本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及XLOC_000090表達(dá)與NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后的相互關(guān)系，更具體的說是一種長鏈非編碼RNA XLOC_000090在腫瘤中的鑒定和用途。

背景技術(shù)：

肺癌目前是世界上發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）在肺癌中約占了80%-85%，其5年生存率僅為15%左右，NSCLC之所以有如此高的死亡率，是因為早起缺乏特異性診斷方法而難以發(fā)現(xiàn)，確診時70%-80%的患者已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，失去手術(shù)機(jī)會。如何有效地預(yù)防和治療手術(shù)后非小細(xì)胞肺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，已成為亟待解決地重要問題。大量的研究發(fā)現(xiàn)，在人類基因組中，僅不到2%的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物具有蛋白質(zhì)編碼功能，其余大部分均為非編碼RNA（non-coding RNA，ncRNA），根據(jù)核苷酸序列的長度，一般將長度>200個核苷酸的ncRNA定義為長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）。隨著近年來研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)lncRNA參與了表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等多種途徑的基因調(diào)控，尤其是腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程與腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為密切相關(guān)，成為近些年來研究的熱點。

我們通過基因芯片技術(shù)篩選出10對肺癌組織及其對應(yīng)的正常肺組織中差異表達(dá)的lncRNA，其中發(fā)現(xiàn)XLOC_000090在肺癌中的表達(dá)明顯高于正常肺組織中的表達(dá)，檢索Pubmed及相關(guān)數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)，XLOC_000090在腫瘤中的功能未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明探討了XLOC_000090表達(dá)與NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后的相互關(guān)系。為此

本發(fā)明公開了一種長鏈非編碼RNA XLOC_000090表達(dá)基因，其特征在于RNA XLOC_000090基因的核苷酸序列為SEQ ID No.1。

本發(fā)明進(jìn)一步公開了長鏈非編碼RNA XLOC_000090表達(dá)基因在用于檢測肺癌細(xì)胞是否轉(zhuǎn)移方面的應(yīng)用。特別是治療非小細(xì)胞肺癌治療靶點藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明公開的長鏈非編碼RNA XLOC_000090表達(dá)基因序列如下：

ATTTGACCCTCTGCAGGAGGTGTGCTGAATGTCCCATTCCCCGGTGCTGCCAGCTCCTCAGAGCTCTGTAGGTTACCCCGTGAGACCTTCTCCCTGCACGCCTTTTTTTCTCTAATAGAAATACCTGCTACCTGTTGCCTTCTTCCCTGCAGGATCACAAGCGCTTGCCCAGTGCCTGGCATAGAGGCGGCCATAGCTGGACTCCTACCCTGTTCCAGATGAGGAAACTGCCGCTCAGAGACGGCAGCCGACCCAGCCAAGGCCGCACAGCCAGGATTCAAAGCCATACCGCTCAGCTCCTGCCTCCAGGCTCTGCCTTTGCATGTGGCTTCTCCTGGCTCCTGGACCCTTCCCCGGCCCTCCCAGCTGGCTGTGCTGTGACAGTGGGCGGGGGAGTGCCAAGGCTCTGCCCTGCCCCCCGCCCTTGGCATCTCCGGTCAATATGGCACTCACAGCTCCCTGGGCATGGACCCCCTCCTGCCATCCCCACTTAAAGTGAT

附圖說明：

圖1為XLOC_000090在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義；其中a為 XLOC_000090在癌和正常組織中的表達(dá)； b為 XLOC_000090在不同腫瘤大小中的表達(dá)； c為 XLOC_000090在陽性和陰性淋巴結(jié)中的表達(dá)； d 為XLOC_000090在不同分期中的表達(dá)；

圖2為XLOC_000090對細(xì)胞增殖能力的影響；其中a 為抑制XLOC_000090后對A549細(xì)胞增殖能力的影響； b 過表達(dá)XLOC_000090后對A549細(xì)胞增殖能力的影響；

圖3 為上調(diào)或下調(diào)XLOC_000090對A549細(xì)胞克隆形成能力的影響；

圖4 為XLOC_000090對細(xì)胞遷移能力的影響，其中（A）為過表達(dá)XLOC_000090后對A549細(xì)胞遷移的影響；（B）抑制XLOC_000090后對A549細(xì)胞遷移的影響；（C）過表達(dá)XLOC_000090后對H1299細(xì)胞遷移的影響；（D）抑制XLOC_000090后對Calu3細(xì)胞遷移的影響；

圖5為XLOC_000090對細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響，其中為（A）抑制XLOC_000090后對A549細(xì)胞遷移和侵襲的影響；（B）抑制XLOC_000090后對Calu3細(xì)胞遷移和侵襲的影響；（C）過表達(dá)XLOC_000090后對A549細(xì)胞遷移和侵襲的影響；（D）過表達(dá)XLOC_000090后對H1299細(xì)胞遷移和侵襲的影響；

圖6為裸鼠尾靜脈注射過表達(dá)XLOC_000090的A549細(xì)胞后，肺表面的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)和對照組之間的比較。

具體實施方式

下面通過具體的實施方案敘述本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實施方案應(yīng)理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的實質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明實質(zhì)和范圍的前提下，對這些實施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改動也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明所用原料及試劑均有市售。

實施例1

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2008年2月至2010年12月天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院118例非小細(xì)胞肺癌患者癌組織及其對應(yīng)的正常肺組織（外科手術(shù)切除病理證實為非小細(xì)胞肺癌，全體患者均簽署了知情同意書，隨訪資料完整并建立患者臨床病歷資料數(shù)據(jù)庫）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：

（1）經(jīng)完全性手術(shù)切除（肺葉切除術(shù)或全肺切除術(shù)加肺門/縱膈淋巴結(jié)清掃術(shù)）；

（2）且病理證實為非小細(xì)胞肺癌。

排除標(biāo)準(zhǔn)：

（1）術(shù)前化療或放療；（2）手術(shù)切緣陽性；（3）術(shù)后1個月內(nèi)死亡的非小細(xì)胞肺癌患者?；诩{入和排除標(biāo)準(zhǔn)，共有118例非小細(xì)胞肺癌患者納入了本研究。所有患者均為中國人。其中男76例，女42例；年齡31～79歲，平均(58.0±9.4)歲。腫瘤分期根據(jù)第七版的TNM分期如下：I 期45例，II期29例，III期40例，IV期4例。末次隨訪日期為2010年12月，中位隨訪時間達(dá)46.0個月。

1.2 細(xì)胞系和主要試劑

人肺癌細(xì)胞株A549、Calu3和H1299購于中國典型培養(yǎng)物保藏中心；胎牛血清購于美國Gibco公司；RPMI-1640和MEM培養(yǎng)基購于美國Hyclone公司，SYBRGreen PCR試劑盒購于美國Thermo公司；Transwell小室購于康寧生命科學(xué)有限公司；XLOC_000090的shRNA購于OriGene公司。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)

人肺癌細(xì)胞株A549、Calu3和H1299的培養(yǎng)條件為含有10%胎牛血清的RPMI-1640或MEM培養(yǎng)基，37℃下在含有5%CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

用表達(dá)XLOC_000090的慢病毒分別轉(zhuǎn)染A549和H1299細(xì)胞，用表達(dá)特異性抑制XLOC_000090基因shRNA(short hairpin RNA)的慢病毒轉(zhuǎn)染病毒轉(zhuǎn)染A549和Calu3細(xì)胞。

1.5 RT-PCR 應(yīng)用

實時定量RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞和組織中XLOC_000090的表達(dá)，轉(zhuǎn)染后48h收集各組細(xì)胞，利用TriZol法提取細(xì)胞和組織中總RNA,用分光光度計定量檢測。RNA樣品用逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA后，用SYBRGreen PCR試劑盒檢測樣本中XLOC_000090含量。反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性10min，95℃、15s，60℃、45s，40個循環(huán)，反應(yīng)結(jié)束后得到各個標(biāo)本和內(nèi)參GAPDH的基本循環(huán)數(shù)（Ct值）。根據(jù)公式計算目的基因相對含量（RQ值），即為XLOC_000090相對含量，實驗重復(fù)三次。

1.6 細(xì)胞增殖實驗

每塊板設(shè)置對照組和實驗組。將處于對數(shù)生長期的對照組和實驗組的細(xì)胞株，胰蛋白酶消化，稀釋細(xì)胞使其濃度為1×10⁴～5×10⁴個細(xì)胞/ml培養(yǎng)液，分別取100ul至96孔培養(yǎng)板，每種細(xì)胞每塊板接種3個同樣的孔作為復(fù)孔，1×10³～5×10³個細(xì)胞/孔，以100ul培養(yǎng)液做空白對照，37℃培養(yǎng)過夜。每個孔加入20ulMTT，37℃，5%CO₂孵育4h后，倒掉每個孔中的培養(yǎng)基，加入150ulDMSO,采用微板分光光度計測定450nm波長吸光度。記錄每塊板的數(shù)值，制作細(xì)胞生長曲線。

1.7 Transwell侵襲實驗

實驗前24 h將不同分組的細(xì)胞換成無血清DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)；接種前將24孔板和Transwell小室用1×PBS浸泡5min濕潤小室；消化細(xì)胞，用無血清DMEM培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞，用含有1％胎牛血清的DMEM重懸細(xì)胞，計數(shù)，稀釋到1×105個細(xì)胞/ml，接種到Transwell小室內(nèi)，每個小室加0.5ml細(xì)胞懸液，下層的24孔板中加入0.75ml含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，每組3個復(fù)孔，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h；每孔加入1ml4%甲醛溶液，室溫固定10min；吸去固定液，用1×PBS洗滌1次，每孔加1ml0.5%結(jié)晶紫溶液，染色30min后用1×PBS洗滌3次，晾干；用棉簽小心擦去Transwell小室內(nèi)沒有遷移的細(xì)胞，置于顯微鏡下觀察，計數(shù)每個視野中的細(xì)胞數(shù)。

1.8 細(xì)胞劃痕實驗

對照組和實驗組細(xì)胞消化計數(shù)后取8×10⁵個分入35 mm2培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。在盤底用記號筆畫線作為標(biāo)記，吸去培養(yǎng)液，用200ul槍頭垂直于記號筆標(biāo)記劃去盤中細(xì)胞。用PBS沖洗去除劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。在0h、48h分別拍照，拍照時選取記號筆畫的線和細(xì)胞劃痕的交點作為觀察點，以定點觀察。

1.9 裸鼠尾靜脈注射體內(nèi)轉(zhuǎn)移實驗

10只雄性裸鼠（5周齡）購自中國科學(xué)院（上海，中國），SPF級飼養(yǎng)。將10只裸鼠分為兩組，一組尾靜脈注射轉(zhuǎn)染空載體（PCDH）的A549細(xì)胞，一組尾靜脈注射轉(zhuǎn)染XLOC_000090的A549細(xì)胞，胰酶消化細(xì)胞，PBS洗滌，重懸細(xì)胞濃度為2×10⁷/ml。100ul重懸A549細(xì)胞注入裸鼠尾靜脈。注射后6周處死裸鼠并對其進(jìn)行解剖，將肺取出拍照，計數(shù)肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)。本研究嚴(yán)格按照美國國立衛(wèi)生研究院實驗動物護(hù)理和使用指南。該研究經(jīng)天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院動物實驗倫理委員會批準(zhǔn)。所有實驗過程均在戊巴比妥鈉麻醉下進(jìn)行以盡量減少痛苦。

2.0 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，論文中的實驗結(jié)果均為3次重復(fù)實驗的平均值，t檢驗評估統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

2.1 臨床樣本中XLOC_000090的表達(dá)情況

運(yùn)用RT-PCR方法檢測發(fā)現(xiàn)，XLOC_000090在肺癌癌組織中的表達(dá)高于正常肺組織（圖

1a），而XLOC_000090的表達(dá)高于在不同大小腫瘤中的表達(dá)沒有差異（圖1b），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中XLOC_000090的表達(dá)高于沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（圖1c），III/IV期肺癌患者中XLOC_000090的表達(dá)高于I/II期患者（圖1d）。表1顯示XLOC_000090在肺癌組織中的表達(dá)與性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分期相關(guān)（表1）：

表 1. XLOC_000090表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性

2 XLOC_000090在肺癌中的預(yù)后意義

單因素分析顯示性別、病理分期和XLOC_000090和預(yù)后相關(guān)（表2）：

表 2 無病生存期和總生存期的單因素分析.

將性別、病理分期和XLOC_000090納入多因素分析，可以看出病理分期和XLOC_000090是獨(dú)立預(yù)后因子（DFS:危險比：1.921，95%置信區(qū)間：1.205-3.060，P=0.006；OS：危險比：2.154，95%置信區(qū)間：1.343-3.453，P=0.001和DFS:危險比：1.452，95%置信區(qū)間：1.189-1.923，P=0.018；OS：危險比：1.468，95%置信區(qū)間：1.203-1.898，P=0.023）（表3 ）：

表 3無病生存期和總生存期的多因素分析：

2.3 上調(diào)XLOC_000090或干擾下調(diào)XLOC_000090對細(xì)胞增殖的影響

A549細(xì)胞shRNA質(zhì)粒3d后鋪96孔板，連續(xù)培養(yǎng)5天，MTT法連續(xù)監(jiān)測細(xì)胞增殖能力。結(jié)果顯示，與shRNA對照組相比，XLOC_000090干擾組與空載體對照組的肺癌細(xì)胞增殖能力無顯著變化（圖2a），相似的，上調(diào)XLOC_000090表達(dá)后，與對照組相比，轉(zhuǎn)染表達(dá)XLOC_000090組的細(xì)胞增殖能力并無差異（圖2b）。與MTT結(jié)果一致，克隆形成實驗的結(jié)果顯示XLOC_000090并不能影響細(xì)胞的增值（圖3）。

2.4 上調(diào)XLOC_000090或干擾下調(diào)XLOC_000090對細(xì)胞遷移的影響

通過細(xì)胞劃痕修復(fù)實驗，觀察質(zhì)粒肺癌細(xì)胞遷移能力受轉(zhuǎn)染XLOC_000090的干擾程度。在劃痕剛開始及開始后48h這兩個時間點拍照，比較細(xì)胞遷移能力，如圖4所示，與空白組相比，如上調(diào)XLOC_000090表達(dá)后，A549和H1299遷移能力增強(qiáng)；與空白組相比，若下調(diào)XLOC_000090表達(dá)后，A549和Calu3細(xì)胞遷移能力下降。

2.5 上調(diào)XLOC_000090或干擾下調(diào)XLOC_000090對細(xì)胞侵襲的影響

采用Matrigel侵襲實驗檢測XLOC_000090對細(xì)胞侵襲能力的影響，結(jié)果如圖5。與空白組相比，如上調(diào)XLOC_000090表達(dá)后，A549和H1299侵襲能力增強(qiáng)；與空白組相比，若下調(diào)XLOC_000090表達(dá)后，A549和Calu3細(xì)胞侵襲能力下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。

結(jié)果提示XLOC_000090能在肺癌細(xì)胞的侵襲中發(fā)揮促進(jìn)作用。

2.6 XLOC_000090在裸鼠體內(nèi)對肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響

如圖6所示，與空白對照組相比，轉(zhuǎn)染XLOC_000090的A549細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)形成更多的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)，差異具有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。

3討論

lncRNA的轉(zhuǎn)錄本長度大于200 nt，一般不編碼蛋白或編碼蛋白能力有限，近年來的研究發(fā)現(xiàn)長鏈非編碼RNA與微小RNA 一樣也具有重要的生物學(xué)功能與人類基因調(diào)節(jié)、細(xì)胞生長分化以及腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展有著密切的聯(lián)系。lncRNA的異常表達(dá)與肺癌的發(fā)病機(jī)制、治療及預(yù)后等關(guān)系密切。

lncRNA對腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的影響即表現(xiàn)在對轉(zhuǎn)移起促進(jìn)作用的基因的激活，又表現(xiàn)在對轉(zhuǎn)移起抑制作用的基因的失活。文獻(xiàn)還報道了一些與NSCLS遷移侵襲相關(guān)lncRNA，如腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)的結(jié)腸癌相關(guān)的轉(zhuǎn)錄物2、ghrelin受體基因反義鏈及表達(dá)下調(diào)的GAS6反義RNA1^［1-3］，這些lncRNA的表達(dá)紊亂均與NSCLC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良密切相關(guān)，其中研究較多的當(dāng)屬肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄子（metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1, MALAT1），MALAT1是一個長度超過8000nt的lncRNA，基因組中定位于11q13. 1^[4]，在NSCLC中表達(dá)上調(diào)^[5]。NSCLC中 MALAT1的表達(dá)具有病程和組織特異性，在有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者腫瘤標(biāo)本中MALAT1表達(dá)水平顯著上調(diào)，并與患者的TNM分期、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，可作為NSCLC早期診斷及預(yù)后的分子標(biāo)記物^[6]。MALAT1發(fā)揮作用可能是與未甲基化的Pc2( CBX4)作用調(diào)節(jié)Pc2綁定的轉(zhuǎn)移相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄。在核斑中，MALAT1能與多種SR蛋白綁定，調(diào)節(jié)其表達(dá)和磷酸化水平或調(diào)控某些前體mRNA的剪切活性^[7]。NSCLC中MALAT1具有癌基因的特點，能促進(jìn)細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，從而在肺癌發(fā)病機(jī)制及治療方案研究中具有重要意義^[8]。

本發(fā)明通過基因芯片技術(shù)篩選出一系列癌和對應(yīng)的正常肺組織中表達(dá)差異的lncRNA，其中差異表達(dá)明顯的一個就是XLOC_000090。首先我們應(yīng)用RT-PCR技術(shù)分析XLOC_000090在118經(jīng)手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌中的意義，發(fā)現(xiàn)XLOC_000090與性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分期相關(guān)，XLOC_000090在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和晚期肺癌中的表達(dá)高于沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和早期肺癌患者。并且單因素和多因素分析顯示XLOC_000090能夠獨(dú)立預(yù)測非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后。接下來我們構(gòu)建了上調(diào)和下調(diào)XLOC_000090的肺癌細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)XLOC_000090并不能影響肺癌細(xì)胞的增殖，但是我們發(fā)現(xiàn)XLOC_000090能夠促進(jìn)肺癌細(xì)胞的遷移和侵襲，裸鼠體內(nèi)實驗同樣證明XLOC_000090能夠促進(jìn)肺癌的轉(zhuǎn)移。

總之，我們的研究發(fā)現(xiàn)XLOC_000090能夠促進(jìn)肺癌的轉(zhuǎn)移，XLOC_000090可成為具潛能的非小細(xì)胞肺癌治療靶點。沉默XLOC_000090基因的表達(dá)例如設(shè)計針對XLOC_000090的單克隆抗體，患者服用針對XLOC_000090的單克隆抗體后，能夠阻止或延遲腫瘤進(jìn)展，從而達(dá)到改善患者預(yù)后的目的。

4 展望與小結(jié)

疾病的發(fā)生是極其復(fù)雜的過程。人們對于哺乳動物細(xì)胞內(nèi)lncRNA調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識仍存在許多不明之處，關(guān)于lncRNA及其功能、調(diào)控機(jī)制的研究僅是冰山一角。隨著高通量技術(shù)大量的涌現(xiàn)及大規(guī)模數(shù)據(jù)管理和分析方法的逐步完善，也許會發(fā)現(xiàn)更多的與腫瘤相關(guān)的lncRNA， lncRNA介導(dǎo)的基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及信號通路網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，將深入揭示lncRNA在NSCLC發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制，為lncRNA能否成為NSCLC早期診斷的分子標(biāo)志、腫瘤預(yù)后指標(biāo)、腫瘤分子靶向治療的有效靶標(biāo)及腫瘤個體化治療提供新的理論基礎(chǔ)和研究方向。鑒于lncRNA自身的特殊性其在肺癌中的研究面臨很大的困難：在研究方法上，高質(zhì)量數(shù)據(jù)庫的缺乏、功能性lncRNA的篩查數(shù)據(jù)量大、研究手段相對較少等問題極大限制了相關(guān)的研究進(jìn)展；在研究內(nèi)容上，各種lncRNA在肺癌中是通過何種機(jī)制來發(fā)揮作用的，是否存在特異的信號通路和相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白或分子，又如何解釋多種lncRNA之間的交叉的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)機(jī)制？因此，在今后的研究中，我們不僅要完善lncRNA文庫和動物模型的構(gòu)建，提高現(xiàn)有檢測技術(shù)的靈敏度，建立更為有效的新技術(shù)以及加強(qiáng)多層次多水平的研究，而且要加強(qiáng)對各類與肺癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)記分子的研究，同時關(guān)注多個分子間是否存在相關(guān)性，以此補(bǔ)充完善lncRNA在肺癌中的調(diào)控機(jī)制。相信隨著lncRNA與肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系的闡明，lncRNA將可能作為一類肺癌分子標(biāo)記物或治療靶點，為肺癌的診斷和治療提供新契機(jī)。

5 參考文獻(xiàn)

[1]. Han L, Kong R, Yin DD, et al. Low expression of long non-coding RNA GAS6-AS1 predicts

a poor prognosis in patients with NSCLC [J].Med Oncol, 2013, 30( 4) : 694.

[2]. Qiu MT,Xu YT,Yang X,et al.CCAT2 is a lung adenocarcinoma-specific long non-coding

RNA and promotes invasion of non-small cell lung cancer[J].Tumor Biol,2014,35 ( 6 ) :

5375-5380.

[3]. Whiteside EJ, Seim I, Pauli JP, et al. Identification of a long non-coding RNA gene, growth hormone secretagogue receptor opposite strand, which stimulates cell migration in non-small celllung cancer cell lines [J]. Int J Oncol,2013,43 ( 2 ) : 566-574.

[4]. Ji P, Diederichs S, Wang W, et al. MALAT- 1,a novel non-coding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer[J]. Oncogene, 2003,22( 39) : 8031-8041.

[5] Schmidt LH, Gorlich D, Spieker T, et al. Prognostic impact of Bcl-2 depends on tumor histology and expression of MALAT-1 lncRNA in non-small-cell lung cancer[J].J Thorac Oncol, 2014,9( 9) :1294-1304

[6]. Schmidt LH, Spieker T, Koschmieder S, et al. The long non-coding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth[J]. J Thorac Oncol, 2011, 6( 12) : 1984-1992.

[7] Gutschner T, Hammerle M, Diederichs S. MALAT1-a paradigm for long noncoding RNA function in cancer[J]. J Mol Med ( Berl ),2013,91( 7) : 791-801.

[8] Weber DG, Johnen G, Casjens S, et al. Evaluation of long non-coding RNA MALAT1 as a candidate blood-based biomarker for the diagnosis of non- small cell lung cancer[J]. BMC Res Notes, 2013, 6: 518.。

SEQUENCE LISTING

<110> 天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院

<120> 長鏈非編碼RNA XLOC_000090在肺癌中的鑒定和用途

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 500

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atttgaccct ctgcaggagg tgtgctgaat gtcccattcc ccggtgctgc cagctcctca 60

gagctctgta ggttaccccg tgagaccttc tccctgcacg cctttttttc tctaatagaa 120

atacctgcta cctgttgcct tcttccctgc aggatcacaa gcgcttgccc agtgcctggc 180

atagaggcgg ccatagctgg actcctaccc tgttccagat gaggaaactg ccgctcagag 240

acggcagccg acccagccaa ggccgcacag ccaggattca aagccatacc gctcagctcc 300

tgcctccagg ctctgccttt gcatgtggct tctcctggct cctggaccct tccccggccc 360

tcccagctgg ctgtgctgtg acagtgggcg ggggagtgcc aaggctctgc cctgcccccc 420

gcccttggca tctccggtca atatggcact cacagctccc tgggcatgga ccccctcctg 480

ccatccccac ttaaagtgat 500