色局限于腔緣并需要40x放大倍數(shù)來可視化。(d)卵巢表面上皮細(xì)胞和下方的皮層基質(zhì)細(xì)胞是完全陰性的(20x放大)。圖17以40x放大倍數(shù)顯示出frα表達(dá)局限于腔緣，正常子宮內(nèi)膜具有弱的1+和中等的2+強(qiáng)度(a)。在20x放大倍數(shù)下可以在非典型復(fù)雜性增生的腔緣上觀察到強(qiáng)的(+3)膜染色(b)。圖18顯示了1級子宮內(nèi)膜腺癌的腔緣上強(qiáng)的(+3)frα膜染色(a)。此外，許多腫瘤細(xì)胞具有2+或3+細(xì)胞質(zhì)染色(20x放大)。在2級子宮內(nèi)膜腺癌的腔緣上存在frα膜染色(2+和3+)；細(xì)胞質(zhì)染色是弱的(20x放大)(b)。在40x放大倍數(shù)下，3級子宮內(nèi)膜腺癌的約50％的腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出3+強(qiáng)的、圓周形膜染色以及弱的細(xì)胞質(zhì)染色(c)。圖19以20x放大倍數(shù)顯示了具有鱗狀化生的腺癌，其中約80％的化生的鱗狀細(xì)胞具有2+和3+frα膜染色以及1+和2+frα細(xì)胞質(zhì)染色(a)。子宮內(nèi)膜透明細(xì)胞癌的腫瘤細(xì)胞具有大的不規(guī)則的核、顯著的核仁和豐富的透明細(xì)胞質(zhì)。在40x放大倍數(shù)下，這些腫瘤細(xì)胞中的大多數(shù)都具有2+或3+frα膜染色(b)。圖20顯示了正常輸卵管的纖毛和非纖毛細(xì)胞在腔緣和外側(cè)細(xì)胞緣上具有3+frα膜染色(a)。細(xì)胞質(zhì)染色也是明顯的(20x放大)。(b)慢性輸卵管炎，在基質(zhì)中具有豐富的淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞。粘膜細(xì)胞在腔緣上保留3+frα染色(20x放大)。(c)2級輸卵管漿液性腺癌的腫瘤細(xì)胞形成復(fù)雜的乳頭狀突起，并在腔緣和外側(cè)細(xì)胞緣上顯示出3+frα膜染色，并且細(xì)胞質(zhì)染色也是明顯的(20x放大)。圖21示出了卵巢皮質(zhì)漿液/輸卵管囊腫。襯細(xì)胞顯示出3+強(qiáng)的膜染色和細(xì)胞質(zhì)染色(20x放大)。具體實(shí)施方式下面的描述表征了特異性結(jié)合于frα的抗體及其抗原結(jié)合片段。本文還描述了能夠編碼這些抗體和抗原結(jié)合片段的相關(guān)多核苷酸、表達(dá)所述抗體和抗原結(jié)合片段的細(xì)胞以及相關(guān)的載體和可檢測的抗體標(biāo)記物。此外，本文描述了使用所述抗體和抗原結(jié)合片段的方法。例如，所提供的抗體和抗原結(jié)合片段可用于診斷卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、輸卵管癌或肺癌；監(jiān)測卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、輸卵管癌或肺癌的進(jìn)展、消退或病情穩(wěn)定；確定患者是否應(yīng)該進(jìn)行癌癥治療，或確定對象是否患有表達(dá)frα的癌癥并因此可能適合于使用frα特異性抗癌療法進(jìn)行治療。定義在整個說明書和權(quán)利要求書中使用了與描述的各個方面相關(guān)的各種術(shù)語。除非另有指明，否則這樣的術(shù)語應(yīng)該被給予它們在本領(lǐng)域中的通常含義。其他特別定義的術(shù)語應(yīng)該以與本文中提供的定義相符的方式進(jìn)行解釋。當(dāng)在本說明書和權(quán)利要求書中使用時，沒有具體數(shù)量的指稱包括其復(fù)數(shù)形式，除非內(nèi)容明確表明不是如此。因此，例如，對“細(xì)胞”的指稱包括兩個或更多個細(xì)胞的組合等。當(dāng)指稱可測量的值例如量、時間長度等時，本文中使用的術(shù)語“約”意味著涵蓋與指定的值相比最多±10％的變化，如果這樣的變化適合于執(zhí)行所公開的方法的話。除非另有指明，否則在說明書和權(quán)利要求書中使用的表示成分、性質(zhì)如分子量、反應(yīng)條件等的數(shù)量的所有數(shù)字應(yīng)該被理解為在所有情況下均被術(shù)語“約”修飾。因此，除非指明與之相反，否則在下面的說明書和權(quán)利要求書中提到的數(shù)值參數(shù)都是近似值，其可以隨著本發(fā)明試圖獲得的所需性質(zhì)而變。至少，并且不試圖限制等同原則應(yīng)用于權(quán)利要求書的范圍，每個數(shù)值參數(shù)至少應(yīng)該根據(jù)所報告的有效數(shù)字的數(shù)目并通過使用常規(guī)的取整技術(shù)來進(jìn)行解釋。盡管說明本發(fā)明的寬范圍的數(shù)值范圍和參數(shù)是近似值，但在特定實(shí)例中提出的數(shù)值被盡可能精確地報告。然而，任何數(shù)值都固有地含有由它們各自的試驗(yàn)測量結(jié)果中存在的標(biāo)準(zhǔn)偏差必然造成的一些誤差?！胺蛛x的”是指生物組分(例如核酸、肽或蛋白質(zhì))已與天然存在所述組分的生物體中的其他生物組分、即其他染色體dna和rna及染色體外dna和rna以及蛋白質(zhì)基本上分離開，與所述其他生物組分分開產(chǎn)生或從所述其他生物組分中純化出來。因此，已被“分離的”核酸、肽和蛋白質(zhì)包括通過標(biāo)準(zhǔn)純化技術(shù)純化的核酸和蛋白質(zhì)?！胺蛛x的”核酸、肽和蛋白質(zhì)可以是組合物的一部分并仍然是分離的，如果這樣的組合物不是所述核酸、肽或蛋白質(zhì)的天然環(huán)境的一部分的話。該術(shù)語還包括通過在宿主細(xì)胞中重組表達(dá)而制備的核酸、肽和蛋白質(zhì)，以及化學(xué)合成的核酸。“多核苷酸”被同義地稱為“核酸分子”或“核酸”，是指任何多核糖核苷酸或多脫氧核糖核苷酸，其可以是未修飾的rna或dna或者修飾的rna或dna?！岸嗪塑账帷卑ǖ幌抻趩捂渄na和雙鏈dna、作為單鏈區(qū)和雙鏈區(qū)的混合物的dna、單鏈rna和雙鏈rna、和作為單鏈區(qū)和雙鏈區(qū)的混合物的rna，以及包含dna和rna的雜合分子，所述dna和rna可以是單鏈的或更通常為雙鏈的或者是單鏈區(qū)和雙鏈區(qū)的混合物。此外，“多核苷酸”是指包含rna或dna或者rna和dna兩者的三鏈區(qū)。術(shù)語多核苷酸還包括含有一個或多個修飾的堿基的dna或rna，以及出于穩(wěn)定性或其他原因而具有修飾的骨架的dna或rna。“修飾的”堿基包括例如三苯甲基化堿基和不常見堿基例如次黃嘌呤核苷?？梢詫na和rna做出各種修飾；因此，“多核苷酸”包含自然界中通常存在的多核苷酸的化學(xué)、酶或代謝修飾的形式，以及病毒和細(xì)胞特征性的dna和rna的化學(xué)形式。“多核苷酸”還包含相對短的核酸鏈，其通常被稱為寡核苷酸?！盎旧舷嗤钡暮x可以隨著術(shù)語所使用的上下文而不同。由于在重鏈和輕鏈以及編碼它們的基因之間可能存在天然的序列變異，人們預(yù)期在本文描述的抗體或抗原結(jié)合片段的氨基酸序列或編碼它們的基因內(nèi)發(fā)現(xiàn)一定水平的變異，而對它們的獨(dú)特結(jié)合性質(zhì)(例如特異性和親和性)具有很小的影響或沒有影響。這樣的預(yù)期部分地是由遺傳密碼的簡并性以及不顯著改變所編碼的蛋白的性質(zhì)的保守氨基酸序列變異的進(jìn)化成功造成的。因此，在核酸序列的情形中，“基本上相同”是指兩個或更多個序列之間至少65％的同一性。優(yōu)選地，該術(shù)語是指兩個或更多個序列之間至少70％的同一性，更優(yōu)選地至少75％的同一性，更優(yōu)選地至少80％的同一性，更優(yōu)選地至少85％的同一性，更優(yōu)選地至少90％的同一性，更優(yōu)選地至少91％的同一性，更優(yōu)選地至少92％的同一性，更優(yōu)選地至少93％的同一性，更優(yōu)選地至少94％的同一性，更優(yōu)選地至少95％的同一性，更優(yōu)選地至少96％的同一性，更優(yōu)選地至少97％的同一性，更優(yōu)選地至少98％的同一性以及更優(yōu)選地至少99％或更高的同一性。這樣的同一性可以使用nblast算法(altschul等，(1990)proc.natl.acad.sci.usa87：2264-8；karlin和altschul(1993)proc.natl.acad.sci.usa90：5873-7)來確定?？梢栽诘鞍踪|(zhì)的氨基酸序列內(nèi)出現(xiàn)而對蛋白質(zhì)功能沒有顯著影響的變異程度遠(yuǎn)低于核酸序列的變異程度，這是因?yàn)橥瑯拥暮啿⑿栽瓌t不適用于氨基酸序列。因此，在抗體或抗原結(jié)合片段的情形中，“基本上相同”意味著抗體或抗原結(jié)合片段與所描述的抗體或抗原結(jié)合片段具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。其他實(shí)施方式包括這樣的frα特異性抗體或抗原結(jié)合片段，即，其構(gòu)架、支架、或其他非結(jié)合區(qū)與本文描述的抗體和抗原結(jié)合片段不具有顯著的同一性，但是卻整合有一個或多個cdr或提供結(jié)合所需要的其他序列，所述一個或多個cdr或提供結(jié)合所需要的其他序列與本文描述的這樣的序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性?！拜d體”是復(fù)制子，例如質(zhì)粒、噬菌體、粘?；虿《?，其中可以可操作地插入另一個核酸區(qū)段以便引起所述區(qū)段的復(fù)制或表達(dá)。當(dāng)外源或異源核酸例如dna被導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)時，所述細(xì)胞已被“轉(zhuǎn)化”。轉(zhuǎn)化的dna可以被或不被整合(共價連接)到細(xì)胞的基因組中。例如，在原核生物、酵母和哺乳動物細(xì)胞中，轉(zhuǎn)化的dna可以被維持在附加體元件例如質(zhì)粒上。對于真核細(xì)胞來說，穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細(xì)胞或“穩(wěn)定細(xì)胞”由真核細(xì)胞建立細(xì)胞系或建立由含有轉(zhuǎn)化的dna的子代細(xì)胞群體構(gòu)成的克隆的能力來證實(shí)?！翱寺　笔峭ㄟ^有絲分裂從單一細(xì)胞或共同祖先產(chǎn)生的細(xì)胞群體?！凹?xì)胞系”是能夠在體外穩(wěn)定生長許多代的原代細(xì)胞的克隆。在本文提供的某些實(shí)例中，通過用dna轉(zhuǎn)染細(xì)胞來轉(zhuǎn)化細(xì)胞。術(shù)語“表達(dá)”和“產(chǎn)生”在本文中同義使用，并且是指基因產(chǎn)物的生物合成。這些術(shù)語涵蓋了將基因轉(zhuǎn)錄成rna。這些術(shù)語還涵蓋將rna翻譯成一種或多種多肽，并且進(jìn)一步涵蓋所有天然存在的轉(zhuǎn)錄后和翻譯后修飾?？贵w或其抗原結(jié)合片段的表達(dá)或產(chǎn)生可以在細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，或者進(jìn)入細(xì)胞外環(huán)境例如細(xì)胞培養(yǎng)物的生長培養(yǎng)基中。術(shù)語“治療”是指在減弱或改善傷口、病理學(xué)或病癥方面的任何成功或成功跡象，包括任何客觀或主觀參數(shù)，例如癥狀的消除、緩解、減輕或使患者對病癥更加耐受，減緩?fù)嘶蛩ネ怂俾?，使退化的終點(diǎn)虛弱度降低，改善對象的身體或心理舒適度，或延長存活長度。治療可以通過客觀或主觀參數(shù)，包括身體檢查、神經(jīng)學(xué)檢查或精神評估的結(jié)果來評估。除非另有指明，否則“抗體”是指免疫球蛋白的所有同種型(igg、iga、ige、igm、igd和igy)，包括每種同種型的各種單體形式和聚合體形式?？乖Y(jié)合片段是可以對特定抗原表現(xiàn)出結(jié)合親和性的任何蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。某些抗原結(jié)合片段由完整抗體的部分構(gòu)成，所述部分保留了親代抗體分子的抗原結(jié)合特異性。例如，抗原結(jié)合片段可以包含已知與特定抗原結(jié)合的抗體的至少一個可變區(qū)(重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū))或一個或多個cdr。適合的抗原結(jié)合片段的實(shí)例包括但不限于微型雙功能抗體(diabody)和單鏈分子以及fab、f(ab’)2、fc、fabc和fv分子，單鏈(sc)抗體，單獨(dú)的抗體輕鏈，單獨(dú)的抗體重鏈，抗體鏈或cdr與其他蛋白之間的嵌合融合體，蛋白支架，重鏈單體或二聚體，輕鏈單體或二聚體，由一條重鏈和一條輕鏈構(gòu)成的二聚體等。所有抗體同種型都可用于產(chǎn)生抗原結(jié)合片段。另外，抗原結(jié)合片段可以包括非抗體蛋白質(zhì)構(gòu)架，其可以以提供針對給定目標(biāo)抗原的親和性的取向成功地整合多肽區(qū)段，例如蛋白支架?？梢灾亟M產(chǎn)生抗原結(jié)合片段，或通過完整抗體的酶切割或化學(xué)切割來產(chǎn)生抗原結(jié)合片段。短語“抗體或其抗原結(jié)合片段”可用于表示給定的抗原結(jié)合片段整合有短語中指稱的抗體的一個或多個氨基酸區(qū)段。當(dāng)在抗體或抗體片段的情形中使用時，“特異性結(jié)合”表示通過由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因的片段編碼的結(jié)構(gòu)域結(jié)合于目標(biāo)蛋白的一個或多個表位，但是其基本上不識別并結(jié)合含有抗原性分子的混合群體的樣品中的其他分子。通常，當(dāng)通過表面等離子體共振測定法或細(xì)胞結(jié)合測定法測量時，抗體以低于約1x10-8m的kd結(jié)合于相關(guān)抗原。術(shù)語“對象”是指人類和非人類動物，包括所有脊椎動物例如哺乳動物和非哺乳動物，例如非人類靈長動物、小鼠、兔、綿羊、狗、貓、馬、牛、雞、兩棲動物和爬行動物。在所描述的方法的許多實(shí)施方式中，對象是人類。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“葉酸受體α”(也被稱為frα、fr-α、folr-1或folr1)是指葉酸的高親和性受體的α同工型。膜結(jié)合型frα通過糖基磷脂酰肌醇(gpi)錨而連接于細(xì)胞表面。frα的可溶形式可以由蛋白酶或磷脂酶對膜錨定型葉酸受體的作用而產(chǎn)生。人類frα的氨基酸序列在本文中顯示為seqidno：1。本文中使用的該術(shù)語涵蓋了變體，例如天然存在的等位基因變體或含有至少一個氨基酸取代的序列。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員將會認(rèn)識到的，人類frα的細(xì)胞結(jié)合形式和非細(xì)胞結(jié)合形式可以涵蓋seqidno：1的變體形式。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“樣品”是指從對象分離的類似流體、細(xì)胞或組織(例如手術(shù)切除的腫瘤組織、活檢組織，包括細(xì)針抽吸物)的集合物，以及對象內(nèi)存在的流體、細(xì)胞或組織。在某些實(shí)施方式中，樣品是生物流體。生物流體通常在生理溫度下是液體，并且可以包括存在于對象或生物來源中、從其抽取、表達(dá)或通過其他方式從其提取的天然存在的流體。某些生物流體源自于特定組織、器官或局部區(qū)域，并且某些其他生物流體可以更加全體性地或全身性地位于對象或生物來源中。生物流體的實(shí)例包括血液，血清和漿膜液，血漿，淋巴，尿液，唾液，囊液，淚液，糞便，痰液，分泌性物質(zhì)和器官的粘膜分泌物，陰道分泌物，腹水例如與非實(shí)體腫瘤相關(guān)的腹水，胸腔、心包腔、腹膜腔、腹腔和其他體腔的流體，通過支氣管灌洗收集的流體，等等。生物流體也可以包括與對象或生物來源相接觸的液體溶液，例如細(xì)胞和器官培養(yǎng)基、包括細(xì)胞或器官的調(diào)制培養(yǎng)基，灌洗液等。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“樣品”涵蓋從對象中取出的材料或?qū)ο笾写嬖诘牟牧?。?dāng)在表達(dá)frα的癌癥的進(jìn)展的情形中使用時，術(shù)語“進(jìn)展”包括癌癥從較低嚴(yán)重性向較高嚴(yán)重性狀態(tài)變化。這可以包括腫瘤的數(shù)量或嚴(yán)重性、轉(zhuǎn)移程度、癌癥生長或擴(kuò)散速度等的增加。例如，“卵巢癌的進(jìn)展”包括這樣的癌癥從較低嚴(yán)重性向較高嚴(yán)重性狀態(tài)進(jìn)展，例如從i期向ii期進(jìn)展、從ii期向iii期進(jìn)展等。當(dāng)在表達(dá)frα的癌癥的消退的情形中使用時，術(shù)語“消退”包括癌癥從較高嚴(yán)重性向較低嚴(yán)重性狀態(tài)變化。這可以包括腫瘤的數(shù)量或嚴(yán)重性、轉(zhuǎn)移程度、癌癥生長或擴(kuò)散速度等的降低。例如，“卵巢癌的消退”包括這樣的癌癥從較高嚴(yán)重性向較低嚴(yán)重性狀態(tài)消退，例如從iii期向ii期消退、從ii期向i期消退等。當(dāng)在表達(dá)frα的癌癥穩(wěn)定的情形中使用時，術(shù)語“穩(wěn)定”意欲描述疾病狀況在臨床相關(guān)的時間段內(nèi)沒有或尚未發(fā)生足夠顯著的變化而不會被認(rèn)為是進(jìn)展性癌癥或消退性癌癥。本文描述的實(shí)施方式不限于特定的方法、試劑、化合物、組合物或生物系統(tǒng)，這些方法、試劑、化合物、組合物或生物系統(tǒng)當(dāng)然可以改變。frα特異性抗體和抗原結(jié)合片段本文描述了特異性結(jié)合frα的分離的單克隆抗體或抗原結(jié)合片段?？贵w分子的一般結(jié)構(gòu)包含包括重鏈和輕鏈的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，以及發(fā)揮包括補(bǔ)體結(jié)合和結(jié)合抗體受體在內(nèi)的多種功能的fc結(jié)構(gòu)域。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段包括所有同種型iga、igd、ige、igg和igm以及四鏈免疫球蛋白結(jié)構(gòu)的合成多聚體。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段還包括通常存在于母雞或火雞血清以及母雞或火雞卵黃中的igy同種型。在實(shí)施例部分中公開的抗體或抗原結(jié)合片段源自于小鼠。可以通過重組手段從任何物種產(chǎn)生類似的抗體。例如，抗體或抗原結(jié)合片段可以是嵌合的大鼠、山羊、馬、豬、牛、雞、兔、駱駝、驢、人類等的抗體或抗原結(jié)合片段。對于施用于人類的應(yīng)用來說，非人類來源的抗體或抗原結(jié)合片段可以在遺傳學(xué)上或結(jié)構(gòu)上改變成在施用于人類患者后具有較低抗原性。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段是嵌合的。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“嵌合的”是指這樣的抗體或其抗原結(jié)合片段，即，其中至少一個可變結(jié)構(gòu)域的至少某些部分源自于非人類哺乳動物、嚙齒動物或爬行動物的抗體氨基酸序列，而所述抗體或其抗原結(jié)合片段的其余部分源自于人類。例如，嵌合抗體可以包含小鼠抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和人類fc或其他這樣的結(jié)構(gòu)性結(jié)構(gòu)域。在某些實(shí)施方式中，抗體是人源化抗體。人源化抗體可以是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(例如fv、fab、fab’、f(ab’)2或抗體的其他抗原結(jié)合性子序列)，其含有極少的源自于非人類免疫球蛋白的序列。對于大多數(shù)部分來說，人源化抗體是其中來自于接受者的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)的殘基被具有希望的特異性、親和性和能力的來自于非人類物種(供體抗體)例如小鼠、大鼠或兔的cdr的殘基替換的人類免疫球蛋白(接受者抗體)。一般來說，人源化抗體包含至少一個、通常兩個可變結(jié)構(gòu)域的基本上所有的部分，其中所有或基本上所有cdr區(qū)對應(yīng)于非人類免疫球蛋白的cdr區(qū)，并且所有或基本上所有構(gòu)架區(qū)是人類免疫球蛋白序列的構(gòu)架區(qū)。人源化抗體可以包括至少一部分的免疫球蛋白恒定區(qū)(fc)，通常為人類免疫球蛋白的恒定區(qū)。本文描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以以多種形式存在，但是它們包括表1中示出的一個或多個抗體可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段或cdr。表1中描述的抗體的同種型被示出在括號中，以描述每種抗體的恒定區(qū)，所述恒定區(qū)已知具有保守序列。表1.所描述的抗體及其抗原結(jié)合片段的抗體區(qū)段(“l(fā)c”表示輕鏈，“hc”表示重鏈)。本文描述了特異性結(jié)合于frα的分離的抗體和抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類igg或其衍生物。盡管所述抗體或抗原結(jié)合片段可以是人類、人源化或嵌合的，但本文中示例的抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類的。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：2基本上相同或一致的輕鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：3基本上相同或一致的輕鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：4基本上相同或一致的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：6基本上相同或一致的重鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：7基本上相同或一致的重鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：8基本上相同或一致的重鏈cdr3氨基酸序列。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：2基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：3基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：4基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：6基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：7基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：8基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：2基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：3基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：4基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈，并且還包括具有與seqidno：6基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：7基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：8基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：5基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：37基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：9基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：41基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：5基本上相同或一致的氨基酸序列，并且所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：9基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，所述抗體由2011年5月19日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(10801universityblvd.，manassas，virginia20110-2209)并被分配有登記號pta-11887的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體對frα的結(jié)合親和性。在某些實(shí)施方式中，所公開的抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈cdr和重鏈cdr。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)。還公開了編碼特異性結(jié)合于frα的抗體或抗原結(jié)合片段的分離的多核苷酸。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：2基本上相同或一致的輕鏈cdr1序列，例如seqidno：34。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：3基本上相同或一致的輕鏈cdr2，例如seqidno：35。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：4基本上相同或一致的輕鏈cdr3，例如seqidno：36。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：6基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：38。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：7基本上相同或一致的重鏈cdr2，例如seqidno：39。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：8基本上相同或一致的重鏈cdr3，例如seqidno：40。所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含具有與seqidno：2基本上相同或一致的cdr1例如seqidno：34、與seqidno：3基本上相同或一致的cdr2例如seqidno：35以及與seqidno：4基本上相同或一致的cdr3例如seqidno：36的輕鏈。所述分離的多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：6基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：38，與seqidno：7基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：39，以及與seqidno：8基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：40。所述分離的多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：2基本上相同或一致的輕鏈cdr1，例如seqidno：34，由與seqidno：3基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr2，例如seqidno：35，和由與seqidno：4基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr3，例如seqidno：36；以及與seqidno：6基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：38，與seqidno：7基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：39，和與seqidno：8基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：40。也可以使用抗體樣蛋白作為cdr支架，對cdr的抗原結(jié)合排列方式進(jìn)行工程化改造。這樣的工程化改造的抗原結(jié)合蛋白也在本公開的范圍之內(nèi)。本文描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：5基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：37的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的分離的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：9基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：41的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的分離的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：5基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：37的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段，以及包括與seqidno：9基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：41的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。本文提供的能夠編碼可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的分離的多核苷酸可以被包含在相同或不同的載體上，以產(chǎn)生抗體或抗原結(jié)合片段。本文描述了特異性結(jié)合于frα的分離的抗體和抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類igg或其衍生物。盡管所述抗體或抗原結(jié)合片段可以是人類、人源化或嵌合的，但本文中示例的抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類的。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：10基本上相同或一致的輕鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：11基本上相同或一致的輕鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：12基本上相同或一致的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：14基本上相同或一致的重鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：15基本上相同或一致的重鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：16基本上相同或一致的重鏈cdr3氨基酸序列。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：10基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：11基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：12基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：14基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：15基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：16基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：10基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：11基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：12基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈，并且還包括具有與seqidno：14基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：15基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：16基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：13基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：45基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：17基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：49基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：13基本上相同或一致的氨基酸序列，并且所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：17基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，所述抗體由2011年5月19日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(10801universityblvd.，manassas，virginia20110-2209)并被分配有登記號pta-11884的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體對frα的結(jié)合親和性。在某些實(shí)施方式中，所公開的抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈cdr和重鏈cdr。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)。還公開了編碼特異性結(jié)合于frα的抗體或抗原結(jié)合片段的分離的多核苷酸。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：10基本上相同或一致的輕鏈cdr1序列，例如seqidno：42。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：11基本上相同或一致的輕鏈cdr2，例如seqidno：43。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：12基本上相同或一致的輕鏈cdr3，例如seqidno：44。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：14基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：46。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：15基本上相同或一致的重鏈cdr2，例如seqidno：47。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：16基本上相同或一致的重鏈cdr3，例如seqidno：48。所述多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含具有與seqidno：10基本上相同或一致的cdr1例如seqidno：42、與seqidno：11基本上相同或一致的cdr2例如seqidno：43以及與seqidno：12基本上相同或一致的cdr3例如seqidno：44的輕鏈。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：14基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：46，與seqidno：15基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：47，以及與seqidno：16基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：48。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：10基本上相同或一致的輕鏈cdr1，例如seqidno：42，由與seqidno：11基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr2，例如seqidno：43，和由與seqidno：12基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr3，例如seqidno：44；以及與seqidno：14基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：46，與seqidno：15基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：47，和與seqidno：16基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：48。也可以使用抗體樣蛋白作為cdr支架，對cdr的抗原結(jié)合排列方式進(jìn)行工程化改造。這樣的工程化改造的抗原結(jié)合蛋白也在本公開的范圍之內(nèi)。本文描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：13基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：45的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：17基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：49的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：13基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：45的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段，以及包括與seqidno：17基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：49的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。本文提供的能夠編碼可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的多核苷酸可以被包含在相同或不同的載體上，以產(chǎn)生抗體或抗原結(jié)合片段。本文描述了特異性結(jié)合于frα的分離的抗體和抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類igg或其衍生物。盡管所述抗體或抗原結(jié)合片段可以是人類、人源化或嵌合的，但本文中示例的抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類的。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：18基本上相同或一致的輕鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：19基本上相同或一致的輕鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：20基本上相同或一致的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：22基本上相同或一致的重鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：23基本上相同或一致的重鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：24基本上相同或一致的重鏈cdr3氨基酸序列。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：18基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：19基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：20基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：22基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：23基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：24基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：18基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：19基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：20基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈，并且還包括具有與seqidno：22基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：23基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：24基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：21基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：53基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：25基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：57基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：21基本上相同或一致的氨基酸序列，并且所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：25基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，所述抗體由2011年5月19日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(10801universityblvd.，manassas，virginia20110-2209)并被分配有登記號pta-11886的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體對frα的結(jié)合親和性。在某些實(shí)施方式中，所公開的抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈cdr和重鏈cdr。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)。還公開了編碼特異性結(jié)合于frα的抗體或抗原結(jié)合片段的多核苷酸。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：18基本上相同或一致的輕鏈cdr1序列，例如seqidno：50。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：19基本上相同或一致的輕鏈cdr2，例如seqidno：51。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：20基本上相同或一致的輕鏈cdr3，例如seqidno：52。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：22基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：54。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：23基本上相同或一致的重鏈cdr2，例如seqidno：55。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：24基本上相同或一致的重鏈cdr3，例如seqidno：56。所述多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含具有與seqidno：18基本上相同或一致的cdr1例如seqidno：50、與seqidno：19基本上相同或一致的cdr2例如seqidno：51以及與seqidno：20基本上相同或一致的cdr3例如seqidno：52的輕鏈。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：22基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：54，與seqidno：23基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：55，以及與seqidno：24基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：56。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：18基本上相同或一致的輕鏈cdr1，例如seqidno：50，由與seqidno：19基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr2，例如seqidno：51，和由與seqidno：20基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr3，例如seqidno：52；以及與seqidno：22基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：54，與seqidno：23基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：55，和與seqidno：24基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：56。也可以使用抗體樣蛋白作為cdr支架，對cdr的抗原結(jié)合排列方式進(jìn)行工程化改造。這樣的工程化改造的抗原結(jié)合蛋白也在本公開的范圍之內(nèi)。本文描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：21基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：53的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：25基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：57的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：21基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：53的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段，以及包括與seqidno：25基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：57的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。本文提供的能夠編碼可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的多核苷酸可以被包含在相同或不同的載體上，以產(chǎn)生抗體或抗原結(jié)合片段。本文描述了特異性結(jié)合于frα的分離的抗體和抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類igg或其衍生物。盡管所述抗體或抗原結(jié)合片段可以是人類、人源化或嵌合的，但本文中示例的抗體或抗原結(jié)合片段是鼠類的。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：26基本上相同或一致的輕鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：27基本上相同或一致的輕鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：28基本上相同或一致的輕鏈cdr3氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：30基本上相同或一致的重鏈cdr1氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：31基本上相同或一致的重鏈cdr2氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗原結(jié)合片段可以包括與seqidno：32基本上相同或一致的重鏈cdr3氨基酸序列。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：26基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：27基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：28基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：30基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：31基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：32基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所述抗體或抗原結(jié)合片段可以包括具有與seqidno：26基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：27基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：28基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的輕鏈，并且還包括具有與seqidno：30基本上相同或一致的cdr1氨基酸序列、與seqidno：31基本上相同或一致的cdr2氨基酸序列以及與seqidno：32基本上相同或一致的cdr3氨基酸序列的重鏈。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：29基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：61基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括重鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：33基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，包括與seqidno：65基本上相同或一致的序列的分離的多核苷酸可以編碼該重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。所描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：29基本上相同或一致的氨基酸序列，并且所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括與seqidno：33基本上相同或一致的氨基酸序列。在某些實(shí)施方式中，所述抗體由2011年5月19日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)(10801universityblvd.，manassas，virginia20110-2209)并被分配有登記號pta-11885的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體對frα的結(jié)合親和性。在某些實(shí)施方式中，所公開的抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈cdr和重鏈cdr。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含由保藏的抗體產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)。還公開了編碼特異性結(jié)合于frα的抗體或抗原結(jié)合片段的多核苷酸。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：26基本上相同或一致的輕鏈cdr1序列，例如seqidno：58。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：27基本上相同或一致的輕鏈cdr2，例如seqidno：59。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：28基本上相同或一致的輕鏈cdr3，例如seqidno：60。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：30基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：62。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：31基本上相同或一致的重鏈cdr2，例如seqidno：63。在某些實(shí)施方式中，所述分離的多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段具有與seqidno：32基本上相同或一致的重鏈cdr3，例如seqidno：64。所述多核苷酸編碼的抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含具有與seqidno：26基本上相同或一致的cdr1例如seqidno：58、與seqidno：27基本上相同或一致的cdr2例如seqidno：59以及與seqidno：28基本上相同或一致的cdr3例如seqidno：60的輕鏈。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：30基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：62，與seqidno：31基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：63，以及與seqidno：32基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：64。所述多核苷酸可以編碼一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其具有與seqidno：26基本上相同或一致的輕鏈cdr1，例如seqidno：58，由與seqidno：27基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr2，例如seqidno：59，和由與seqidno：28基本上相同或一致的核苷酸序列編碼的cdr3，例如seqidno：60；以及與seqidno：30基本上相同或一致的重鏈cdr1，例如seqidno：62，與seqidno：31基本上相同或一致的cdr2，例如seqidno：63，和與seqidno：32基本上相同或一致的cdr3，例如seqidno：64。也可以使用抗體樣蛋白作為cdr支架，對cdr的抗原結(jié)合排列方式進(jìn)行工程化改造。這樣的工程化改造的抗原結(jié)合蛋白也在本公開的范圍之內(nèi)。本文描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：29基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：61的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：33基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：65的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸可以編碼抗體或抗原結(jié)合片段，其具有包括與seqidno：29基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：61的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段，以及包括與seqidno：33基本上相同或一致的氨基酸序列、例如seqidno：65的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段。本文提供的能夠編碼可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的多核苷酸可以被包含在相同或不同的載體上，以產(chǎn)生抗體或抗原結(jié)合片段。編碼工程化改造的抗原結(jié)合蛋白的多核苷酸也在本公開的范圍之內(nèi)。在某些實(shí)施方式中，所描述的多核苷酸(以及它們編碼的肽)包括前導(dǎo)序列?？梢允褂帽绢I(lǐng)域中已知的任何前導(dǎo)序列。前導(dǎo)序列可以包括但不限于限制性位點(diǎn)或翻譯起始位點(diǎn)。本文描述的抗體或抗原結(jié)合片段包括具有單個或多個氨基酸取代、缺失或添加并保留所描述的抗體或抗原結(jié)合片段的生物性質(zhì)(例如結(jié)合親和性或免疫效應(yīng)子活性)的變體。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以產(chǎn)生具有單個或多個氨基酸取代、缺失或添加的變體。這些變體可以包括：(a)其中一個或多個氨基酸殘基被保守或非保守氨基酸取代的變體，(b)其中向多肽添加或從多肽缺失一個或多個氨基酸的變體，(c)其中一個或多個氨基酸包括取代基的變體，以及(d)其中多肽與另一個肽或多肽融合的變體，所述另一個肽或多肽例如為融合配偶體、蛋白質(zhì)標(biāo)簽或其他化學(xué)部分，其可以向所述多肽提供有用的性質(zhì)，例如用于抗體的表位、聚組氨酸序列、生物素部分等。本文描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以包括其中在保守或非保守位置處，來自于一個物種的氨基酸殘基被另一個物種中的相應(yīng)殘基取代的變體。在其他實(shí)施方式中，非保守位置處的氨基酸殘基被保守或非保守殘基取代。用于獲得這些變體的技術(shù)，包括遺傳學(xué)(抑制、缺失、突變等)、化學(xué)和酶學(xué)技術(shù)，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是已知的。本文描述的抗體或抗原結(jié)合片段可以表現(xiàn)為數(shù)種抗體同種型，例如igm、igd、igg、iga和ige。抗體或其抗原結(jié)合片段的特異性主要由cdr的氨基酸序列和排列決定。因此，可以將一種同種型的cdr轉(zhuǎn)移到另一種同種型而不改變抗原特異性?；蛘?，已經(jīng)建立了使雜交瘤從產(chǎn)生一種抗體同種型轉(zhuǎn)換成產(chǎn)生另一種同種型(同種型轉(zhuǎn)換)而不改變抗原特異性的技術(shù)。因此，這樣的抗體同種型在所描述的抗體或抗原結(jié)合片段的范圍之內(nèi)。本文描述的抗體或抗原結(jié)合片段對frα具有結(jié)合親和性(單位為m)，其包括小于約1x10-8m的解離常數(shù)(kd)。在一種實(shí)施方式中，抗體9f3對frα的親和性為7.15x10-10m。在一種實(shí)施方式中，抗體19d4對frα的親和性為5.67x10-10m。在一種實(shí)施方式中，抗體24f12對frα的親和性為1.02x10-10m。在一種實(shí)施方式中，抗體26b3對frα的親和性為2.73x10-11m。在一種實(shí)施方式中，抗體9f3對frα的親和性為約6.5x10-10m至約8x10-10m。在一種實(shí)施方式中，抗體19d4對frα的親和性為約5x10-10m至約6.5x10-10m。在一種實(shí)施方式中，抗體24f12對frα的親和性為約0.5x10-10m至約2x10-10m。在一種實(shí)施方式中，抗體26b3對frα的親和性為約1x10-11m至約3.5x10-11m。還提供了包含本文描述的多核苷酸的載體。所述載體可以是表達(dá)載體。因此，在本公開的范圍內(nèi)設(shè)想了含有編碼目標(biāo)多肽的序列的重組表達(dá)載體。表達(dá)載體可以含有一個或多個附加序列，例如但不限于調(diào)控序列(例如啟動子、增強(qiáng)子)、選擇標(biāo)記和多腺苷酸化信號。用于轉(zhuǎn)化廣泛的各種宿主細(xì)胞的載體是公知的，并且包括但不限于質(zhì)粒、噬粒、粘粒、桿狀病毒、桿粒、細(xì)菌人工染色體(bac)、酵母人工染色體(yac)以及其他細(xì)菌、酵母和病毒載體。本說明書范圍內(nèi)的重組表達(dá)載體包括合成的、基因組的或cdna來源的編碼至少一種重組蛋白且可以與適合的調(diào)控元件可操作連接的核酸片段。這樣的調(diào)控元件可以包括轉(zhuǎn)錄啟動子、編碼適合的mrna核糖體結(jié)合位點(diǎn)的序列以及控制轉(zhuǎn)錄和翻譯的終止的序列。表達(dá)載體、特別是哺乳動物表達(dá)載體，也可以包括一個或多個非轉(zhuǎn)錄元件例如復(fù)制起點(diǎn)、與待表達(dá)的基因相連的適合的啟動子和增強(qiáng)子、其他5′或3′側(cè)翼非轉(zhuǎn)錄序列、5′或3′非翻譯序列(例如必需的核糖體結(jié)合位點(diǎn))、多腺苷酸化位點(diǎn)、剪接供體和受體位點(diǎn)或轉(zhuǎn)錄終止序列。也可以整合有提供在宿主中復(fù)制的能力的復(fù)制起點(diǎn)。用于轉(zhuǎn)化脊椎動物細(xì)胞的表達(dá)載體中的轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列可以由病毒來源提供。示例性的載體可以如okayama和berg，3mol.cell.biol.280(1983)所述來構(gòu)造。在某些實(shí)施方式中，將抗體或抗原結(jié)合片段的編碼序列置于強(qiáng)有力的組成性啟動子的控制之下，例如用于下列基因的啟動子：次黃嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(hprt)，腺苷脫氨酶，丙酮酸激酶，β-肌動蛋白，人類肌球蛋白，人類血紅蛋白，人類肌肉肌氨酸等。此外，許多病毒啟動子在真核細(xì)胞中組成性地發(fā)揮作用，并且適用于所描述的實(shí)施方式。這樣的病毒啟動子包括但不限于巨細(xì)胞病毒(cmv)立即早期啟動子，sv40的早期和晚期啟動子，小鼠乳腺腫瘤病毒(mmtv)啟動子，馬羅尼白血病病毒、人免疫缺陷病毒(hiv)、epsteinbarr病毒(ebv)、勞氏肉瘤病毒(rsv)和其他反轉(zhuǎn)錄病毒的長末端重復(fù)序列(ltr)，以及單純皰疹病毒的胸苷激酶啟動子。在一種實(shí)施方式中，將抗體或其抗原結(jié)合片段的編碼序列置于誘導(dǎo)型啟動子的控制之下，所述誘導(dǎo)型啟動子例如為金屬硫蛋白啟動子、四環(huán)素誘導(dǎo)型啟動子、多西環(huán)素誘導(dǎo)型啟動子、含有一個或多個干擾素刺激響應(yīng)性元件(isre)例如蛋白激酶r2′，5′-寡腺苷酸化合成酶、mx基因、adar1的啟動子等。本文描述的載體可以含有一個或多個內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(ires)。在融合載體中包含ires序列，對于提高某些蛋白的表達(dá)可能是有益的。在某些實(shí)施方式中，載體系統(tǒng)包括一個或多個多腺苷酸化位點(diǎn)(例如sv40)，其可以在任何上述核酸序列的上游或下游。載體組分可以被連續(xù)地連接，或者以為基因產(chǎn)物的表達(dá)提供最佳間隔的方式排列(即通過在orf之間引入“間隔”核苷酸)，或以另一種方式放置。調(diào)控元件例如ires基序也被排列成提供用于表達(dá)的最佳間隔。載體可以包含選擇標(biāo)記，其在本領(lǐng)域中是公知的。選擇標(biāo)記包括陽性和陰性選擇標(biāo)記，例如抗生素抗性基因(例如新霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、卡那霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因、青霉素抗性基因)，谷氨酸合酶基因，用于更昔洛韋選擇的hsv-tk、hsv-tk衍生物，或用于6-甲基嘌呤選擇的細(xì)菌嘌呤核苷磷酸化酶基因(gadi等，7genether.1738-1743(2000))。編碼選擇標(biāo)記或克隆位點(diǎn)的核酸序列可以在編碼目標(biāo)多肽或克隆位點(diǎn)的核酸序列的上游或下游。本文描述的載體可用于向多種細(xì)胞轉(zhuǎn)化編碼所描述的抗體或抗原結(jié)合片段的基因。例如，載體可用于產(chǎn)生生產(chǎn)抗體或抗原結(jié)合片段的細(xì)胞。因此，另一方面描述了用包含核酸序列的載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，所述核酸序列編碼特異性結(jié)合frα的抗體或其抗原結(jié)合片段，例如本文中描述并示例的抗體或抗原結(jié)合片段。在本領(lǐng)域中已知用于將外來基因?qū)爰?xì)胞的多種技術(shù)，所述技術(shù)可以按照本文中描述和示例的各種實(shí)施方式，用于構(gòu)造目的在于執(zhí)行所描述的方法的重組細(xì)胞。所使用的技術(shù)應(yīng)該提供異源基因序列向宿主細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)移，使得所述異源基因序列可以被細(xì)胞后代遺傳并表達(dá)，并使受體細(xì)胞必需的發(fā)育和生理功能不被破壞?？梢允褂玫募夹g(shù)包括但不限于染色體轉(zhuǎn)移(例如細(xì)胞融合、染色體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移、微細(xì)胞介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移)、物理方法(例如轉(zhuǎn)染、原生質(zhì)體融合、微注射、電穿孔、脂質(zhì)體載體)、病毒載體轉(zhuǎn)移(例如重組dna病毒、重組rna病毒)等(被描述在cline，29pharmac.ther.69-92(1985)中)。磷酸鈣沉淀和聚乙二醇(peg)誘導(dǎo)的細(xì)菌原生質(zhì)體與哺乳動物細(xì)胞的融合，也可用于轉(zhuǎn)化細(xì)胞。適用于表達(dá)本文描述的抗體或抗原結(jié)合片段的細(xì)胞優(yōu)選地是真核細(xì)胞，更優(yōu)選地是植物、嚙齒動物或人類來源的細(xì)胞，例如但不限于nso、cho、chok1、perc.6、tk-ts13、bhk、hek293細(xì)胞、cos-7、t98g、cv-1/ebna、l細(xì)胞、c127、3t3、hela、ns1、sp2/0骨髓瘤細(xì)胞和bhk細(xì)胞系等。此外，可以使用雜交瘤細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)抗體的表達(dá)。本領(lǐng)域中已經(jīng)建立了用于產(chǎn)生雜交瘤的方法。可以對用本文描述的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的細(xì)胞進(jìn)行選擇或篩選，以獲得本文描述的抗體或抗原結(jié)合片段的重組表達(dá)。將重組陽性細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增并篩選表現(xiàn)出希望的表型的亞克隆，所述希望的表型例如為高水平表達(dá)、增強(qiáng)的生長性質(zhì)或產(chǎn)生由于例如蛋白質(zhì)修飾或翻譯后修飾的改變而具有希望的生物化學(xué)特性的蛋白的能力。這些表型可能是由給定亞克隆的固有性質(zhì)或突變造成的?？梢酝ㄟ^使用化學(xué)品、uv波長的光、輻射、病毒、插入性誘變劑、dna錯配修復(fù)的抑制或這些方法的組合來實(shí)現(xiàn)突變。本文提供了通過將樣品與本文描述的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸來檢測樣品中的frα的方法。正如本文中所描述，樣品可以源自于尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、與組織不關(guān)聯(lián)的細(xì)胞(即游離細(xì)胞)、組織(例如手術(shù)切除的腫瘤組織、活檢組織，包括細(xì)針抽吸物)、組織學(xué)制備物等。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過將樣品與下面的(a)、(b)、(c)、(d)或(e)相接觸來檢測樣品中的frα：(a)與抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段；(b)抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種或其抗原結(jié)合片段；(c)包含如表1中所描述的抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列的抗體或其抗原結(jié)合片段；(d)包含如表1中所描述的抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的抗體或其抗原結(jié)合片段；或(e)具有由保藏于atcc并且登記號為pta-11887、pta-11884、pta-11886或pta-11885的任一種細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體的氨基酸序列的抗體，或其抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，可以將樣品與本文描述的一種以上抗體或抗原結(jié)合片段相接觸。例如，可以將樣品與第一種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后與第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，其中所述第一種抗體或抗原結(jié)合片段與所述第二種抗體或抗原結(jié)合片段不是相同的抗體或抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方式中，可以將所述第一種抗體或其抗原結(jié)合片段固定于表面例如多孔板、芯片或類似的基材，然后與樣品相接觸。在其他實(shí)施方式中，在與樣品相接觸之前，所述第一種抗體或其抗原結(jié)合片段可以完全不固定或連接于任何物體。可以使用抗體或其抗原結(jié)合片段的各種組合來檢測樣品中的frα。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體9f3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體19d4的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體9f3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體24f12的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體9f3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體26b3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體19d4的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體9f3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體19d4的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體24f12的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體19d4的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體26b3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體24f12的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體9f3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體24f12的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體19d4的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體24f12的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體26b3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體26b3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體9f3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體26b3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體24f12的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體26b3的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體19d4的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體9f3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體19d4的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體9f3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體24f12的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體9f3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體26b3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體19d4的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體9f3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體19d4的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體24f12的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體19d4的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體26b3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體24f12的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體9f3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體24f12的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體19d4的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體24f12的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體26b3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體26b3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體9f3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體26b3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體24f12的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與包含抗體26b3的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與包含抗體19d4的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的氨基酸序列(如表1中所提供)的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11884的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11885的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在一種實(shí)施方式中，可以將樣品首先與能夠與由atcc登記號pta-11886的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后獨(dú)立地與能夠與由atcc登記號pta-11887的細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體結(jié)合相同表位的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。所描述的抗體和抗原結(jié)合片段可以被可檢測地標(biāo)記。在某些實(shí)施方式中，標(biāo)記的抗體和抗原結(jié)合片段可以便于通過本文描述的方法檢測frα。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，許多這樣的標(biāo)記物是容易知道的。例如，適合的標(biāo)記物包括但不應(yīng)被認(rèn)為僅限于放射性標(biāo)記物、熒光標(biāo)記物(例如649)、表位標(biāo)簽、生物素、發(fā)色團(tuán)標(biāo)記物、ecl標(biāo)記物或酶。更具體來說，所描述的標(biāo)記物包括釕、111in-dota、111in-二亞乙基三胺五乙酸(dtpa)、辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶和β-半乳糖苷酶、聚組氨酸(his標(biāo)簽)、吖啶染料、花青染料、熒光酮染料、嗪染料、菲啶染料、羅丹明染料、染料等。所描述的抗體和抗原結(jié)合片段可用于檢測樣品中的frα的各種測定法中。一些適合的測定法包括但不應(yīng)被認(rèn)為僅限于蛋白印跡分析、放射免疫測定法、免疫熒光測定法、免疫沉淀、平衡透析、免疫擴(kuò)散、電化學(xué)發(fā)光(ecl)免疫測定法、免疫組織化學(xué)、熒光激活細(xì)胞分選(facs)或elisa測定法。在本文描述的某些實(shí)施方式中，在對象中檢測到表達(dá)frα的癌細(xì)胞，可用于確定對象可以用針對frα的治療劑進(jìn)行治療。在某些實(shí)施方式中，所述針對frα的治療劑可以是抗體例如farletuzumab。用于診斷癌癥的方法本文中提供了用于診斷對象中上皮起源的卵巢癌、乳腺癌、甲狀腺癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、輸卵管癌或肺癌的方法。在如上所述的某些實(shí)施方式中，對樣品例如組織學(xué)樣品、細(xì)針抽吸樣品、切除的腫瘤組織、循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞等中的frα進(jìn)行檢測，提供了在獲取所述樣品的對象中診斷癌癥的能力。在某些實(shí)施方式中，可能已經(jīng)知道獲取所述樣品的對象患有癌癥，但是對象所患癌癥的類型可能尚未被診斷或者初步診斷可能不明確，因此檢測從所述對象獲得的樣品中的frα可以允許或澄清癌癥的診斷。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的樣品中存在的frα的量，并將觀察到的frα量與對照樣品中的frα量進(jìn)行比較，來評估對象是否患有表達(dá)frα的癌癥，其中源自于對象的樣品中的frα量與對照樣品中的frα量之間的差異是對象患有表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，通過將樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估源自于對象的樣品中的frα量。類似的方法可用于確定對象是否患有與frα產(chǎn)生增加無關(guān)的癌癥。用于評估frα的存在的樣品可以源自于尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、與組織不關(guān)聯(lián)的細(xì)胞(即游離細(xì)胞)、組織(例如手術(shù)切除的腫瘤組織、活檢組織，包括細(xì)針抽吸物)、組織學(xué)制備物等。在某些實(shí)施方式中，對象是人類。在某些實(shí)施方式中，診斷表達(dá)frα的癌癥的方法包括：將對象的生物樣品與frα特異性抗體或其抗原結(jié)合片段(例如源自于表1中提供的抗體和片段的那些frα特異性抗體或其抗原結(jié)合片段)相接觸，對樣品中存在的被所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合的frα的量進(jìn)行定量，將樣品中存在的frα的量與已知標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，以及確定對象的frα水平是否落在與癌癥相關(guān)的frα水平之內(nèi)。在另外的實(shí)施方式中，在診斷方法后面可以跟隨有施用或給出癌癥特異性治療的附加步驟。在某些實(shí)施方式中，所述癌癥特異性治療可以針對表達(dá)frα的癌癥，例如farletuzumab。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的樣品中存在的與細(xì)胞或組織相關(guān)的frα的量，并將觀察到的frα量與對照樣品中的frα量進(jìn)行比較，來評估對象是否患有表達(dá)frα的癌癥，其中源自于對象的樣品中的frα量與對照樣品中的frα量之間的差異是對象患有表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，對照樣品可以源自于未患表達(dá)frα的癌癥的對象。在某些實(shí)施方式中，對照樣品可以源自于患有表達(dá)frα的癌癥的對象。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對照樣品源自于未患表達(dá)frα的癌癥的對象時，觀察到樣品中存在的frα的量相對于對照樣品中所觀察到的量的增加是被評估對象患有表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對照樣品源自于未患表達(dá)frα的癌癥的對象時，觀察到測試樣品中存在的frα的量相對于對照樣品中所觀察到的量的降低或相似性是被評估對象未患表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對照樣品源自于患有表達(dá)frα的癌癥的對象時，觀察到測試樣品中存在的frα的量相對于對照樣品中所觀察到的量的相似性是被評估對象患有表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)對照樣品源自于患有表達(dá)frα的癌癥的對象時，觀察到測試樣品中存在的frα的量相對于對照樣品中所觀察到的量的降低是被評估對象未患表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα量，通過將樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。用于評估frα的存在的樣品可以是循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、與組織不關(guān)聯(lián)的細(xì)胞(即游離細(xì)胞)、組織(例如手術(shù)切除的腫瘤組織、活檢組織，包括細(xì)針抽吸物)、組織學(xué)制備物等。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的樣品中存在的與細(xì)胞或組織不相關(guān)的frα的量，并將觀察到的frα量與對照樣品中的frα量進(jìn)行比較，來評估對象是否患有表達(dá)frα的癌癥，其中源自于對象的樣品中的frα量與對照樣品中的frα量之間的差異是對象患有表達(dá)frα的癌癥的指示。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα量，通過將樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。用于評估frα的存在的樣品可以是尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、組織學(xué)制備物等。在所描述的方法的各種實(shí)施方式中，癌癥可以是表達(dá)frα的癌癥。在特定實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是卵巢癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是子宮內(nèi)膜癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是結(jié)腸直腸癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是乳腺癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是甲狀腺癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是輸卵管癌。在另一種實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是非小細(xì)胞肺癌例如腺癌。或者，所描述的方法可用于診斷不表達(dá)frα的癌癥，例如鱗狀細(xì)胞癌。在各種不同情況下，通過將樣品與結(jié)合frα的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸來測定frα的量。在某些實(shí)施方式中，可以將樣品與一種以上類型的結(jié)合frα的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在某些實(shí)施方式中，可以將樣品與結(jié)合frα的第一種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后與結(jié)合frα的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。諸如本文中描述的抗體可用于這種情況。例如，抗體選自：(a)與抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段；(b)抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種或其抗原結(jié)合片段；(c)包含如表1中所描述的抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列的抗體或其抗原結(jié)合片段；(d)包含如表1中所描述的抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的抗體或其抗原結(jié)合片段；或(e)具有由保藏于atcc并且登記號為pta-11887、pta-11884、pta-11886或pta-11885的任一種細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體的氨基酸序列的抗體，或其抗原結(jié)合片段。如上面在描述檢測方法的通述部分中詳細(xì)描述的，(a)-(e)中所描述的抗體和抗原結(jié)合片段的各種組合可用于提供“第一種”和“第二種”抗體或抗原結(jié)合片段以執(zhí)行所描述的診斷方法。在某些實(shí)施方式中，frα的量通過蛋白印跡分析、放射免疫測定法、免疫熒光測定法、免疫沉淀、平衡透析、免疫擴(kuò)散、電化學(xué)發(fā)光(ecl)免疫測定法、免疫組織化學(xué)、熒光激活細(xì)胞分選(facs)或elisa測定法來測定。在所描述的診斷方法的各種實(shí)施方式中，使用對照樣品。對照樣品可以是陽性或陰性測定對照，其確保所使用的測定法正確工作；例如，這種性質(zhì)的測定對照可以常用于免疫組織化學(xué)測定法?；蛘撸瑢φ諛悠房梢允墙】祵ο笾衒rα的標(biāo)準(zhǔn)化的對照量。在某些實(shí)施方式中，可以將觀察到的受試對象的frα水平與在來自于已知患有表達(dá)frα的癌癥的對照對象的樣品中觀察到的frα水平進(jìn)行比較。在某些實(shí)施方式中，對照對象的表達(dá)frα的癌癥是卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、甲狀腺癌、輸卵管癌或肺癌例如腺癌。在某些實(shí)施方式中，已知對照對象患有早期的表達(dá)frα的癌癥，例如i期卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、甲狀腺癌、輸卵管癌或肺癌(例如腺癌)。在某些實(shí)施方式中，已知對照對象患有中期的表達(dá)frα的癌癥，例如ii期卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、甲狀腺癌、輸卵管癌或肺癌(例如腺癌)。在某些實(shí)施方式中，已知對照對象患有晚期的表達(dá)frα的癌癥，例如iii期或iv期卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、甲狀腺癌、輸卵管癌或肺癌(例如腺癌)。本文提供的診斷方法還提供了一種基礎(chǔ)，在此基礎(chǔ)上可以預(yù)測對象在診斷后存活5年的可能性是相對較高還是較低。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法可用于為患有腺癌的對象預(yù)測有利結(jié)果，其中有利結(jié)果被定義為具有增加的5年存活率。如本文中提供的數(shù)據(jù)所表明的，與被確定為患有表達(dá)frα的i期或ii期腺癌的對象相比，被確定為患有不表達(dá)frα的i期或ii期腺癌的對象在5年內(nèi)死亡的可能性高約2倍。因此，本文描述的診斷方法可以與這一知識相結(jié)合，以允許獲得一種為被確定患有癌癥的對象預(yù)測5年存活可能性的方法。在某些實(shí)施方式中，所述方法用于為被確定患有腺癌的對象預(yù)測5年存活可能性。在某些實(shí)施方式中，所描述的預(yù)后方法包括：將對象的生物樣品與frα特異性抗體或其抗原結(jié)合片段(例如源自于表1中提供的抗體和片段的那些frα特異性抗體或其抗原結(jié)合片段)相接觸，對樣品中存在的被所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合的frα的量進(jìn)行定量，將樣品中存在的frα的量與已知標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，以及確定對象的frα水平是否指示表達(dá)frα的癌癥的存在，從而允許對對象在被診斷為患有癌癥后存活5年的可能性進(jìn)行預(yù)測。在某些實(shí)施方式中，對象已知患有或被確定為患有腺癌。在某些實(shí)施方式中，對象是人類。用于監(jiān)測癌癥的方法本文中提供了用于監(jiān)測對象中上皮起源的癌癥的方法。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的測試樣品中存在的frα的量，并將觀察到的frα量與在較早時間點(diǎn)從所述對象獲得的樣品中的frα量進(jìn)行比較，來評估表達(dá)frα的癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定，其中測試樣品和較早樣品中的frα量之間的差異提供了所述癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定的指示。就此而言，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有增加的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的進(jìn)展。相反，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有降低的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的消退。因此，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有無顯著差異的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的病情穩(wěn)定狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα量，通過將所述樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。用于評估frα的存在的樣品可以源自于尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、與組織不關(guān)聯(lián)的細(xì)胞(即游離細(xì)胞)、組織(例如手術(shù)切除的腫瘤組織、活檢組織，包括細(xì)針抽吸物)、組織學(xué)制備物等。在某些實(shí)施方式中，對象是人類。在某些實(shí)施方式中，監(jiān)測表達(dá)frα的癌癥的方法包括：將對象的生物樣品與frα特異性抗體或其抗原結(jié)合片段(例如源自于表1中提供的抗體和片段的那些frα特異性抗體或其抗原結(jié)合片段)相接觸，對樣品中存在的被所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合的frα的量進(jìn)行定量，將樣品中存在的frα的量與在較早時間點(diǎn)來自于同一對象的樣品中確定的frα量進(jìn)行比較，以及確定對象的frα水平是否隨時間變化。測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有增加的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的進(jìn)展。相反，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有降低的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的消退。因此，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有無顯著差異的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的病情穩(wěn)定狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，可以將樣品的frα水平單獨(dú)地與已知標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，或者還與在較早時間點(diǎn)評估的樣品中所觀察到的frα水平進(jìn)行比較。在某些實(shí)施方式中，已知標(biāo)準(zhǔn)可以是已知濃度的frα蛋白(例如重組或純化的frα蛋白樣品)。在其他實(shí)施方式中，在診斷方法后面可以跟隨有施用癌癥特異性治療的附加步驟。在某些實(shí)施方式中，所述癌癥特異性治療可以針對表達(dá)frα的癌癥，例如farletuzumab。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的測試樣品中存在的與細(xì)胞或組織相關(guān)的frα的量，并將觀察到的frα量與在較早時間點(diǎn)以類似方式從對象獲得的樣品中的frα量進(jìn)行比較，來評估表達(dá)frα的癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定，其中測試樣品和較早樣品中的frα量之間的差異提供了所述癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定的指示。就此而言，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有提高的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的進(jìn)展。相反，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有降低的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的消退。因此，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有無顯著差異的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的病情穩(wěn)定狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα量，通過將所述樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。用于評估frα的存在的樣品可以是循環(huán)細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞、與組織不關(guān)聯(lián)的細(xì)胞(即游離細(xì)胞)、組織(例如手術(shù)切除的腫瘤組織、活檢組織，包括細(xì)針抽吸物)、組織學(xué)制備物等。在某些實(shí)施方式中，所描述的方法包括通過測定源自于對象的測試樣品中存在的與細(xì)胞或組織不相關(guān)的frα的量，并將觀察到的frα量與在較早時間點(diǎn)以類似方式從對象獲得的樣品中的frα量進(jìn)行比較，來評估表達(dá)frα的癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定，其中測試樣品和較早樣品中的frα量之間的差異提供了所述癌癥是進(jìn)展、消退還是保持穩(wěn)定的指示。就此而言，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有提高的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的進(jìn)展。相反，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有降低的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的消退。因此，測試樣品相對于較早樣品中所觀察到的量具有無顯著差異的frα量，可以指示表達(dá)frα的癌癥的病情穩(wěn)定狀態(tài)。在某些實(shí)施方式中，源自于對象的樣品中的frα量，通過將所述樣品與結(jié)合frα的抗體例如本文中描述的抗體相接觸來評估。用于評估frα的存在的樣品可以是尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、組織學(xué)制備物等。在所描述的方法的各種實(shí)施方式中，癌癥可以是表達(dá)frα的癌癥。在特定實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是卵巢癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是子宮內(nèi)膜癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是結(jié)腸直腸癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是乳腺癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是甲狀腺癌。在某些實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是輸卵管癌。在另一種實(shí)施方式中，表達(dá)frα的癌癥是非小細(xì)胞肺癌例如腺癌。在各種不同情況下，通過將樣品與結(jié)合frα的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸來測定frα的量。在某些實(shí)施方式中，可以將樣品與一種以上類型的結(jié)合frα的抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。在某些實(shí)施方式中，可以將樣品與結(jié)合frα的第一種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸，然后與結(jié)合frα的第二種抗體或其抗原結(jié)合片段相接觸。諸如本文中描述的抗體可用于這種情況。例如，抗體可以選自：(a)與抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段；(b)抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種或其抗原結(jié)合片段；(c)包含如表1中所描述的抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列的抗體或其抗原結(jié)合片段；(d)包含如表1中所描述的抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的抗體或其抗原結(jié)合片段；或(e)具有由保藏于atcc并且登記號為pta-11887、pta-11884、pta-11886或pta-11885的任一種細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體的氨基酸序列的抗體，或其抗原結(jié)合片段。如上面在描述檢測方法的通述部分中詳細(xì)描述的，(a)-(e)中所描述的抗體和抗原結(jié)合片段的各種組合可用于提供“第一種”和“第二種”抗體或抗原結(jié)合片段以執(zhí)行所描述的監(jiān)測方法。在某些實(shí)施方式中，frα的量通過蛋白印跡分析、放射免疫測定法、免疫熒光測定法、免疫沉淀、平衡透析、免疫擴(kuò)散、電化學(xué)發(fā)光(ecl)免疫測定法、免疫組織化學(xué)、熒光激活細(xì)胞分選(facs)或elisa測定法來測定。在詳細(xì)描述和所提供的實(shí)施例和相關(guān)附圖中，更詳細(xì)地提供了所概述的主題的其他方面。用于檢測frα的試劑盒本文提供了用于檢測樣品中的frα的試劑盒。這些試劑盒包括本文描述的一種或多種frα特異性抗體或其抗原結(jié)合片段，以及所述試劑盒的使用說明書。在某些實(shí)施方式中，被提供在所描述的試劑盒中的抗體或抗原結(jié)合片段可以是下列一種或多種：(a)與抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種結(jié)合相同表位的抗體或其抗原結(jié)合片段；(b)抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種或其抗原結(jié)合片段；(c)包含如表1中所描述的抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列以及輕鏈cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列的抗體或其抗原結(jié)合片段；(d)包含如表1中所描述的抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3中的任一種的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)段的抗體或其抗原結(jié)合片段；或(e)具有由保藏于atcc并且登記號為pta-11887、pta-11884、pta-11886或pta-11885的任一種細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體的氨基酸序列的抗體，或其抗原結(jié)合片段。所提供的抗體或抗原結(jié)合片段可以在溶液中，冷凍干燥，固定于基材、載體或板，或偶聯(lián)于可檢測的標(biāo)記物。所描述的試劑盒還可以包含可用于執(zhí)行本文描述的方法的附加組分。例如，試劑盒可以包含用于從對象獲得樣品的機(jī)構(gòu)，對照樣品例如來自于患有緩慢進(jìn)展的癌癥的對象和/或未患癌癥的對象的樣品，一個或多個樣品區(qū)室，和/或描述本發(fā)明方法的執(zhí)行和組織特異性對照/標(biāo)準(zhǔn)品的說明性材料。用于測定frα水平的機(jī)構(gòu)可以進(jìn)一步包括例如緩沖劑或在用于測定frα水平的測定法中使用的其他試劑。說明書可以是例如用于執(zhí)行測定法的印刷說明書和/或用于評估frα的表達(dá)水平的說明書。所描述的試劑盒還可以包括用于從對象分離樣品的機(jī)構(gòu)。這些機(jī)構(gòu)可以包含可用于從對象獲得流體或組織的一種或多種設(shè)備或試劑。用于從對象獲得樣品的機(jī)構(gòu)還可以包含用于從血液樣品分離血液組分例如血清的機(jī)構(gòu)。優(yōu)選地，試劑盒被設(shè)計成用于人類對象。所描述的試劑盒還可以包括能夠被施加到樣品以減少第一抗體或第二抗體的非特異性結(jié)合的封閉試劑。封閉試劑的實(shí)例是牛血清白蛋白(bsa)，其可以在使用前用緩沖液進(jìn)行稀釋。其他可商購的封閉試劑例如blockace和elisasynblock(abdserotec)、backgroundpunisher(biocaremedical)和startingblock(thermofisherscientific)是本領(lǐng)域中已知的。所描述的試劑盒還可以包括陰性對照第一抗體，其在基于抗體的檢測測定法中不能充分結(jié)合于frα以產(chǎn)生陽性結(jié)果。此外，所描述的試劑盒可以包括能夠與frα第一抗體例如抗體9f3、抗體19d4、抗體24f12或抗體26b3結(jié)合的第二抗體。在某些實(shí)施方式中，第二抗體可以偶聯(lián)于可檢測的標(biāo)記物例如辣根過氧化物酶(hrp)或熒光團(tuán)，以允許檢測結(jié)合于樣品的第一抗體。所描述的試劑盒還可以包括比色測定或化學(xué)發(fā)光底物，其允許在樣品上檢測結(jié)合的第二抗體的存在。在某些實(shí)施方式中，比色測定或化學(xué)發(fā)光底物可以是2，2′-聯(lián)氮基-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(abts)，3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺(tmb)，3，3′-二氨基聯(lián)苯胺(dab)，supersignal(thermofisherscientific)，ecl試劑(thermofisherscientific)，或本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其他這樣的試劑。提供下面的實(shí)施例是為了補(bǔ)充前面的公開內(nèi)容并為本文描述的主題提供更好的理解。這些實(shí)施例不應(yīng)被認(rèn)為限制所描述的主題。應(yīng)該理解，本文描述的實(shí)施例和實(shí)施方式僅僅是出于說明目的，并且對其進(jìn)行的各種修改或改變對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，并應(yīng)被包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)并且是可以在不背離本發(fā)明的真實(shí)范圍的情況下做出的。實(shí)施例1-重組人類frα的表達(dá)和純化為了進(jìn)行與本文描述的研究相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)生了數(shù)種表達(dá)葉酸受體α(frα)的細(xì)胞系統(tǒng)或細(xì)胞株，以產(chǎn)生表達(dá)frα的細(xì)胞基質(zhì)或產(chǎn)生純化的重組人類frα蛋白。所使用的一種表達(dá)系統(tǒng)是通過桿狀病毒表達(dá)重組人類frα的sf9昆蟲細(xì)胞系。使用人類frα序列來制備該系統(tǒng)，所述人類frα序列含有被優(yōu)化用于昆蟲細(xì)胞表達(dá)的前導(dǎo)序列、n-端6x組氨酸(6xhis)表位標(biāo)簽和完整的天然gpi連接位點(diǎn)。然后將細(xì)胞在1l搖瓶中溫育，并將sf9昆蟲細(xì)胞的對數(shù)期培養(yǎng)物以＜1的感染復(fù)數(shù)(moi)用重組桿狀病毒進(jìn)行感染。從30l培養(yǎng)物收獲細(xì)胞，裂解，并用含有10mm3-[(3-膽酰胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸(chaps)的1x磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)提取2x。將nacl濃度調(diào)整至300mm，并通過0.2um膜進(jìn)行過濾。將澄清的上清液通過親和層析進(jìn)行純化，其中使用含有2mnacl、1mmchaps的ph7.4的1xpbs作為洗滌緩沖液，然后用ph6.8的10mm3-(n-嗎啉代)丙磺酸(mops)、3mmgcl2、1mmchaps洗脫。將峰級分針對ph7.4的1xpbs充分透析，通過sds-page分析純度，通過二喹啉甲酸測定法(bca)定量，分成等分試樣并儲存在-80℃。使用含有人類免疫球蛋白κ前導(dǎo)序列和代替gpi連接位點(diǎn)的c-端6xhis表位標(biāo)簽的人類葉酸受體α(frα)序列，產(chǎn)生穩(wěn)定地表達(dá)并分泌人類frα的中華倉鼠卵巢(cho)細(xì)胞系。在產(chǎn)生后，將表達(dá)frα的cho細(xì)胞以25l規(guī)模在波狀包中生長。為了純化分泌的frα蛋白，通過深度過濾從細(xì)胞上清液清除細(xì)胞碎片，然后通過切向流過濾將上清液濃縮10倍，并滲濾到ph8.0的50mm磷酸鈉、300mmnacl、1mm咪唑中。使用fplc將其裝載到預(yù)裝填的imac柱上。使用ph8.0的50mm磷酸鈉、300mmnacl、5mm咪唑洗掉未結(jié)合的材料，并使用含5mm-100mm咪唑的ph8.0的50mm磷酸鈉、300mmnacl的線性梯度來洗脫結(jié)合的蛋白。將峰級分針對ph7.4的1xpbs充分透析，通過sds-page分析純度，通過bca測定法定量，分成等分試樣并儲存在-80℃。也為人類葉酸受體β(frβ)、人類葉酸受體γ(frγ)和人類葉酸受體δ(frδ)產(chǎn)生了類似的細(xì)胞系統(tǒng)。簡單來說，使用含有人類免疫球蛋白κ前導(dǎo)序列和代替gpi連接位點(diǎn)的c-端6xhis表位標(biāo)簽的frβ、frγ或frδ的構(gòu)建物來瞬時轉(zhuǎn)染1l293f細(xì)胞培養(yǎng)物。按照上面對人類frα所描述的，對重組fr蛋白進(jìn)行純化。也制備了穩(wěn)定地表達(dá)并分泌含有人類免疫球蛋白κ前導(dǎo)序列和代替gpi連接位點(diǎn)的c-端6xhis表位標(biāo)簽的人類間皮素序列的中華倉鼠卵巢(cho)細(xì)胞系，因?yàn)殚g皮素對于許多研究來說起到陰性對照的作用。將表達(dá)人類間皮素的cho細(xì)胞以25l規(guī)模在波狀包中生長。為了純化分泌的間皮素蛋白，通過中空纖維過濾從細(xì)胞上清液清除碎片，并通過切向流過濾將澄清的上清液濃縮10倍。將上清液的nacl濃度調(diào)整至300mmnacl和0.5mm咪唑。使用fplc將其裝載到預(yù)裝填的imac柱上。使用ph8.0的50mm磷酸鈉、300mmnacl、3mm咪唑洗掉未結(jié)合的材料，并使用ph8.0的50mm磷酸鈉、300mmnacl、150mm咪唑來洗脫結(jié)合的蛋白。將峰級分針對ph7.5的50mm磷酸鉀充分透析。添加硫酸銨至終濃度為1m，然后使用含1m-0m硫酸銨的ph7.5的50mm磷酸鉀的步階梯度，在預(yù)裝填的苯基瓊脂糖凝膠柱上進(jìn)行最后的純化。將峰級分針對ph7.4的1xpbs充分透析，通過sds-page分析純度，通過bca測定法定量，分成等分試樣并儲存在-80℃。實(shí)施例2-產(chǎn)生純化的還原和烷基化frα進(jìn)行嘗試以產(chǎn)生frα的還原和烷基化的抗原性形式。為了還原所述蛋白，使用離心過濾器(amiconultra，3kdmw限制)將純化的frα在磷酸鹽緩沖鹽水(ph7.4)中濃縮至2mg/ml。使用bca測定法(thermoscientific)測定蛋白質(zhì)濃度。將得到的frα在8m尿素/pbs中1∶1稀釋，以產(chǎn)生在含有4m尿素的pbs中的終濃度為1mg/ml的frα。加入二硫蘇糖醇溶液(500mm，在pbs中)至終濃度為10mm。將所述溶液在65℃溫育1小時，并冷卻至室溫。接下來，將在磷酸鹽緩沖鹽水中的1m碘乙酰胺溶液加入到還原的葉酸受體溶液中至終濃度為10mm，并將反應(yīng)在室溫下和暗處保持30分鐘。在這些條件下蛋白保持可溶。用于免疫接種的最終的還原的frα被儲存在含有4m尿素、10mmdtt和10mm碘乙酰胺的磷酸鹽緩沖鹽水中。圖1示出了在非還原條件下通過sds-page分析的天然frα蛋白和蛋白的還原和烷基化形式的差異遷移。實(shí)施例3-使用frα產(chǎn)生雜交瘤將8周齡雌性balb/c小鼠用帶有六聚組氨酸標(biāo)簽的frα蛋白(n＝5)或還原和烷基化的frα蛋白(n＝5)進(jìn)行免疫接種。在第0天施用的初始腹膜內(nèi)免疫接種包含與弗氏完全佐劑(rockland，目錄號d614-0050)1∶1(v∶v)混合的50μg相應(yīng)的免疫原。然后在14天后及其后每21天，通過腹膜內(nèi)施用與弗氏不完全佐劑(rockland，目錄號d615-0050)1∶1(v∶v)混合的50μg免疫原對小鼠進(jìn)行加強(qiáng)免疫。在初始免疫接種后24天和其后每21天，從免疫接種后的小鼠收集血液樣品。通過針對frα的直接酶聯(lián)免疫測定法(eia)分析收集的血液樣品。將板用frα蛋白(100ml1mg/ml溶液，在ph7.2的pbs、0.02m磷酸鉀、0.15m氯化鈉中)包被并在4℃溫育過夜，用含有0.2％的pbs(pbst；rockland，目錄號mb-075-1000)洗滌，并用3％魚凝膠(sigma)在室溫下封閉1小時。允許各個小鼠血清樣品的3倍連續(xù)稀釋液在室溫下結(jié)合1小時，然后將板用pbst洗滌3次，隨后用hrp偶聯(lián)的兔抗小鼠抗體(rockland，目錄號610-4320)以1∶2500在37℃下探測30分鐘。加入tmb底物(rockland，目錄號tmbe-100)，并在30分鐘后通過加入100ml1mhcl終止反應(yīng)，然后在450nm處讀取吸光度(酶標(biāo)儀“benchmark”；biorad)。將所有樣品針對作為陰性對照的帶有六聚組氨酸標(biāo)簽的重組間皮素(間皮素-his6)蛋白進(jìn)行反向篩選。從顯示出最高抗原特異性滴度的小鼠收獲脾臟，并通過脾細(xì)胞與sp2/0ag14骨髓瘤細(xì)胞(attccrl1581)的電融合(hybrimunetmceef-50b型波形發(fā)生器；cellectis，romainville，france)來制備雜交瘤。隨后，通過如上所述針對frα和重組間皮素-his6的elisa來篩選雜交瘤上清液，以選擇陽性親代融合細(xì)胞系。然后通過有限稀釋法對所選擇的被確定為產(chǎn)生對重組人類frα(rhfrα)具有反應(yīng)性的抗體的親代細(xì)胞系進(jìn)行亞克隆。然后重新測試由這些細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的frα結(jié)合，并使用clonetypingtm系統(tǒng)(southernbiotech，birmingham，al)進(jìn)行同種型分型。通過針對人類葉酸受體的三種其他同種型(frβ、frγ和frδ)的直接elisa，對來自于這些克隆的上清液進(jìn)行進(jìn)一步篩選，以確定受體特異性。將板用100μl相應(yīng)frα同種型的1μg/ml溶液在4℃下包被過夜，用含有0.2％的pbs(rockland，目錄號mb-075-1000)洗滌，并用3％魚凝膠(sigma)封閉。允許培養(yǎng)上清液的3倍連續(xù)稀釋液在室溫下結(jié)合1小時，然后如上所述將板洗滌，并用hrp偶聯(lián)的抗小鼠抗體進(jìn)行探測。產(chǎn)生對frβ、frγ和frδ具有反應(yīng)性的抗體的克隆不被選擇用于進(jìn)一步分析。將4個選擇的雜交瘤克隆19d4.b7、26b3.f2、24f12.b1和9f3.h9.h3.h3.b5.g2于2011年5月19日保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心(americantypeculturecollection)，并分別被分派有atcc登記號pta-11884、pta-11885、pta-11886和pta-11887。實(shí)施例4-產(chǎn)生純化的針對frα的單克隆抗體使用支原體測試試劑盒(rockland，目錄號mab-012)對選擇的細(xì)胞系進(jìn)行支原體測試，然后以0.5x105細(xì)胞/ml接種到含有無血清培養(yǎng)基(invitrogen，目錄號12045-076)和5％低iggfbs(0.1μg/ml)(gibco，目錄號16250-078)的1l滾瓶中。允許培養(yǎng)物在37℃生長14或21天，然后收獲上清液并通過50kda過濾膜(spectrumlabs，ranchodominguezca)濃縮約10倍，然后使用蛋白a層析(rockland，目錄號pa50-00-0025)進(jìn)行純化。根據(jù)抗體同種型，使用ph3.5/4.5的0.1m檸檬酸鈉來洗脫結(jié)合的抗體，并使用12-14kda膜式管路系統(tǒng)(spectrumlabs，ranchodominguezca)通過透析將緩沖液針對pbs進(jìn)行交換。使用0.22μmexpresstmplusstericups(millipore，billericama)將純化的抗體進(jìn)行除菌過濾，并儲存在4℃下用于進(jìn)一步測試。進(jìn)行了嘗試以對4個所選雜交瘤克隆(9f3-h9、19d4-b7、24f12-b1和26b3-f2)的重鏈和輕鏈進(jìn)行測序。首先，使用試劑盒(ambion)，按照制造商的流程從每種雜交瘤細(xì)胞系(各自1x103至1x105個細(xì)胞的細(xì)胞沉淀物)分離總rna。使用nanodroptm8000分光光度計(thermoscientific)對rna進(jìn)行定量。然后通過多重rt-pcr對分離的rna進(jìn)行擴(kuò)增，對每種雜交瘤使用ep梯度熱循環(huán)儀(eppendorf)進(jìn)行三份平行試驗(yàn)。首先，對每種雜交瘤進(jìn)行兩個獨(dú)立的基因特異性cdna擴(kuò)增(≤1ugrna/反應(yīng))，以確定在ig重排期間所使用的ig重鏈和輕鏈基因。每種混合物由被設(shè)計成與任何可能的鼠類igv基因家族(ighv、igkv)和ig恒定區(qū)基因(ighcγ、igkc)退火的獨(dú)特的家族特異性引物構(gòu)成。使用iii一步rt-pcr系統(tǒng)，利用taq高保真酶(invitrogen)在下列條件下進(jìn)行cdna產(chǎn)生和擴(kuò)增：55℃30分鐘和95℃2分鐘，然后進(jìn)行40個循環(huán)的95℃1分鐘、55℃1分鐘、68℃1分鐘，最后進(jìn)行68℃10分鐘的完成步驟。將dna產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠上電泳。切下適合的條帶，并使用凝膠提取試劑盒(qiagen)按照制造商的流程進(jìn)行凝膠純化。將純化的dna進(jìn)行測序(genewiz，inc.，southplainfield，nj)以確定每種雜交瘤表達(dá)的種系基因區(qū)段。然后使用與上述相同的rna源和基因特異性引物(與在多重rt-pcr混合物中使用的家族特異性引物不同)，進(jìn)行適合于為每種雜交瘤鑒定的特定基因的進(jìn)一步的rt-pcr分析。為了便于克隆，將擴(kuò)增的igcdna置于in-fusion(if)表達(dá)載體中，每種基因特異性引物還含有能夠進(jìn)行同源交換的載體相容性連接序列。所有其他試劑和熱循環(huán)儀條件與用于上面描述的多重rt-pcr實(shí)驗(yàn)的相同。實(shí)施例5：結(jié)合于frα的抗體的表征通過表面等離子體共振(spr)實(shí)驗(yàn)確定純化的針對frα的單克隆抗體的結(jié)合特性。使用帶有研究級cm5芯片的biacoret100(gehealthcare)，按照制造商的指示在25℃下進(jìn)行所有spr實(shí)驗(yàn)。一開始，將小鼠抗體捕獲試劑盒(gehealthcare)中提供的抗小鼠igg通過酰胺偶聯(lián)固定化到cm5傳感器芯片。每個結(jié)合循環(huán)，將小鼠抗frα單克隆抗體(26b3、24f12、19d4或9f3)捕獲在單獨(dú)的流動池上，而第四個流動池被用作參比。使用hbs-p(gehealthcare)作為運(yùn)行緩沖液并以30μl/min的流速進(jìn)行結(jié)合實(shí)驗(yàn)。將每種單克隆抗體樣品(0.5μg/ml)注射3分鐘以捕獲抗體。然后將各種濃度的純化的重組人類frα(rh-frα)(1nm-30nm)注射到frα特異性和參比表面上3分鐘，使用單循環(huán)動力學(xué)方法記錄結(jié)合傳感圖。監(jiān)測解離曲線25分鐘。在結(jié)合之間，通過注射30μl10mm甘氨酸(ph1.7)將表面再生。使用biacoret100評估軟件(2.0.1版)對傳感圖進(jìn)行處理，并擬合成1∶1langmuir結(jié)合模型。抗體26b3、24f12、19d4和9f3的一些結(jié)合特性被提供在表2中。表2：frα特異性抗體的結(jié)合特性。實(shí)施例6：所選的frα特異性抗體的表位作圖在表位結(jié)合研究中，使用octetqk進(jìn)一步評估frα特異性抗體26b3、24f12和9f3。結(jié)果顯示，對純化的人類frα具有高親和性的26b3和24f12彼此競爭結(jié)合于frα。因此，這些抗體可能具有共同的表位或具有彼此緊密相鄰的表位。結(jié)果還表明9f3抗體具有獨(dú)特表位，因?yàn)樗慌c其他frα特異性抗體競爭結(jié)合于frα。使用氫/氘交換質(zhì)譜術(shù)和對接方法，通過exsartm進(jìn)行了其他表位作圖研究。這些對抗體9f3、24f12和26b3的研究結(jié)果被示出在圖2中。對于抗體26b3的表位來說，由于通過流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)了26b3識別天然frα的能力，因此這些數(shù)據(jù)表明它在天然的膜錨定型結(jié)構(gòu)中是可接近的。此外，這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明，mab26b3所識別的表位的構(gòu)象限制，正如其不能檢測還原的蛋白印跡上的蛋白所證實(shí)的，與frα蛋白中與第111位半胱氨酸形成二硫化物橋的第185位處的半胱氨酸相關(guān)。實(shí)施例7：frα的變性形式和化學(xué)保護(hù)的形式的識別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定上述任何frα特異性抗體是否能夠識別frα的變性形式。為了進(jìn)行這些分析，將穩(wěn)定表達(dá)gpi連接的人類frα、β或δ的chok1細(xì)胞在增補(bǔ)有完全mini蛋白酶抑制劑混合物(rochediagnostics，indianapolis，in)和pmsf(100nm)的1.1％obg緩沖液(50mmtris-hcl，ph7.5，150mmnacl，1.1％obg)中進(jìn)行裂解，并在冰上放置15分鐘。通過以13,000rpm離心15分鐘以去除碎片，將裂解物預(yù)澄清。對于還原和變性的樣品來說，將等量的蛋白(20μg)在含有β-巰基乙醇+40mmdtt的lds樣品緩沖液(invitrogen)中煮沸10分鐘。使用sds-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)在4-12％bis-tris凝膠(invitrogen)上分離蛋白，并將其轉(zhuǎn)移至pvdf膜。將膜在pbst+5％脫脂奶粉中在室溫下封閉1h，隨后將膜用pbst洗滌兩次。使用特異性針對frα的純化的小鼠單克隆抗體9f3、19d4、24f12或26b3(1μg/ml)進(jìn)行免疫印跡，使用hrp偶聯(lián)的山羊抗小鼠抗體進(jìn)行檢測，并使用supersignalwestpico化學(xué)發(fā)光底物(pierce，rockford，il)進(jìn)行可視化。使用omega12ic分子成像系統(tǒng)(ultra-lum，claremont，ca)對發(fā)光進(jìn)行可視化，并使用ultraquanttm6.0軟件(ultra-lum)進(jìn)行圖像分析。也使用純化的葉酸受體制備物進(jìn)行蛋白印跡分析。為了進(jìn)行這些實(shí)驗(yàn)，將0.5μg如實(shí)施例1中所述產(chǎn)生的純化的人類frα、β、γ或δ在含有或不含20mmdtt的1xsds-page上樣緩沖液(invitrogen)中溫育，煮沸10min，并在4-12％梯度的sds-page凝膠上電泳。將蛋白轉(zhuǎn)移到pvdf膜，并如上所述進(jìn)行印跡探測。使用benchmarktm預(yù)染的蛋白梯帶來運(yùn)行凝膠。使用純化的重組fr蛋白進(jìn)行的凝膠也通過銀染進(jìn)行可視化，以確保荷載的蛋白量相等。蛋白印跡分析表明，抗體19d4、9f3、24f12和26b3識別非還原的frα，然而對于任何這些抗體來說，沒有檢測到與還原和變性的樣品的結(jié)合(圖3(a)和(b))。還進(jìn)行了免疫組織化學(xué)(ihc)研究以確定任何這些抗體是否能夠結(jié)合于福爾馬林固定的石蠟包埋的乳頭狀漿液性卵巢癌組織樣品。對于frα來說，使用mach4tm通用hrp-聚合物檢測試劑盒(biocaremedical)進(jìn)行間接ihc測試。將福爾馬林固定的石蠟包埋的樣本在帶正電荷的玻璃載片上以5微米切片，并在60℃加熱約60分鐘。將載片在3個連續(xù)的二甲苯浴中脫石蠟，每個浴中3分鐘，轉(zhuǎn)移至3個連續(xù)的100％乙醇浴，每個浴中3分鐘，然后轉(zhuǎn)移至3個連續(xù)的95％乙醇浴，每個浴中3分鐘，然后在去離子(di)水中漂洗5分鐘。然后將制備的樣品用在di水中稀釋至1∶10的diva熱誘導(dǎo)的表位恢復(fù)溶液(biocaremedical)進(jìn)行預(yù)處理，并放置在已經(jīng)裝填有500mldi水的加壓去掩蔽腔室內(nèi)。將樣品在所述去掩蔽腔室內(nèi)溫育15分鐘，其中加壓溫育達(dá)到在16psi下最高125℃30秒，然后冷卻15分鐘至95℃。然后將載片在室溫下冷卻15分鐘。在冷卻后，將載片在3個連續(xù)的tris緩沖鹽水/0.1％洗滌緩沖液(tbst)浴中洗滌，每個浴中3分鐘。所有后續(xù)的緩沖液洗滌均以這種方式進(jìn)行。然后將載片在過氧化物酶-1(biocaremedical)封閉溶液中在室溫下封閉5分鐘，用tbst洗滌，然后在室溫下施加backgroundsniper(biocaremedical)無血清通用封閉試劑10分鐘。在將樣品封閉后，將載片與被稀釋在抗體稀釋劑(dako)中的2.5μg/ml26b3抗體或通用陰性對照——小鼠即用型陰性對照抗體(dako，用于陰性同種型組織)在室溫下溫育60分鐘。然后將載片用tbst洗滌，并與mach4tm小鼠探測第一抗體增強(qiáng)劑(被提供在biocaremedicalmach4tm試劑盒中)在室溫下溫育15分鐘。然后將載片再次用tbst洗滌，并與聚合物-hrp試劑(被提供在biocaremedicalmach4試劑盒中)在室溫下溫育20分鐘。在溫育后，將載片用tbst洗滌，并與3，3’-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽(dab)溶液(dako)在室溫下溫育5分鐘。然后將載片用di水充分漂洗3次，每次30-60秒，并用蘇木精(dako)復(fù)染2分鐘，用tbst洗滌，在95％和100％乙醇的各3個連續(xù)的浴中脫水，在每個浴中30秒，并在3個連續(xù)的二甲苯浴中透明化，在每個浴中30秒。最后，在分析前將蓋玻片施加到載片。通常認(rèn)為，由于組織固定的破壞性質(zhì)使得抗原不含三級結(jié)構(gòu)，因此為了有效用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織的免疫組織化學(xué)，抗體必須能夠識別目標(biāo)抗原的線性表位。因此，在這一測定中抗體26b3能夠識別frα(圖4)是令人吃驚的，因?yàn)橥ㄟ^蛋白印跡發(fā)現(xiàn)它不識別還原和變性的frα。此外，對正常組織觀察到的使用抗體26b3的frα染色圖案，與以前發(fā)表的使用多種其他抗體和技術(shù)的文獻(xiàn)相一致，其中胰腺、甲狀腺、肺、唾液腺、腎、垂體、宮頸和乳腺顯示出各種不同程度的表達(dá)(表3)。如圖5中所示，以正常肺(a)和正常腎(b)切片為例，正常組織中的染色圖案高度局限于上皮細(xì)胞并且在本質(zhì)上通常在頂端。表3.正常人類組織中的frα表達(dá)實(shí)施例8：frα的天然形式的識別進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)研究以評估所選的frα特異性抗體結(jié)合天然蛋白的能力。對于這些研究來說，收獲表達(dá)frα的中華倉鼠卵巢(cho)細(xì)胞，將其洗滌并重懸浮在冰冷的生長培養(yǎng)基(增補(bǔ)有10％fbs的rpmi)中。將細(xì)胞與9f3、19d4、24f12或26b3(1μg/ml)在冰上溫育1小時，洗滌，然后與fitc偶聯(lián)的第二抗體[1∶100稀釋](southernbiotech，birmingham，al)溫育。在分析之前，將細(xì)胞用7-氨基-放線菌素d(7-aad)(bdbiosciences，franklinlakes，nj)標(biāo)記，以排除非存活的細(xì)胞。也對不表達(dá)frα的cho細(xì)胞進(jìn)行相同的實(shí)驗(yàn)程序，作為陰性對照。在easycytetm流式細(xì)胞儀(technologies，hayward，ca)上對細(xì)胞進(jìn)行分析。表4中提供的數(shù)據(jù)表明所有4種抗體都能夠結(jié)合天然frα。表4：frα特異性抗體識別表達(dá)在細(xì)胞表面上的frα實(shí)施例9：檢測已知患有卵巢癌的對象的血清中的frα進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光研究以確定本文描述的frα特異性抗體是否能夠檢測已知患有卵巢癌的患者的血清中的frα。對于這些實(shí)驗(yàn)來說，使用mab26b3作為捕獲mab，并以75μg/ml的濃度添加到ecl板。將板進(jìn)行洗滌，并向每個孔加入50μl樣品血清并溫育2小時。血清樣品從正常的健康女性(陰性對照)和卵巢癌患者獲得。將樣品在pbst(磷酸鹽緩沖鹽水，ph7.4，含有0.01％)中1∶4稀釋。在溫育后，將樣品用pbst洗滌，并向每個孔加入25μl/孔的用ru以約13個標(biāo)記物/igg分子的比率標(biāo)記的mab19d4(1μg/ml)，以檢測結(jié)合的樣品。在2小時溫育期后，將板用pbst洗滌，并使用2xmsd緩沖液t進(jìn)行讀數(shù)。表5中的結(jié)果顯示，可以使用單克隆抗體26b3和19d4來捕獲并檢測血清中的frα。表5：相對的frα血清水平類型(n)fra平均值pg/ml標(biāo)準(zhǔn)偏差正常(15)22374卵巢癌(15)18153896實(shí)施例10：檢測已知患有卵巢癌的對象的血清和尿液中的frα然后進(jìn)行電化學(xué)發(fā)光研究以確定本文描述的frα特異性抗體是否能夠檢測已知患有卵巢癌的患者的血清和尿液中的frα。對于這些實(shí)驗(yàn)來說，使用mab26b3作為捕獲mab，并以75μg/ml的濃度添加到ecl板。將板進(jìn)行洗滌，并向每個孔加入50μl樣品血清并溫育2小時。匹配的血清和尿液樣品從正常的健康女性(陰性對照)和卵巢癌患者獲得。將樣品(血清或尿液)在pbst(磷酸鹽緩沖鹽水，ph7.4，含有0.01％)中1∶4稀釋。在溫育后，將樣品用pbst洗滌，并向每個孔加入25μl/孔的用ru以約13個標(biāo)記物/igg分子的比率標(biāo)記的mab19d4(1μg/ml)，以檢測結(jié)合的樣品。在2小時溫育期后，將板用pbst洗滌，并使用2xmsd緩沖液t進(jìn)行讀數(shù)。表6中的結(jié)果顯示，可以使用單克隆抗體26b3和19d4來捕獲并檢測血清和尿液中的frα。表6：相對的frα血清水平和尿液水平患者名稱血清frαpg/ml尿液frαpg/ml正常13983080正常223611508正常33157704正常432013198卵巢癌119479368066卵巢癌2414423738卵巢癌3986165826卵巢癌4719414187實(shí)施例11：作為免疫組織化學(xué)結(jié)果的度量的m-分值開發(fā)了一種用于每種樣品的染色的度量(m-分值)，其可以定義如下：在方程中，xij是對于患者i來說以強(qiáng)度j被染色的腫瘤的百分率，wj是強(qiáng)度的絕對值(范圍為0至3+)。所述度量具有從零(無陽性染色)至50(100％的細(xì)胞以3+強(qiáng)度染色)的理論范圍。因此，m-分值是捕獲frα陽性細(xì)胞的比例和染色強(qiáng)度兩者的frαihc腫瘤細(xì)胞膜染色的權(quán)重分值。在適當(dāng)情況下，在多個組織微陣列(tma)樣品上對每位患者的m-分值進(jìn)行平均。如果樣品沒有結(jié)果，即不存在腫瘤或壞死組織，則m-分值被指派為非空確定值。下面示出了上述方程的實(shí)際應(yīng)用：3+2+1+0m分值x＝40y＝30z＝10m＝(3x+2y+z)/63x40＝1202x30＝601x10＝10(120+60+10)/6＝31.67在這里，x＝以強(qiáng)度3+被染色的腫瘤％；y＝以強(qiáng)度2+被染色的腫瘤％；z＝以強(qiáng)度1+被染色的腫瘤％。在給定組織學(xué)內(nèi)frα表達(dá)的陽性率被計算為按照陽性結(jié)果的定義(≥5％的全部腫瘤細(xì)胞染色)陽性染色的樣品的比例。使用已建立的方法確定精確的二項式置信區(qū)間(clopperc.j.和pearsonr.c.，biometrika.26：404-13(1934))。此處示出了對所有人口統(tǒng)計學(xué)變量和m-分值的概述統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)。使用單因素anova和用于總體i型誤差的事后檢驗(yàn)控制來確定平均值的差異。如果與檢驗(yàn)相關(guān)的p-值小于該檢驗(yàn)的bonferroni調(diào)整的i型誤差(i型誤差最大值＝0.05)，則平均值的差異是統(tǒng)計學(xué)差異。實(shí)施例12：使用抗體26b3和抗體bn3.2對肺癌細(xì)胞進(jìn)行比較性染色在文獻(xiàn)中，對于通過ihc確定的表達(dá)frα的各種癌的百分率存在顯著差異，這部分是由各種不同抗體的使用造成的，這些抗體大多數(shù)是不可商購的。一種可商購并已被證實(shí)在ffpe切片上通過ihc檢測frα的frα特異性mab是抗體bn3.2(leicamicrosystems，buffalogrove，il)。因此，使用含有各種組織學(xué)類型的肺癌的可商購的tma進(jìn)行研究，以比較抗體bn3.2與抗體26b3用于frα檢測的特異性和靈敏度兩者。與其他組織學(xué)亞型尤其是鱗狀細(xì)胞癌相比，兩種抗體都對腺癌高度特異。然而，抗體26b3的靈敏度顯著高于bn3.2，分別鑒定26/36(72％；m-分值平均值±sd＝19.84±18.64)和22/36(61％；m-分值平均值±sd＝11.38±14.25)的腺癌樣品(p＜0.0001)。這些數(shù)據(jù)證實(shí)，對于檢測ffpe組織樣品上的frα表達(dá)來說，抗體bn3.2的靈敏度顯著低于26b3，并且如圖6中所示，對于這兩種抗體來說，在肺腺癌樣品上觀察到的m-分值的關(guān)系是非線性的。實(shí)施例13：檢測已知患有肺腺癌的對象中的frα進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定由抗體26b3檢測到的frα陽性組織學(xué)的存在是否與肺癌的特定形式相關(guān)。如實(shí)施例7中所述，使用抗體26b3通過ihc染色來評估具有正常肺組織樣本以及i期、ii期、iii期和iv期肺癌組織樣本的兩份平行樣品的組織微陣列的frα表達(dá)。正如可以從表6中的數(shù)據(jù)看到的，相對于表現(xiàn)出有限的陽性染色的鱗狀細(xì)胞癌，frα與腺癌更加相關(guān)。表7：癌組織樣品的組織學(xué)評估在組織微陣列中在89份組織學(xué)樣品上進(jìn)行了進(jìn)一步分析，其中36份(40％)為腺癌，32份(36％)為鱗狀細(xì)胞癌，2份(2％)為腺鱗癌，其余19份(21％)代表各種不同組織學(xué)(表8)。對于每種組織學(xué)亞型來說，frα總陽性率顯著變化。與鱗狀細(xì)胞癌相比，顯著更高比例的腺癌腫瘤是frα陽性的(72％比13％，p＜0.0001)。在4份陽性鱗狀細(xì)胞癌樣品中，只有1份在兩個樣品上顯示出3+染色；1份在兩個樣品上具有中度(2+)染色，其他2份在單個樣品上為非常弱的陽性(5-10％的腫瘤細(xì)胞處于1+)。此外，兩份腺鱗癌樣品還顯示出frα陽性，其中染色局限于這些樣品的腺癌部分(圖7)。表8：在nsclc類型#內(nèi)frα表達(dá)的分布#usbiomax肺癌tma(目錄號bc041114；90份病例，雙份核心)*使用fisher精確檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)來確定p值：鱗狀細(xì)胞癌相對于腺癌p＜0.0001；男性相對于女性，p＝0.46；階段，p＝0.563；等級，p＝0.517**包括2例腺鱗癌病例，兩者都僅在腺癌部分中為frα陽性***僅有1例iv期病例兩份平行的腺癌組織學(xué)樣品的m-分值分析顯示出在抗體26b3的染色中幾乎沒有變差(圖8)，反映出抗體26b3染色的魯棒性。此外，在腺癌組織學(xué)亞型內(nèi)通過階段和等級進(jìn)行的m-分值檢查表明，疾病的階段和等級都不與由m-分值所定義的染色程度相關(guān)(數(shù)據(jù)未顯示)。肺腺癌和鱗狀細(xì)胞癌樣品的frα染色的m-分值分布被示出在圖9中。用抗體26b3染色的腺癌和鱗狀細(xì)胞癌樣品的m-分值的平均值(±sd)分別為19.84(±18.64)和1.39(±5.54)(p＜0.0001)。當(dāng)與所有其他肺癌組織學(xué)類型相比時，腺癌的m-分值也顯著更高。此外，進(jìn)行了樹分析以確定癌癥的組織學(xué)是腺癌的機(jī)率。m-分值＞21.7產(chǎn)生16的比值比(or)，進(jìn)一步證實(shí)了frα主要表達(dá)在腺癌組織學(xué)中(分析未示出)。很少可以從被診斷患有晚期肺癌的患者得到福爾馬林固定的石蠟包埋的(ffpe)組織塊，因?yàn)橥ǔ２贿M(jìn)行外科切除。因此，進(jìn)行了研究以確定細(xì)針抽吸(fna)樣本用于使用mab26b3的frαihc的適合性，因?yàn)橥砥诜伟┳钔ǔＭㄟ^小的活檢組織或細(xì)胞學(xué)材料來診斷。對于這些研究來說，從9位通過胸部淋巴結(jié)抽吸物的細(xì)胞學(xué)評估而被診斷的晚期腺癌患者獲得樣品(圖10)，并證實(shí)了frα陽性率(63％)與在肺癌tma上評估的組織學(xué)樣本中所觀察到的相當(dāng)。盡管只有小的樣品量，但這些數(shù)據(jù)表明，細(xì)胞學(xué)樣本可能是用于確定晚期腺癌患者中的frα表達(dá)的適合的組織來源。實(shí)施例14-frα由從已知患有非小細(xì)胞肺癌的患者的血液分離的ck+/cd45-細(xì)胞而不是ck-/cd45+細(xì)胞表達(dá)進(jìn)行了研究以確定已知患有非小細(xì)胞肺癌的患者的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(ctc)上frα的表達(dá)情況。對于這些研究來說，從15位健康供體和5位iv期肺癌患者獲得血液樣品，然后使用apocell的aposteamtm系統(tǒng)富集ctc。在富集后，將每種樣品對細(xì)胞角蛋白(ck)、cd45(蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶受體c型)、細(xì)胞核和frα進(jìn)行染色。使用抗體26b3作為第一抗體來進(jìn)行frα染色，然后使用偶聯(lián)于649的小鼠特異性第二抗體來檢測所述第一抗體。如表9中所示，通過ck+/cd45-ctc而不是ck-/cd45+ctc觀察到frα表達(dá)。表9-已知患有非小細(xì)胞肺癌的患者的循環(huán)腫瘤細(xì)胞的frα表達(dá)實(shí)施例15：患有和未患表達(dá)frα的肺腺癌的對象的5年存活性進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)以確定由抗體26b3檢測到的frα陽性組織學(xué)的存在是否能夠與5年存活性的提高或降低相關(guān)。如實(shí)施例7中所述對正常和癌化的i期或ii期腺癌肺組織樣本進(jìn)行ihc染色，然后進(jìn)行讀數(shù)。記錄腫瘤上染色的3+、2+、1+和0強(qiáng)度的百分率。有177個載片可解釋為患者的兩份或三份平行樣品。當(dāng)與可評估的臨床和組織學(xué)數(shù)據(jù)組合時，鑒定到53例可評估的病例。根據(jù)與人口統(tǒng)計學(xué)、臨床和在診斷為非小細(xì)胞肺腺癌后5年時的存活狀態(tài)相關(guān)的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。為了確定m-分值的最佳截止點(diǎn)，進(jìn)行受試者工作特征(roc)分析。在這一分析中，診斷準(zhǔn)確性并不重要；然而，陽性試驗(yàn)的診斷似然比與陰性試驗(yàn)的診斷似然比的比率是重要的。這些比率如pepems，《用于分類和預(yù)測的醫(yī)學(xué)試驗(yàn)的統(tǒng)計學(xué)評估》(thestatisticalevaluationofmedicaltestsforclassificationandprediction)，newyork：oxforduniversitypress(2003)中所描述的進(jìn)行所定義。在10的截止點(diǎn)處，比值比達(dá)到6.62的最大值。選擇這一m值來確定染色載片的陽性。使用frα關(guān)聯(lián)性作為預(yù)后因子，產(chǎn)生kaplan-maier存活函數(shù)。對數(shù)秩檢驗(yàn)表明，frα陽性對于非致死事件來說是有益的(chi-sq＝7.34，df＝1，p＝0.007)。圖11示出了通過26b3檢測被視為frα陽性和frα陰性的i期和ii期腺癌組的存活函數(shù)。在5年時，危害比為2.42。這表明，與具有frα陽性腫瘤的對象(m≥10)相比，具有frα陰性的腫瘤的對象(m＜10)在診斷5年內(nèi)死亡的可能性高2.5倍。實(shí)施例16：葉酸受體α的表達(dá)與乳腺癌的三陰性形式相關(guān)進(jìn)行研究以評估乳腺癌組織樣品的frα表達(dá)。使用如實(shí)施例7中所描述的用抗體26b3染色的組織微陣列(tma)樣品和按照實(shí)施例7中所述制備并用抗體26b3染色的ffpe組織學(xué)樣品來進(jìn)行分析。乳腺癌tma(u.s.biomax，目錄號br1503a；72例病例，雙份核心)上存在的組織學(xué)分布被示出在表10中，所代表的大部分病例被鑒定為侵入性導(dǎo)管癌(idc)。tma包括2份正常乳腺樣品，其是frα表達(dá)陽性的，正如通過mab26b3確定的。正常乳腺中的染色局限于導(dǎo)管細(xì)胞，具有腔和膜染色。3例纖維腺瘤病例中的2例(67％)、0/2囊性肉瘤病例(0％)和1/6原位導(dǎo)管癌病例(17％)是frα陽性的。單個侵入性小葉癌(ilc)是frα染色陰性的。在59份idc樣品中，18份(31％)是frα陽性的(圖12)。由于在該tma上陽性病例的數(shù)量少，相對于階段或等級進(jìn)行frα表達(dá)的有效分析是不可能的；然而，應(yīng)該指出，大部分樣品為t1或t2。相對于er/pr陽性腫瘤(p＝0.012)和三陰性乳腺癌(tnbc)(er/pr+或her2+相對于er/pr/her2-，p＜0.0001)，frα表達(dá)被顯示為與er/pr陰性腫瘤相關(guān)。在18例frα陽性idc病例中，僅有2例(11％)是her2陽性的，這意味著絕大多數(shù)(89％)為her2陰性。這些數(shù)據(jù)表明，frα陽性更緊密跟隨her2陰性。此外，在18例frα陽性idc病例中，3份是雌激素受體(er)陽性的，4份是孕酮受體(pr)陽性的，但是所有er/pr陽性/frα陽性病例是her2陰性的。在frα陽性idc病例中，12/18(67％)是三陰性乳腺癌(tnbc)，表明frα可以是預(yù)后非常不良的tnbc分子亞型的標(biāo)志物和靶點(diǎn)。將tma作為整體來看，所有her2陽性病例中僅有2/13(15％)也是frα陽性的，而her2陰性病例的16/46(35％)也是frα陽性的，這支持frα表達(dá)與her2表達(dá)負(fù)相關(guān)這一建議。圖13中示出了該tma的m-分值相對于分子亞型(her-2(+)和her-2(-))的分布圖示。上面描述的tma主要由早期乳腺癌構(gòu)成：i期，6/60(10％)；ii期，44/60(73％)；iii期，10/60(17％)。因此，為了證實(shí)并擴(kuò)展在所述tma上獲得的結(jié)果，對來自于已知具有0-100％陽性范圍內(nèi)的er/pr表達(dá)的iv期(t4)her2陰性乳腺癌的61個ffpe組織塊進(jìn)行評估(ffpe組織塊從genzymegenetics的庫存獲得)。所有這些61份樣品來自于轉(zhuǎn)移瘤而不是原發(fā)腫瘤。該研究的結(jié)果概述在表11中。表10：在組織學(xué)類型中frα陽性的分布——tma數(shù)據(jù)*使用fisher精確檢驗(yàn)，通過2x2列聯(lián)表分析計算得到的p值。**4/8(50％)的n1/n2樣品為her2+在22/61(36％)的這些患者中發(fā)現(xiàn)frα表達(dá)(圖14)，這證實(shí)了在her2陰性群體中，在早期階段的疾病中確定的frα陽性樣本/腫瘤的百分率在晚期轉(zhuǎn)移性疾病中得以保留(tma陽性率＝35％；iv期轉(zhuǎn)移性疾?。?6％)。在22位frα陽性iv期轉(zhuǎn)移患者中，僅有3位(14％)顯示出對er/pr的任何陽性，這樣的陽性率趨勢在低范圍內(nèi)(最高30％)。因此，19/22(86％)的frα陽性患者是三陰性分子亞型。此外，將這些數(shù)據(jù)有利地與在早期疾病中在tma上獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，在后一種情況下所有frα陽性患者的67％為三陰性亞型。表11：在轉(zhuǎn)移性乳腺癌樣品的分子亞型中frα陽性的分布*使用fisher精確檢驗(yàn)，通過2x2列聯(lián)表分析計算得到的p值。此外，從大量轉(zhuǎn)移位點(diǎn)獲得來自于iv期轉(zhuǎn)移性疾病的樣品，包括淋巴結(jié)、骨、皮膚和肝臟以及主要從胸膜和穿刺術(shù)獲得的流體和細(xì)針抽吸(fna)樣品。這些“流體活檢組織”中的數(shù)種是frα陽性染色的(圖15)，這表明所描述的ihc方法對多種樣品類型的普遍適用性。實(shí)施例17：組織學(xué)婦科癌癥樣品的葉酸受體α表達(dá)的評估進(jìn)行免疫組織化學(xué)研究來評估包括卵巢、子宮內(nèi)膜和輸卵管的婦科惡性腫瘤中的frα表達(dá)。使用如實(shí)施例7中所描述的用抗體26b3染色的組織微陣列(tma)樣品和按照實(shí)施例7中所述制備并用抗體26b3染色的ffpe組織學(xué)樣品來進(jìn)行分析。用于卵巢癌(目錄號ov1921；96例病例，雙份核心)、子宮內(nèi)膜癌(目錄號emc1021；102例病例，單核心)和輸卵管癌(目錄號ute601；30例病例，雙份核心)的商品化組織微陣列從usbiomax，inc.(rockville，md)獲得。如果膜染色陽性的腫瘤細(xì)胞的百分率在任何強(qiáng)度下大于或等于5％，則所述樣品被認(rèn)為是frα表達(dá)陽性的。如果婦科病理學(xué)家確定樣品完全丟失或由活細(xì)胞數(shù)量不足以進(jìn)行評估的的壞死組織構(gòu)成，則樣品被排除，因此不包含在分析中。在子宮內(nèi)膜樣品中，6份僅含有非典型復(fù)雜性增生而沒有腺癌。細(xì)胞類型和等級的組織學(xué)分類是基于who的乳腺和女性生殖器官分類(whoclassificationofbreastandfemalegenitalorgans)(tavassoli和devilee)?；趂igo和tnm系統(tǒng)的臨床階段由tma的制造商(usbiomax)提供。在給定的腫瘤類型內(nèi)，frα表達(dá)的陽性率被計算為按照陽性結(jié)果的定義(±5％腫瘤細(xì)胞膜染色)陽性染色的腫瘤的比例。使用2x2列聯(lián)表和fisher精確檢驗(yàn)來評估不同的組例如組織學(xué)、階段、等級組之間frα陽性的差異。如果與檢驗(yàn)相關(guān)的p-值小于該檢驗(yàn)的bonferroni調(diào)整的i型誤差(i型誤差最大值＝0.05)，則平均值的差異是統(tǒng)計學(xué)差異。膜和細(xì)胞質(zhì)的染色強(qiáng)度被評分為0，無染色；1+，弱；2+，中等和3+，強(qiáng)。還確定樣品中每種強(qiáng)度的細(xì)胞的百分率。在4x、10x、20x和40x物鏡下對組織進(jìn)行分析。強(qiáng)膜染色(3+)能在4x下被容易地觀察到，并在10x下驗(yàn)證。中等膜染色(2+)在10x下可見，并在20x下驗(yàn)證。弱染色(1+)需要20x或40x(圖16)。在3+染色存在下，膜的濃密染色出現(xiàn)在頂端和外側(cè)細(xì)胞緣。在切向截面中，完整的圓周形圖案是明顯的(圖16(a)和(b))。2+膜染色與3+相比在強(qiáng)度上更弱并且更稀薄，通常位于頂端腔緣上，并偶爾出現(xiàn)在外側(cè)細(xì)胞緣上。1+弱膜染色一般局限于腔緣。相伴的細(xì)胞質(zhì)染色隨著腫瘤類型而變。在卵巢腫瘤tma上的94份可評估的樣品中，70份(74％)是漿液類型的，10份(11％)是粘液性的，4份(4％)是子宮內(nèi)膜樣的，3份(3％)是透明細(xì)胞類型的，其余7份(8％)是各種罕見腫瘤。在87份卵巢癌樣品中，每種細(xì)胞類型的frα陽性率如下：在漿液類型中為100％(70/70)，在粘液類型中為80％(8/10)，子宮內(nèi)膜樣類型為75％(3/4)，透明細(xì)胞類型為67％(2/3)。漿液和粘液類型之間的差異是顯著的，通過fisher精確檢驗(yàn)得到其p值為0.014(表12)。對于組織學(xué)等級或臨床階段來說，frα狀態(tài)是不顯著的。共存的細(xì)胞質(zhì)染色在漿液類型中通常為2+或3+，在其他腫瘤類型中更弱并且更少見。表12：frα陽性相對于卵巢癌中的組織學(xué)類型、臨床階段和組織學(xué)等級的分布*1例移行細(xì)胞癌，1例鱗狀細(xì)胞癌，1例胚胎性癌，2例卵黃囊瘤和2例粒層細(xì)胞腫瘤不包括在分析中**使用fisher精確檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)確定的p值：漿液性癌相對于粘液性癌p＝0.014***ns＝不顯著在子宮內(nèi)膜樣品中，frα被表達(dá)在80％(4/5)的正常(圖17(a))、100％(6/6)的非典型復(fù)雜性增生(圖17(b))和89％(80/90)的腺癌中，所述腺癌包括88例子宮內(nèi)膜樣類型和1例透明細(xì)胞類型(圖18和19)。8例子宮內(nèi)膜樣腺癌含有鱗狀化生區(qū)域。在正常子宮內(nèi)膜中，膜染色是弱的且局限于頂端腔緣(圖17(a))。在非典型復(fù)雜性增生和癌中，染色主要在腔處，并且在某些情況下具有在外側(cè)細(xì)胞緣上的附加染色(圖17(b))。在3+膜染色存在下，細(xì)胞質(zhì)染色的強(qiáng)度從強(qiáng)(圖18(a))到弱(圖18(b)和(c))變化。具有1+或2+膜染色的腫瘤細(xì)胞很少表現(xiàn)出細(xì)胞質(zhì)染色。大多數(shù)化生的鱗狀細(xì)胞和透明細(xì)胞表現(xiàn)出中等至強(qiáng)的膜染色(圖19(a)和(b))。在100％的1級、96％的2級和74％的3級腫瘤中frα表達(dá)陽性(1級相比于3級，p值＝0.0029；2級相比于3級，p＝0.034)。對于t1相比于t2/3、n0相比于n1和i期相比于ii/iii期來說，frα狀態(tài)不顯著。17份正常輸卵管的核心、16份慢性輸卵管炎樣品和20份輸卵管漿液性癌樣品都是膜和細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)陽性的(圖20(a)至(c))。實(shí)施例18：組織學(xué)結(jié)腸直腸樣品的葉酸受體α表達(dá)的評估進(jìn)行免疫組織化學(xué)研究以評估結(jié)腸直腸組織樣品中的frα表達(dá)。使用從usbiomax獲得的組織微陣列(tma)樣品(目錄號bc051111)來進(jìn)行分析。所述tma含有從已知患有結(jié)腸直腸癌的對象獲得的組織的90個兩份平行樣品和10個正常結(jié)腸直腸樣品。如實(shí)施例7中所述將樣品用抗體26b3染色。在從已知患有結(jié)腸直腸癌的對象獲得的90個樣品中，18個(20％)是frα表達(dá)陽性的，而所有正常樣品都不是陽性。此外，陽性染色一般為中度到弱，并且沒有觀察到與疾病階段的明顯關(guān)系。實(shí)施例19：組織學(xué)甲狀腺樣品的葉酸受體α表達(dá)的評估進(jìn)行免疫組織化學(xué)研究以評估甲狀腺組織樣品中的frα表達(dá)。使用從usbiomax獲得的組織微陣列(tma)樣品(目錄號th802a)來進(jìn)行分析。如實(shí)施例7中所述將樣品用抗體26b3染色。甲狀腺乳頭狀癌對于frα膜表達(dá)來說為強(qiáng)陽性(26/28，93％)，并且可以與髓樣癌區(qū)分開，在所述髓樣癌中所有5個樣品都是frα染色陰性的，這與以前的報告相一致。有趣的是，濾泡性腺瘤可以被分成大濾泡型和小濾泡型，其中分別有3/13(23％)和18/22(82％)顯示出frα表達(dá)陽性。在該tma上，在少量許特耳(hurthle)細(xì)胞瘤(2/3，67％)和濾泡癌(3/7，43％)樣品中也觀察到一些陽性。這些結(jié)果概述在表13中。表13-甲狀腺組織樣品中frα的表達(dá)當(dāng)前第1頁12