本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及一種芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：芳氧苯氧丙酸類除草劑(aopp)主要用于防除禾本科雜草，因其高效、低毒而在我國(guó)及世界作物田廣泛應(yīng)用。當(dāng)前國(guó)際市場(chǎng)上銷量最大的aopp除草劑品種是炔草酯和精惡唑禾草靈，2003年和2009年該除草劑的銷售額分別為2.5億美元和2.8億美元，占該類除草劑總銷售量的31.2％，位于全球除草劑銷量榜第七位。盡管除草劑的毒性相對(duì)較低，但大量研究表明aopp對(duì)水生生物表現(xiàn)為高毒性，過(guò)渡殘留會(huì)給水體生物和人類健康帶來(lái)了巨大的威脅。環(huán)境污染物在環(huán)境中的降解主要分為光解、水解和生物降解。aopp的降解主要依賴于土壤中微生物的作用，而微生物對(duì)物質(zhì)的降解主要由細(xì)胞內(nèi)的酶來(lái)完成。微生物是各種酶制劑的重要來(lái)源，利用分子克隆技術(shù)從產(chǎn)酶微生物中克隆產(chǎn)酶基因，再將其與合適的載體連接并轉(zhuǎn)入相應(yīng)宿主細(xì)胞，可進(jìn)行酶的大量表達(dá)便于應(yīng)用。目前，通過(guò)基因工程技術(shù)手段進(jìn)行生產(chǎn)酶，已經(jīng)成為工業(yè)用酶的主導(dǎo)。酯酶廣義上是指具有催化水解酯鍵能力的一類水解酶的總稱，而通常所說(shuō)的酯酶往往是羧酸酯酶，主要用來(lái)水解脂肪酸族和芳香族酯類物質(zhì)。三酰甘油酯類以及對(duì)硝基苯酯類物質(zhì)都是酯酶的特異性底物。由于酯酶具有很高的活性，作為生物催化劑，利用其水解反應(yīng)、酯轉(zhuǎn)化和酯合成反應(yīng)可以廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化工、食品、能源及環(huán)保領(lǐng)域。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是針對(duì)芳氧苯氧丙酸類除草劑對(duì)水生生物會(huì)產(chǎn)生高毒性的問(wèn)題，提供一種aopp水解酯酶。本發(fā)明的目的可通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶aoph，其氨基酸序列如seqidno：2所示。本發(fā)明還提供了編碼該水解酯酶的基因aoph，其核苷酸序列如seqidno：1所示。該基因全長(zhǎng)(從起始密碼子到終止密碼子)為927bp，g+c含量為45.88％。本發(fā)明以aopp除草劑炔草酯為唯一碳源從土壤中分離篩選到一株高效降解炔草酯的菌株acinetobactersp.vl-2，所述菌株vl-2為本實(shí)驗(yàn)室自主篩選，已于2016年7月4日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心cctcc，保藏編號(hào)為：cctccno：m2016374。本發(fā)明以該菌株vl-2為材料構(gòu)建其基因組文庫(kù)，并成功從該文庫(kù)中克隆出所述水解酯酶基因aoph。本發(fā)明的另一目的是提供含有上述編碼基因aoph的表達(dá)載體及基因工程菌。所述表達(dá)載體的出發(fā)載體選用pet-28a(+)，構(gòu)建含aoph的重組質(zhì)粒pet-aoph作為表達(dá)載體。選用宿主菌e.colibl21(de3)構(gòu)建含有aopp水解酯酶基因aoph的基因工程菌e.colibl21(de3-pet-aoph)，高效表達(dá)酯酶基因。所述的基因工程菌e.colibl21(de3-pet-aoph)的構(gòu)建方法：所述的含aopp水解酯酶基因的pet-28a(+)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主菌e.colibl21(de3)獲得重組微生物e.colibl21(de3-pet-aoph)，再將所獲得的重組微生物轉(zhuǎn)接到含有100mg/l炔草酯(aopp)、50mg/l卡那霉素和24mg/liptg的平板，37℃培養(yǎng)16h后，挑取有透明水解圈的陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證基因序列無(wú)誤后，保存。本發(fā)明的又一目的是提供該基因酶的應(yīng)用。利用該基因生產(chǎn)的酶制劑可用于環(huán)境的生物修復(fù)、食品加工、醫(yī)藥、洗滌等行業(yè)，不僅可以解決aopp的環(huán)境污染問(wèn)題，還可以取得可觀的經(jīng)濟(jì)效益。其中，所述的aopp包括精惡唑禾草靈、精喹禾靈、炔草酯、氰氟草酯、氟吡甲禾靈。所述的aopp水解酯酶aoph在水解三酰甘油酯中的應(yīng)用，所述的三酰甘油酯優(yōu)選三乙酸甘油酯、三丁酸甘油酯、三己酸甘油酯、三辛酸甘油酯或、三癸酸甘油酯。所述aopp水解酯酶aoph在水解對(duì)硝基苯酯中的應(yīng)用，所述的對(duì)硝基苯酯優(yōu)選乙酸對(duì)硝基苯酯、丁酸對(duì)硝基苯酯、己酸對(duì)硝基苯酯、辛酸對(duì)硝基苯酯、癸酸對(duì)硝基苯酯、月桂酸對(duì)硝基苯酯、肉豆蔻酸對(duì)硝基苯酯、棕櫚酸對(duì)硝基苯酯，進(jìn)一步優(yōu)選乙酸對(duì)硝基苯酯。所述的aopp水解酯酶aoph在水解三酰甘油酯中的應(yīng)用，所述的三酰甘油酯優(yōu)選三乙酸甘油酯、三丁酸甘油酯或三己酸甘油酯。利用本發(fā)明的基因aoph構(gòu)建的工程菌株能高效表達(dá)芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶aoph，所述水解酯酶aoph還可以作用于三酰甘油酯、對(duì)硝基苯酯等其他酯類化合物，生產(chǎn)的酶制劑可用于環(huán)境的生物修復(fù)、食品加工、醫(yī)藥、洗滌等行業(yè)，不僅可以解決aopp的環(huán)境污染問(wèn)題，還可以取得可觀的經(jīng)濟(jì)效益。附圖說(shuō)明圖1是芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶基因克隆及基因表達(dá)流程圖。圖2是芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶aoph純化sds-page電泳圖譜。圖3是aoph對(duì)對(duì)硝基苯酯和三酰甘油酯類化合物的底物特異性。圖4是芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶aoph的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。本發(fā)明所述的生物材料，其分類命名為acinetobactersp.vl-2，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱cctcc)，保藏編號(hào)為：cctccno：m2016374，保藏日期為：2016年7月4日，保藏地址為：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。具體實(shí)施方式下述的實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法無(wú)特殊說(shuō)明均為常規(guī)方法。下述的實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)試劑耗材等無(wú)特殊說(shuō)明均可從商業(yè)用途購(gòu)買。下面結(jié)合實(shí)施對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例一acinetobactersp.vl-2基因組文庫(kù)的構(gòu)建：以aopp除草劑炔草酯為唯一碳源從土壤中分離篩選到一株高效降解炔草酯的菌株acinetobactersp.vl-2，所述菌株vl-2已于2016年7月4日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心cctcc，保藏編號(hào)為：cctccno：m2016374。采用高鹽法提取vl-2的染色體總dna，用限制性內(nèi)切酶sau3ai將其部分酶切，再經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離回收4-6kb的dna片段，與脫磷載體puc118(bamhi/bap)連接后，化學(xué)轉(zhuǎn)化導(dǎo)入制備好的e.colidh5α感受態(tài)細(xì)胞，構(gòu)建acinetobactersp.vl-2基因組文庫(kù)。通過(guò)含100mg/l炔草酯的lb平板挑選含芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶基因的陽(yáng)性克隆(圖1)。陽(yáng)性克隆子插入片段的測(cè)序委托上海英濰捷基生物技術(shù)有限公司完成。測(cè)序引物為puc118(bamhi/bap)載體上特異性引物(m13+:agggttttcccagtcacg；m13-：gagcggataacaatttcacac)，并根據(jù)兩端測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)引物walking直至整個(gè)插入片段測(cè)通。將測(cè)序完成的序列在ncbi數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比對(duì)，序列分析，并利用orffinder工具鑒定插入片段所含的orf。實(shí)施例二芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶基因在e.colibl21(de3)中的高效表達(dá)：(1)芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶基因的pcr擴(kuò)增：根據(jù)推斷的芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶orf，設(shè)計(jì)兩對(duì)引物aoph-f(含有ndei酶切位點(diǎn)，5’-catatgtcagtagagatatacaa-3’)和aoph-r(含有xhoi，5’-ctcgagctatgcgttgattttgataactt-3’)，用于擴(kuò)增芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶全基因。50μl擴(kuò)增體系如下：5×primestarbuffer(mg2+plus)10.0μldntpmixture(2.5mm)4.0μlaoph-f1.0μlaoph-r1.0μl模板dna(菌株vl-2總dna，約20ng·μl-1)1.0μlprimestarhsdnapolymerase5u·μl-10.5μl無(wú)菌ddh2o32.5μl總體積50.0μlpcr擴(kuò)增程序：98℃變性10sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min；10℃冷卻10min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)0.75％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，回收試劑盒回收后儲(chǔ)于-20℃。pcr產(chǎn)物經(jīng)加a尾后與pmd19-tvector按摩爾比3:1混合，在連接液作用下，16℃水浴過(guò)夜。酶連產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至e.colidh5α，通過(guò)含100mg/l炔草酯的lb平板挑選含芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶基因的陽(yáng)性克隆，利用質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒，送上海英濰捷基生物有限公司測(cè)序。(2)芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶基因表達(dá)載體的構(gòu)建：將克隆載體pmd19t-aoph和表達(dá)載體pet-28a(+)用ndei和xhoi雙酶切，酶切體系如下：在37℃水浴中，反應(yīng)3h以上。酶切產(chǎn)物進(jìn)行0.75％的瓊脂糖凝膠電泳切膠回收含有酶切位點(diǎn)的aoph基因和線性的pet-28a(+)表達(dá)載體。將上述兩個(gè)片段進(jìn)行酶連得含芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶基因的pet-28a(+)重組質(zhì)粒pet-aoph。酶連好的pet-aoph重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主菌e.colibl21(de3)獲得重組微生物e.colibl21(de3-pet-aoph)，涂布含有100mg/l炔草酯、50mg/l卡那霉素和24mg/liptg的平板，經(jīng)37℃培養(yǎng)16-20h后，挑取有透明水解圈的陽(yáng)性克隆子，經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證基因序列無(wú)誤。(3)重組芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶的誘導(dǎo)表達(dá)及純化：將構(gòu)建的表達(dá)菌株e.colibl21(de3-pet-aoph)在lb固體平板(50mg·ml-1kan)劃線活化，接種單菌落于含有50mg·ml-1kan的3ml液體lb培養(yǎng)基中，37℃過(guò)夜振蕩培養(yǎng)作為種子液。取1ml種子液轉(zhuǎn)接于100ml液體lb培養(yǎng)基(含50mg·ml-1kan)，37℃，180rpm培養(yǎng)至od600nm為0.6左右，加入1miptg20μl，18℃,180rpm培養(yǎng)24h，5,000rpm離心5min收集菌體，超聲波破碎后，12,000rpm離心20min，蛋白質(zhì)電泳，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)染色、脫色后觀察結(jié)果。取10ul酶液在含有炔草酯的水平板上檢測(cè)是否有水解圈生成。其中，12％sds聚丙烯凝膠電泳(sds-page)檢測(cè)aoph的表達(dá)情況和純化情況，并初步判斷其分子量(圖2)。ni2+-nta親和層析柱在20％的乙醇中保存，首先去除乙醇，用5倍體積的超純水沖洗。以兩倍柱體積的20mmtris-hcl(ph7.5)平衡柱子，將含有重組酶aoph的破碎液離心上清上樣至ni2+-nta親和層析柱，4℃孵育1h，以5倍柱體積的20mmtris-hcl(ph7.5，50mm咪唑)洗去雜蛋白，然后以20mmtris-hcl(ph7.5，100mm、200mm、300mm咪唑)進(jìn)行梯度洗脫，經(jīng)酶活測(cè)定以及sds-page電泳，收集合并重組酶純度最高的洗脫液，4℃，以截留分子量10kda的透析袋在20mmtris-hcl(ph7.0)緩沖液中透析過(guò)夜去除咪唑，用于后續(xù)研究。(4)驗(yàn)證aoph對(duì)炔草酯的水解功能：取10μl重組芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶純酶液加至4ml含有0.2mm炔草酯的磷酸緩沖液中，于50℃反應(yīng)10min后，用高效液相色譜檢測(cè)炔草酯的降解情況。酶活單位定義為每分鐘產(chǎn)生1μmol炔草酯酸即為一個(gè)單位，測(cè)得純酶的比活力為329.13u/mgprotein，即1mg純酶酶以炔草酯為底物在最適條件下反應(yīng)每分鐘可獲得329.13μmol炔草酯酸。實(shí)施例三重組芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶aoph的底物特異性：將適量的重組酶aoph加至含精惡唑禾草靈、氰氟草酯、炔草酯、精喹禾靈、氟吡甲禾靈、對(duì)硝基乙酰苯酯、對(duì)硝基丁酰苯酯、對(duì)硝基已酰苯酯、對(duì)硝基辛酰苯酯、對(duì)硝基癸酰苯酯、對(duì)硝基月桂酰酯、對(duì)硝基肉豆蔻酰酯、對(duì)硝基軟脂酰酯、三乙酸甘油酯、三丁酸甘油酯、三已酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三癸酸甘油酯等底物的20mmtris-hcl(ph7.5)反應(yīng)體系，底物終濃度為2mm，37℃反應(yīng)10min。檢測(cè)重組酶aoph對(duì)不同底物的水解情況。以炔草酯等芳氧苯氧丙酸類除草劑為底物時(shí)，根據(jù)不同底物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用hplc檢測(cè)各個(gè)底物的殘留量，同時(shí)以不加酶作為對(duì)照，根據(jù)底物的減少量計(jì)算酶活。酶活單位定義為每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol底物所需的酶量。經(jīng)過(guò)hplc分析，重組酶aoph均可以水解測(cè)試的芳氧苯氧丙酸類除草劑，但是表現(xiàn)出的活性強(qiáng)弱不同。其作用于精惡唑禾草靈、精喹禾靈、氰氟草酯、炔草酯和氟吡甲禾靈的比酶活力分別為216.39、123.86、146.29、329.13、189.62u·mgprotein-1，這表明aoph對(duì)炔草酯具有最好的水解酶活性(表1)。以對(duì)硝基苯酯類化合物為底物時(shí)，酶促反應(yīng)完畢后迅速煮沸終止酶反應(yīng)，將反應(yīng)液稀釋10倍，測(cè)定od410nm光度值，根據(jù)對(duì)硝基苯酚濃度-od410nm繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算酶促反應(yīng)產(chǎn)生的對(duì)硝基苯酚的量。酶活單位定義為每分鐘產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量。酶活力測(cè)定結(jié)果顯示，重組酶aoph對(duì)所有測(cè)試的對(duì)硝基苯酯類化合物均有水解活性，但其酶活力差異較大，其中以乙酸對(duì)硝基苯酯為底物時(shí)酶活力最高，可達(dá)5648u·mgprotein-1；隨著羧酸碳鏈的延長(zhǎng)，其酶活性顯著降低，當(dāng)羧酸碳鏈長(zhǎng)度大于10碳時(shí)，其酶活力均跌至1000u·mgprotein-1以下(圖3)。以甘油三酯類化合物為底物時(shí)，反應(yīng)完畢后，加入2倍體積的乙醇終止反應(yīng)，加20μl1％酚酞溶液，用10mm的naoh滴定至淡粉色，記錄消耗的naoh的量。酶活單位定義為每分鐘產(chǎn)生1μmol羧酸所需的酶量即為一個(gè)單位。當(dāng)以三酰甘油酯為底物時(shí)，重組酶aoph仍然具有較高的酶活力，且酶活力亦隨著羧酸鏈的延長(zhǎng)而降低。以三乙酸甘油酯為底物時(shí)，其活力23482u·mgprotein-1，而以三己酸甘油酯為底物時(shí)，活力僅為240u·mgprotein-1(圖3)。將重組酶aoph加入到含不同濃度底物(0.1-2mm)的測(cè)活反應(yīng)體系中，37℃，反應(yīng)10min后迅速終止酶反應(yīng)，測(cè)定酶活力。根據(jù)底物濃度和所測(cè)定的反應(yīng)速率作michaelis-menten雙倒數(shù)曲線圖，計(jì)算重組酶aoph對(duì)不同底物km值和vmax。aoph的最適底物為pnpc2，酶活力為5648u·mgprotein-1，km為0.21mmol·l-1，vmax為9.21mmol·min-1·mg-1。在所測(cè)試的芳氧苯氧丙酸類除草劑中，最適底物為炔草酯，酶活力為329u·mgprotein-1，km為0.72mmol·l-1，vmax為8.53mmol·min-1·mg-1。重組酶aoph對(duì)不同aopp除草劑的酶活力大小排序?yàn)椋喝膊蒗?gt;精惡唑禾草靈>氟吡甲禾靈>氰氟草酯>精喹禾靈(表1)。表1aopp水解酯酶aoph的底物特異性與表觀動(dòng)力學(xué)常數(shù)實(shí)施例四重組芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶aoph的氨基酸序列分析：將aoph的氨基酸序列與proteindatabank(pdb)數(shù)據(jù)庫(kù)的蛋白序列進(jìn)行同源性分析，發(fā)現(xiàn)和aoph氨基酸序列相似度最高的是α/β水解酶超家族的成員，例如與來(lái)源于staphylococcusaureus的水解酯酶同源性30％(3d7r)，與來(lái)源于宏基因組文庫(kù)的α/β水解酯酶同源性28％(3dnm)等。選擇5個(gè)同源最高的已知蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的α/β水解酯酶進(jìn)行序列比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)aoph具有α/β水解酯酶超家族蛋白典型的三聯(lián)體催化活性位點(diǎn)ser-glu/asp-his(ser159,asp253andhis283)以及該家族蛋白的特征序列標(biāo)簽(g-x-s-x-g)。從而確定aoph是α/β水解酶家族的一個(gè)新成員。將aoph氨基酸序列在ncbi(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)上以blastp進(jìn)行比對(duì)，與已報(bào)道的芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶和相關(guān)農(nóng)藥水解酯酶以鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)果表明，aoph與來(lái)源于rhodococcussp.t1的精惡唑禾草靈水解酯酶feh同源性10％；與來(lái)源于pseudomonasazotoformansqdz-1的氰氟草酯水解酯酶chbh同源性12％；與來(lái)源于sphingopyxissp.ob-3的溴苯腈水解酯酶broh同源性9％；與來(lái)源于delftiasp.t3-6的具有酯酶活性的cmepa水解酰胺酶damh同源性22％(圖4)。這表明α/β水解酶aoph是一個(gè)新的芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶。序列表<110>南京工業(yè)大學(xué)<120>一種芳氧苯氧丙酸類除草劑水解酯酶及其應(yīng)用<130>xb16101202<160>2<170>patentinversion3.5<210>1<211>927<212>dna<213>artificialsequence<220><223>1<220><221>cds<222>(1)..(927)<400>1atgtcagtagagatatacaatggtgagagaagcgaggagtcaatacag48metservalgluiletyrasnglygluargserglugluserilegln151015ttcgagaccctcataaccagtcagtcaaacaaggaatcattcgcatca96phegluthrleuilethrserglnserasnlysgluserphealaser202530gtagagaagacgaagaatatcttgagccagatcgagaacataaaaccg144valglulysthrlysasnileleuserglnilegluasnilelyspro354045tacgctataggtgacgacgttaagttggtttcagagatcaaagaacag192tyralaileglyaspaspvallysleuvalsergluilelysglugln505560atatttgagggtatgcaagtatttaccctcaacgatcagatgagccag240ilephegluglymetglnvalphethrleuasnaspglnmetsergln65707580aaacagaaagttatattgtacatccacgggggggcatgggttaatcaa288lysglnlysvalileleutyrilehisglyglyalatrpvalasngln859095ccgttgcactttcactggtggtatatggacaagatggcacagagtttg336proleuhisphehistrptrptyrmetasplysmetalaglnserleu100105110aacgcaaaggttgtagcaccgatctacccgaagctcccgcactactca384asnalalysvalvalalaproiletyrprolysleuprohistyrser115120125tatcaggacacgtaccctaagatactcaacttgtacaaggagatcttg432tyrglnaspthrtyrprolysileleuasnleutyrlysgluileleu130135140aagaccgtagaatcaacggaccagctcaccataatgggtgacagcgct480lysthrvalgluserthraspglnleuthrilemetglyaspserala145150155160gggggtaacataagcttggggttagctcacttgctcaaaatggagtca528glyglyasnileserleuglyleualahisleuleulysmetgluser165170175ttacctcaacctaaagacataatactcctcagcgcttgcgtagacatg576leuproglnprolysaspileileleuleuseralacysvalaspmet180185190tcactctcaaacgcgttgatcagcgagtacgcattgaaggacccgata624serleuserasnalaleuileserglutyralaleulysaspproile195200205ctcgcaccggagggtatcgacgtaataaccaagatatgggctgctgac672leualaprogluglyileaspvalilethrlysiletrpalaalaasp210215220aagaaaatcacggatcctctcatatcacctatacatggggatttcaat720lyslysilethraspproleuileserproilehisglyasppheasn225230235240gggttgggtaagataacgcacttcataggtacccacgacatactctac768glyleuglylysilethrhispheileglythrhisaspileleutyr245250255cctgacgctttgaaattggacgagaaattgaccgagcagggtatagat816proaspalaleulysleuaspglulysleuthrgluglnglyileasp260265270atgaagacgttcgtataccctgagatgttacacgttttcgtagtaatg864metlysthrphevaltyrproglumetleuhisvalphevalvalmet275280285cctataccggaagctcaggatgcacaagagaagataatacaagttatc912proileproglualaglnaspalaglnglulysileileglnvalile290295300aaaatcaacgcatag927lysileasnala305<210>2<211>308<212>prt<213>artificialsequence<220><223>syntheticconstruct<400>2metservalgluiletyrasnglygluargserglugluserilegln151015phegluthrleuilethrserglnserasnlysgluserphealaser202530valglulysthrlysasnileleuserglnilegluasnilelyspro354045tyralaileglyaspaspvallysleuvalsergluilelysglugln505560ilephegluglymetglnvalphethrleuasnaspglnmetsergln65707580lysglnlysvalileleutyrilehisglyglyalatrpvalasngln859095proleuhisphehistrptrptyrmetasplysmetalaglnserleu100105110asnalalysvalvalalaproiletyrprolysleuprohistyrser115120125tyrglnaspthrtyrprolysileleuasnleutyrlysgluileleu130135140lysthrvalgluserthraspglnleuthrilemetglyaspserala145150155160glyglyasnileserleuglyleualahisleuleulysmetgluser165170175leuproglnprolysaspileileleuleuseralacysvalaspmet180185190serleuserasnalaleuileserglutyralaleulysaspproile195200205leualaprogluglyileaspvalilethrlysiletrpalaalaasp210215220lyslysilethraspproleuileserproilehisglyasppheasn225230235240glyleuglylysilethrhispheileglythrhisaspileleutyr245250255proaspalaleulysleuaspglulysleuthrgluglnglyileasp260265270metlysthrphevaltyrproglumetleuhisvalphevalvalmet275280285proileproglualaglnaspalaglnglulysileileglnvalile290295300lysileasnala305當(dāng)前第1頁(yè)12