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一種腸炎沙門氏菌PCR檢測引物、檢測試劑盒及檢測方法與流程

文檔序號:12346681閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種腸炎沙門氏菌PCR檢測引物,其特征在于,所述引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的下游引物。

2.一種腸炎沙門氏菌檢測試劑盒,其特征在于,其組分包括權(quán)利要求1所述腸炎沙門氏菌PCR檢測引物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述腸炎沙門氏菌檢測試劑盒,其特征在于,其組分還包括dNTP、Taq DNA聚合酶、Mg2+和PCR反應(yīng)緩沖液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述腸炎沙門氏菌檢測試劑盒,其特征在于,所述腸炎沙門氏菌PCR檢測引物的濃度為10 μM,所述dNTP的濃度為2.5 mM,所述Mg2+的濃度為25 mM,所述PCR反應(yīng)緩沖液為10×PCR反應(yīng)緩沖液。

5.一種腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法,其特征在于,以待檢測樣品DNA為模板,權(quán)利要求1所述腸炎沙門氏菌PCR檢測引物為引物進行PCR擴增,對PCR擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳分析,在紫外線下觀察電泳結(jié)果,若PCR擴增產(chǎn)物電泳后在488 bp處出現(xiàn)單一擴條帶,則判定待檢測樣品中含有腸炎沙門氏菌。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法,其特征在于,所述待檢測樣品DNA采用如下方法獲得:將待檢測樣品接種于LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),對培養(yǎng)菌液進行離心和沉淀重懸處理后,將重懸菌液煮沸后冷卻,將冷卻后的重懸菌液離心取上清液,獲得待檢測樣品DNA。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法,其特征在于,將待檢測樣品于接種于LB液體培養(yǎng)基中于37℃下培養(yǎng)8 h,取培養(yǎng)菌液于10000 r/min下離心2 min后棄上清液,重懸沉淀菌體得到重懸菌液,對重懸菌液再次于10000 r/min下離心2 min后再次重懸菌液,得到二次重懸菌液,將二次重懸菌液于沸水中煮沸,于-20 ℃冷卻,將冷卻后的二次重懸菌液于12000 r/min下離心10 min后取上清液,得到待檢測樣品DNA。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法,其特征在于,PCR反應(yīng)體系以25 μL計,組分為:滅菌雙蒸水12 μL、10×PCR反應(yīng)緩沖液2.5 μL、10 μM權(quán)利要求1所述上游引物1.0 μL、10 μM權(quán)利要求1所述下游引物1.0 μL、2.5 mM dNTP 1.5 μL、Taq酶1.0 μL、25 mM Mg2+ 2.0 μL和待檢測樣品DNA 4.0 μL。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述腸炎沙門氏菌的PCR檢測方法,其特征在于,所述PCR反應(yīng)的條件為:先于94℃預變性5min;接著開始循環(huán),每個循環(huán)包括94℃變性30s,60℃退火40s,72℃延伸40s,共30個循環(huán);循環(huán)結(jié)束后于72℃延伸5min,最后降溫至16℃,完成PCR反應(yīng)操作。

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