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在發(fā)酵中使用甘油和限制進料的碳水化合物的制作方法

文檔序號:11109560閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種通過發(fā)酵生產(chǎn)有機酸的方法,包括方法步驟:

I)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)微生物,其中向培養(yǎng)基中進料甘油和其他含碳化合物作為可同化碳源,以允許微生物產(chǎn)生有機酸,由此獲得包含有機酸的發(fā)酵液;

II)從方法步驟I)中獲得的發(fā)酵液回收有機酸或其鹽;

其中其他含碳化合物的消耗速率(CRc.c.;以g/升/小時計)低于其他含碳化合物的最大理論消耗速率(CRc.c.max;以g/升/小時計)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法,其中,在至少30分鐘的培養(yǎng)時間中,其他含碳化合物的消耗速率(CRc.c.;以g/升/小時計)低于其他含碳化合物的最大理論消耗速率(CRc.c.max;以g/升/小時計)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法,其中,其他含碳化合物的消耗速率(CRc.c.;以g/升/小時計)不高于其他含碳化合物的最大理論消耗速率(CRc.c.max;以g/升/小時計)的50%。

4.根據(jù)之前任一項權(quán)利要求的方法,其中在方法步驟I)中,以至少5:1的甘油:其他含碳化合物總重量比,將甘油和其他含碳化合物進料至培養(yǎng)基中。

5.根據(jù)之前任一項權(quán)利要求的方法,其中有機酸是琥珀酸。

6.根據(jù)之前任一項權(quán)利要求的方法,其中其他含碳化合物是碳水化合物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法,其中碳水化合物選自蔗糖、D-葡萄糖或其混合物。

8.根據(jù)之前任一項權(quán)利要求的方法,其中方法步驟I)中使用的微生物是修飾的微生物。

9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法,其中,修飾微生物來自野生型微生物,所述野生型微生物屬于巴斯德氏菌科(Pasteurellaceae)。

10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法,其中,修飾微生物來自野生型微生物,所述野生型微生物屬于巴斯夫菌屬。

11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法,其中方法步驟I)中使用的微生物屬于物種產(chǎn)琥珀酸巴斯夫菌。

12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法,其中,修飾微生物來自野生型微生物,所述野生型微生物具有SEQ ID NO:1或顯示出與SEQ ID NO:1至少96%序列同源性的序列的16S rDNA。

13.根據(jù)權(quán)利要求8至12任一項的方法,其中與其野生型相比,修飾微生物具有

i)降低的丙酮酸甲酸裂解酶活性,

ii)降低的乳酸脫氫酶活性,或

iii)降低的丙酮酸甲酸裂解酶活性和降低的乳酸脫氫酶活性。

14.根據(jù)權(quán)利要求13的修飾微生物,其中微生物包括:

A)ldhA-基因或其至少一部分的缺失,ldhA-基因的調(diào)控元件或其至少一部分的缺失,或ldhA-基因中至少一個突變的引入;

B)pflD-基因或其至少一部分的缺失,pflD-基因的調(diào)控元件或其至少一部分的缺失,或pflD-基因中至少一個突變的引入;

C)pflA-基因或其至少一部分的缺失,pflA-基因的調(diào)控元件或其至少一部分的缺失,或pflA-基因中至少一個突變的引入;

D)ldhA-基因或其至少一部分的缺失,ldhA-基因的調(diào)控元件或其至少一部分的缺失,或ldhA-基因中至少一個突變的引入

pflD-基因或其至少一部分的缺失,pflD-基因的調(diào)控元件或其至少一部分的缺失,或pflD-基因中至少一個突變的引入;

E)ldhA-基因或其至少一部分的缺失,ldhA-基因的調(diào)控元件或其至少一部分的缺失,或ldhA-基因中至少一個突變的引入

pflA-基因或其至少一部分的缺失,pflA-基因的調(diào)控元件或其至少一部分的缺失,或pflA-基因中至少一個突變的引入。

15.根據(jù)之前任一項權(quán)利要求的方法,其中所述方法還包括方法步驟:

III)通過至少一個化學反應(yīng),將方法步驟I)中獲得的包含在發(fā)酵液中的有機酸、或?qū)⒎椒ú襟EII)中獲得的回收的有機酸,轉(zhuǎn)化成不同于所述有機酸的次級有機產(chǎn)物。

16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法,其中所述有機酸為琥珀酸,并且其中次級有機產(chǎn)物選自琥珀酸酯或其聚合物、四氫呋喃(THF)、1,4-丁二醇(BDO)、γ-丁內(nèi)酯(GBL)和吡咯烷酮。

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