本發(fā)明涉及液體菌種技術領域，尤其涉及一種基于虎杖渣的鮑魚菇液體菌種培養(yǎng)基及其種鮑魚菇液體菌種制備方法。

背景技術：

鮑魚菇生產過程中，液體菌種具有固體菌種所不可比擬的優(yōu)勢，液體菌種具有生產周期短，菌齡短而一致，純度高、活力強，接種簡便快捷，易實行工廠化、規(guī)?；藴驶a等優(yōu)點?，F(xiàn)在，越來越多的人都在研究和使用液體菌種，而液體菌種的推廣和使用也是實現(xiàn)食用菌工廠化、規(guī)?；?、標準化的必然趨勢。但是液體菌種也存在著自身的缺陷和不足：1、液體菌種萌發(fā)點多生長速度快，但是穿透力不強，培養(yǎng)料過粗菌絲不易吃透培養(yǎng)料，菌絲將沿著培養(yǎng)料表面快速生長，培養(yǎng)料內部菌絲量很少，嚴重影響了菌種產量和質量的問題；2、常規(guī)的液體菌種雖然解決了固體菌種存在的一些問題，能明顯縮短栽培周期、增強菌種活力和抗逆性、降低菌種污染率、使得菌種質量整齊度提高，但仍存在例如發(fā)酵得到的液體菌種中菌球的密度、大小、均勻度等物理特性不是很理想等不足，如果用攪拌剪切的方法將菌球打碎，得到的菌種均勻度會更理想，但是，高速攪拌粉碎和打漿的剪切力對菌種傷害極大，對菌種整體的質量影響較為嚴重。開發(fā)分布均勻且具有更小粒徑菌絲球的高質量的液體菌種具有重要意義。公開號CN105309194A《食用菌微粒液體菌種生產新技術》提供了一種菌絲球粒徑在0.5㎜的食用菌微粒液體菌種，采用的增加食用菌液體菌種培養(yǎng)液通氣量，使通氣量在1:0.6—0.9V/V?min為適宜，同時在通氣發(fā)酵罐內裝置攪拌器使培養(yǎng)液渦流運動延長氣泡的運動路線的技術操作方法，該生產微粒液體菌種的方法是從生產工藝上進行改進，并沒有液體菌種培養(yǎng)基方面進行改進，實施起來技術難度要求高；公開號CN105130516A《分子級生物培養(yǎng)基制作方法》提到了分子級生物培養(yǎng)基營養(yǎng)成分可以快速全面的被吸收，促進液體菌種的生長，但是并沒有提到分子級生物培養(yǎng)基對液體菌種菌絲球直徑大小的影響。發(fā)展一種基于液體菌種培養(yǎng)基原材料成分改進液體菌種菌絲球直徑改善食用菌菌種產量和質量的技術，具有重要的意義。

細菌納米纖維素是自然界的豐富的可再生產物之一，細菌納米纖維素是纖維素的物理最小結構單元，是指直徑1-100nm之間的纖維，細菌納米纖維素質輕，生物相容性好，可降解、可再生，反應活性高，且具有楊氏模量高，聚合度高，潔凈度高，強度高，比表面積大等優(yōu)勢。將細菌納米纖維素作作為食用菌液體菌種培養(yǎng)基原材料，對食用菌液體菌種的菌絲球分布以及直徑具有一定的影響，進而起到改善食用菌菌種質量的作用。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的就是為了彌補已有技術的缺陷，提供一種基于虎杖渣的鮑魚菇液體菌種培養(yǎng)基及其種鮑魚菇液體菌種制備方法。

本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：

一種基于虎杖渣的鮑魚菇液體菌種培養(yǎng)基，包括以下重量份組分：虎杖渣17-18、鮑魚蛋白粉60-62、大豆酶解小分子肽9-10、麥芽糖12-13、核糖18-19、乙酸桂酯6-7、海螵蛸4-5、石膏1-1.2、碳酸鈣0.6-0.8、過磷酸鈣0.9-1、甘草酸二鉀1-1.1、檸檬酸鈉0.8-0.9、檸檬酸三銨1.2-1.3、硫酸亞鐵銨1.2-1.3、納米級電氣石粉5.6-6、細菌納米纖維素4.8-5、適量的水。

一種采用上述的培養(yǎng)基制備鮑魚菇液體菌種的方法，包括以下步驟：

（1）、將一半納米級電氣石粉和水按照0.1g/L混合，通電激發(fā)制備無菌水備用；將石膏、碳酸鈣、過磷酸鈣、甘草酸二鉀、檸檬酸鈉、檸檬酸三銨、硫酸亞鐵銨的總量和無菌水按1g/L混合在30℃攪拌溶解得溶液一；將大豆酶解小分子肽、麥芽糖、核糖、乙酸桂酯、海螵蛸的總量和無菌水按4g/L混合攪拌溶解得溶液二；將虎杖渣放入超微粉碎機中粉碎處理30min，放入鍋中加入總重量4倍的水小火文煮1h，之后過濾，得濾液和濾渣，將濾液中加入鮑魚蛋白粉混合攪拌均勻，并在進行98℃進行巴氏滅菌滅酶10min，得溶液三，將濾渣采用膨化機處理，得膨化虎杖渣微粉備用；將另一半納米電氣石粉和細菌納米纖維素以及總重量3-4倍的水混合攪拌均勻并采用高溫蒸汽滅菌，得溶液四備用；

（2）、將溶液三保持20℃、溶液二保持25℃、溶液一保持30℃，先將溶液一加入到溶液二中混合攪拌均勻得復合液，在將該復合液加入到溶液三中混合攪拌均勻得營養(yǎng)液，并調整pH，此后對該營養(yǎng)液進行通電激發(fā)處理30min得液體培養(yǎng)基備用；

（3）、將鮑魚菇母種在無菌環(huán)境中先接種到一半的液體培養(yǎng)基上進行液體發(fā)酵，發(fā)酵條件為pH5.3-5.5、接種量13%、溫度25-26℃、搖床轉速100r/min、培養(yǎng)11-12h，得鮑魚菇液體菌種一；

（4）、將剩余一半的液體培養(yǎng)基以及溶液四無菌混合均勻，之后加入膨化虎杖渣微粉以及總重量2-3倍的無菌水，高壓均質之后，通電激化配合高溫再次滅菌，并放置到無菌培養(yǎng)瓶中，得復合培養(yǎng)基，將步驟（3）得到的鮑魚菇液體菌種一按35%的接種量在無菌環(huán)境中接種到該培養(yǎng)瓶中，溫度28-30℃，培養(yǎng)22-23h即得。

本發(fā)明的優(yōu)點是：本發(fā)明以麥芽糖、核糖為碳源，以大豆酶解小分子肽、鮑魚蛋白粉為氮源，配合處理過的超微膨脹虎杖渣以及虎杖渣提取物共同制備鮑魚菇液體菌種液體培養(yǎng)基，營養(yǎng)豐富，可以增強鮑魚菇的藥用功效的同時，提供了鮑魚菇液體菌種培養(yǎng)基的豐富原料；再者，加入了乙酸桂酯、海螵蛸營養(yǎng)物質，對提高鮑魚菇液體菌種的穩(wěn)定性具有重要作用；在液體菌種培養(yǎng)基的制備過程中，借助于納米電氣石粉以及電激化處理輔助滅菌，具有方便簡單能耗少的特點；另外，膨化虎杖渣微粉，細菌納米纖維素的加入以及高壓均質處理，保證了液體菌種培養(yǎng)基的穩(wěn)定性和均勻性以及培養(yǎng)料內部的微小空間的存在，保證了鮑魚菇液體菌種菌絲球的分布穩(wěn)定性和均勻性，可以起到改善菌絲球質量的作用，提高鮑魚菇液體菌種子實體質量。

具體實施方式

一種基于虎杖渣的鮑魚菇液體菌種培養(yǎng)基，包括以下重量份組分：虎杖渣17、鮑魚蛋白粉60、大豆酶解小分子肽9、麥芽糖12、核糖18、乙酸桂酯6、海螵蛸4、石膏1、碳酸鈣0.6、過磷酸鈣0.9、甘草酸二鉀1、檸檬酸鈉0.8、檸檬酸三銨1.2、硫酸亞鐵銨1.2、納米級電氣石粉5.6、細菌納米纖維素4.8、適量的水。

一種采用上述的培養(yǎng)基制備鮑魚菇液體菌種的方法，包括以下步驟：

（1）、將一半納米級電氣石粉和水按照0.1g/L混合，通電激發(fā)制備無菌水備用；將石膏、碳酸鈣、過磷酸鈣、甘草酸二鉀、檸檬酸鈉、檸檬酸三銨、硫酸亞鐵銨的總量和無菌水按1g/L混合在30℃攪拌溶解得溶液一；將大豆酶解小分子肽、麥芽糖、核糖、乙酸桂酯、海螵蛸的總量和無菌水按4g/L混合攪拌溶解得溶液二；將虎杖渣放入超微粉碎機中粉碎處理30min，放入鍋中加入總重量4倍的水小火文煮1h，之后過濾，得濾液和濾渣，將濾液中加入鮑魚蛋白粉混合攪拌均勻，并在進行98℃進行巴氏滅菌滅酶10min，得溶液三，將濾渣采用膨化機處理，得膨化虎杖渣微粉備用；將另一半納米電氣石粉和細菌納米纖維素以及總重量3倍的水混合攪拌均勻并采用高溫蒸汽滅菌，得溶液四備用；

（2）、將溶液三保持20℃、溶液二保持25℃、溶液一保持30℃，先將溶液一加入到溶液二中混合攪拌均勻得復合液，在將該復合液加入到溶液三中混合攪拌均勻得營養(yǎng)液，并調整pH，此后對該營養(yǎng)液進行通電激發(fā)處理30min得液體培養(yǎng)基備用；

（3）、將鮑魚菇母種在無菌環(huán)境中先接種到一半的液體培養(yǎng)基上進行液體發(fā)酵，發(fā)酵條件為pH5.3、接種量13%、溫度25℃、搖床轉速100r/min、培養(yǎng)11h，得鮑魚菇液體菌種一；

（4）、將剩余一半的液體培養(yǎng)基以及溶液四無菌混合均勻，之后加入膨化虎杖渣微粉以及總重量2倍的無菌水，高壓均質之后，通電激化配合高溫再次滅菌，并放置到無菌培養(yǎng)瓶中，得復合培養(yǎng)基，將步驟（3）得到的鮑魚菇液體菌種一按35%的接種量在無菌環(huán)境中接種到該培養(yǎng)瓶中，溫度28℃，培養(yǎng)22h即得。